一种用于农场现场发酵的多粘类芽孢杆菌药肥及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物肥料与微生物农药领域，特别是涉及一种应用于农场现场发酵 的多粘类芽孢杆菌药肥及其应用。
【背景技术】
[0002] 随着现有农业政策的发展，农场规模化，大型化的趋势进一步加强，芽胞杆菌是目 前生物农药，生物肥料中研究最多的一种微生物，它具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力， 其营养细胞能在真菌性病原菌丝体表面繁衍定殖，有效抑制病菌生长，因此，在控制病害发 生、促进植株生长，提高作物产量等方面显示出了广阔的应用前景。
[0003]多粘类芽抱杆菌是一种产芽孢的革兰氏阳性细菌，属于类芽饱杆菌属。其菌落多 呈浅黄或白色，隆起，粘稠状，表面湿润光滑，菌体呈杆状，G十C含量为40%-50%;利用周生 鞭毛运动，在膨大抱子囊中产生椭圆型芽抱;最适生长pH为7.0，最适温度为28-35°C;兼性 厌氧，分解葡萄糖和其他糖类产酸，有时产气，在营养琼脂上无可溶性色素。
[0004]多粘类芽抱杆菌属的菌株具有芽饱杆菌属菌株的某些共性，不仅具有显著的生防 潜力，还能产生耐热抗逆的芽抱，有利于生防菌剂的生产、剂型加工及在环境中存活、定殖 与繁殖，是植物病害生防微生物的重要组成部分(parthaPatra，etal，2006)。多粘类芽饱杆 菌对植物具有非致病性，同时具有防病作用和促生作用，作为生防菌广泛应用在农业生产 中。多粘类芽抱杆菌能产生肽类、蛋白质类、核苷类、吡嗪类和酚类等多种抗菌物质，能防治 多种植物病害(李蜀等，2007;于淑池等，2004)。
[0005]此外，多粘类芽抱杆菌具有从土壤向植物根部移动定殖的能力（肖春桥等，2004)， 并能通过固氮和溶磷作用为宿主植物提供营养成分(陈志谊等，2001)，促进植株生长，提高 植物抗病原微生物的效果，多粘类芽抱杆菌作用范围广，能防治病原细菌、病原真菌、根结 线虫（肖春桥等，2004)等多种有害微生物，作用机制多样，既有抗菌物质起作用，又有细菌 菌体的直接作用，有可能使诱导宿主植物产生抗病性(赵爽等，2008)。多粘类芽饱杆菌作为 生防菌以应用于很多领域，该菌产生的次生代谢产物能够抑制很多植物病原菌，而且能促 进作物生长，诱导作物产生系统抗病性。童蕴慧等筛选获得抗灰葡萄孢的多粘类芽抱杆菌 w3和Y2-11-1对番茄植株抗灰霉病具有极显著的系统诱导作用，它可以在番茄体表很好地 定殖，定殖时间达l〇-15d(童蕴慧等，2004)。张震等研究发现多粘类芽饱杆菌A2对黄瓜苗期 猝倒病和生长期枯萎病有较好的防治效果，而且该菌能够促进黄瓜的生长，增加干物质含 量。0.1亿cfu/g多粘类芽饱杆菌细粒剂(康地蕾得)是由华东理工大学研发的微生物杀菌 剂，通过抗菌物质、根际位点竞争、诱导植物产生抗病性和促进植物生长等机制抑制植物病 原菌(魏鸿刚等，2008)。多粘类芽抱杆菌具有防病效果好、对人畜安全和无环境污染等优 点，在我国已被农业部列为一级安全菌种。在甜菜上接种内生多粘类芽孢菌S-7后，其显著 提高了甜菜叶片净光合速率，使甜菜叶片光合强度维持在一个较高的水平，因而增加了甜 菜的含糖率(史应武等，2009)。
[0006]多粘类芽抱杆菌产生的次级代谢产物种类较多，成分复杂。张道敬等在多粘类芽 抱杆菌发酵液的乙醇提取物中分离到8种化合物，分别为尿嘧啶、胸腺嘧啶、、金雀异黄素、 5，4二羟基-7-甲氧基黄酮、2，4-二叔丁基苯酚、对羟基苯甲醛、棕搁酸、内消旋-2，3-丁二 醇(张道敬等，2008)。王智文等利用大孔吸附树脂对多粘类饱杆菌Cp-S316产生的抗真菌活 性物质的吸附、解吸性能，并测定了抗真菌活性物质的部分性质（王智文等，2007)。多粘类 芽孢杆菌的抑菌谱较广，代谢产物较丰富，能够产生多种抑菌物质。