山药用复合菌粉及其制作方法和山药用复合菌肥及其制备方法与流程

1.本发明涉及山药种植技术领域，尤其是涉及一种山药用复合菌粉及其制作方法和山药用复合菌肥及其制备方法。


背景技术：

2.山药药食两用，块根肥厚、下扎较深，不仅所需营养多，而且易受地老虎、蛴螬、金针虫等地下害虫侵袭，使山药减产、品质变劣。山药地上部藤蔓密集，环境隐蔽，营造出高温高湿环境，利于病原菌侵袭。
3.目前山药种植中存在如下缺陷：
4.①
靠施用大量化肥增产；
5.②
频繁使用农药防病虫害；
6.③
可用的微生物产品，菌种单一、活力低，功效单一。
7.有鉴于此，特提出本发明。


技术实现要素：

8.本发明的目的之一在于提供一种山药用复合菌粉，以解决现有技术中存在的依靠施用大量化肥增产、频繁使用农药防病虫害、可用的微生物产品，菌种单一、活力低，功效单一的技术问题。
9.本发明的目的之二在于提供上述山药用复合菌粉的制备方法，所述制备方法成本低、保留各微生物自身代谢产物，营养、活性成分含量高。
10.本发明的目的之三在于提供一种山药用复合菌肥，根据山药生长发育特点，刺激植株生长，全方位为山药提供营养成分，而且能够改善土壤条件，预防山药病虫害。
11.本发明的目的之四在于提供上述山药用复合菌肥的制备方法，所述制备方法简单易操作，适合大规模工业化生产。
12.为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：
13.本发明的第一方面提供了一种山药用复合菌粉，包括按活菌数比的如下组分：复合细菌菌粉：复合真菌菌粉为(20～100):(1～10)；
14.其中所述复合细菌菌粉包括枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌；所述复合真菌菌粉包括哈茨木霉和金龟子绿僵菌。
15.进一步地，所述复合细菌菌粉中枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的活菌数比为(50～200):(1～10):(1～10):(10～30)；
16.和/或，所述复合真菌菌粉中哈茨木霉和金龟子绿僵菌的活菌数比为(1～10):(5～20)。
17.进一步地，所述复合细菌菌粉中枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的活菌数比为(100～150):(2～8):(2～8):(20～28)；
18.和/或，所述复合真菌菌粉中哈茨木霉和金龟子绿僵菌的活菌数比为(2～8):(10～15)。
19.本发明的第二方面提供了第一方面所述的山药用复合菌粉的制备方法，将所述复合细菌菌粉和所述复合真菌菌粉混合得到所述山药用复合菌粉。
20.进一步地，所述复合细菌菌粉的制备方法包括以下步骤：
21.步骤a：将所述枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的菌种分别进行活化，分别得到四种活化后的菌液；
22.步骤b：将步骤a得到的四种活化后的菌液分别制备四种种子液；
23.步骤c：将步骤b得到的四种种子液分别进行液体发酵培养，得到相应的四种发酵液；
24.步骤d：将步骤c得到的四种发酵液混合后进行喷雾干燥；
25.优选地，所述喷雾干燥的速度为800～1300ml/h；
26.优选地，所述喷雾干燥在喷雾干燥塔进行，喷雾干燥塔的入口温度为145～150℃，出口温度为90～95℃。
27.进一步地，所述复合真菌菌粉的制备方法包括以下步骤：
28.步骤a：将所述哈茨木霉和金龟子绿僵菌分别进行活化，分别得到两种活化后的菌种；
29.步骤b：将步骤a得到的两种活化后的菌种分别进行液体发酵培养，得到相应的两种母液；
30.步骤c：将步骤b得到的两种母液分别接种到固体培养基上；
31.步骤d：将步骤c得到的两种固体培养基低温干燥后混合得到所述复合真菌菌粉；
32.其中，步骤d中，所述低温干燥的温度不超过35℃。
33.本发明的第三方面提供了一种山药用复合菌肥，包括山药用复合菌粉、载体、肥料增效剂和生物刺激剂；
34.其中，所述山药用复合菌粉包括第一方面所述的山药用复合菌粉或第二方面所述的制备方法制备得到的山药用复合菌粉。
35.进一步地，所述载体包括黄腐酸钾；
36.和/或，所述肥料增效剂包括海藻多糖；
37.和/或，所述生物刺激剂包括壳寡糖。
38.进一步地，包括按照质量份数计的如下组分：山药用复合菌粉200～500份、黄腐酸钾200～500份、海藻多糖100～300份和壳寡糖5～30份。
39.本发明的第四方面提供了第三方面所述的山药用复合菌肥的制备方法，将所述山药用复合菌粉、黄腐酸钾、海藻多糖和壳寡糖混合均匀得到。
