本发明涉及药物化学领域；具体地说，本发明涉及新型的蝶啶酮衍生物、其合成方法及其作为表皮生长因子受体酪氨酸激酶(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase,EGFR)抑制剂在治疗EGFR介导的疾病(肿瘤)中的应用。
背景技术：
癌症亦称恶性肿瘤，是以细胞异常增殖及转移为特点的一大类疾病，具有发病率高和死亡率高的特点，是威胁人类健康，导致死亡的恶性疾病之一。研究数据表明，2008年全球有1270万癌症患者，其中死亡人数高达700余万。而全世界20％的新发肿瘤病人在中国，24％的肿瘤死亡病人在中国。如果不采取有效措施预防，或拿出更优的治疗方案，预计到2030年，世界范围内每年将出现2600万新增癌症病例，癌症死亡人数将达到1700万。在现有的癌症中，肺癌是目前世界范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌患者的80％以上。据世界卫生组织(WHO)预测，到2025年，我国每年新增肺癌病例将超过100万。一旦被确诊为肺癌，患者便只有渺茫的生存前景，5年生存率不到15％。
从20世纪80年代开始，随着肿瘤分子生物学研究的深入，肿瘤发生、发展的分子机制日益清晰。在诸多诱发癌症的因素中，癌细胞中由基因突变引起的高表达的某些蛋白激酶是导致其信号转导通路异常的主要因素之一。蛋白质酪氨酸激酶是信号传递过程中的重要因子，参与一系列细胞活动，与细胞生长、分化、增殖密切相关。它催化ATP的γ磷酸基转移到许多重要蛋白质的酪氨酸残基上，使酚羟基磷酸化，从而传递信号。因此，发展选择性的蛋白激酶抑制剂来阻断或者调控由于这些信号通路异常产生的疾病已经被视为抗肿瘤药物开发的一个有效的研究策略。在众多的酪氨酸激酶中，表皮生长因子受体酪氨酸激酶(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase,EGFR)是不可或缺的重要组成部分。EGFR由1186个氨基酸组成，编码一个分子量为170-kDa的跨膜糖 蛋白。EGFR能够介导多条信号转导通路，将胞外信号传递到胞内，对正常细胞和肿瘤细胞的增殖、分化和凋亡均发挥重要的调节作用(Cell,2000,100,113-127)。EGFR是许多正常上皮组织(如皮肤和毛囊)的组成性表达成分，而在大部分实体瘤中，EGFR存在过表达或者高表达。例如，在肺癌中，EGFR的表达率达到40～80％。因此选择性地抑制EGFR，干扰其介导的信号转导途径，可以达到治疗肺癌的目的，为靶向治疗肺癌开辟了一条可行之路。
临床治疗上，结合传统的放疗、化疗，以EGFR靶向药物如吉非替尼(Iressa)、厄洛替尼(Tarceva)等进行一线药物在肺癌治疗中被证明是非常有效的。然而，临床实践表明：大部分非小细胞肺癌患者在使用Gefitinib或Erlotinib治疗之后，会在6-12月内出现获得性耐药。其中大约50％病例的耐药性与EGFR激酶结构域中一个氨基酸残基的突变(790位苏氨酸残基突变为甲硫氨酸，T790M)有关(The New England Journal of Medicine,2005,352,786-792)。T790M突变导致抑制剂与EGFR结合时产生空间位阻或者增加EGFR与ATP的亲和力，使得这类可逆性结合的竞争性抑制剂的抗癌效果大大减弱。耐药性的产生不但降低了病人对药物的敏感性，也大大降低了肿瘤患者的生存质量。为了克服T790M突变引起的耐药性，一系列不可逆ATP竞争性抑制剂(如CI-1033、HKI-272，PF00299804等)已进入临床研究阶段。不可逆抑制剂含有一个迈克尔受体片段，能与EGFR的ATP结合位点的一个保守氨基酸残基(Cys797)形成共价键，从而获得了比可逆性抑制剂更强的EGFR结合亲和力。尽管如此，但由于此类药物对野生型和突变型EGFR选择性较差，因此其最大耐受量(MTD)较低，临床实验效果并不明显。此外，有些化合物虽然有着不错的活性，但其成药能力不佳，从而限制了它们的临床应用。
因此，研究开发选择性抑制T790M突变，克服临床耐药的EGFR靶向药物具有重大的临床意义和应用前景。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种结构全新的蝶啶酮衍生物，这些衍生物能够选择性抑制EGFR T790M突变并且具有良药的类药性质。
在第一方面，本发明提供式I所示化合物或其药学上可接受的盐：
式中，
R1独立选自氢、取代或未取代的C1-C10烷基、C2-C6链烯基、C2-C6炔基、任选取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的苄基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳杂环基；
A为二价基团-(CRaRb)n-A’-或不存在，其中Ra和Rb独立选自H、C1-3烷基、卤素，n为0-3的整数；
A’为苯环、五元或六元杂环或C3-C8环烷基；
R2独立选自氢、未取代的或卤素取代的C1-C4烷基、硝基、氨基、卤素、C1-C6烷氧基、任选取代的酰氧基、任选取代的酰氨基、任选取代的酰基；其中，当A’为苯环时，R2为间位取代；
m为0-3的整数；
R7独立选自取代或未取代的NH2、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳杂环基、取代或未取代的C1-C10烷基；
R3、R4、R5、R6独立选自H、卤素、取代或未取代的C1-C6(优选C1-C3)烷氧基、取代或未取代的C1-C6(优选C1-C3)烷基、NRcRd；其中Rc和Rd各自独立选自C1-C3烷基；
其中，当R1为H并且m为0时，R3、R4、R5和R6不同时为H；
当R1为H、m为0、A’为苯环并且R7为时，R3和R6不能其一为甲氧基，另一为H。
在具体的实施方式中，R1独立选自氢、取代或未取代的C1-C10烷基(优选C1-C6烷基)、取代或未取代的苯基、取代或未取代的苄基、任选取代的C3-C8环烷基；
A’为苯环、五元或六元含氮杂环；
R2独立选自C1-C3烷基、C2-C4烯基取代的酰氨基、取代或未取代的C2-C4烯基取代的酰基；
R7选自：
R3、R4、R5、R6独立选自H、取代或未取代的C1-C6(优选C1-C3)烷氧基、取代或未取代的C1-C6(优选C1-C3)烷基。
在具体的实施方式中，
R1独立选自氢、取代或未取代的C1-C6烷基、或取代或未取代的苯基；
n＝0；
A’为苯环、或五元含氮杂环；
R2独立选自C2-C4烯基取代的酰氨基、或C2-C4烯基取代的酰基；
m＝0-2的整数；
R7选自：
或
R3、R4、R5、R6独立选自H、取代或未取代的C1-C3烷氧基、取代或未取代的C1-C3烷基。
在第二方面，本发明提供选自下组的化合物或其药学上可接受的盐：
在第三方面，本发明提供选自下组的化合物或其药学上可接受的盐：
在第四方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物含有第一到第 三方面所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
在优选的实施方式中，所述药物组合物是适于口服的剂型，包括但不限于片剂、溶液剂、混悬液、胶囊剂、颗粒剂、粉剂。
在第五方面，本发明提供第一到第三方面所述的化合物在制备治疗或预防EGFR介导的疾病，或抑制EGFR的药物中的用途。
在具体的实施方式中，所述EGFR介导的疾病为癌症。
在具体的实施方式中，所述癌症选自下组：非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、乳腺癌、前列腺癌、神经胶质细胞瘤、卵巢癌、头颈部鳞癌、宫颈癌、食管癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、结肠癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、胃癌、多发性骨髓癌和实体瘤。
在第六方面，本发明提供利用第一到第三方面所述的化合物治疗或预防EGFR介导的疾病方法。
