本发明涉及生物有机肥技术领域，尤其涉及一种含有成绿肉座菌的微生物有机肥及其制备方法。
背景技术：
中国是一个农业大国，随着中国人口的不断急剧增长，对农作物的需求也越来越大，但是农作物在种植的过程中往往由于病虫害的发生，导致产量和质量明显降低。种植者为了保证农作物能够顺利上市，满足人民的需要，长期大量使用化学农药来防治病虫害的发生，以保证农作物的产量和质量。但是长期使用化学农药，不但使种植的成本大大增加，而且化学农药的残留不仅危害农作物的品质和人类健康，还会造成害虫对化学药物具有耐受性，同时也会造成对农业生态环境的污染，不利于绿色环保。
根结线虫是我国粮食、蔬菜、经济作物的重大病原物之一，对农作物的危害也最大这些病虫害严重影响了农作物的生长，同时也给种植者造成了经济损失。目前对根结线虫、蝼蛄、蛴螬、金针虫等地下害虫和根腐病、立枯病等植物病害的防治往往采用的是化学农药，但是化学农药的使用不但增加了种植成本，而且会有农药的残留，同样也会使得根结线虫、蝼蛄、蛴螬、金针虫等地下害虫和根腐病、立枯病等植物病害对化学农药具有耐受性。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于针对现有技术的不足，而提供一种微生物有机肥及其制备方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种微生物有机肥，包括体积比为1：10～50的成绿肉座菌和腐熟肥。
优选的，所述成绿肉座菌选自生物保藏编号为CGMCC No.7995的菌种。
优选的，所述成绿肉座菌有效孢子量为2.0×108cfu/g以上。
优选的，所述腐熟肥由包括以下质量含量组分的原料进行堆肥处理得到：40～60％木薯渣、15～30％竹醋原液和15～30％填充料。
优选的，所述木薯渣的含水率为40～60％。
优选的，所述竹醋原液由竹材烧炭过程中产生的气体冷却得到；
所述竹醋原液中包括有机酸类、醇类、酮类、醛类、酯类及微量的碱性成分。
优选的，所述填充料为锯末和/或秸秆。
本发明还提供了上述有机肥的制备方法，包括以下步骤：
a)将成绿肉座菌菌种接入活化培养基中进行活化培养，将所述活化培养后的菌种接入成绿肉座菌一级液体培养基中进行一级液体培养，得到成绿肉座菌一级培养液；
b)将步骤a)所述的一级培养液接入成绿肉座菌二级培养液中进行二级液体培养，得到成绿肉座菌二级培养液；
c)将步骤b)所述的二级培养液接入成绿肉座菌固体培养基中进行固体发酵培养，得到成绿肉座菌；
d)将堆肥原料混合进行堆肥处理，直至腐熟，得到腐熟肥；
e)将所述步骤c)得到的成绿肉座菌与所述步骤d)得到的腐熟肥混合，得到微生物有机肥；
所述步骤a)、步骤b)、步骤c)与步骤d)之间没有时间顺序限定。
优选的，所述步骤a)中活化培养的温度为20～35℃，活化培养的时间为30～65h；
所述一级液体培养过程中持续通入无菌空气，接种后进入24h内，通气量为10～15m3/h，培养24h后，通气量为15～24m3/h，一级液体培养的时间为35～50h，一级液体培养的温度为20～32℃，一级培养的初始pH值为5.5～6.5；
所述二级培养过程中持续通入无菌空气，接种后进入24h内，通气量为100～180m3/h，培养24h后，通气量为200～260m3/h，二级液体培养的时间为50～75h，二级液体培养的温度为25～35℃，二级液体培养的初始pH值为5.5～6.5；
所述固体发酵培养的时间为5～10d，固体发酵培养的温度为25～35℃，固体发酵培养的环境湿度为10～90％。
优选的，所述步骤d)中采用静态强制通风方式进行堆肥处理，所述通风的种类为普通空气，通风量为20～25m3/(h·t)；
所述堆肥处理的时间为25～35天。