40.本发明提供的山药用复合菌粉，结合山药生长和病虫害特点，选取枯草芽孢杆菌，侧孢芽孢杆菌，多粘芽孢杆菌，苏云金芽孢杆菌以及哈茨木霉，金龟子绿僵菌复配，协同工作改善土壤结构，同时防病害、虫害、促进植株生长。上述各菌群配合使用时对山药病虫害抑制效率高于单菌的总和，且无毒无污染，山药植株也不产生抗药性。
41.本发明提供的山药用复合菌粉的制备方法，将菌种活化后的种子液进行发酵，制作成本低，保留了微生物分泌的细胞分裂素、吲哚乙酸、赤霉素、维生素、氨基酸等生理活性
物质，营养、活性成分含量高。这些物质促进新根萌发、植株生长、块茎膨大，间接提高山药产量。
42.本发明提供的山药用复合菌肥，其中微生物菌剂通过竞争、抗生、溶菌等方式形成保护屏障，抑制病原菌生长繁殖；载体、肥料增效剂和生物刺激剂为植物生长提供营养物质，且提高植株抗逆性，且能螯合金属离子，利于植物利用。该复合菌肥各组分之间协同增效，能防治植物病害、增强植株抗性、促进植物生长、提高山药产量。
43.本发明提供的山药用复合菌肥的制备方法，将山药用复合菌粉、黄腐酸钾、海藻多糖和壳寡糖混合均匀即可得到，可根据栽培土壤特点调节配比，原料用的复合菌粉仍能保持菌种活性。工艺简单，节省劳力，适合大规模工业化生产。
具体实施方式
44.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。因此，以下对本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
45.山药因其特有的种植、生长方式，土壤条件对其生长和山药品质会造成重要影响。考虑到山药扎根深的特点，部分山药扎根甚至可达到1m以下的土壤，在山药成长过程中，必须加强病虫害防治。山药常见病有炭疽病、褐斑病、根茎腐病、枯萎病，主要是由土壤中的胶孢炭疽菌、薯蓣色链隔孢菌、茄腐皮镰刀菌或尖孢镰刀菌引起。山药常见的地下害虫主要有地老虎、金针虫和蛴螬。本发明将针对上述病虫害提出综合性防治方法。
46.根据本发明的第一方面提供的一种山药用复合菌粉，包括按活菌数比的如下组分：复合细菌菌粉：复合真菌菌粉为(20～100):(1～10)；
47.其中所述复合细菌菌粉包括枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌；所述复合真菌菌粉包括哈茨木霉和金龟子绿僵菌。
48.本发明提供的山药用复合菌粉，结合山药生长和病虫害特点，选取枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌以及哈茨木霉、金龟子绿僵菌复配，协同工作改善土壤结构，改善了现有技术依靠施用大量化肥增产的问题。同时防病害、虫害、促进植株生长，降低了目前农药的使用量。上述各菌群以一定比例配置时对山药病虫害抑制效率高于单菌的总和，改善了现存的微生物产品菌种单一、活力低、功效单一的技术问题，而且无毒无污染，山药植株也不产生抗药性。
49.枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种，cas号68038
‑
70
‑
0。单个细胞0.7～0.8
×
2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，可形成内生抗逆芽孢，芽孢0.6～0.9
×
1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。生长、繁殖速度较快，菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭，是一种需氧菌。枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。枯草芽孢杆菌还能产生抑制细菌、病毒、真菌和病原体的生长的抗生素类物质，这些抗菌物质以磷脂类、氨基糖类、肽类和脂肽类等抗生素为主。其中，脂肽类抗生素是枯草芽孢
杆菌最重要的抗菌物质。
50.侧孢芽孢杆菌改善土壤微生态环境，促进团粒结构形成，改良土壤质地，增加土壤有益微生物数量，增大革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌比率，改善土壤微生态环境。侧孢芽孢杆菌的大量繁殖产生粘性分泌物，增加土壤有机质，促进土壤团粒结构的形成，改善土壤的通透性、保墒性、保温性、保肥性。
51.多粘芽孢杆菌以芽孢形式存在，耐温性好，质量稳定，“以菌治菌”，药效持久；“药肥兼能”，不仅能防治青枯病、枯萎病、根腐病、软腐病等土传病害，而且具有明显的促进生长、提高山药产量、改善山药品质的作用。