在优选的实施方式中，所述EGFR介导的疾病为癌症；优选地，所述癌症选自下组：非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、乳腺癌、前列腺癌、神经胶质细胞瘤、卵巢癌、头颈部鳞癌、宫颈癌、食管癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、结肠癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、胃癌、多发性骨髓癌和实体瘤。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
发明人经过广泛而深入的研究，出乎意料地发现一批结构全新的蝶啶酮衍生物，这些衍生物具有良药的类药性质且能够选择性抑制EGFR T790M突变。这些化合物对EGFR-T790M/L858R激酶抑制活性IC50值与抑制H1975细胞(非小细胞肺癌细胞，EGFR-T790M/L858R)增殖的IC50值达到nM水平，并且具备优异的溶解度。在此基础上完成了本发明。
术语定义
本文中涉及到的一些基团定义如下：
本文中，“烷基”指碳链长度为1-10个碳原子的饱和的支链或直链烷基，优选的烷基包括长2-8个碳原子、1-6个、1-4个碳原子、1-3个碳原子不等的烷基。烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、庚基等。烷基可以被1个或多个取代基取代，例如被卤素或卤代烷基取代。例如，烷基可以是被1-4个氟原子取代的烷基，或者烷基可以是被氟代烷基取代的烷基。
本文中，“环烷基”指包含3-10个，优选3-8个环碳原子的饱和的环状烷基。环烷基的例子包括但不限于环丙基、环丁基、环己基、环庚基等。环烷基可以被1个或多个取代基取代，例如被卤素或卤代烷基取代。例如，环烷基可以是被1-4个氟原子取代。在优选的实施方式中，本发明中的环烷基是环己基。
本文中，“烷氧基”指被烷基取代的氧基。优选的烷氧基是长1-6个碳原子的烷氧基，更优选为长1-4个碳原子的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基等。在具体的实施方式中，烷氧基可以是取代的烷氧基，例如，烷氧基取代的烷氧基。在具体的实施方式中，优选C1-C3烷氧基取代的C1-C3烷氧基。
本文中，“链烯基”通常表示具有至少一个双键的单价烃基，通常含有2-8个碳原子，优选含有2-6个碳原子，更优选含有2-4个碳原子，可以是直链或支链。链烯基的例子包括但不限于乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基、己烯基等等。
本文中，“卤素”指氟、氯、溴和碘。
本文中，“芳基”指含有6到14个碳原子的单环、双环或三环芳族基团，包括苯基、萘基、菲基、蒽基、茚基、茀基、四氢化萘基、二氢化茚基等。芳基可任选地被1-5个(例如，1、2、3、4或5个)选自以下的取代基取代：卤素、C1-4醛基、C1-6烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羟甲基、卤素取代的烷基(例如三氟甲基)、卤素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、C1-4烷氧基、乙氧甲酰基、N(CH3)和C1-4酰基等、杂环基或杂芳基等。
本文所用“杂环基”包括但不限于含有1-3个选自O、S和N的杂原子的5元或6元杂环基团，包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯烷基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噁唑基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哌啶基、吗啉基等。
本文所用“芳杂环基”是指含有5-14个环原子，并且有6个，10个或14个电子在环体系上共用。而且所含环原子是碳原子和从氧、氮、硫中任选的1-3个杂原子。有用的芳杂环基包括哌嗪基、吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、噻吩基、呋喃基、吡喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、包括但不限制于2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基、吡嗪基、嘧啶基等。
芳杂环基可任选地被1-5个(例如，1、2、3、4或5个)选自以下的取代基取代：卤素、C1-4醛基、C1-6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羟甲基、卤素取代的烷基(例如三氟甲基)、卤素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、C1-4烷氧基、乙氧甲酰基、N(CH3)和C1-4酰基。
本文中，“酰基”指结构式为“-C(O)-R”的基团，其中，R可选自烷基、链烯基和炔基。所述R可任选地被取代。在具体的实施方式中，本文所述的“酰基”中的R被任选取代的烯基取代。在优选的实施方式中，本文所述的“酰基”中的R被任选取代的C2-C4烯基取代。在优选的实施方式中，本发明的“酰基”是任选取代的烯基取代的甲酰基；例如，乙烯基取代的甲酰基、NRxRy取代的丙烯基取代的甲酰基，其中Rx和Ry可独立选自烷基或H。
本文中，“酰氨基”指结构式为“-NH-C(O)-R”的基团，其中，R可选自烷基、链烯基、炔基、NRxRy取代的烷基、NRxRy取代的链烯基和NRxRy取代的炔基、卤素取代的烷基、氰基取代的链烯基，其中，Rx和Ry可独立选自烷基或链烯基。在具体的实施方式中，本文所述的“酰氨基”中的R被烯基取代。在优选的实施方式中，本文所述的“酰氨基”中的R被C2-C4烯基取代。在优选的实施方式中，本发明的“酰氨基”是乙烯基取代的甲酰氨基。
本文中，“任选取代的”指其所修饰的取代基可任选地被1-5个(例如，1、2、3、4或5个)选自以下的取代基取代：卤素、C1-4醛基、C1-6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羟甲基、卤素取代的烷基(例如三氟甲基)、卤素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、C1-4烷氧基、乙氧甲酰基、N(CH3)和C1-4 酰基。
本发明的化合物
本发明人合成了一系列具有EGFR抑制活性的候选物。对得到的候选化合物进行结构优化，设计并合成了一系列结构新颖的7(8H)-蝶啶酮类化合物，并进行了结构表征。对此系列化合物进行了生物活性及理化性质的测试，得到一批具有良药的类药性质且能够选择性抑制EGFR T790M突变的化合物。其中化合物ZW-39对EGFR-T790M/L858R激酶抑制活性IC50值为3.9nM，抑制H1975细胞(非小细胞肺癌细胞，EGFR-T790M/L858R)增殖的IC50值为9nM，水中溶解度(20mM磷酸盐缓冲液，pH 6.8)达到1367μg/mL。本发明人尤其发现，本发明的化合物对于野生型EGFR和突变型EGFR以及表达野生型EGFR的癌细胞和表达突变型EGFR的癌细胞具备明显的差异活性，换言之，本发明的化合物对突变型EGFR以及表达突变型EGFR的癌细胞具备特异性。
经过进一步的研究，发明人发现对于候选化合物的评判，不仅要考虑其绝对活性，还要考虑其溶解度，即，候选化合物的成药性能。为了在整体上评判候选化合物，本发明人创造性地采用候选化合物的溶解度与EGFR-T790M/L858R激酶抑制活性IC50值之比(比值1)以及候选化合物的溶解度与抑制H1975细胞增殖的IC50值之比(比值2)作为标准，同时将目前已进入Ⅱ期临床试验的第三代选择性EGFR抑制剂AZD9291用作阳性对照，从而鉴定到一系列优异的候选化合物。
在具体的实施方式中，本发明的化合物是以下通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐：
式中，
R1独立选自氢、取代或未取代的C1-C10烷基、C2-C6链烯基、C2-C6炔基、任选取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的苄基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳杂环基；