本发明提供的一种微生物有机肥，包括体积比为1：10～50的成绿肉座菌和腐熟肥。本发明是以成绿肉座菌和腐熟肥为原料制成微生物有机肥，微生物有机肥中的成绿肉座菌对病虫害的防治效果高，减少了根结线虫、蝼蛄、蛴螬、金针虫等地下害虫和根腐病、立枯病等植物病害的发生，能代替部分化学农药的使用，降低化学农药的施用次数，减少农户生产成本。与此同时成绿肉座菌能够促进根系和植株的生长，促进植株营养器官的生长，并且还提高了农作物的产量。腐熟肥在生产过程中会产生高温，可以杀死原料中的病原微生物，虫，卵以及杂草种子，并对有害物质降解，腐熟后为农作物提供营养元素，供农作物生长需要。而且本发明提供的微生物与腐熟肥制作成的有机肥不会产生抗药性，长期使用能减少化肥和化学农药带来的环境污染问题。
进一步的，本发明提供的微生物有机肥中有机质含量≥45％，氮磷钾总含量≥5％，能够满足植物生长的要求，同时促进植物的生长。
生物保藏说明
成绿肉座菌(Hypocrea virens)，于2013年8月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，生物保藏编号为CGMCC No.7995。
具体实施方式
本发明提供了一种微生物有机肥，包括体积比为1：10～50的成绿肉座菌和腐熟肥。
在本发明中，所述成绿肉座菌与腐熟肥的体积比优选为1：10～50，更优选为1：20～40，最优选为1：30。
在本发明中，所述微生物有机肥中成绿肉座菌的有效孢子量优选在(2.0～10.0)×108cfu/g以上。
在本发明中，所述成绿肉座菌为选自生物保藏编号为CGMCC No.7995的菌种。
在本发明中，所述成绿肉座菌的制备方法优选包括以下步骤：
1)将成绿肉座菌菌种活化；
2)将所述活化后的成绿肉座菌接种于成绿肉座菌一级液体培养基中进行一级液体培养，培养35～50h停止培养，得到成绿肉座菌一级培养液；
3)将所述步骤2)得到的成绿肉座菌一级培养液接种于成绿肉座菌二级液体培养基中进行二级液体培养，培养50～75h停止培养，得到成绿肉座菌二级培养液；
4)将所述步骤3)得到的二级培养液接种于成绿肉座菌固体培养基中，进行固体发酵培养，得到成绿肉座菌。
在本发明中，所述成绿肉座菌菌种的活化优选为将保藏的成绿肉座菌菌种接种于装有营养琼脂培养基的茄型瓶中，20～35℃培养30～65h进行活化培养。
所述活化培养后，本发明将所述活化后的成绿肉座菌接种于成绿肉座菌液体培养基中进行一级液体培养。在本发明中，所述一级培养液的接种量优选为10～30％，更优选为15～25％，最优选为20％。
在本发明中，所述成绿肉座菌二级培养液的接种量优选为10～30％，更优选为15～25％，最优选为20％。
在本发明中，所述成绿肉座菌固体发酵培养的接种量优选为10～30％，更优选为15～25％，最优选为20％。
在本发明中，所述成绿肉座菌一级液体培养基优选包括下列质量百分含量的组分：葡萄糖0.5％～2.0％、白砂糖0.5％～2.0％、黄豆粉0.1％～0.3％、硫酸铵0.1％～0.3％、磷酸氢二钾0.05％～0.1％、氯化钾0.05％～0.1％、硫酸镁0.01％～0.04％、硫酸铁0.00％～0.004％，余量为水；更优选为葡萄糖0.8％～1.5％、白砂糖0.8％～1.5％、黄豆粉0.15％～0.25％、硫酸铵0.15％～0.25％、磷酸氢二钾0.06％～0.09％、氯化钾0.06％～0.09％、硫酸镁0.015％～0.03％、硫酸铁0.001％～0.003％，余量为水；最优选为葡萄糖1％、白砂糖1％、黄豆粉0.2％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.08％、氯化钾0.08％、硫酸镁0.02％、硫酸铁0.002％，余量为水。本发明对上述药品的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的用于制备培养基的药品即可。