52.苏云金芽孢杆菌的菌株可产生内毒素(伴胞晶体)和外毒素两类毒素，使害虫停止取食，害虫均因饥饿、细胞壁破裂、血液败坏和神经中毒而死。苏云金芽孢杆菌经害虫食入后，寄生于寄主的中肠内，在肠内合适的碱性环境中生长繁殖，晶体毒素经过虫体肠道内蛋白酶水解，形成有毒效的较小亚单位，它们作用于虫体的中肠上皮细胞，引起肠道麻痹、穿孔、虫体瘫痪、停止进食。随后苏云金杆菌进入血腔繁殖，引起败血症，导致虫体死亡。
53.哈茨木霉对山药生长环境中的腐霉菌、立枯丝核菌、镰刀菌、黑根霉、柱孢霉、核盘菌、齐整小核菌等病原菌引起的植物病害有预防作用。哈茨木霉菌在植物的根围、叶围迅速生长，抢占植物体表面的位点，形成一个保护罩，阻止病原菌接触到植物根系及叶片表面，以此来保护植物根部、叶部免受上述病原菌的侵染，并保证植株能够健康地成长。
54.金龟子绿僵菌在山药根部形成根际共生关系而进行长期宿存，对土壤中存在的害虫通过害虫体壁进行主动入侵而感染不同害虫，在害虫血腔中可进行酵母状繁殖，产生大量虫菌体，同时可产生破坏素等杀虫毒素，抑制害虫免疫、加速杀虫。在害虫寄主不存在时，金龟子绿僵菌还可与植物根部形成根际共生关系而进行长期宿存，为山药植株生长提供长效保护。
55.细菌与真菌的比值影响着山药植株的生长和山药的产量。本发明细菌和真菌的比值设置在(20～100):(1～10)的范围内。在本发明的一种优选实施方式中，山药用复合菌粉中复合细菌菌粉与复合真菌菌粉按活菌数比值典型但非限制性的为100:1，50:1，20:1，10:1，2:1。
56.进一步地，所述复合细菌菌粉中枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的活菌数比为(50～200):(1～10):(1～10):(10～30)。
57.在复合细菌菌粉中，枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的活菌数比典型但非限制性的为50:1:1:10，20:1:1:3，10:1:1:1或200:1:1:10。
58.和/或，所述复合真菌菌粉中哈茨木霉和金龟子绿僵菌的活菌数比为(1～10):(5～20)。
59.复合真菌菌粉的活菌数比典型但非限制性的为2:1，1:2，1:5，1:10或1:20。
60.进一步地，所述复合细菌菌粉中枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的活菌数比为(100～150):(2～8):(2～8):(20～28)。
61.在本发明的一种优选实施方式中，枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的活菌数比典型但非限制性的为50:1:1:10，25:2:2:5，30:2:2:7或30:2:2:5。
62.和/或，所述复合真菌菌粉中哈茨木霉和金龟子绿僵菌的活菌数比为(2～8):(10
～15)。
63.在本发明的一种优选实施方式中，哈茨木霉和金龟子绿僵菌的活菌数比典型但非限制性的为1:5，2:15，4:5，8:15或1:3。
64.根据本发明第二方面提供的第一方面所述的山药用复合菌粉的制备方法，将所述复合细菌菌粉和所述复合真菌菌粉混合得到所述山药用复合菌粉。
65.本发明提供的山药用复合菌粉的制备方法，将菌种活化后的种子液进行发酵，制作成本低，保留了微生物自身代谢产物，营养、活性成分含量高。
66.进一步地，所述复合细菌菌粉的制备方法包括以下步骤：
67.步骤a：将所述枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的菌种分别进行活化，分别得到四种活化后的菌液；
68.步骤b：将步骤a得到的四种活化后的菌液分别制备四种种子液；
69.步骤c：将步骤b得到的四种种子液分别进行液体发酵培养，得到相应的四种发酵液；
70.步骤d：将步骤c得到的四种发酵液混合后进行喷雾干燥；
71.优选地，所述喷雾干燥的速度为800～1300ml/h；
72.优选地，所述喷雾干燥在喷雾干燥塔进行，喷雾干燥塔的入口温度为145～150℃，出口温度为90～95℃。
73.菌种活化就是将保藏状态的菌种放入适宜的培养基中培养，逐级扩大培养得到纯而壮的培养物，即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。菌种发酵有一般需要2
‑
3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化，让菌种逐渐适应培养环境。