A为二价基团-(CRaRb)n-A’-或不存在，其中Ra和Rb独立选自H、C1-3烷基、卤素，n为0-3的整数；
A’为苯环、五元或六元杂环或C3-C8环烷基；
R2独立选自氢、未取代的或卤素取代的C1-C4烷基、硝基、氨基、卤素、C1-C6烷氧基、任选取代的酰氧基、任选取代的酰氨基、任选取代的酰基；其中，当A’为苯环时，R2为间位取代；
m为0-3的整数；
R7独立选自取代或未取代的NH2、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳杂环基、取代或未取代的C1-C10烷基；
R3、R4、R5、R6独立选自H、卤素、取代或未取代的C1-C6(优选C1-C3)烷氧基、取代或未取代的C1-C6(优选C1-C3)烷基、NRcRd；其中Rc和Rd各自独立选自C1-C3烷基；
其中，当R1为H并且m为0时，R3、R4、R5和R6不同时为H；
当R1为H、m为0、A’为苯环并且R7为时，R3和R6不能其一为甲氧基，另一为H。
在优选的实施方式中，R1独立选自氢、取代或未取代的C1-C10烷基(优选C1-C6烷基)、取代或未取代的苯基、取代或未取代的苄基、任选取代的C3-C8环烷基；A’为苯环、五元或六元含氮杂环；R2独立选自C1-C3烷基、C2-C4烯基取代的酰氨基、取代或未取代的C2-C4烯基取代的酰基；R7选自：
R3、R4、R5、R6独立选自H、取代或未取代的C1-C6(优选C1-C3)烷氧基、取代或未取代的C1-C6(优选C1-C3)烷基。
在具体的实施方式中，本发明提供以下化合物：
在进一步优选的实施方式中，R1独立选自氢、取代或未取代的C1-C6烷基、或取代或未取代的苯基；n＝0；A’为苯环、或五元含氮杂环；R2独立选自C2-C4烯基取代的酰氨基、或C2-C4烯基取代的酰基；m＝0-2的整数；R7选自：
或
R3、R4、R5、R6独立选自H、取代或未取代的C1-C3烷氧基、取代或未取代的C1-C3烷基。
在优选的实施方式中，本发明提供以下化合物：
在上述化合物的基础上，本发明进一步提供一种药物组合物，该组合物含有治疗有效量的本发明的式I化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明化合物的药学上可接受的盐的例子包括但不限于无机和有机酸盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、扁桃酸盐和草酸盐；以及与碱例如钠羟基、三(羟基甲基)胺基甲烷(TRIS，胺丁三醇)和N-甲基葡糖胺形成的无机和有机碱盐。
虽然每个人的需求各不相同，本领域技术人员可确定本发明药物组合物中每种活性成分的最佳剂量。一般情况下，本发明的化合物或其药学上可接受的 盐，对哺乳动物每天口服给药，药量按照约0.0025到50毫克/公斤体重。但最好是每公斤口服给药约0.01到10毫克。例如，单位口服剂量可以包括约0.01到50毫克，最好是约0.1到10毫克的本发明化合物。单位剂量可给予一次或多次，每天为一片或多片，每片含有约0.1到50毫克，合宜地约0.25到10毫克的本发明化合物或其溶剂化物。
本发明的药物组合物可被配制成适合各种给药途径的制剂形式，包括但不限于被配制成用于肠外，皮下，静脉，肌肉，腹腔内，透皮，口腔，鞘内，颅内，鼻腔或外用途径给药的形式，用于治疗肿瘤和其他疾病。给药量是有效地改善或消除一个或多个病症的药量。对于特定疾病的治疗，有效量是足以改善或以某些方式减轻与疾病有关的症状的药量。这样的药量可作为单一剂量施用，或者可依据有效的治疗方案给药。给药量也许可治愈疾病，但是给药通常是为了改善疾病的症状。一般需要反复给药来实现所需的症状改善。药的剂量将根据病人的年龄，健康与体重，并行治疗的种类，治疗的频率，以及所需治疗效益来决定。
本发明的药物制剂可以给予任何哺乳动物，只要他们能获得本发明化合物的治疗效果。在这些哺乳动物中最为重要的是人类。
本发明的化合物或其药物组合物可用于治疗各种由表皮生长因子受体激酶(EGFR)介导的疾病。本文中，由EGFR介导的疾病为各种癌症。所述癌症包括但不限于非小细胞肺癌，小细胞肺癌，肺腺癌，肺鳞癌，乳腺癌，前列腺癌，神经胶质细胞瘤，卵巢癌，头颈部鳞癌，宫颈癌，食管癌，肝癌，肾癌，胰腺癌，结肠癌，皮肤癌，白血病，淋巴瘤，胃癌，多发性骨髓癌及实体瘤。
本发明的药物制剂可用已知的方式制造。例如，由传统的混合，制粒，制锭，溶解，或冷冻干燥过程制造。制造口服制剂时，可结合固体辅料和活性化合物，选择性研磨混合物。如果需要或必要时加入适量助剂后，加工颗粒混合物，获得片剂或锭剂芯。
合适的辅料特别是填料，例如糖类如乳糖或蔗糖，甘露醇或山梨醇；纤维素制剂或钙磷酸盐，例如磷酸三钙或磷酸氢钙；以及粘结剂，例如淀粉糊，包括玉米淀粉，小麦淀粉，大米淀粉，马铃薯淀粉，明胶，黄芪胶，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，羧甲基纤维素钠，或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可增加 崩解剂，比如上面提到的淀粉，以及羧甲基淀粉，交联聚乙烯吡咯烷酮，琼脂，或褐藻酸或其盐，如海藻酸钠。辅助剂特别是流动调节剂和润滑剂，例如，硅石，滑石，硬脂酸盐类，如镁硬脂酸钙，硬脂酸或聚乙二醇。如果需要，可以給锭剂核芯提供可以抵抗胃液的合适包衣。为此，可以应用浓缩糖类溶液。这个溶液可以含有阿拉伯树胶，滑石，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇和/或二氧化钛，漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了制备耐胃液的包衣，可使用适当的纤维素溶液，例如醋酸纤维素邻苯二甲酸或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸。可向药片或锭剂核芯的包衣加入染料或色素。例如，用于识别或为了表征活性成分剂量的组合。
因此，本发明还提供一种治疗EGFR介导的疾病的方法，该方法包括给予需要的对象以本发明的化合物或包含本发明化合物的药物组合物。
给药方法包括但不限于本领域周知的各种给药方法，可根据患者的实际情况加以确定。这些方法包括但不限于肠外、皮下、静脉、肌肉、腹腔内、透皮、口腔、鞘内、颅内、鼻腔或外用途径给药。
本发明也包括本发明化合物在制备治疗EGFR介导的疾病用的药物中的用途。
以下结合具体实施案例对本发明的技术方案进一步描述，但以下实施案例不构成对本发明的限制，所有依据本发明的原理和技术手段采用的各种施用方法，均属于本发明范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
材料与方法
本发明的7(8H)-蝶啶酮类化合物的合成如下所示：
试剂和条件：(a)胺,DIPEA,1,4-二氧六环,r.t.；(b)ArNH2,DIPEA,1,4-二氧六环,r.t.；(c)Pd/C,H2,EtOH；(d)R2COCOOEt,HOAc,EtOH,回流；(e)三氟乙酸,CH2Cl2,0℃-r.t.；(f)酰基氯,Et3N,CH2Cl2,0℃-r.t.或酰基氯,1-甲基-2-吡咯烷酮,CH3CN,0℃-r.t。
上述制备流程中，R1、R2、R3、R4的定义如上文所述。本领域技术人员可根据实际制备需要，采用本领域常规获得的各种起始化合物为原料，制备本发明的化合物。
实施例
实施例1
上述步骤a-f的具体合成方法如下：
(3-(2-氯-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
称取2,4-二氯-5-硝基嘧啶(3.80g，19.59mmol)置于100mL圆底烧瓶中，加入80mL 1,4-二氧六环，室温下搅拌，另取(3-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯(4g，19.21mmol)、N,N-二异丙基乙胺(2.98g，23.05mmol)溶于20mL 1,4-二氧六环，并滴加到上述反应液中，滴加完成后，继续在室温下搅拌0.5小时，TLC跟踪至原料完全转化。旋转蒸发除去溶剂，粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1，v/v)分离，得到(3-(2-氯-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯橙色固体5.9g，产率84％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.37(s,1H),9.48(s,1H),9.13(s,1H),7.67(s,1H),7.31(m,2H),7.15(m,1H),1.48(s,9H)。