在本发明中，所述成绿肉座菌液体培养基优选经120～130℃灭菌30～45min后使用。在本发明中，所述灭菌温度更优选为125℃；所述灭菌时间更优选为40min。本发明对培养基的灭菌设备没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的灭菌设备即可，如高压蒸汽灭菌锅。
本发明对所述发酵的设备没有特殊的限定，采用本技术领域熟知的发酵设备即可，如发酵罐。
在本发明中，所述成绿肉座菌一级液体培养的温度优选为20～32℃，更优选的为25～30℃，最优选为28℃；所述成绿肉座菌一级液体培养的初始pH值优选为5.5～6.5，更优选的为5.8～6.2，最优选为6.0；
本发明在所述一级液体培养过程中持续通入无菌空气，优选为接种后进入24h内，通气量为5～25m3/h，培养24h后，通气量为20～30m3/h；更优选为接种后进入24h内，通气量为10～20m3/h，培养24h后，通气量为22～28m3/h；最优选为接种后进入24h内，通气量为15m3/h，培养24h后，通气量为25m3/h。本发明对所述通入无菌空气的设备没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的通气设备即可，如空压机。
在本发明中，所述成绿肉座菌一级液体培养的时间优选为35～50h，更优选为40～48h，更优选为45h。
得到成绿肉座菌一级液体培养液后，本发明将得到的成绿肉座菌一级液体培养液接种于成绿肉座菌二级液体培养基中，进行二级液体培养，得到成绿肉座菌二级液体培养液。在本发明中，所述二级液体培养的接种量优选为10～30％，更优选为15～25％，最优选为20％。
在本发明中，所述成绿肉座菌二级液体培养基优选包括以下组分：葡萄糖1％～3％、白砂糖1％～3％、马铃薯粉0.5％～1.5％、黄豆粉0.5％～1.5％、玉米粉0.3％～1.0％、磷酸氢二钾0.01％～0.02％，余量为水；更优选为葡萄糖1.5％～2.5％、白砂糖1.5％～2.5％、马铃薯粉0.8％～1.2％、黄豆粉0.8％～1.2％、玉米粉0.4％～0.7％、磷酸氢二钾0.012％～0.018％，余量为水；最优选为葡萄糖2％、白砂糖2％、马铃薯粉1％、黄豆粉1％、玉米粉0.5％、磷酸氢二钾0.015％，余量为水。本发明对上述药品的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的用于制备培养基的药品即可。
在本发明中，所述成绿肉座菌二级液体培养基优选经120～130℃灭菌30～45min后使用。在本发明中，所述灭菌温度更优选为125℃；所述灭菌时间更优选为40min。本发明对培养基的灭菌设备没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的灭菌设备即可，如高压蒸汽灭菌锅。
本发明对所述发酵的设备没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的发酵设备即可，如发酵罐。
在本发明中，所述成绿肉座菌二级液体培养的温度优选为25～35℃，更优选的为28～32℃，最优选为30℃；所述成绿肉座菌二级液体培养的初始pH值优选为5.5～6.5，更优选的为5.8～6.2，最优选为6.0。
在本发明中，所述成绿肉座菌二级液体培养优选在持续通入无菌空气条件下进行，所述通入无菌空气的程序具体优选为：接种到二级液体培养基后的24h之内，通气量为100～180m3/h，更优选为120～160m3/h，最优选为150m3/h；培养24h后，通气量为200～260m3/h，更优选为220～250m3/h，最优选为240m3/h。本发明对所述通入无菌空气的设备没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的通气设备即可，如空压机。