多粘类芽孢杆菌具有抑 制植物病害的能力，可制成生物制剂用于植物花部、叶、枝干、根部以及果蔬釆后病害防治 上;使用多粘类芽孢杆菌的发酵液，对农作物进行喷施、拌种、灌根等，对植物都产生促进生 长的功效。在生物防治领域，多粘类芽孢杆菌应用很多。虽然以芽孢杆菌为主制备的微生物 农药产品不少，但总体说来，还存在包括研究开发与生产脱节，制剂化困难，产品质量稳定 性差、生产工艺落后，产品一致性不高，生产企业规模小，应用推广难度大的问题，除些之 外，目前芽孢杆菌以可湿性粉剂为主，这种剂型虽然便于储存和运输，但在生产应用中存在 很多制约因子。如施用的可湿性粉剂中大部份以芽孢作为衡量产品中有效成分的惟一标 准，若芽孢不能及时萌发，施用效果则不佳，如王倩利用枯草芽孢杆菌TR21防治巴西蕉枯萎 病时，前期试验利用TR21菌株NB发酵液灌根和叶腋接种都能有效防治枯萎病，但是利用芽 孢制备可湿性粉剂的灌根与叶腋效果却不理想，显示了去掉发酵液后的纯芽孢可能因为萌 发困难和缺少发酵液中有效成分而使防效下降。此外，在生产实践中，随着作物的生长，需 要定期不断的补充生防菌才能获得较好的防效，但现有可湿性粉剂价格一般较高，而且可 湿性粉剂的溶解需要使用大量的水，而随着植物病害的蔓延，洁净水源也成为制约生防制 剂使用的因子，与化学药剂不同的是芽孢溶解到水中并不能直接杀死水中的病原菌，因而 如果使用已被病原菌污染的水体施用生防菌，还会促进病害的蔓延。
[0007] 为了能够利于生产，运输，我们生产产品中的芽孢菌主要是以孢子的状态存在，但 其应用于作物，土壤，水体中，都需要的主要是营养态细胞，如在水产上使用芽孢杆菌制剂， 在使用前会经过活化，即使芽孢状态的芽孢杆菌转化为营养态细胞，但传统上的活化主要 是加入一些红糖，或葡萄糖，培养基之类的营养物质诱导其生长繁殖，如芽孢杆菌制剂:红 糖:水以1:1:10的比例进行"活化"，但传统上的"活化"存在以下几个方面的问题： 一、 是高营养培养基加水后易使空气与水中的酵母菌，乳酸菌繁殖迅速，消耗培养基中 营养，迅速降低培养液中PH，抑制芽孢的萌发与生长； 二、 是芽孢萌发前期需要时间长，一般需要4小时，芽孢才会开始萌发，而此时，由于"活 化"液中酵母菌与乳酸菌的大量繁殖导致pH下降迅速，已经可以抑制芽孢的萌发与繁殖，从 而大大影响芽孢萌发； 三、 是高营养培养基中也易感染大肠杆菌，原著的植物病害菌等有害杂菌，导致施用后 效果差仍致有反作用； 四、 是芽孢菌用量大，效果不稳定。
[0008] 随着土地允许流转，国家提倡农场式经营，农场规模化，大型化的趋势将会进一步 加强，农场现场进行扩繁发酵生防菌则适应用了农业市场的需求，然而到目前为止还没有 公开过有关一种应用于农场现场发酵扩繁的能够较好控制杂菌与促进芽孢快速萌发的多 粘类芽孢杆菌药肥及其应用的相关技术。
【发明内容】
[0009] 为了克服现有技术的缺点，本发明提供一种应用于农场现场发酵扩繁的能够较好 控制杂菌与促进芽孢快速萌发的多粘类芽孢杆菌药肥及其应用，具体说是提供一种可应用 于农场现场发酵扩繁，利用纳他霉素与多粘菌素抑制病原真菌，酵母菌等真菌与大肠杆菌， 沙门氏菌等革兰氏阴性菌的生长，利用丙氨酸，果糖，缬氨酸等芽孢萌发剂，能快速促进芽 孢的萌发，提高芽孢萌发效率，减少芽孢萌发时间，从而快速使用多粘类芽孢杆菌繁殖而 占据优势菌种，而更好的抑制其他的杂菌与有害菌，因此，可以得到一种用菌量少，成本低， 现场发酵的发酵液菌含量高，活性高，杂菌少，具有防病促生，增产提质，效果稳定，可作为 微生物农药与肥料使用的多粘类芽孢杆菌发酵液。
[0010] 为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种用于农场现场发酵的多粘 类芽孢杆菌药肥，制备该多粘类芽孢杆菌药肥的原料为： 多粘类芽孢杆菌菌粉50-200份，硫酸粘杆菌素10-50份，纳他霉素1-2份，L-丙氨酸3-4