(3-((2-((2-(甲氧甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-5-硝基-4-嘧啶基)氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
称取叔丁基-3-(2-氯-5-硝基嘧啶-4-氨基)苯基氨基甲酸酯(902mg，2.47mmol)、2-(甲氧甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)-苯胺(775mg，2.47mmol)、DIPEA(956mg，7.40mmol)置于100mL圆底烧瓶中，加入50mL四氢呋喃，加热至回流，搅拌过夜。反应结束后，旋转蒸发除去溶剂，加水稀释后用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，有机相经饱和氯化铵溶液(50mL×2)、饱和氯化钠溶液洗涤后，加入无水硫酸钠干燥。旋转蒸发除去溶剂，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30:1，v/v)纯化，得到(3-((2-((2-(甲氧甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-5-硝基-4-嘧啶基)氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯橙红色固体945mg，产率66％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.25(s,1H),9.44(s,1H),9.28(s,1H),9.04(s,1H),7.54(s,1H),7.42(d,J＝8.8Hz,1H),7.23-7.20(m,2H),7.08(t,J＝8.0Hz,1H),6.70(s,1H),6.43(d,J＝8.8Hz,1H),5.15(s,2H),3.32(s,3H),3.11(br,4H),2.46(br,4H),2.23(s,3H),1.46(s,9H)。
(3-(2-((2-(甲氧甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
称取(3-((2-((2-(甲氧甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-5-硝基-4-嘧啶基)氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(940mg，1.62mmol)置于400mL圆底烧瓶中，加入120mL乙醇、100mL二氯甲烷和250mg钯碳(10％Pd)，通入氢气，室温下搅拌8小时。反应结束后，抽滤，将滤液旋干，产品未经纯化，直接用于下一步 反应。
将上一步反应得到的产品置于50mL圆底烧瓶中，加入1.45mL冰醋酸、25mL无水乙醇，然后加入乙醛酸乙酯(50％甲苯溶液)(0.495mL，2.43mmol)，加热至回流搅拌过夜。反应结束后，旋转蒸发除去溶剂，加入15mL乙醇重结晶，有固体析出，抽滤，滤饼用乙醇、氨水、去离子水洗涤，干燥，得到(3-(2-((2-(甲氧甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)氨基甲酸叔丁酯橙红色固体452mg，产率47％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.65(s,1H),8.80(s,1H),8.55(br,1H),8.02(s,1H),7.59(s,1H),7.52(d,J＝8.0Hz,1H),7.43(t,J＝8.0Hz,1H),7.36-7.33(m,1H),6.97(d,J＝8.0Hz,1H),6.65(d,J＝2.0Hz,1H),6.16(br,1H),5.17(s,2H),3.36(s,3H),3.03(br,4H),2.44(t,J＝3.6Hz,4H),2.22(s,3H),1.46(s,9H)。
8-(3-氨基苯基)-2-((2-(甲氧甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮的合成
称取(3-(2-((2-(甲氧甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(452mg,0.77mmol)置于25mL圆底烧瓶中,加入7mL二氯甲烷，冰浴搅拌下加入2mL三氟乙酸。然后继续在冰浴下搅拌1小时，室温下搅拌1小时。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液中和至溶液pH＝9，滤液用二氯甲烷萃取，有机相用去离子水、饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，将溶剂旋干。粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝20:1，v/v)纯化，得到8-(3-氨基苯基)-2-((2-(甲氧甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮橙红色固体132mg，产率35％。MS(ESI)m/z 489.2[M+H]+
N-(3-(2-((2-(甲氧甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)蝶啶基)苯基)丙烯酰胺的合成(化合物ZW-44)
称取8-(3-氨基苯基)-2-((2-(甲氧甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(132mg,0.270mmol)置于25mL圆底烧瓶中，加入4mL N-甲基吡咯烷酮，冰浴下搅拌；另取丙烯酰氯(25μL,0.297mmol)溶于2mL乙腈中，并用恒压滴液漏斗滴加到反应液中。滴加完成后，冰浴下搅拌半小时，然后室温下搅拌2小时。反应结束后，往反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液，继续搅拌15分钟，加水稀释后用乙酸乙酯萃取，有机相用去离子水、饱和氯化钠溶液洗涤。浓缩后经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇/氨水＝100:5:0.5，v/v)纯化得到N-(3-(2-((2-(甲氧甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)蝶啶基)苯基)丙烯酰胺橙色固体101mg，产率69％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.40(s,1H),8.81(s,1H),8.53(br,1H),8.03(s,1H),7.85(d,J＝6.4Hz,1H),7.72(s,1H),7.53(t,J＝8.0Hz,1H),7.34-7.33(m,1H),7.10(d,J＝8.0Hz,1H),6.64(s,1H),6.46(dd,J＝16.8,10.0Hz,1H),6.27(dd,J＝16.8,1.6Hz,1H),6.13-6.09(m,1H),5.78(dd,J＝10.0,1.6Hz,1H),5.16(s,2H),3.35(s,3H),3.00(br,4H),2.43(t,J＝4.4Hz,4H),2.22(s,3H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C28H31N8O4,543.2468；found,543.2476.