在本发明中，所述成绿肉座菌二级液体培养的时间优选为50～75h，更优选为60～70h，更优选为65h。
得到成绿肉座菌二级液体培养液后，本发明将得到的成绿肉座菌二级液体培养液接种于成绿肉座菌固体培养基中，进行固体发酵，得到成绿肉座菌。在本发明中，所述固体发酵的接种量优选为10～30％，更优选为15～25％，最优选为20％。
在本发明中，所述成绿肉座菌固体培养基优选包括以下重量份的组分：麦麸64％～76％、豆粕8％～13％、玉米粉7.6％～13.5％、谷壳7.8％～13.4％，更优选为68％～74％、豆粕9％～11％、玉米粉8.4％～11.4％、谷壳8.6％～11.2％；最优选为麦麸70％、豆粕10％、玉米粉10％、谷壳10％。本发明优选在所述成绿肉座菌固体培养基中添加蒸馏水，使固体培养基含水量优选为45％～55％，更优选为47％～52％，最优选为50％，然后进行固体发酵。
本发明对所述固体培养过程的环境温度、菌料温度和环境湿度控制。在本发明中，所述温度和湿度的控制程序具体优选为：在进入固体培养1～3d之内控制环境湿度优选为85～90％，更优选为88％，环境温度优选为25～35℃，菌料温度控制为28～30℃；在进入固体培养4～5d之内控制环境湿度为40～60％，环境温度为30℃；6～7d之内环境温度优选为30～35℃；所述固体培养32～36h时优选翻盘散热；所述固体培养48～55h时优选将营养液喷洒到菌料上。
在本发明中，所述营养液优选包括质量浓度为2～7％葡萄糖和质量分数为0.0005～0.002％的ZnCl2，更优选为5％葡萄糖和质量分数为0.001％的ZnCl2。本发明对所述葡萄糖和ZnCl2的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员所熟知常规药品即可。
在本发明中，所述营养液的喷洒体积优选为菌料体积的5～10％，更优选为6～9，最优选为7％。
在本发明中，所述固体培养基的厚度优选为2～5cm，更优选为2.5～3.5cm，最优选为3cm。
完成所述成绿肉座菌固体发酵后，本发明优选对得到孢子粉的进行收集，得到成绿肉座菌。在本发明中，所述成绿肉座菌孢子的收集具体采用微生物固态发酵真菌孢子分离设备的仪器进行。所述微生物固态发酵真菌孢子分离设备的仪器购自江西天人生态股份有限公司。
在本发明中，所述固体发酵得到的成绿肉座菌的有效孢子量为1.0×1010cfu/g以上。
在本发明中，所述腐熟肥优选由包括以下质量含量组分的原料进行堆肥处理得到的：40～60％木薯渣、15～30％竹醋原液和15～30％填充料。在本发明中，所述腐熟肥的原料优选包括优选为45～55％的木薯渣，更优选为50％。本发明所述的木薯渣的含水率优选为40～60％，更优选为45～55％，最优选为50％。在本发明中，所述木薯渣为木薯提取淀粉后的副产物，本发明对所述木薯渣的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员常规选用的木薯渣即可。
在本发明中，所述腐熟肥的原料优选包括质量含量为18～27％的竹醋原液，更优选为25％。在本发明中，所述竹醋原液优选由竹材烧炭过程中产生的气体冷却得到，所述竹醋原液中包括有机酸类、醇类、酮类、醛类、酯类及微量的碱性成分。在本发明中，所述烧炭过程的温度优选为500～1000℃，更优选为600～900℃，最优选为700～800℃；本发明优选在80～150℃条件下收集烧炭产生的气体，更优选为100～130℃，最优选为120℃。本发明对所述竹材的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员常规选用的竹材即可。
