用于确定对MEK/ERK抑制剂的应答性的方法与流程

本申请要求2014年4月4日提交的标题为“癌症治疗的生物标记”的中国专利申请201410135569.9的优先权。其全部内容在此参考并入。

发明领域

本发明一般涉及用于确定受试者对MEK或者ERK抑制剂的治疗的应答性的方法。

背景技术：

Ras-Raf-MEK-ERK信号级联(MEK/ERK通路)是关键性的促增殖和促存活通路之一。已经发现MEK/ERK通路中的突变导致在许多癌症(例如，黑素瘤)中生长失控。已经使用了抑制MEP/ERK通路中的步骤的化合物来治疗癌症。然而，一些具有MEK/ERK通路突变的患者显示出对MEK或者ERK抑制剂的抗性。

需要有效的方法来确定哪些具有MEK/ERK通路突变的患者会对MEK或者ERK抑制剂的治疗具有耐受性并且需要将这种确定性发现结合到有效的治疗中。

发明概述

一方面，本申请提供了一种用于预测癌细胞对MEK抑制剂的应答性的方法。在某些实施方案中，所述方法包括通过使来源于所述癌细胞的核酸样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述癌细胞中选自ADAM12、COL14A1、TNN和TP53组的一种或多种基因中的至少一种突变的存在，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；其中ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和/或其任意组合中突变的存在指示所述癌细胞对所述MEK抑制剂的降低的应答性。

在某些实施方案中，所述癌细胞来源于癌症患者。

在某些实施方案中，所述MEK抑制剂是曲美替尼(Trametinib)。

在某些实施方案中，所述在ADAM12中的突变选自下组突变：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在COL14A1中的突变选自下组突变：COL14A1中的R178W、L713_剪接、Q1272K、L479I、L1295F、E1024K、P1467S、G737R、K1023T、G966C、S1512fs；所述在TNN中的突变选自下组突变：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S突变；所述在TP53中的突变选自下组突变：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*。

在某些实施方案中，所述检测步骤包括将所述寡核苷酸用作引物来扩增所述基因的至少一部分，以及检测所述扩增产物从而确定在所述基因中所述突变的存在。

在某些实施方案中，所述检测步骤包括使所述核酸样品接触所述寡核苷酸，所述寡核苷酸与所述基因的所述突变特异性杂交以形成复合物，以及检测所述复合物的形成从而确定在所述基因中所述突变的存在。

另一方面，本申请提供了一种鉴定MEK抑制剂的可能的应答者或者可能的无应答者的方法，所述方法包括：通过使来自患者的样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述样品中选自下组的一种或多种基因中至少一种突变的存在：ADAM12、COL14A1、TNN和TP53，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；如果在所述样品中检测到ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和/或其任意组合中的至少一种突变，则将所述患者鉴定为所述MEK抑制剂的可能的无应答者。

在某些实施方案中，所述MEK抑制剂是曲美替尼(Trametinib)。

在某些实施方案中，所述在ADAM12中的突变选自下组突变：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在COL14A1中的突变选自下组突变：COL14A1中的R178W、L713_剪接、Q1272K、L479I、L1295F、E1024K、P1467S、G737R、K1023T、G966C、S1512fs；所述在TNN中的突变选自下组突变：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S；所述在TP53中的突变选自下组突变：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*。

在某些实施方案中，所述方法进一步包括对被鉴定为可能的无应答者的所述患者不推荐用所述ERK抑制剂的单一疗法或者MEK抑制剂治疗。

在某些实施方案中，所述方法进一步包括推荐被鉴定为可能的无应答者的所述患者用不同的MEK抑制剂治疗，或者用不同的MEK抑制剂和另外的具有不同机制的治疗剂的联合疗法治疗。

在某些实施方案中，所述方法进一步包括推荐被鉴定为可能的应答者的所述患者用所述MEK抑制剂治疗。

在某些实施方案中，所述样品来源于所述患者的癌细胞或者组织。

另一方面，本申请提供了一种用于预测癌细胞对ERK抑制剂的应答性的方法，所述方法包括：通过使来源于所述癌细胞的核酸样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述癌细胞中选自ADAM12、PEX5L、TNN和TP53组的一种或多种基因中的至少一种突变的存在，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；其中ADAM12、PEX5L、TNN、TP53和/或其任意组合中突变的存在指示所述癌细胞对所述ERK抑制剂的降低的应答性。

在某些实施方案中，所述癌细胞来源于癌症患者。

在某些实施方案中，所述ERK抑制剂是SCH772984。

在某些实施方案中，所述在ADAM12中的突变选自下组突变：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在PEX5L中的突变选自下组突变：PEX5L中的D179N、S229Y、G4E、T89K、Q355E、D39N、L571F、D113N；所述在TNN中的突变选自下组突变：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S；所述在TP53中的突变选自下组突变：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*。

在某些实施方案中，所述检测步骤包括用所述寡核苷酸作为引物来扩增所述基因的至少一部分，以及检测所述扩增产物从而确定在所述基因中所述突变的存在。

在某些实施方案中，所述检测步骤包括使所述核酸样品接触所述寡核苷酸，所述寡核苷酸与所述基因的所述突变特异性杂交以形成复合物，以及检测所述复合物的形成从而确定在所述基因中所述突变的存在。

另一方面，本申请提供了一种鉴定ERK抑制剂的可能的应答者或者可能的无应答者的方法，所述方法包括：通过使来自患者的样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述样品中选自ADAM12、PEX5L、TNN和TP53组的一种或多种基因中至少一种突变的存在，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；如果在所述样品中检测到ADAM12、PEX5L、TNN、TP53和/或其任意组合中的至少一种突变，则将所述患者鉴定为所述ERK抑制剂的可能的无应答者。