74.将活化后的菌种进行扩培，缩短发酵周期，让细菌繁殖尽早迎来稳定期后进行发酵培养。发酵培养是细菌在合适的生长条件下，大量繁殖的过程。本发明细菌培养过程使用的是液体培养基，液体培养基营养物质分布均匀，与菌体表面接触充分，还能大量溶解微生物的代谢产物。因此发酵培养的发酵液中存在大量细菌以及细菌的代谢产物，例如细胞分裂素、吲哚乙酸、赤霉素、维生素、氨基酸等。
75.喷雾干燥是系统化技术应用于物料干燥的一种方法。于干燥室中将混合后的发酵液雾化后，在与热空气的接触中，水分迅速汽化，即得到干燥后的细菌菌粉，避免了粉碎过程中对菌体的破坏和杀死。
76.需要说明的是，喷雾干燥过程中会根据目标菌粉的活菌浓度，使用黄腐酸钾进行稀释。
77.所述的喷雾干燥在喷雾干燥塔中进行，喷雾干燥的速度典型但非限制性的为800ml/h，1000ml/h或1300ml/h。发酵液在喷雾干燥塔的入口温度典型但非限制性的为145℃，146℃，147℃，148℃，149℃或150℃，菌粉在喷雾干燥塔的出口温度典型但非限制性的为90℃，91℃，92℃，93℃，94℃或95℃。
78.进一步地，所述复合真菌菌粉的制备方法包括以下步骤：
79.步骤a：将所述哈茨木霉和金龟子绿僵菌分别进行活化，分别得到两种活化后的菌种；
80.步骤b：将步骤a得到的两种活化后的菌种分别进行液体发酵培养，得到相应的两
种母液；
81.步骤c：将步骤b得到的两种母液分别接种到固体培养基上；
82.步骤d：将步骤c得到的两种固体培养基低温干燥后混合得到所述复合真菌菌粉；
83.其中，步骤d中，所述低温干燥的温度不超过35℃。
84.根据本发明的第三方面提供的一种山药用复合菌肥，包括山药用复合菌粉、载体、肥料增效剂和生物刺激剂；
85.其中，所述山药用复合菌粉包括第一方面所述的山药用复合菌粉或第二方面所述的制备方法制备得到的山药用复合菌粉。
86.本发明提供的山药用复合菌肥通过添加菌粉、载体、肥料增效剂和生物刺激剂全方位保障山药植株的生长，其中设置多种菌体有利于土壤修复和土壤改良，并且可以起到抑菌抗虫抗病的作用，还能够避免土壤板结、酸化，增强土壤透气性，并制备方法的菌体发酵采用复合发酵工艺，富含胞外多糖等生物活性物质，使作物高产优质和保证土壤可持续高效耕作。载体、肥料增效剂和生物刺激剂共同作用，增强作物抗寒、抗旱等的抗逆性和抵御病虫害的能力。
87.载体是承载菌粉的主要物质，施入土壤后，能为微生物提供有机质等营养物质，利于生长繁殖，防止土壤中有机质含量低，微生物生长繁殖受限。
88.肥料增效剂可直接作用于作物，也可以提高土壤肥效。可活化土壤中难以利用的矿质营养，补充农作物必须的中微量元素；可去除土壤有害物质，净化修复土壤，改善土壤结构；可促进微生物活动，增强作物抗逆性，改善品质。
89.生物刺激剂的靶标是山药植株本身，它可改善植株的生理生化状态，提高农药效果和肥料的利用率。激活植株先天性免疫系统，生根、抑菌防病、抗逆、提高品质。
90.进一步地，所述载体包括黄腐酸钾；
91.和/或，所述肥料增效剂包括海藻多糖；
92.和/或，所述生物刺激剂包括壳寡糖。
93.在本发明的一种优选实施方式中，载体典型但非限制性的为黄腐酸钾。黄腐酸钾对山药植株生长有益，可以螯合金属离子，利于植物利用；防治植物病害，增强抗性；提高营养吸收，促进植物生长。
94.在本发明的一种优选实施方式中，肥料增效剂典型但非限制性的为海藻多糖。海藻多糖为微生物生长发育提供营养物质，利于微生物的生长繁殖。可以刺激山药植株生长，提高植物的抗寒、抗病、抗涝等抗逆能力。
95.在本发明的一种优选实施方式中，生物刺激剂典型但非限制性的为壳寡糖。壳寡糖改变土壤菌群，促进有益微生物的生长。壳寡糖还可诱导山药植株的抗病性，对多种真菌、细菌、病毒和线虫产生免疫和杀灭作用。复合海藻多糖促进山药植株对营养元素的吸收，促进根系的生长，增加产量、健壮植株、增强抗逆性、达到根深叶茂、改善品质的作用，提高山药的抑菌抗菌功效。
96.进一步地，包括按照质量份数计的如下组分：山药用复合菌粉200～500份、黄腐酸钾200～500份、海藻多糖100～300份和壳寡糖5～30份。
97.在本发明的一些优选实施方式中，山药复合菌粉典型但非限制性的为200份，300份，400份或500份；黄腐酸钾典型但非限制性的为200份，300份，400份或500份；海藻多糖典
型但非限制性的为100份，200份或300份；壳寡糖典型但非限制性的为5份，10份，20份或30份。
98.根据本发明第四方面提供的第三方面所述的山药用复合菌肥的制备方法，将所述山药用复合菌粉、黄腐酸钾、海藻多糖和壳寡糖混合均匀得到。