在本发明中，所述腐熟肥的原料优选包括质量含量为18～27％的填充料，更优选为25％。在本发明中，所述填充料优选包括锯末和秸秆中一种或两种。所述填充料具体的可优选为上述物质的两种，所述锯末和秸秆的质量比优选为1：3，更优选为1：2，最优选为1：1.5。本发明对所述锯末和秸秆的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员常规选用的锯末和秸秆即可。本发明所述秸秆的长度优选为3～5cm，更优选为4cm。本发明对秸秆粉碎的设备没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的粉碎设备即可，如粉碎机。
本发明还提供了上述技术方案所述微生物有机肥的制备方法，包括以下步骤：
a)将成绿肉座菌菌种接入活化培养基中进行活化培养，将所述活化培养后的菌种接入成绿肉座菌一级液体培养基中进行一级液体培养，得到成绿肉座菌一级培养液；
b)将步骤a)所述的一级培养液接入成绿肉座菌二级培养液中进行二级液体培养，得到成绿肉座菌二级培养液；
c)将步骤b)所述的二级培养液接入成绿肉座菌固体培养基中进行固体发酵培养，得到成绿肉座菌；
d)将堆肥原料混合进行堆肥处理，直至腐熟，得到腐熟肥；
e)将所述步骤c)得到的成绿肉座菌与所述步骤d)得到的腐熟肥混合，得到微生物有机肥；
所述步骤a)、步骤b)、步骤c)与步骤d)之间没有时间顺序限定。
本发明优选采用上述技术方案所述成绿肉座菌制备的技术方案制备得到成绿肉座菌，在此不再赘述。
本发明将堆肥原料进行混合堆肥处理，直至腐熟，得到腐熟肥。在本发明中，所述堆肥原料为上述技术方案所述腐熟肥的原料，在此不再赘述。本发明在所述堆肥处理的过程中，优选向所述堆肥原料中通风；所述通风的种类优选为普通空气。
在本发明中，所述通风优选采用静态强制通风方式进行。
在本发明中，所述通风的速率优选为20～25m3/(h·t)，更优选为22～24m3/(h·t)，最优选为23m3/(h·t)。
在本发明中，所述堆肥处理的时间优选为25～35d，更优选为28～32d，最优选为30d。
得到成绿肉座菌和腐熟肥后，本发明将所述成绿肉座菌和腐熟肥混合，得到为生物有机肥。本发明对所述混合的方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的组合物各组分混合的技术方案即可，如在本发明的实施例中，采用搅拌的方式对混合物料进行混合。
本发明提供微生物有机肥在使用的过程中，优选按照每667m2施肥量为10～40kg施用在农作物种植田中，并且以不施用微生物有机肥的农作物田作为对照组，记录农作物的生长情况，病害情况和产量。本发明对所述微生物有机肥的施用方式没有特殊限定，采用本领域技术人员常规的施用方式即可。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
成绿肉座菌的制备：将保藏的成绿肉座菌菌种接种于装有营养琼脂培养基的茄型瓶中，30℃培养35h进行活化培养；活化培养后的成绿肉座菌以20％的接种量接种于121℃灭菌35min后的一级液体培养基中，具体的培养条件为：温度为28℃；pH值为6.0；接种后进入24h内，通气量为15m3/h，培养24h后，通气量为25m3/h；培养45h后停止培养，得到成绿肉座菌一级液体培养液；将得到的一级培养液以20％的接种量接种于成绿肉座菌二级液体培养液中，具体的培养条件为：温度为30℃；pH值为6.0；接种后进入24h内，通气量为150m3/h，培养24h后，通气量为240m3/h；培养65h后停止培养，得到成绿肉座菌二级液体