在某些实施方案中，所述ERK抑制剂是SCH772984。

在某些实施方案中，所述在ADAM12中的突变选自下组突变：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在PEX5L中的突变选自下组突变：PEX5L中的D179N、S229Y、G4E、T89K、Q355E、D39N、L571F、D113N；所述在TNN中的突变选自下组突变：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S；所述在TP53中的突变选自下组突变：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*。

在某些实施方案中，所述方法进一步包括对被鉴定为可能的无应答者的所述患者不推荐用所述ERK抑制剂的单一疗法或者ERK抑制剂治疗。

在某些实施方案中，所述方法进一步包括推荐被鉴定为可能的无应答者的所述患者用不同的ERK抑制剂治疗，或者用不同的ERK抑制剂和另外的具有不同机制的治疗剂的联合疗法治疗。

在某些实施方案中，所述样品来源于所述患者的癌细胞或者组织。

另一方面，本申请提供了一种试剂盒，其包括至少一种能用于确定一个或多个基因中至少一种突变的存在的寡核苷酸，其中所述基因选自下组：ADAM12、COL14A1、TNN、TP53、ITGB和PEX5L。

在某些实施方案中，所述至少一种寡核苷酸包括用于确定ADAM12中至少一种突变的存在的第一寡核苷酸，用于确定COL14L1中至少一种突变的存在的第二寡核苷酸，用于确定TNN中至少一种突变的存在的第三寡核苷酸，用于确定TP53中至少一种突变的存在的第四寡核苷酸，或其任意组合。

在某些实施方案中，所述至少一种寡核苷酸包括用于确定ADAM12中至少一种突变的存在的第一寡核苷酸，用于确定PEX5L中至少一种突变的存在的第二寡核苷酸，用于确定TNN中至少一种突变的存在的第三寡核苷酸，用于确定TP53中至少一种突变的存在的第四寡核苷酸，和或其组合。

在某些实施方案中，所述至少一种寡核苷酸包括用于扩增基因序列的至少一部分的引物对，或者包括用于与所述基因的所述突变特异性杂交以形成复合物的探针。

另一方面，本申请提供了至少一种寡核苷酸在制造用于预测癌细胞或者癌症患者对MEK抑制剂或者ERK抑制剂的应答性的试剂盒中的用途，其中所述寡核苷酸用于检测一种或多种基因中至少一种突变的存在，所述基因选自下组：ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和PEX5L。

附图简述

图1显示了具有ADAM12基因中的突变的细胞对MEK抑制剂曲美替尼(Trametinib)的增强的敏感性。

图2显示了具有COL14A1基因中的突变的细胞对MEK抑制剂曲美替尼(Trametinib)的降低的敏感性。

图3显示了具有TNN基因中的突变的细胞对MEK抑制剂曲美替尼(Trametinib)的增强的敏感性。

图4显示了具有TP53基因中的突变的细胞对MEK抑制剂曲美替尼(Trametinib)的增强的敏感性。

图5显示了具有ADAM12、COL14A1、TNN和TP53基因中的多种突变的细胞对MEK抑制剂曲美替尼(Trametinib)的增强的敏感性。

图6显示了具有ADAM12基因中的突变的细胞对ERK抑制剂SCH772984的增强的敏感性。

图7显示了具有PEX5L基因中的突变的细胞对ERK抑制剂SCH772984的增强的敏感性。

图8显示了具有TNN基因中的突变的细胞对ERK抑制剂SCH772984的增强的敏感性。

图9显示了具有TP53基因中的突变的细胞对ERK抑制剂SCH772984的增强的敏感性。

图10显示了具有ADAM12、PEX5L、TNN和TP53基因中的多种突变的细胞对ERK抑制剂SCH772984的增强的敏感性。

发明详述

一方面，本申请提供了一种用于预测癌细胞对MEK抑制剂的应答性的方法。在某些实施方案中，所述方法包括通过使来源于所述癌细胞的核酸样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述癌细胞中选自ADAM12、COL14A1、TNN和TP53组的一种或多种基因中的至少一种突变的存在，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；其中ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和/或其任意组合中突变的存在指示所述癌细胞对所述ERK抑制剂的降低的应答性。

丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)-细胞外调节蛋白激酶(ERK)级联，也称为Ras-Raf-MEK-ERK信号通路，是涉及肿瘤恶性生长和发展的关键性信号通路之一。所述信号通路始于信号分子(例如，生长因子)与细胞表面的受体结合之时。这触发Ras(一种GTP酶)离开其GDP而结合GTP。结合GTP的Ras随后激活Raf，所述Raf激活MEK，所述MEK激活ERK。ERK随后激活一些蛋白质，例如myc，其控制细胞分裂和细胞存活。当通路中的一种或多种蛋白质(例如Ras)突变时，其可导致所述信号通路陷入活化的状态，所述状态是许多癌症发展中的必经步骤。因此，已经开发了MEK/ERK信号通路的抑制剂来治疗癌症。已经发现某些患者对MEK或者ERK的抑制剂具有抗性。尚不清楚对这些抑制剂的抗性的潜在机制。

多种MEK和ERK1/2的抑制剂目前正处于癌症治疗的临床研究中，并且更多的靶向MEK或ERK1/2的试剂正处于临床前开发中。MEK抑制剂的实例包括但不限于曲美替尼(Trametinib)(GSK1120212)、司美替尼(Selumetinib)、比尼替尼(Binimetinib)(MEK162)、PD-325901、考比替尼(Cobimetinib)(GDC-0973，XL518)和CI-1040(PD035901)。ERK抑制剂包括但不限于SCH772984、FR180204、GDC-0994。