99.本发明提供的山药用复合菌肥的制备方法工艺简单，节省劳力，适合大规模工业化生产。山药用复合菌肥充分利用植物、微生物和土壤相互作用原理及根系对环境的主动响应原理，以根际微生物、肥料养分两方面为切入点，在满足山药所需氮磷钾养分的基础上，通过有机质调节土壤透气性，通过黄腐酸钾对钙离子的螯合促进钙的有效吸收，同时海藻多糖和壳寡糖具有调节山药生长的功能，刺激山药根系的延伸生长及须根的发生，最终达到促进山药植株生长发育、提高产量的效果。
100.下面结合实施例对本发明的实施方式作详细说明。在不冲突的情况下，下述的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
101.实施例1
102.本实施例提供一种山药用复合菌粉，具体步骤如下：
103.步骤1：将所保存的枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌菌种分别接种于lb平板培养基上，36℃培养40h后，转接于lb液体培养基的摇瓶中进一步培养，培养温度36℃，摇床转速145r/min，培养时间36h。将活化后的菌液分别转接于各自的种子罐中，接种量3％，培养温度36℃，压强0.8mpa，通气量50m3/h，发酵24h，作为种子液。将所制备种子液分别转接于各自的液体发酵培养基中进行发酵培养。
104.枯草芽孢杆菌发酵培养：接种量5
‑
8％，培养温度32
‑
36℃，转速180
‑
200r/min，通气量80
‑
100m3/h，待芽孢率达98％时停止发酵。培养基由玉米面8
‑
10份、豆粕25
‑
30份、氯化钠3
‑
5份、硫酸铵3
‑
5份组成，培养基原料经超微粉碎机粉碎。ph值6.5
‑
7.0。
105.侧孢芽孢杆菌发酵培养：接种量5
‑
8％，培养温度32
‑
35℃，转速160
‑
180r/min；通气量60
‑
80m3/h，待芽孢率达98％时停止发酵。培养基由玉米面15
‑
20份、豆粕10
‑
15份、磷酸二氢钠1
‑
2份、硫酸镁0.5
‑
0.8份组成，培养基原料经超微粉碎机粉碎。ph值6.0
‑
7.0。
106.多粘芽孢杆菌发酵培养：接种量8
‑
10％，培养温度32
‑
35℃，转速为120
‑
150r/min，通气量50
‑
80m3/h，待芽孢率达98％时停止发酵。培养基由玉米淀粉15
‑
20份、豆粕30
‑
35份、氯化钠4
‑
7份、碳酸钙3
‑
5份组成，培养基原料经超微粉碎机粉碎。ph值6.0
‑
7.2。
107.苏云金芽孢杆菌发酵培养：接种量8
‑
13％，培养温度28
‑
35℃，转速为160
‑
180r/min通气量80
‑
100m3/h，待芽孢率达98％时停止发酵。培养基由玉米淀粉10
‑
15份、豆粕10
‑
15份、硫酸铵3
‑
6份、磷酸氢二钾2
‑
4份、硫酸镁0.4
‑
0.8份、氯化钠0.4
‑
0.6份、硫酸亚铁0.05
‑
0.1份组成，培养基原料经超微粉碎机粉碎。ph值为6.5
‑
7.5。
108.步骤2：将步骤1得到的枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌发酵液按照活菌数比值为50:1:1:10混合后，通过喷雾干燥塔进行喷雾干燥，入料速度为1000ml/h，入口温度为145℃，出口温度为95℃，得到细菌菌粉。
109.步骤3：将所保存的哈茨木霉、金龟子绿僵菌分别接种于pda平板培养基上，培养温度30℃，活化时间4d。将活化后的哈茨木霉、金龟子绿僵菌种子分别转接于各自的液体发酵培养基上。
110.哈茨木霉液体发酵培养：培养温度25
‑
30℃，转速150
‑
180r/min，通气量0.8
‑
1.0vvm，ph值6.5
‑
7.0，培养时间5
‑
6d。培养基由玉米淀粉15
‑
20份、豆粕30
‑
40份、葡萄糖15
‑
20份、氯化钠2
‑
3份、磷酸二氢钠0.4
‑
0.5份、硫酸铵4
‑
6份、碳酸钙2
‑
4份、硫酸镁0.4
‑
0.5份组成。
111.金龟子绿僵菌液体发酵培养：培养温度28
‑
30℃，转速180
‑
200r/min，通气量0.8
‑
1.0vvm，ph值6.5
‑
7.0，培养时间5
‑
6d。培养基由葡萄糖15
‑
20份、酵母膏8
‑
10份，硫酸铵4
‑
6份，磷酸二氢钾0.4
‑
0.6份，硫酸镁0.1
‑
0.15份，硫酸亚铁0.1份组成。
112.步骤4：将步骤3得到的母液转接于固体培养基上。
113.哈茨木霉固体发酵培养：接种量18
‑
22％、温度25
‑
30℃，湿度70