以下化合物的合成均采用与上述合成步骤相同或相似的路线合成：
(S)-8-(1-丙烯酰基-3-吡咯烷基)-2-((2-甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物ZW-36)
橙红色固体，产率40％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.96(s,1H),8.73(s,0.5H),8.72(s,0.5H),7.86(s,0.5H),7.84(s,0.5H),7.32(m,1H),6.57(s,1H),6.43-6.42(m,1H),6.16(ddd,J＝16.8,10.0,2.4Hz,1H),5.72(dd,J＝10.0,2.4Hz,1H),5.65(dd,J＝10.0,2.4Hz,1H),4.08(t,J＝10.2Hz,0.5H),3.88-3.82(m,0.5H),3.76(s,3H),3.67-3.62(m,1H),3.58-3.55(m,1H),3.21-3.17(m,4H),2.81-2.71(m,1H),2.68-2.61(m,4H),2.38(s,1.4H),2.34(s,1.6H),2.04-1.96(m,2H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd forC25H31N8O3,491.2519；found,491.2520。HPLC纯度:95.7％,保留时间＝9.43min.
(R)-8-(1-丙烯酰基-3-吡咯烷基)-2-((2-甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物ZW-37)
橙红色固体，产率40％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.94(s,1H),8.72-8.71(m,1H),7.86-7.84(m,1H),7.33(t,J＝8.4Hz,1H),6.56(s,1H),6.42-6.40(m,1H),6.16(ddd,J＝16.8,10.4,2.4Hz,1H),5.70(dd,J＝10.4,2.4Hz,1H),5.65(dd,J＝10.4,2.4Hz,1H),4.10(t,J＝10.2Hz,0.5H),3.88-3.83(m,0.6H),3.76(s,3H),3.67-3.62(m,1H),3.58-3.55(m,1H),3.15-3.10(m,4H),2.82-2.64(m,1H),2.45(br,4H),2.23(s,3H),2.06-1.96(m,1H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C25H31N8O3,491.2519；found,491.2473.
(S)-8-(1-丙烯酰基-3-哌啶基)-2-((2-甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物ZW-38)
橙红色固体，产率38％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.14(br,1H),8.71(s,1H),7.83(s,1H),7.22-7.21(m,1H),6.80-6.62(m,2H),6.48-6.47(m,1H),6.15-6.08(m,1H),5.71-5.60(m,1H),4.82-4.76(m,0.6H),4.34-4.24(m,1H),3.95-3.92(m,1H),3.74(s,3H),3.14(br,4H),2.46(br,4H),1.64(br,2H),1.34-1.30(m,1H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C26H33N8O3,505.2676；found,505.2676.
N-(3-(2-((3-甲氧基-4-(甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)丙烯酰胺(化合物ZW-39)
红色固体，产率55％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.41(s,1H),10.00(br,1H),8.86(s,1H),8.04(s,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.73(s,1H),7.54(t,J＝8.0Hz,1H),7.11(d,J＝8.0Hz,1H),7.04-6.95(m,2H),6.48-6.42(m,2H),6.27(dd,J＝17.2,2.0Hz,1H),5.77(dd,J＝10.0,2.0Hz,1H),3.55(s,3H),2.83(br,4H),2.43(br,4H),2.22(s,3H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C27H29N8O3,513.2363；found,513.2362.
N-(3-(2-((3-甲氧基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代)-8(7H)蝶啶基)苯基)丙烯酰胺(化合物ZW-40)
黄色固体，产率63％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.41(s,1H),10.04(s,1H),8.86(s,1H),8.04(s,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.76(s,1H),7.55(t,J＝8.0Hz,1H),7.22(s,1H),7.13-7.10(m,2H),6.70-6.69(m,1H),6.45(dd,J＝17.0,10.2Hz,1H),6.26(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),5.76(dd,J＝10.2,2.0Hz,1H),2.70(br,4H),2.44(br,4H),2.23(s,3H),1.97(s,3H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C27H29N8O2,497.2413；found,497.2428.
N-(3-(2-((2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)丙烯酰胺(化合物ZW-41)
红色固体，产率50％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.38(s,1H),8.82(s,1H),8.37(s,1H),8.04(s,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),7.74(s,1H),7.53(t,J＝8.0Hz,1H),7.29(s,1H),7.10(d,J＝8.8Hz,1H),6.62(s,1H),6.45(dd,J＝16.8,2.0Hz,1H),6.25(dd,J＝16.8,2.0Hz,1H),5.77-5.76(m,1H),3.78(s,1H),2.76(br,4H),2.46(br,4H),2.24(s,3H),1.85(s,3H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C28H31N8O3,527.2519；found,527.2518.
N-(3-(2-((4-(4-乙酰基-1-哌嗪基)-2-甲氧基苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)丙烯酰胺(化合物ZW-42)
红色固体，产率50％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.36(s,1H),8.80(s,1H),8.44(s,1H),8.03(s,1H),7.86(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(t,J＝2.0Hz,1H),7.52(t,J＝8.0Hz,1H),7.32(d,J＝8.8Hz,1H),7.09(d,J＝8.0Hz,1H),6.57(d,J＝2.4Hz,1H),6.45(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),6.27(dd,J＝17.0,10.0Hz,1H),6.09(br,1H),5.77(dd,J＝10.0,2.0Hz,1H),3.77(s,1H),3.58-3.54(m,4H),3.06-3.00(m,4H),2.05(s,3H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C28H29N8O4,541.2312；found,541.2312.
N-(3-(2-((4-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)丙烯酰胺(化合物ZW-43)
黄色固体，产率50％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.41(s,1H),10.13(s,1H),8.88(s,1H),8.07(s,1H),7.88(d,J＝8.0Hz,1H),7.77(s,1H),7.57(t,J＝8.0Hz,1H),7.31-7.30(m,2H),7.14(d,J＝8.0Hz,1H),6.86(br,2H),6.45(dd,J＝16.8,10.0Hz,1H),6.26(dd,J＝16.8,2.0Hz,1H),5.77(dd,J＝10.0,2.0Hz,1H),2.56(t,J＝7.6Hz,2H),2.39-2.31(m,9H),2.15(s,3H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C28H31N8O2,511.2570；found,511.2571.