在某些实施方案中，所述MEK抑制剂是曲美替尼(Trametinib)。曲美替尼(Trametinib)(商品名Mekinist)具有化学名称N-(3-{3-环丙基-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基}苯基)乙酰胺。曲美替尼(Trametinib)的结构如下所示。

本文使用的术语“应答性”是指细胞/个体/患者/受试者对MEK或者ERK抑制剂的治疗产生应答的可能性，即在用MEK或者ERK抑制剂治疗后显示出降低的增殖/生长和/或增强的细胞死亡。在某些实施方案中，可将所述应答性分为不敏感的(即，不太可能产生应答)、敏感的(可能产生应答)和不确定的。在某些实施方案中，当所述细胞/个体/患者/受试者显示出发生病理完全反应(pcR)(即，不存在侵袭性癌症)的降低的可能性时，则所述细胞/个体/患者/受试者不太可能对MEK或者ER抑制剂的治疗产生应答。在某些实施方案中，降低的可能性是指在参照患者(例如，在目标基因中没有突变的患者)中发生pcR的可能性的约70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％。在某些实施方案中，可以通过测定细胞对MEK或者ERK抑制剂的IC50来评价所述细胞的应答性。

本文使用的术语“突变”是指基因组DNA相对正常参照(例如野生型基因组DNA)的偏离，例如，添加、缺失、插入、重排、倒位、转换、颠换、移码突变、无义突变、错义突变、易位和单核苷酸多态性。

检测基因中突变的存在的方法描述于本文中并且是本领域已知的(通常参见例如，Molecular Cloning A Laboratory Manual,第2版,ed.By Sambrook,Fritsch and Maniatis,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)。所述方法的实例包括但不限于，核酸测序(例如Sanger二脱氧测序、“二代”测序方法和单分子测序)、基于PCR(聚合酶链反应)的测定法(实时RCR、PCR-RFLP测定法(参见Cancer Research 59(1999)，5169-5175)、质谱基因分型(例如MALDI-TOF)、HPLC、酶法和SSPC(单链构象多态性分析(参见Pathol Int(1996)46,801-804))、基于杂交的测定法(例如Northern印迹、Southern印迹、5'-外切核酸酶(TaqMan^TM)探针、分子信标、荧光能量转移探针、Scorpion探针)。

在某些实施方案中，所述方法可以包括对有待于通过PCR进行评价的基因的DNA或cDNA片段进行酶扩增。所得到的PCR产物可以进行常规的基于Sanger的双脱氧核苷酸测序法或者平行测序法(“二代测序”)，例如由Roche(454technology)、Illumina(Solexa technology)ABI(Solid technology)或者Invitrogen(IonTorrent)市售的方法。通过与公众可获得的基因序列数据库比较，可以从序列读数中鉴定突变。或者，可以通过掺入等位基因特异性探针来鉴定突变，所述探针可以用酶检测反应、荧光、质谱法等来检测。

在某些实施方案中，所述方法可以包括使用仅特异性结合正常和突变的序列中的一个的引物来扩增目标基因的DNA或cDNA片段。因此，只能在正常和突变的基因中的一个中发现扩增产物。因此，可以通过检测所述扩增产物的存在来确定所述基因中突变的存在。

在某些实施方案中，所述方法可以包括使核酸样品接触寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针与基因的突变特异性杂交以形成复合物。可以将所述寡核苷酸探针设计成不与基因的正常序列杂交。可以使用报告信号，例如荧光来检测杂交复合物的存在。因此，可以通过检测所述复合物的形成来确定基因中突变的存在。

在某些实施方案中，突变存在于基因的外显子中。在某些实施方案中，所述突变的存在导致由所述基因编码的多肽的氨基酸改变。表3显示了本发明要确定的突变的示例性核酸序列。如本文中所使用的，将特定突变标注为所得到的氨基酸的改变。例如，Q650K突变是指编码所述基因第650位的氨基酸K的密码子/三联体，其中氨基酸G存在于野生型序列中。

ADAM12基因(基因ID：8038)编码ADAM(一种去整合素和金属蛋白酶)蛋白家族的成员。ADAM家族的成员是与蛇毒去整合素结构相关的膜锚定蛋白，并且已经被发现涉及细胞-细胞和细胞-基质的相互作用。ADAM12基因具有两个可变剪接的转录物：较短的分泌形式和较长的膜结合形式。

COL14A1基因(基因ID：7373)编码XIV类胶原的α链，所述胶原是FACIT(具有间断三螺旋的原纤维相关胶原)胶原家族的成员。XIV型胶原与所述原纤维表面相互作用并参与调节原纤维形成。

TNN基因(基因ID：63923)编码腱生蛋白N前体。腱生蛋白是细胞外基质糖蛋白家族，其成员已被发现参与伤口愈合以及发现于一些肿瘤基质中。

TP53基因(基因ID：7157)编码肿瘤蛋白p53，其是含有转录激活域、DNA结合域和寡聚化结构域的肿瘤抑制蛋白。肿瘤蛋白p53响应多种细胞应激以调节靶基因的表达，从而诱导细胞周期停滞、凋亡、衰老、DNA修复、或者代谢变化。已经发现TP53基因中的突变与多种癌症相关。TP53基因的可变剪接和替代启动子的使用导致产生多个转录本变体和同种型。还已经显示使用替代的翻译起始密码子产生了另外的同种型。如本文中所使用的，位置编号是指肿瘤蛋白p53同种型a的序列。