‑
80％，培养2周，培养初始ph值6.5
‑
7.0，每隔48h翻抛一次。固体培养基由麦麸35
‑
40份、稻壳25
‑
30份、秸秆25
‑
32份，豆粕4
‑
6份，硫酸二氢钾1
‑
3份、硫酸镁2
‑
4份组成，培养基原料经超微粉碎机粉碎，培养基厚度4cm。
114.金龟子绿僵菌固体发酵培养：接种量20
‑
22％、温度25
‑
30℃，湿度75％
‑
80％，培养2周，培养初始ph值6.5
‑
7.0，每隔48h翻抛一次。固体培养基由麦麸50
‑
70份、玉米粉18
‑
22份、豆粕8
‑
12份组成，培养基原料经超微粉碎机粉碎，培养基厚度4cm。
115.步骤5：将步骤4的含有哈茨木霉的固体培养基和含有金龟子绿僵菌的固体培养基经低温干燥后按照活菌数比为1:5混合，得到复合真菌菌粉。
116.步骤6：将步骤2得到的细菌菌粉和步骤5得到的真菌菌粉按照活菌数比为50:1混合，得到山药用复合菌粉。
117.实施例2
118.本实施例提供一种山药用复合菌粉，与实施例1不同的是，步骤2中枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌发酵液按照活菌数比值为20:1:1:3混合。其余步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
119.实施例3
120.本实施例提供一种山药用复合菌粉，与实施例1不同的是，步骤2中枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌发酵液按照活菌数比值为10:1:1:1混合，其余步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
121.实施例4
122.本实施例提供一种山药用复合菌粉，与实施例1不同的是，步骤2中枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌发酵液按照活菌数比值为200:1:1:10混合，其余步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
123.实施例5
124.本实施例提供一种山药用复合菌粉，与实施例1不同的是，步骤2中枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌发酵液按照活菌数比值为30:2:2:7混合，其余步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
125.实施例6
126.本实施例提供一种山药用复合菌粉，与实施例1不同的是，步骤2中枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌发酵液按照活菌数比值为25:2:2:5混合，其余步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
127.实施例7
128.本实施例提供一种山药用复合菌粉，与实施例1不同的是，步骤2中枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌发酵液按照活菌数比值为40:1:1:10混合，其余步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
129.实施例8
130.本实施例提供一种山药用复合菌粉，与实施例1不同的是，步骤5中含有哈茨木霉的固体培养基和含有金龟子绿僵菌的固体培养基经低温干燥后按照活菌数比为2:1混合，其余步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
131.实施例9
132.本实施例提供一种山药用复合菌粉，与实施例1不同的是，步骤5中含有哈茨木霉的固体培养基和含有金龟子绿僵菌的固体培养基经低温干燥后按照活菌数比为1:2混合，其余步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
133.实施例10
134.本实施例提供一种山药用复合菌粉，与实施例1不同的是，步骤5中含有哈茨木霉的固体培养基和含有金龟子绿僵菌的固体培养基经低温干燥后按照活菌数比为1:20混合，其余步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
135.实施例11