N-(3-(2-((2-(甲氧乙氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶 啶基)苯基)丙烯酰胺(化合物ZW-45)
橙红色固体，产率61％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.78(s,1H),8.65-8.62(m,1H),8.24(s,1H),8.07(s,1H),7.85(s,1H),7.41(br,3H),6.93(d,J＝5.6Hz,1H),6.44(s,1H),6.33(d,J＝17.0Hz,1H),6.10(dd,J＝17.0,10.4Hz,1H),5.78(d,J＝10.4Hz,1H),4.10(br,2H),3.69(br,2H),3.43(s,3H),3.08(br,4H),2.54(br,4H),2.34(s,3H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C29H33N8O4,557.2625；found,557.2621.
N-(3-(2-((4-(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基)-2-甲氧基苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)丙烯酰胺(化合物ZW-46)
橙色固体，产率53％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.39(s,1H),8.79(s,1H),8.43(s,1H),8.02(s,1H),7.85(d,J＝7.6Hz,1H),7.71(s,1H),7.52(t,J＝8.0Hz,1H),7.30(d,J＝7.6Hz,1H),7.09(d,J＝8.0Hz,1H),6.52(s,1H),6.45(dd,J＝16.8,10.0Hz,1H),6.27(dd,J＝16.8,2.0Hz,1H),6.02(br,1H),5.78(dd,J＝10.0,2.0Hz,1H),4.43(t,J＝5.2Hz,1H),3.76(s,3H),3.56-3.52(m,2H),3.04(br,4H),2.53(t,J＝4.8Hz,4H),2.44(t,J＝6.0Hz,1H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcdfor C29H33N8O3,543.2468；found,543.2466.
N-(3-(2-((4-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯 基)丙烯酰胺(化合物ZW-47)
红色固体，产率50％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.41(s,1H),8.80(s,1H),8.43(s,1H),8.03(s,1H),7.88-7.87(m,1H),7.70(s,1H),7.52(t,J＝8.0Hz,1H),7.29(d,J＝8.0Hz,1H),7.09(d,J＝8.0Hz,1H),6.52(s,1H),6.46(dd,J＝17.2,10.0Hz,1H),6.27(dd,J＝17.2,2.0Hz,1H),6.04(br,1H),5.78(dd,J＝10.0,2.0Hz,1H),3.76(s,3H),3.60-3.58(m,2H),2.58(t,J＝10.8Hz,2H),2.20-2.18(m,7H),1.82-1.79(d,J＝12Hz,2H),1.48-1.40(m,2H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C29H33N8O3,541.2676；found,541.2674.
N-(3-(6-异丙基-2-((4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)丙烯酰胺(化合物ZW-48)
红色固体163mg，产率75％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.42(s,1H),9.85(br,1H),8.79(s,1H),7.91(d,J＝6.4Hz,1H),7.71(s,1H),7.55(t,J＝8.0Hz,1H),7.25(s,2H),7.11(d,J＝8.0Hz,1H),6.59-6.58(m,2H),6.45(dd,J＝17.0,10.2Hz,1H),6.26(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),5.78(dd,J＝10.2,2.0Hz,1H),3.45-3.38(m,1H),2.97(br,4H),2.42(br,4H),2.21(s,3H),1.25(d,J＝6.8Hz,6H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C29H33N8O2,525.2726；found,525.2728.
N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基-8(7H)-蝶啶基)苯基)丙烯酰胺(化合物ZW-49)
红色固体，产率75％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.41(s,1H),8.87(s,1H),8.41(s,1H),8.21-8.19(m,2H),7.89-7.88(m,1H),7.75(t,J＝2.0Hz,1H),7.54(t,J＝8.0Hz,1H),7.50-7.48(m,3H),7.35(d,J＝8.8Hz,1H),7.17-7.14(m,1H),6.54(d,J＝2.0Hz,1H),6.46(dd,J＝17.0,10.2Hz,1H),6.27(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),6.05(br,1H),5.78(dd,J＝10.2,2.0Hz,1H),3.78(s,3H),3.05(br,4H),2.45(br,4H),2.23(s,3H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C33H33N8O3,589.2676；found,589.2676.
8-(1-丙烯酰基-4-哌啶基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)-蝶啶酮(化合物ZW-50)
橙色固体，产率53％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.83(s,1H),8.71(s,1H),7.83(s,1H),7.53(br,1H),6.85(dd,J＝17.2,10.4Hz,1H),6.61(d,J＝2.4Hz,1H),6.47(d,J＝8.0Hz,1H),6.13(dd,J＝17.2,2.4Hz,1H),5.70(dd,J＝10.4,2.4Hz,1H),5.29(br,1H),4.60(d,J＝10.4Hz,1H),4.20(d,J＝12.8Hz,1H),3.80(s,3H),3.13(t,J＝4.8Hz,4H),2.59-2.53(m,3H),2.45(t,J＝4.8Hz,4H),2.22(s,3H),1.67(d,J＝10.0Hz,2H),1.23(s,1H).
(R)-8-((1-丙烯酰基-3-哌啶基)甲基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基) 氨基)-7(8H)-蝶啶酮(化合物ZW-51)
橙色固体，产率61％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.92(s,1H),8.74(s,1H),7.91-7.89(m,1H),7.50-7.44(m,1H),6.75(dd,J＝16.8,10.4Hz,1H),6.64(s,1H),6.56-6.51(m,1H),6.02(d,J＝16.8Hz,1H),5.64-5.54(m,1H),4.13-4.10(m,1H),3.94-3.83(m,3H),3.76(s,3H),3.16(br,4H),3.03-2.98(m,1H),2.84-2.74(m,1H),2.47(t,J＝4.8Hz,4H),1.92-1.91(m,1H),1.64-1.57(m,2H),1.30-1.23(m,3H).
(S)-8-((1-丙烯酰基-3-哌啶基)甲基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)-蝶啶酮(化合物ZW-52)
橙色固体，产率54％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.92(s,1H),8.74(s,1H),7.91-7.89(m,1H),7.49-7.43(m,1H),6.75(dd,J＝16.4,10.4Hz,1H),6.64(s,1H),6.56-6.51(m,1H),6.02(d,J＝16.4Hz,1H),5.64-5.54(m,1H),4.13-4.08(m,1H),3.94-3.86(m,3H),3.76(s,3H),3.16(br,4H),3.03-2.97(m,1H),2.84-2.74(m,1H),2.47(t,J＝4.8Hz,4H),1.92(br,1H),1.64-1.57(m,2H),1.30-1.20(m,3H).