在某些实施方案中，所述在ADAM12中的突变选自下组突变：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在COL14A1中的突变选自下组突变：COL14A1中的R178W、L713_剪接、Q1272K、L479I、L1295F、E1024K、P1467S、G737R、K1023T、G966C、S1512fs；所述在TNN中的突变选自下组突变：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S；所述在TP53中的突变选自下组突变：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*，其中“*”表示所述突变引起产生终止密码子，“fs”表示突变导致移码，“剪接”表示所述突变导致mRNA的可变剪接。

所述癌细胞可以，例如，来源于肺癌、非小细胞肺(NSCL)癌、支气管肺泡细胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头部或颈部的癌症、皮肤或眼内黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区域的癌症、胃癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统的癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、膀胱癌、肾脏或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、间皮瘤、肝细胞癌、胆管癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、中枢神经系统(CNS)的肿瘤、脊髓轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、神经鞘瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、鳞状细胞癌、垂体腺瘤，包括上述任何癌症的难治性形式，或者一种或多种上述癌症的组合。在某些实施方案中，所述癌细胞来源于癌症患者。

另一方面，本申请提供了一种鉴定MEK抑制剂的可能的应答者或者可能的无应答者的方法，所述方法包括通过使来自患者的样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述样品中选自ADAM12、COL14A1、TNN和TP53组的一种或多种基因中至少一种突变的存在，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；如果在所述样品中检测到ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和/或其任意组合中的至少一种突变，则将所述患者鉴定为所述MEK抑制剂的可能的无应答者。

本文使用的术语“应答者”是指对用MEK或ERK抑制剂治疗更有可能应答的个体/患者/受试者。本文使用的“更有可能应答”是指在用MEK或ERK抑制剂治疗的患者中有增加的将发生病理完全反应的可能性。术语“无应答者”是指对用MEK或ERK抑制剂治疗不太可能产生应答的个体/患者/受试者。本文使用的“不太可能应答”是指在用MEK或ERK抑制剂治疗的患者中有降低的发生病理完全反应的可能性。

在某些实施方案中，在患者被评估为可能的“应答者”的情况下，推荐所述患者用MEK或者ERK抑制剂治疗。

在患者被鉴定为可能的无应答者的情况下，对不推荐所述患者用MEK或者ERK抑制剂的单一疗法治疗，或者不推荐用MEK或者ERK抑制剂治疗。

在某些实施方案中，当患者被鉴定为MEK抑制剂的可能的无应答者时，对所述患者推荐用不同的MEK抑制剂治疗，或者用不同的MEK抑制剂和另外的具有不同机制的治疗剂的联合疗法治疗。有别于曲美替尼(Trametinib)的MEK抑制剂的实例包括，但不限于，司美替尼(Selumetinib)、比尼替尼(Binimetinib)(MEK162)、PD-325901、考比替尼(Cobimetinib)(GDC-0973，XL518)和CI-1040(PD035901)。

在某些实施方案中，所述另外的具有不同机制的治疗剂可以是靶向PI3K-Akt-mTOR信号通路的试剂。所述靶向PI3K-Akt-mTOR信号通路的试剂是本领域已知的并且包括，但不限于，美国专利号8,022,205B2中公开的稠合嘧啶衍生物或者WO2009/099163中公开的稠合吡咯并嘧啶衍生物。

在某些实施方案中，具有不同机制的另外的试剂可以包括c-Met抑制剂(例如，ARQ197(taventinib，由Daichi Sankyo和ArQule开发))、AMG458(由Amgen开发)、GSK1363089(也称为XL880或者foretinib，由GSK开发)、克唑替尼(也称为PF2341066，由Pfizer开发)、PF04217903(由Pfizer开发)、INCB28060(由Incyte开发)、E7050(由Eisai开发)、MK-2461(由Merck开发)、BMS-777607(由BMS开发)、JNJ-38877605(由Johnson&Johnson开发)、XL184(由BMS/Exelixis开发))。

在某些实施方案中，所述另外的具有不同机制的治疗剂可以是化疗剂(例如，环磷酰胺(CTX；例如)、苯丁酸氮芥(CHL；例如)、顺铂(CisP；例如)、白消安(例如)、美法仑、卡莫司汀(BCNU)、链脲佐菌素、三亚乙基胺(TEM)、丝裂霉素C)。

在某些实施方案中，所述另外的具有不同机制的治疗剂可以是抗代谢物，例如甲氨蝶呤(MTX)、依托泊苷(VP16；例如)、6-巯基嘌呤(6MP)、6-硫代鸟嘌呤(6TG)、阿糖胞苷(Ara-C)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨(例如)、达卡巴嗪(DTIC))。

在某些实施方案中，所述另外的具有不同机制的治疗剂可以是其他抗肿瘤剂，例如紫杉醇(例如)和紫杉醇衍生物、细胞生长抑制剂、糖皮质激素例如地塞米松(DEX；例如)和皮质类固醇例如泼尼松、核苷酶抑制剂例如羟基脲、氨基酸耗竭酶例如天冬酰胺酶、亚叶酸钙、亚叶酸、雷替曲塞和其他叶酸衍生物，以及类似的多种抗肿瘤剂。