136.本实施例提供一种山药用复合菌粉，与实施例1不同的是，步骤6中细菌菌粉和真菌菌粉按照活菌数比为100:1混合，其余步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
137.实施例12
138.本实施例提供一种山药用复合菌粉，与实施例1不同的是，步骤6中细菌菌粉和真菌菌粉按照活菌数比为2:1混合，其余步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
139.对比例1
140.本对比例提供一种山药用复合菌粉，其与实施例1不同的是，步骤6中细菌菌粉和真菌菌粉按照1:2混合，其余步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
141.对比例2
142.本对比例提供一种山药用复合菌粉，其与实施例1不同的是，细菌菌粉中只包括枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌和多粘芽孢杆菌，且其活菌数比例为50:1:1，其余原料和制备步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
143.对比例3
144.本对比例提供一种山药用复合菌粉，其与实施例1不同的是，真菌菌粉只含有哈茨木霉，其余原料和制备步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
145.对比例4
146.本对比例提供一种山药用复合菌粉，其与实施例1不同的是，复合菌粉中只含有细菌菌粉，不含真菌菌粉，其余原料和制备步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
147.对比例5
148.本对比例提供一种山药用复合菌粉，其与实施例1不同的是，复合菌粉中只含有真菌菌粉，不含细菌菌粉，其余原料和制备步骤均与实施例1相同，在此不再赘述。
149.试验例1
150.将实施例1
‑
12和对比例1
‑
5得到的山药用复合菌粉活化后接种在pda培养基平板
四周的4个角点，胶孢炭疽菌、薯蓣色链隔孢菌、茄腐皮镰刀菌、尖孢镰刀菌分别接种在接种过复合菌的pda培养基平板中央，空白组pda培养基上只接种病原菌，置于35℃培养箱中培养，3次重复，3d后，测定抑菌率。抑菌率通过下式(1)计算。
151.抑菌率(％)＝(空白组菌落直径－处理组菌落直径)/空白组菌落直径
×
100％
152.式(1)
153.表1山药用复合菌粉对各病原菌的抑菌效果
[0154][0155][0156]
由表1可知，实施例1－12提供的山药用复合菌粉均有抑制胶孢炭疽菌、薯蓣色链隔孢菌、茄腐皮镰刀菌、尖孢镰刀菌等病原菌生长，且对茄腐皮镰刀菌的抑制效果最佳，说明本发明提供的山药用复合菌粉有很好的防病害的作用。实施例1提供的山药用复合菌粉的抑菌率最好，因此以下实施例提供的山药用复合菌肥均使用实施例1中的菌粉配比。
[0157]
实施例13
[0158]
本实施例提供一种山药用复合菌肥，取实施例1得到的山药用复合菌粉400g、黄腐酸钾200g、海藻多糖200g和壳寡糖20g均匀混合，得到山药用复合菌肥。
[0159]
实施例14
[0160]
本实施例提供一种山药用复合菌肥，实施例13不同的是，山药用复合菌粉为200g、
黄腐酸钾500g、海藻多糖100g和壳寡糖20g，其余步骤均与实施例12相同，在此不再赘述。
[0161]
实施例15
[0162]
本实施例提供一种山药用复合菌肥，实施例13不同的是，山药用复合菌粉为500g、黄腐酸钾200g、海藻多糖100g和壳寡糖20g，其余步骤均与实施例12相同，在此不再赘述。
[0163]
对比例6
[0164]
本对比例提供一种山药用复合菌肥，取实施例1得到的山药用复合菌粉为820g。
[0165]
对比例7
[0166]
本对比例提供一种山药用复合菌肥，取实施例1得到的山药用复合菌粉为500g和黄腐酸钾320g混合均匀，得到山药用复合菌肥。
[0167]
对比例8
[0168]
本对比例提供一种山药用复合菌肥，取实施例1得到的山药用复合菌粉为500g、黄腐酸钾200g和海藻多糖120g混合均匀，得到山药用复合菌肥。
[0169]
对比例9
[0170]
本对比例提供一种山药用复合菌肥，取实施例1得到的山药用复合菌粉为220g、黄腐酸钾200g、海藻多糖200g和壳寡糖200g，混合均匀，得到山药用复合菌肥。
[0171]
试验例2
[0172]
将实施例13
‑
15和对比例6
‑