培养液；将得到的成绿肉座菌二级培养液以20％的接种量接种于固体培养基中，在固体培养基中加入蒸馏水，使固体培养基含水量为50％，然后进行固体发酵培养，发酵培养条件为：在进入固体培养1～3d之内控制环境湿度优选为90％，环境温度优选为25℃，菌料温度控制为30℃；在进入固体培养4～5d之内控制环境湿度为60％，环境温度为30℃；6～7d之内环境温度优选为35℃；所述固体培养36h时优选翻盘散热，在固体培养50h时将营养液喷洒到菌料上；将固体发酵后的菌料采用微生物固态发酵真菌孢子分离设备收集成绿肉座菌孢子，经检测，成绿肉座菌的有效孢子量为1.0×1010cfu/g以上。
腐熟肥的制备：将占总体积的50％的木薯渣、25％竹醋原液和25％锯末进行充分混合，置于堆肥槽中进行堆肥处理，采用静态强制通风方式进行堆肥处理，通入普通空气，通气量为23m3/(h·t)，经30天堆肥达到腐熟，得到腐熟肥。
将获得的成绿肉座菌和腐熟肥按照体积比1:30进行混合，保证得到的微生物有机肥中成绿肉座菌的有效孢子量为2.0×108cfu/g。
实施例2
成绿肉座菌的制备：将保藏的成绿肉座菌菌种接种于装有营养琼脂培养基的茄型瓶中，20℃培养55h进行活化培养；活化培养后的成绿肉座菌以10％的接种量接种于121℃灭菌35min后的一级液体培养基中，具体的培养条件为：温度为32℃；pH值为5.5；接种后进入24h内，通气量为10m3/h，培养24h后，通气量为15m3/h；培养50h后停止培养，得到成绿肉座菌一级液体培养液；将得到的一级培养液以15％的接种量接种于成绿肉座菌二级液体培养液中，具体的培养条件为：温度为35℃；pH值为6.5；接种后进入24h内，通气量为100m3/h，培养24h后，通气量为200m3/h；培养50h后停止培养，得到成绿肉座菌二级液体培养液；将得到的成绿肉座菌二级培养液以15％的接种量接种于固体培养基中，在固体培养基中加入蒸馏水，使固体培养基含水量为50％，然后进行固体发酵培养，发酵培养条件为：在进入固体培养1～3d之内控制环境湿度优选为85％，环境温度优选为25℃，菌料温度控制为30℃；在进入固体培养4～5d之内控制环境湿度为40％，环境温度为30℃；6～7d之内环境温度优选为35℃；所述固体培养32h时优选翻盘散热，在固体培养55h时将营养液喷洒到菌料上；将固体发酵后的菌料采用微生物固态发酵真菌孢子分离设备收集成绿肉座菌孢子，经检测，成绿肉座菌的有效孢子量为1.0×1010cfu/g以上。
腐熟肥的制备：将占总体积的40％的木薯渣、30％竹醋原液和30％小麦秸秆进行充分混合，置于堆肥槽中进行堆肥处理，采用静态强制通风方式进行堆肥处理，通入普通空气，通气量为20m3/(h·t)，经28天堆肥达到腐熟，得到腐熟肥。
将获得的淡紫拟青霉和腐熟肥按照体积比1:20进行混合，保证得到的微生物有机肥中成绿肉座菌的有效孢子量为2.0×108cfu/g。
实施例3
成绿肉座菌的制备：将保藏的成绿肉座菌菌种接种于装有营养琼脂培养基的茄型瓶中，35℃培养30h进行活化培养；活化培养后的成绿肉座菌以15％的接种量接种于121℃灭菌35min后的一级液体培养基中，具体的培养条件为：温度为25℃；pH值为5.0；接种后进入24h内，通气量为12m3/h，培养24h后，通气量为20m3/h；培养40h后停止培养，得到成绿肉座菌一级液体培养液；将得到的一级培养液以18％的接种量接种于成绿肉座菌二级液体培养液中，具体的培养条件为：温度为30℃；pH值为5.0；接种后进入24h内，通气量为180m3/h，培养24h后，通气量为260m3/h；培养75h后停止培养，得到成绿肉座菌二级液体培养液；将得到的成绿肉座菌二级培养液以15％的接种量接种于固体培养基中，在固体培养基中加入蒸馏水，使固体培养基含水量为50％，然后进行固体发酵培养，发酵培养条件为：在进入固体培养1～3d之内控制环境湿度优选为88％，环境温度优选为25℃，菌料温度控制为30℃；在进入固体培养4～5d之内控制环境湿度为45％，环境温度为30℃；6～7d之内环境温度优选为35℃；所述固体培养35h时优选翻盘散热，在固体培养50h时将营养液喷洒到菌料上；将固体发酵完后的菌料采用微生物固态发酵真菌孢子分离设备收集成绿肉座菌孢子，经检测，成绿肉座菌的有效孢子量为1.0×1010cfu/g以上。