在某些实施方案中，所述另外的具有不同机制的治疗剂可以是抗激素剂(例如，类固醇受体拮抗剂，抗雌激素剂例如他莫昔芬、雷洛昔芬，芳香酶抑制剂4(5)-咪唑，其他芳香酶抑制剂，42-羟基他莫昔芬，三氧嘧啶，keoxifene，LY 117018，奥那司酮和托瑞米芬(例如)；抗雄激素剂例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及上述任意的药学上可接受的盐、酸或衍生物；糖蛋白激素例如促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)以及黄体生成素(LH)和LHRH(促卵泡激素释放激素)的激动剂和/或拮抗剂；LHRH激动剂醋酸戈舍瑞林，市售为(AstraZeneca)；LHRH拮抗剂D-丙氨酰胺N-乙酰基-3-(2-萘基)-D-丙氨酰基-4-氯-D-苯丙氨酰基-3-(3-吡啶基)-D-丙氨酰基-L-丝氨酰基-N6-(3-吡啶基羰基)-L-赖氨酰基-N6-(3-吡啶基羰基)-D-赖氨酰基-L-亮氨酰基-N6-(1-甲基乙基)-L-赖氨酰基-L-脯氨酸(例如Ares-Serono)；LHRH拮抗剂醋酸加尼瑞克；甾体抗雄激素醋酸环丙孕酮(CPA)和醋酸甲地孕酮，市售为(Bristol-MyersOncology)；非甾体抗雄激素氟他胺(2-甲基-N-[4,20-硝基-3-(三氟甲基)苯基丙酰胺)，市售为(Schering Corp.)；非甾体抗雄激素尼鲁米特(5,5-二甲基-3-[4-硝基-3-(三氟甲基-4'-硝基苯基)-4,4-二甲基-咪唑烷二酮)；和其他非容许受体的拮抗剂，例如RAR、RXR、TR、VDR等的拮抗剂)。

在某些实施方案中，所述另外的具有不同机制的治疗剂可以是血管生成抑制剂(例如，VEGFR抑制剂，例如SU5416和SU6668(南旧金山的Sugen Inc.，加州，美国)，或者如例如国际申请号WO 99/24440、WO 99/62890、WO 95/21613、WO 99/61422、WO 98/50356、WO 99/10349、WO 97/32856、WO 97/22596、WO 98/54093、WO 98/02438、WO 99/16755和WO 98/02437，以及美国专利号5,883,113、5,886,020、5,792,783、5,834,504和6,235,764中所述的抑制剂；VEGF抑制剂如IM862(柯克兰的Cytran Inc.，华盛顿，美国)；血管酶，其是来自Ribozyme(Boulder，科罗拉多州)和Chiron(Emeryville，加州)的合成的核酶；以及VEGF的抗体，例如贝伐单抗(Avastin^TM,Genentech，南旧金山，加州)，其是VEGF的重组人源化抗体；整合素受体拮抗剂和整合素拮抗剂，例如针对α_vβ₃、α_vβ₅和α_vβ₆整合素的拮抗剂，及其亚型，例如西仑吉肽(EMD 121974)，或抗整合素抗体，如，例如α_vβ₃特异性的人源化抗体(例如)；因子如IFN-α(美国专利号41530,901、4,503,035和5,231,176)；血管生成抑制素和纤溶酶原片段(例如kringle 14、kringle 5、kringle 1-3(O'Reilly,M.S.等(1994)Cell 79:315-328；Cao等(1996)J.Biol.Chem.271:29461-29467；Cao等(1997)J.Biol.Chem.272:22924-22928)；内皮抑素(O'Reilly,M.S.等(1997)Cell88:277；以及国际专利公开号WO 97/15666)；血小板反应蛋白(TSP-1；Frazier,(1991)Curr.Opin.Cell Biol.3:792)；血小板因子4(PF4)；纤溶酶原激活物/尿激酶抑制剂；尿激酶受体拮抗剂；肝素酶；烟曲霉素类似物例如TNP-4701；苏拉明和苏拉明类似物；血管稳定类固醇；bFGF拮抗剂；flk-1和flt-1拮抗剂；抗血管生成剂例如MMP-2(基质金属蛋白酶2)抑制剂和MMP-9(基质金属蛋白酶9)抑制剂)。

在某些实施方案中，所述样品是来源于患者的癌细胞或者组织。

另一方面，本申请提供了一种用于预测癌细胞对ERK抑制剂的应答性的方法，所述方法包括通过使来源于所述癌细胞的核酸样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述癌细胞中选自ADAM12、PEX5L、TNN和TP53组的一种或多种基因中的至少一种突变的存在，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；其中ADAM12、PEX5L、TNN、TP53和/或其任意组合中突变的存在指示所述癌细胞对所述ERK抑制剂的降低的应答性。

在某些实施方案中，所述癌细胞来源于癌症患者。

在某些实施方案中，所述ERK抑制剂是SCH772984。SCH772984，化学名为(R)-1-(2-氧代-2-(4-(4-(嘧啶-2-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-N-(3-(吡啶-4-基)-1H-吲唑-5-基)吡咯烷-3-甲酰胺，是ERK1/2新型的、选择性的并且ATP竞争性的抑制剂(参见Morris EJ等,Discovery of a novel ERK inhibitor with activity in models ofacquired resistance to BRAF and MEK inhibitors,Cancer Discov.20133(7):742-50)。SCH772984的结构如下所示。

在某些实施方案中，所述在ADAM12中的突变选自下组突变：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在PEX5L中的突变选自下组突变：PEX5L中的D179N、S229Y、G4E、T89K、Q355E、D39N、L571F、D113N；所述在TNN中的突变选自下组突变：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S突变；所述在TP53中的突变选自下组突变：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*。

在某些实施方案中，所述检测步骤包括将所述寡核苷酸用作引物来扩增所述基因的至少一部分，以及检测所述扩增产物从而确定在所述基因中所述突变的存在。

在某些实施方案中，所述检测步骤包括使所述核酸样品接触所述寡核苷酸，所述寡核苷酸与所述基因的所述突变特异性杂交以形成复合物，以及检测所述复合物的形成从而确定在所述基因中所述突变的存在。