9得到的山药用复合菌肥0.43g与过筛细土混匀后装入花盆，每盆种植3棵山药栽子，放到日光温室中，5d后将金针虫2龄幼虫、地老虎3龄幼虫、金龟子2龄幼虫(即蛴螬)各接种4头至土壤表面，将24h不能入土的试虫替换，5次重复，接种5d后检查各幼虫存活情况。需要说明的是，山药种植密度按7000株/亩，山药用复合菌肥施用量按1kg/亩，即0.143g/株；空白例不施用任何复合菌肥作为对照。
[0173]
表2山药用复合菌肥对地下害虫的抑制效果
[0174][0175]
试验例3
[0176]
将实施例13
‑
15和对比例6
‑
9得到的山药用复合菌肥在焦作温县于春季种植山药时开始使用，按照下述方式施用：
[0177]
底施：1.5kg/亩复合菌肥，与细土混合均匀后施入种植沟内。
[0178]
追施：出苗后，复合菌肥500g/亩/次，滴灌，每月施用一次，共施用5次。
[0179]
未施山药用复合菌肥的作为空白例。
[0180]
将试验例3中得到山药进行下述测量：
[0181]
采摘季，对山药的鲜重、长度、茎粗和产量进行测量，结果如表3所示。
[0182]
表3山药用复合菌肥对山药产量的影响
[0183]
项目鲜重(kg/株)长度(cm)直径(cm)产量(kg/亩)空白例0.2762.81.831520实施例130.4172.62.232172实施例140.3871.92.181892实施例150.4072.22.201980对比例60.3469.02.091703对比例70.3368.32.031629对比例80.3669.22.111732对比例90.3367.92.011683
[0184]
对山药地上部病情指数的影响，通过下述评级方式进行初步定级：
[0185]
0级：无病，全株叶片无病斑；
[0186]
1级：轻微，下部叶片有病斑，上部叶片无病斑；
[0187]
2级：较重，下部叶片病斑多，上部叶片病斑少，植株落叶率为1％～30％；
[0188]
3级：严重，叶片病斑多，植株落叶率为30％～90％；
[0189]
4级：死亡，植株落叶率达90％以上或植株死亡。
[0190]
对评级后数据统计计算结果如表4所示。
[0191]
定级后进行统计学计算，计算方式如式(2)和式(3)所示。
[0192][0193][0194]
表4山药用复合菌肥对地上部病情指数的影响
[0195]
处理病情指数防效(％)空白例48.2实施例1314.370.33实施例1415.667.63实施例1514.969.09对比例617.962.86对比例719.359.96
对比例817.164.52对比例919.858.92
[0196]
对山药的病斑长度进行测量，计算病斑所占百分比，结果如表5所示。
[0197]
表5山药用复合菌肥对山药根茎腐病的影响
[0198]
项目病斑长度病斑所占百分比(％)空白例21.434.08实施例134.25.79实施例144.86.68实施例154.46.09对比例66.49.28对比例76.79.81对比例85.98.53对比例97.110.46
[0199]
对山药土壤根际微生物数量进行测量，测量结果如表6所示。
[0200]
表6山药用复合菌肥对山药土壤根际微生物数量的影响
[0201][0202][0203]
对山药外观品质进行统计，外观品质主要从畸形、缺陷、长短和粗细均匀、色泽和表面光滑度进行观测，统计结果如表7所示：
[0204]
表7山药用复合菌肥对山药外观品质的影响
[0205]
项目畸形数缺陷数长短、粗细均匀度色泽度表面光滑度空白例较多较多参差不齐颜色暗较粗糙实施例13非常少几乎无均匀颜色亮光滑实施例14少少较均匀颜色较亮较光滑实施例15非常少几乎无均匀颜色亮光滑对比例6较少较少较均匀颜色稍亮较光滑对比例7较少较少相对均匀颜色稍暗相对光滑对比例8少少较均匀颜色较亮较光滑
对比例9较少较少相对均匀颜色稍暗相对光滑
[0206]
由表2可知，施入山药用复合菌肥5天后，地老虎、金针虫、蛴螬的活虫数减少，说明本发明提供的山药用复合菌肥能杀死害虫。由表3可知，本发明提供的山药用复合菌肥可以促进山药块根生长膨大、干物质积累，能够提高山药产量。实时观察显示施用山药用复合菌肥山药块根表面亮度较佳、根毛较多。从表4、表5、表6数据可知，实施例提供的山药用复合菌肥能不同程度降低山药染病程度，增加土壤中细菌含量，抑制土壤真菌生长，减少土壤土传病原菌数量。由表7可知，施用实施例提供的山药用复合菌肥后，山药块根色泽度佳、畸形数少、长短粗细较均匀，外观品质较佳。
[0207]
本发明提供的山药用复合菌肥能防病虫害，促进植株生长，提高山药品质和产量，适合大规模推广使用。
[0208]
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。