腐熟肥的制备：将占总体积的60％的木薯渣、15％竹醋原液和25％玉米秸秆进行充分混合，置于堆肥槽中进行堆肥处理，采用静态强制通风方式进行堆肥处理，通入普通空气，通气量为23m3/(h·t)，经32天堆肥达到腐熟，得到腐熟肥。
将获得的成绿肉座菌和腐熟肥按照体积比1:40进行混合，保证得到的微生物有机肥中成绿肉座菌的有效孢子量为2.0×108cfu/g。
实施例4
成绿肉座菌的制备：将保藏的成绿肉座菌菌种接种于装有营养琼脂培养基的茄型瓶中，28℃培养45h进行活化培养；活化培养后的成绿肉座菌以15％的接种量接种于121℃灭菌35min后的一级液体培养基中，具体的培养条件为：温度为30℃；pH值为5.8；接种后进入24h内，通气量为15m3/h，培养24h后，通气量为18m3/h；培养45h后停止培养，得到成绿肉座菌一级液体培养液；将得到的一级培养液以18％的接种量接种于成绿肉座菌二级液体培养液中，具体的培养条件为：温度为32℃；pH值为5.5；接种后进入24h内，通气量为160m3/h，培养24h后，通气量为240m3/h；培养60h后停止培养，得到成绿肉座菌二级液体培养液；将得到的成绿肉座菌二级培养液以15％的接种量接种于固体培养基中，在固体培养基中加入蒸馏水，使固体培养基含水量为50％，然后进行固体发酵培养，发酵培养条件为：在进入固体培养1～3d之内控制环境湿度优选为90％，环境温度优选为25℃，菌料温度控制为30℃；在进入固体培养4～5d之内控制环境湿度为45％，环境温度为30℃；6～7d之内环境温度优选为35℃；所述固体培养34h时优选翻盘散热，在固体培养52h时将营养液喷洒到菌料上；将固体发酵完后的菌料采用微生物固态发酵真菌孢子分离设备收集成绿肉座菌孢子，经检测，成绿肉座菌的有效孢子量为1.0×1010cfu/g以上。
腐熟肥的制备：将占总体积的55％的木薯渣、20％竹醋原液、15％玉米秸秆和10％锯末进行充分混合，置于堆肥槽中进行堆肥处理，采用静态强制通风方式进行堆肥处理，通入普通空气，通气量为20m3/(h·t)，经30天堆肥达到腐熟，得到腐熟肥。
将获得的成绿肉座菌和腐熟肥按照体积比1:30进行混合，保证得到的微生物有机肥中成绿肉座菌的有效孢子量为2.0×108cfu/g。
对实施例1～4获得的微生物有机肥进行测定，结果表明有机质含量≥45％，氮磷钾总含量≥5％；将实施例1～4获得的微生物有机肥按照每677m2施肥量为30kg施用在番茄种植田中，并且以不施用微生物有机肥的番茄种植田作为对照组，结果见表1：
表1微生物有机肥施肥效果(番茄)
从表1的试验结果可以得出，施用微生物生物肥，能减少根结线虫、蝼蛄、蛴螬、金针虫等地下害虫的危害，减少了番茄根腐病的发生，提高了番茄的抗病虫害能力，并且减少了农药和化肥的施用次数。与对照组相比，番茄植株长势良好，病虫害发生少，大大减少化学农药和化肥的使用，同时番茄的产量提高了20％～25％。
由以上实施例可知，施用本发明的微生物有机肥，不但减少了根结线虫、蝼蛄、蛴螬、金针虫等地下害虫和根腐病、立枯病等植物病害的发生，并且还减少了化学农药的使用，同时提高了农作物的产量。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。