另一方面，本申请提供了一种鉴定ERK抑制剂的可能的应答者或者可能的无应答者的方法，所述方法包括通过使来自患者的样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述样品中选自ADAM12、PEX5L、TNN和TP53组的一种或多种基因中至少一种突变的存在，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；如果在所述样品中检测到ADAM12、PEX5L、TNN、TP53和/或其任意组合中的至少一种突变，则将所述患者鉴定为所述ERK抑制剂的可能的无应答者。

在某些实施方案中，所述方法进一步包括对被鉴定为可能的无应答者的所述患者不推荐用所述ERK抑制剂的单一疗法或者ERK抑制剂治疗。

在某些实施方案中，所述方法进一步包括推荐被鉴定为可能的无应答者的所述患者用不同的ERK抑制剂治疗，或者用不同的ERK抑制剂和另外的具有不同机制的治疗剂的联合疗法治疗。除了SCH772984之外的ERK抑制剂的实例包括FR180204、GDC-0994。

另一方面，本申请提供了一种试剂盒，其包括至少一种能用于确定一个或多个基因中至少一种突变的存在的寡核苷酸，其中所述基因选自下组：ADAM12、COL14A1、TNN、TP53、ITGB和PEX5L。

在某些实施方案中，所述至少一种寡核苷酸包括用于确定ADAM12中至少一种突变的存在的第一寡核苷酸，用于确定COL14L1中至少一种突变的存在的第二寡核苷酸，用于确定TNN中至少一种突变的存在的第三寡核苷酸，用于确定TP53中至少一种突变的存在的第四寡核苷酸，或其任意组合。

在某些实施方案中，所述至少一种寡核苷酸包括用于确定ADAM12中至少一种突变的存在的第一寡核苷酸，用于确定PEX5L中至少一种突变的存在的第二寡核苷酸，用于确定TNN中至少一种突变的存在的第三寡核苷酸，用于确定TP53中至少一种突变的存在的第四寡核苷酸，和或其组合。

在某些实施方案中，所述至少一种寡核苷酸包括用于扩增基因序列的至少一部分的引物对，或者包括用于与所述基因的所述突变特异性杂交以形成复合物的探针。

另一方面，本申请提供了至少一种寡核苷酸在制造用于预测癌细胞或者癌症患者对ERK抑制剂或者MEK抑制剂的应答性的试剂盒中的用途，其中所述寡核苷酸用于检测一种或多种基因中至少一种突变的存在，所述基因选自下组：ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和PEX5L。

实施例1

以下是鉴定与对MEK抑制剂和/或ERK抑制剂的敏感性相关的基因的实例。

我们在50个细胞系组中检查了MEK抑制剂曲美替尼(trametinib)和ERK1/2抑制剂SCH772984的抗增殖活性(参见表1)。

表1.用于所述筛选的细胞系

材料和方法

细胞培养

在37℃温度、5％CO₂和95％湿度的条件下，除非有特别标注，否则将在补充有10％FBS的培养基中培养所有细胞。

细胞活力试剂

通过使用发光细胞活力测定试剂盒(目录号：G7572，Promega，在-20℃下储存)测定了细胞活力。为了制备所述CellTiter_Glo试剂，在使用前将CellTiter-Glo缓冲液解冻并平衡至室温。为了方便起见，可以在使用前将CellTiter-Glo缓冲液解冻并在室温下储存长达48小时。在使用前将冻干的CellTiter-Glo底物平衡至室温。将适当体积(100ml)的CellTiter-Glo缓冲液转移到含有CellTiter-Glo底物的琥珀色瓶中，以重构冻干的酶/底物混合物，其形成所述CellTiter-Glo试剂。在某些情况下，可将CellTiter-Glo缓冲液瓶的整个液体体积加入到CellTiter-Glo底物小瓶中。通过轻轻震荡、涡旋或者通过倒转内容物进行混合以获得均匀的溶液。所述CellTiter-Glo底物会在不到一分钟内就能迅速成为溶液。

MEK和ERK抑制剂

MEK抑制剂曲美替尼(Trametinib)购自Selleckchem(目录号S2673)并于使用前储存在-20℃。ERK1/2抑制剂SCH772984购自Selleckchem(目录号S7101)并于使用前储存在-20℃。

设备

在实验中使用了以下设备：EnVision多标记检测仪2104-0010A，PerkinElmer(美国)；Countstar，Inno-Alliance Biotech(美国)；Forma II系列水套CO2培养箱，ThermoScientific(美国)；生物安全柜，Thermo Scientific，(美国)；倒置显微镜，奥林巴斯CKX41SF(日本)。

细胞毒性和IC50的确定

在实验前一天(第-1天)，在对数生长期期间用细胞解离缓冲液(Gibco 13151-014)解离细胞，与合适的细胞培养基混合并且以1000rpm离心3分钟。在用表1中所列的相应培养基将细胞浓度调整至优化的密度(即4.44×10⁴个细胞/ml)前，使用Countstar重新悬浮细胞并计数，用于3天的CTG测定法(在实际研究之前优化细胞密度；在测试中使用的细胞密度可以随不同细胞系而变化)。对于3天的CTG测定法，将90μl细胞悬浮液加入到两个96孔板(板A和板B)中，得到4×10³个细胞/孔(在实际研究之前优化细胞密度；在测试中使用的细胞密度可以随不同细胞系而变化)。将板A和板B组在37℃具有5％CO₂的加湿的培养箱中培育过夜。