N-(3-(2-((4-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)丙烯酰胺(化合物ZW-53)
红色固体，产率61％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.37(s,1H),8.76(s,1H),8.41(br,1H),7.99(s,1H),7.84-7.83(m,1H),7.69(t,J＝2.0Hz,1H),7.51(t,J＝8.0Hz,1H),7.26-7.19(m,1H),7.09(d,J＝8.0Hz,1H),6.45(dd,J＝16.8,10.4Hz,1H),6.29-6.24(m,2H),5.77(dd,J＝10.4,2.0Hz,1H),3.74(s,3H),2.84(s,3H),2.35-2.33(m,2H),2.19(s,6H).
N-(3-(2-((4-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)-6-异丙基-7-氧代-8(7H)-蝶啶基)苯基)丙烯酰胺(化合物ZW-54)
橙色固体，产率62％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.37(s,1H),8.72(s,1H),8.21(s,1H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(s,1H),7.51(t,J＝8.0Hz,1H),7.26(d,J＝7.6Hz,1H),7.09(d,J＝8.4Hz,1H),6.45(dd,J＝16.8,10.4Hz,1H),6.29-6.24(m,2H),5.87(br,1H),5.76(dd,J＝10.4,2.0Hz,1H),3.75(s,3H),3.43-3.38(m,1H),2.84(s,3H),2.34(t,J＝6.8Hz,2H),2.19(s,6H),1.24(d,J＝6.8Hz,6H).
N-(3-(2-((4-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基-8(7H)-蝶啶基)苯基)丙烯酰胺(化合物ZW-55)
红色固体，产率64％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.39(s,1H),8.83(s,1H),8.38(br,1H),8.21-8.18(m,2H),7.87(d,J＝7.2Hz,1H),7.75(s,1H),7.53(t,J＝8.0Hz,1H),7.49-7.47(m,3H),7.28(br,1H),7.15(d,J＝8.4Hz,1H),6.46(dd,J＝16.8,10.0Hz,1H),6.29-6.25(m,2H),5.83(br,1H),5.76(dd,J＝10.0,2.0Hz,1H),3.76(s,3H),3.35(br,2H),2.85(s,3H),2.35(t,J＝5.6Hz,2H),2.20(s,6H).
(R)-8-((1-丙烯酰基-3-哌啶基)甲基)-6-异丙基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)-蝶啶酮(化合物ZW-56)
黄色固体，产率55％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.70(br,2H),7.57-7.52(m,1H),6.76(dd,J＝16.4,10.4Hz,1H),6.64(s,1H),6.57-6.51(m,1H),6.05-5.98(m,1H),5.64-5.53(m,1H),4.15-3.96(m,3H),3.90-3.87(m,1H),3.78(s,3H),3.16(br,4H),3.04-2.75(m,2H),2.47(t,J＝3.6Hz,4H),2.24(s,3H),1.94(br,1H),1.66-1.61(m,2H),1.20(d,J＝6.8Hz,6H).
(R)-8-(1-丙烯酰基-3-哌啶基)-2-((2-甲氧基)-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)蝶啶酮(化合物ZW-57)
橙色固体，产率46％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.17(s,1H),8.71(s,1H),7.83(s,1H),7.20(br,1H),6.81(br,1H),6.68-6.62(m,2H),6.47(br,1H),6.14-6.08(m,1H),5.72-5.61(m,1H),4.78-4.72(m,1H),4.35-4.24(m,1H),3.95-3.82(m,1H),3.73(s,3H),3.14(br,4H),2.46(br,4H),2.23(s,3H),1.62(br,2H),1.34-1.26(m,1H).
N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((6-异丙基-8-甲基)-7-氧代-7,8-二氢-2-蝶啶基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(化合物ZW-58)
黄色固体，产率43％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.08(s,1H),8.96(s,1H),8.73(s,1H),8.64(s,1H),7.02(s,1H),6.42(dd,J＝16.4,10.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.4Hz,1H),5.75(d,J＝10.4Hz,1H),3.85(s,3H),3.59(s,3H),3.43-3.36(m,1H),2.89(br,2H),2.71(s,3H),2.35(br,2H),2.23(s,6H),1.20(d,J＝6.8Hz,6H).
(S)-8-(1-丙烯酰基-3-吡咯烷基)-6-异丙基-2-((3-甲基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)-蝶啶酮(化合物XYQ-1)
黄色固体，产率81％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.90(s,1H),8.77(s,0.6H),8.76(s,0.4H),7.49-7.41(m,2H),6.93(t,J＝7.2Hz,1H),6.73-6.47(m,1H),6.23-6.15(m,1H),6.03-5.94(m,1H),5.76-5.65(m,1H),4.22(t,J＝8.8Hz,0.6H),4.02-3.86(m,1.7H),3.83-3.65(m,1.7H),3.47-3.40(m,1H),2.92-2.85(m,1H),2.78(br,4H),2.46(br,4H),2.23(s,3H),2.20(s,3H),2.14-2.07(m,1H),1.20(d,J＝6.4Hz,6H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C28H37N8O2[M+H]+517.3039；found,517.3038.
(S)-8-(1-丙烯酰基-3-吡咯烷基)-2-((3-甲基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-6-苯基-7(8H)-蝶啶酮(化合物XYQ-2)
橙色固体，产率77％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.09(s,1H),8.88(s,1H),8.13(br,2H),7.52-7.49(m,5H),6.98-6.96(m,1H),6.74-6.48(m,1H),6.23-6.15(m,1H),6.13-6.02(m,1H),5.73-5.65(m,1H),4.28-4.24(m,0.5H),4.12-3.90(m,1.7H),3.85-3.67(m,1.8H),3.52-3.44(m,1H),2.94-2.89(m,1H),2.82(br,4H),2.28(s,3H),2.22(s,3H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C31H35N8O2[M+H]+551.2883；found,551.2880.
(S)-8-(1-丙烯酰基-3-吡咯烷基)-6-异丙基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-哌嗪基) 苯基)氨基)-7(8H)-蝶啶酮(化合物XYQ-3)
橙色固体，产率54％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.71(s,1H),8.69(s,0.5H),8.68(s,0.5H),7.39(t,J＝7.6Hz,1H),6.57(s,1H),6.41(d,J＝8.8Hz,1H),6.17(dd,J＝16.4Hz,10.8Hz,1H),5.86-5.80(m,1H),5.72-5.63(m,1H),4.12(t,J＝8.8Hz,0.6H),3.91-3.86(m,0.6H),3.77(s,3H),3.69-3.64(m,1H),3.59(br,1H),3.40-3.38(m,0.8H),3.12(br,4H),2.81-2.70(m,1H),2.45(br,4H),2.23(s,3H),2.09-1.98(m,1H),1.18(d,J＝6.4Hz,6H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for533.2989；found,533.2994.
