用于基于蔗糖的改善精细化学品产生的修饰微生物的制作方法

文档序号:11849893阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种修饰的微生物,与其野生型相比具有fruA-基因编码的酶的减少活性,其中修饰的微生物所来自的野生型属于巴斯德菌科(Pasteurellaceae)。

2.根据权利要求1所述的修饰的微生物,其中修饰的微生物不以蔗糖介导的甘油分解代谢阻遏为特征。

3.根据权利要求1或2所述的修饰的微生物,其中修饰的微生物所来自的野生型具有SEQ ID NO:1的16S rDNA或显示与SEQ ID NO:1的至少96%、97%、98%、99%或99.9%序列同源性的序列。

4.根据权利要求3所述的修饰的微生物,其中修饰的微生物所来自的野生型属于Basfia属。

5.根据权利要求4所述的修饰的微生物,其中修饰的微生物所来自的野生型属于Basfia succiniciproducens物种。

6.根据权利要求5所述的修饰的微生物,其中修饰的微生物所来自的野生型是如以DSM 18541保藏于德国DSMZ的Basfia succiniciproducens菌株DD1。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的修饰的微生物,其中fruA-基因包含选自以下的核酸:

a)具有SEQ ID NO:3的核苷酸序列的核酸;

b)编码SEQ ID NO:4的氨基酸序列的核酸;

c)与a)或b)的核酸至少70%相同的核酸,同一性是在a)或b)的核酸总长度范围内的同一性;

d)编码氨基酸序列的核酸,所述氨基酸序列与a)或b)的核酸编码的氨基酸序列至少70%相同,同一性是在a)或b)的核酸编码的氨基酸序列的总长度范围内的同一性。

e)能够在严格条件下与根据a)或b)的任何核酸的互补序列杂交的核酸;和

f)编码与a)或b)的任何核酸相同的蛋白质,但因遗传密码简并性而与上文a)或b)的核酸不同的核酸。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的修饰的微生物,其中修饰fruA-基因。

9.根据权利要求8所述的修饰的微生物,其中通过缺失fruA-基因或至少其部分、缺失fruA-基因的调节元件或至少其部分或向fruA-基因中引入至少一个突变,实现对fruA-基因的修饰。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的修饰的微生物,其中微生物与其野生型相比还具有

i)减少的丙酮酸甲酸裂合酶活性,

ii)减少的乳酸脱氢酶活性,或

iii)减少的丙酮酸甲酸裂合酶活性和减少的乳酸脱氢酶活性。

11.根据权利要求10所述的修饰的微生物,其中微生物包含:

A)ldhA-基因或至少其部分的缺失、ldhA-基因调节元件或至少其部分的缺失或向ldhA-基因引入至少一个突变;

B)pflD-基因或至少其部分的缺失、pflD-基因调节元件或至少其部分的缺失或向pflD-基因引入至少一个突变;

C)pflA-基因或至少其部分的缺失、pflA-基因调节元件或至少其部分的缺失或向pflA-基因引入至少一个突变;

D)ldhA-基因或至少其部分的缺失、ldhA-基因调节元件或至少其部分的缺失或向ldhA-基因引入至少一个突变

pflD-基因或至少其部分的缺失、pflD-基因调节元件或至少其部分的缺失或向pflD-基因引入至少一个突变;

E)ldhA-基因或至少其部分的缺失、ldhA-基因调节元件或至少其部分的缺失或向ldhA-基因引入至少一个突变

pflA-基因或至少其部分的缺失、pflA-基因调节元件或至少其部分的缺失或向pflA-基因引入至少一个突变。

12.产生有机化合物的方法,包括

I)在包含蔗糖作为可同化碳源的培养基中培养根据权利要求1至10中任一项所述的修饰的微生物以允许修饰的微生物产生有机化合物,因而获得包含有机化合物的发酵液;

II)从过程步骤I)中获得的发酵液回收有机化合物。

13.根据权利要求12所述的方法,其中有机化合物是琥珀酸。

14.根据权利要求12或13所述的方法,其中可同化碳源不是甘油和蔗糖的混合物。

15.根据权利要求12至14中任一项所述的方法,其中方法还包括过程步骤:

III)通过至少一个化学反应,将过程步骤I)中获得的发酵液内所含的有机化合物转化成或将过程步骤II)中获得的已回收有机化合物转化成与该有机化合物不同的次级有机产物。

16.根据权利要求15所述的方法,其中有机化合物是琥珀酸并且其中次级有机产物选自琥珀酸酯或其聚合物、四氢呋喃(THF)、1,4-丁二醇(BDO)、γ-丁内酯(GBL)和吡咯烷酮。

17.根据权利要求1至11中任一项所述的修饰的微生物的用途,用于发酵产生有机化合物。

18.根据权利要求17所述的用途,其中有机化合物是琥珀酸并且其中可同化碳源不是甘油和蔗糖的混合物。

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