在第0天，对于板A组，向每个孔中加入10μl培养基用于读取T0。以与每孔中存在的细胞培养基相等的体积加入试剂(例如，对于96孔板，向100μl含有细胞的培养基中加入100μl试剂)。将内容物在轨道摇床上混合2分钟以促进细胞裂解。将所述板在室温下培育10分钟以稳定发光信号。将背封黑色贴纸(Backsealblack sticker)放置到每个板的底部。使用EnVision多标记检测仪记录发光。这形成了T0值的基础。

在第0天，以测试物稀释图所示的浓度溶解测试物和阳性对照。制备100×的PBS溶液，然后用适当的培养基将其稀释(1:10)成10×的工作溶液。根据平板接种图，在板B组的每个孔中分配10μl(10×)药物溶液(每个药物浓度一式三份)。将测试板在37°具有5％CO₂的加湿的培养箱中培育4天。

在第3天，以与每孔中存在的细胞培养基相等的体积加入试剂(例如，对于96孔板，向100μl含有细胞的培养基中加入100μl试剂)。将内容物在轨道摇床上混合2分钟以促进细胞裂解。将所述板在室温下培育10分钟以稳定发光信号。将背封黑色贴纸(Backseal black sticker)放置到每个板的底部。使用EnVision多标记检测仪记录发光。

使用GraphPad Prism 5.0以图形的形式显示数据。为了计算IC50，使用具有反曲剂量反应的非线性回归模型拟合剂量-应答曲线。用于计算存活率的公式如下所示；使用GraphPad Prism 5.0软件计算Y轴设置为50％时的绝对IC50。

存活率(％)＝(Lum_测试物-Lum_{培养基对照})/(Lum_未处理组-Lum_{培养基对照})×100％。

将Lum_未处理组-Lum_{培养基对照}设置为100％并且将Lum_{培养基对照}设置为0％存活率。T0值显示为Lum_未处理组的百分比。

统计分析

我们根据其对于SCH772984和曲美替尼的IC50，分别将63个细胞系分成敏感组、不敏感组和不确定组，然后在敏感组和不敏感组之间检测具有差异表达的或者不同突变类型的基因。这些基因在几条癌症相关通路中富集。

将所述63个细胞系分成3组(参见表1)：敏感组(IC50值小于1)、不敏感组(IC50值大于10)和不确定组(其余范围)。因此，我们得到了针对SCH772984的25个敏感细胞系和22个不敏感细胞系，针对曲美替尼的34个敏感细胞系和24个不敏感细胞系。在随后的分析中仅使用具有基因组数据的细胞系。使用GSEA软件分析差异表达的基因和富集的通路，使用Fisher精确检验检测具有不同突变类型的基因。

结果

对于曲美替尼，32个敏感细胞系和23个不敏感细胞系具有通过Affymetrix U219阵列分析的基因表达，34个基因组显著富集，标称p值<1％(参见表S2)。29个敏感细胞系和20个不敏感细胞系具有突变信息，并且通过临界P值0.01鉴定出了ADAM12、COL14A1、TNN和TP53(参见表3和图1-5)。

对于SCH772984，23个敏感细胞系和22个不敏感细胞系具有通过AffymetrixU219阵列分析的基因表达，10个基因组显著富集，标称p值<1％。21个敏感细胞系和18个不敏感细胞系具有突变信息，并且通过临界P值0.01鉴定出了ADAM12、PEX5L、TNN和TP53(参见表3和图6-10)。

表2.IC50信息

虽然已经以具体实施方案(其中一些是优选的实施方案)为参考具体示出和描述了本发明，但是本领域技术人员应当理解，在不偏离在此公开的本发明的主旨和范围的情况下，可以在形式和细节上进行各种改变。