(S)-8-(1-丙烯酰基-3-吡咯烷基)-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-6-苯基-7(8H)-蝶啶酮(化合物XYQ-4)
红色固体，产率63％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.90(s,1H),8.79(s,1H),8.10(br,2H),7.46(br,3H),7.41-3.39(m,1H),6.58-6.42(m,3H),6.17(dd,J＝16.4Hz,10.4Hz,1H),5.98-5.82(m,1H),5.72-5.64(m,1H),4.16(t,J＝8.8Hz,0.6H),3.95-3.90(m,0.6H),3.78(s,3H),3.71(t,J＝9.6Hz,0.8H),3.60(br,1H),3.40-3.34(m,1H),3.13(br,4H),2.83-2.71(m,1H),2.45(br,4H),2.23(s,3H),2.12-2.02(m,1H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C31H35N8O3[M+H]+ 567.2832；found,567.2831.
(S,E)-8-(1-(4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰基)-3-吡咯烷基)-6-异丙基-2-((3-甲基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-7(8H)-蝶啶酮(化合物XYQ-5)
橙色固体，产率89％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.75(s,1H),8.00(s,1H),7.73(s,0.6H),7.65(s,0.4H),7.02-6.89(m,1H),6.55-6.50(m,2H),6.42-6.20(m,1H),6.17-6.07(m,1H),4.48-4.45(m,0.5H),4.18-3.99(m,2H),3.90(s,3H),3.83(t,J＝8.8Hz,0.8H),3.76-3.69(m,0.6H),3.65-3.56(m,0.7H),3.52-3.44(m,1H),3.22-3.18(m,4H),3.15(t,J＝6.0Hz,1H),3.04(d,J＝5.6Hz,2H),2.62-2.60(br,4H),2.38(s,3H),2.30(s,3H),2.21(s,3H),2.14-2.10(m,1H),1.99(s,2H),1.26(t,J＝6.0Hz,6H).
(S,E)-8-(1-(4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰基)-3-吡咯烷基)-2-((3-甲基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)氨基)-6-苯基-7(8H)-蝶啶酮(化合物XYQ-6)
橙色固体，产率82％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.10(s,1H),8.88(s,1H),8.12(s,2H),7.49(br,5H),6.97(d,J＝8.4Hz,1H),6.72-6.61(m,1H),6.54-6.31(m,1H),6.10-6.00(m,1H),4.28-4.24(m,0.6H),4.05-4.00(m,0.7H),3.93-3.86(m,1.5H),3.81-3.76(m,1.5H),3.73-3.67(m,1H),3.55(br,4H),3.18(d,J ＝6.8Hz,2H),3.08(d,J＝5.2Hz,1H),2.83(br,4H),2.57(s,3H),2.32(s,1.5H),2.30(s,1.5H),2.57(s,3H),2.22(s,3H),2.17(s,3H).HRMS(ESI)(m/z):[M+H]+calcd for C34H42N9O2[M+H]+608.3461；found,608.3466.
实施例2
生物活性测试部分
本发明提供的化合物对EGFR激酶活性的体外抑制效果实验如下进行：
体外酶活性分析：野生型及各种突变型(T790M,L858/T790M)EGFR均购自于Invitrogen。为所有的待测试化合物设置了从5.1×10-11mol/L到1.0×10-6mol/L的10个浓度梯度。
不同激酶的浓度由优化实验决定，相应的浓度为：EGFR(PV3872,Invitrogen)0.287μg/μL,EGFR-T790M(PV4803,Invitrogen)0.174μg/μL,EGFR-L858R/T790M(PV4879,Invitrogen)0.055μg/μL。化合物在DMSO中从5.1x10-9M到1x10-4M稀释三倍。4μL化合物溶于96μL水，得到4x的化合物溶液。40μM ATP溶于1.33x激酶缓冲液，激酶/肽混合物包含2x激酶、4μM酪氨酸4肽准备好待用。10μL激酶反应包括2.5μL化合物溶液，5μL激酶/肽混合物，2.5μL ATP溶液。5μL磷酸化肽溶液代替激酶/肽混合物用作100％磷酸化对照。2.5μL 1.33x激酶缓冲液代替ATP溶液用作100％抑制对照，2.5μL 4％DMSO代替化合物溶液用作0％抑制对照。板内溶液充分混合后在室温下培养1.5小时。每孔加入5μL Development Solution后继续在室温下培养1小时，非磷酸化肽在此时间内被裂解。最后，加入5μL Stop Reagent结束反应。孔板用EnVisionMultilabel Reader(Perkin Elmer)进行测量。实验数据使用GraphPad Prism version 4.0进行计算。每次实验均重复3次以上。
细胞增殖及生长抑制分析：H1975(非小细胞肺癌细胞，EGFRL858R/T790M)、A431(非小细胞肺癌细胞，EGFR野生型)，细胞均从ATCC获得。细胞增殖活性采用MTS分析法进行评估。细胞暴露在处理条件下72小时，各细胞系每次实验所使用的细胞数根据吸光度值(490nm处的吸光度值为1.3-2.2)进行调整。为待测试化合物设置了6个浓度梯度(0.1nM-10μM)，每个浓度值至少使用6组平行对照。
H1975、A431细胞在相应的培养基中培养，细胞在复苏后至少传代两次，然后用于实验使用。对数期的细胞受胰蛋白酶作用并在培养基中再悬浮。H1975(每孔1000细胞)、A431(每孔2000细胞)播种于96孔板中，体积100μL；设置6组平行及7列。孔板放于37℃ 5％二氧化碳的培养箱中过夜。将化合物溶于DMSO，配制浓度为每升10μM，随后将化合物浓度逐步稀释得到的化合物浓度分别为每升10μM、1μM、0.1μM、0.01μM、0.001μM、0.0001μM。2μL化合物溶液加到998μL的培养基中，混合物经充分混合。100μL的混合物加入96孔板中。2μL DMSO代替化合物溶液用作0％抑制对照。培养68小时之后，加入20μL MTT(5mg/mL)。4小时候，抛弃上清液并加入150μL DMSO。摇振10分钟之后，孔板用Synergy HT(Bio TeK)(OD490)读取数据。数据使用GraphPad Prism version 4.0进行计算，IC50值通过使用剂量反应曲线的非线性回归模型调整得到。
水中溶解度的测定：称取待测化合物约2mg置于1.5mL离心管中，加入1mL PBS缓冲液(20mM，pH＝6.8)，超声5分钟(若化合物完全溶解，则再次加入2mg化合物)，振摇过夜。悬浊液经0.22μm PVDF过滤器过滤之后，用甲醇(v＝50％)及PBS(v＝50％)稀释至合适浓度，用紫外分光光度仪测定吸光度值。精确称取约3mg化合物，加入甲醇，配制1mg/mL母液。取上述母液配制浓度分别为0.05、0.04、0.03、0.02、0.01mg/mL的溶液，并加入PBS溶液(v＝50％)，测定吸光度值。以浓度c(mg/mL)为横坐标，吸光度A为纵坐标作图，并拟合直线，得标准曲线(相关系数均大于0.998)。根据标准曲线计算化合物在水中的溶解度。
测试结果如下表1所示：
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。