SEQUENCE LISTING

<110> 中美冠科(太仓)生物技术有限公司

<120> 用于确定对MEK/ERK抑制剂的应答性的方法

<130> 061557-8005WO01

<150> CN201410135569.9

<151> 2014-04-04

<160> 10

<170> PatentIn 3.5版本

<210> 1

<211> 8050

<212> DNA

<213> 智人

<400> 1

acgccgccaa ctggcggggg tgcgggggag acaataattt gttccgcggt aataagaacg 60

gtgactgctg gccgtggatc catttcacag gcctgccttc tctcactaac gctcttccta 120

gtccccgggc caactcggac agtttgctca tttattgcaa cggtcaaggc tggcttgtgc 180

cagaacggcg cgcgcgcgcg cacgcacgca cacacacggg gggaaacttt tttaaaaatg 240

aaaggctaga agagctcagc ggcggcgcgg gcgctgcgcg agggctccgg agctgactcg 300

ccgaggcagg aaatccctcc ggtcgcgacg cccggccccg gctcggcgcc cgcgtgggat 360

ggtgcagcgc tcgccgccgg gcccgagagc tgctgcactg aaggccggcg acgatggcag 420

cgcgcccgct gcccgtgtcc cccgcccgcg ccctcctgct cgccctggcc ggtgctctgc 480

tcgcgccctg cgaggcccga ggggtgagct tatggaacca aggaagagct gatgaagttg 540

tcagtgcctc tgttgggagt ggggacctct ggatcccagt gaagagcttc gactccaaga 600

atcatccaga agtgctgaat attcgactac aacgggaaag caaagaactg atcataaatc 660

tggaaagaaa tgaaggtctc attgccagca gtttcacgga aacccactat ctgcaagacg 720

gtactgatgt ctccctcgct cgaaattaca cggtaattct gggtcactgt tactaccatg 780

gacatgtacg gggatattct gattcagcag tcagtctcag cacgtgttct ggtctcaggg 840

gacttattgt gtttgaaaat gaaagctatg tcttagaacc aatgaaaagt gcaaccaaca 900

gatacaaact cttcccagcg aagaagctga aaagcgtccg gggatcatgt ggatcacatc 960

acaacacacc aaacctcgct gcaaagaatg tgtttccacc accctctcag acatgggcaa 1020

gaaggcataa aagagagacc ctcaaggcaa ctaagtatgt ggagctggtg atcgtggcag 1080

acaaccgaga gtttcagagg caaggaaaag atctggaaaa agttaagcag cgattaatag 1140

agattgctaa tcacgttgac aagttttaca gaccactgaa cattcggatc gtgttggtag 1200

gcgtggaagt gtggaatgac atggacaaat gctctgtaag tcaggaccca ttcaccagcc 1260

tccatgaatt tctggactgg aggaagatga agcttctacc tcgcaaatcc catgacaatg 1320

cgcagcttgt cagtggggtt tatttccaag ggaccaccat cggcatggcc ccaatcatga 1380

gcatgtgcac ggcagaccag tctgggggaa ttgtcatgga ccattcagac aatccccttg 1440

gtgcagccgt gaccctggca catgagctgg gccacaattt cgggatgaat catgacacac 1500

tggacagggg ctgtagctgt caaatggcgg ttgagaaagg aggctgcatc atgaacgctt 1560

ccaccgggta cccatttccc atggtgttca gcagttgcag caggaaggac ttggagacca 1620

gcctggagaa aggaatgggg gtgtgcctgt ttaacctgcc ggaagtcagg gagtctttcg 1680

ggggccagaa gtgtgggaac agatttgtgg aagaaggaga ggagtgtgac tgtggggagc 1740

cagaggaatg tatgaatcgc tgctgcaatg ccaccacctg taccctgaag ccggacgctg 1800

tgtgcgcaca tgggctgtgc tgtgaagact gccagctgaa gcctgcagga acagcgtgca 1860

gggactccag caactcctgt gacctcccag agttctgcac aggggccagc cctcactgcc 1920

cagccaacgt gtacctgcac gatgggcact catgtcagga tgtggacggc tactgctaca 1980

atggcatctg ccagactcac gagcagcagt gtgtcacgct ctggggacca ggtgctaaac 2040

ctgcccctgg gatctgcttt gagagagtca attctgcagg tgatccttat ggcaactgtg 2100

gcaaagtctc gaagagttcc tttgccaaat gcgagatgag agatgctaaa tgtggaaaaa 2160

tccagtgtca aggaggtgcc agccggccag tcattggtac caatgccgtt tccatagaaa 2220

caaacatccc cctgcagcaa ggaggccgga ttctgtgccg ggggacccac gtgtacttgg 2280

gcgatgacat gccggaccca gggcttgtgc ttgcaggcac aaagtgtgca gatggaaaaa 2340

tctgcctgaa tcgtcaatgt caaaatatta gtgtctttgg ggttcacgag tgtgcaatgc 2400

agtgccacgg cagaggggtg tgcaacaaca ggaagaactg ccactgcgag gcccactggg 2460

cacctccctt ctgtgacaag tttggctttg gaggaagcac agacagcggc cccatccggc 2520

aagcagataa ccaaggttta accataggaa ttctggtgac catcctgtgt cttcttgctg 2580

ccggatttgt ggtttatctc aaaaggaaga ccttgatacg actgctgttt acaaataaga 2640

agaccaccat tgaaaaacta aggtgtgtgc gcccttcccg gccaccccgt ggcttccaac 2700

cctgtcaggc tcacctcggc caccttggaa aaggcctgat gaggaagccg ccagattcct 2760

acccaccgaa ggacaatccc aggagattgc tgcagtgtca gaatgttgac atcagcagac 2820

ccctcaacgg cctgaatgtc cctcagcccc agtcaactca gcgagtgctt cctcccctcc 2880

accgggctcc acgtgcacct agcgtccctg ccagacccct gccagccaag cctgcactta 2940

ggcaggccca ggggacctgt aagccaaacc cccctcagaa gcctctgcct gcagatcctc 3000

tggccagaac aactcggctc actcatgcct tggccaggac cccaggacaa tgggagactg 3060

ggctccgcct ggcacccctc agacctgctc cacaatatcc acaccaagtg cccagatcca 3120

cccacaccgc ctatattaag tgagaagccg acaccttttt tcaacagtga agacagaagt 3180

ttgcactatc tttcagctcc agttggagtt ttttgtacca acttttagga ttttttttaa 3240

tgtttaaaac atcattacta taagaacttt gagctactgc cgtcagtgct gtgctgtgct 3300

atggtgctct gtctacttgc tcaggtactt gtaaattatt aatttatgca gaatgttgat 3360

tacagtgcag tgcgctgtag taggcatttt taccatcact gagttttcca tggcaggaag 3420

gcttgttgtg cttttagtat tttagtgaac ttgaaatatc ctgcttgatg ggattctgga 3480

caggatgtgt ttgctttctg atcaaggcct tattggaaag cagtccccca actaccccca 3540

gctgtgctta tggtaccaga tgcagctcaa gagatcccaa gtagaatctc agttgatttt 3600

ctggattccc catctcaggc cagagccaag gggcttcagg tccaggctgt gtttggcttt 3660

cagggaggcc ctgtgcccct tgacaactgg caggcaggct cccagggaca cctgggagaa 3720

atctggcttc tggccaggaa gctttggtga gaacctgggt tgcagacagg aatcttaagg 3780

tgtagccaca ccaggataga gactggaaca ctagacaagc cagaacttga ccctgagctg 3840

accagccgtg agcatgtttg gaaggggtct gtagtgtcac tcaaggcggt gcttgataga 3900

aatgccaagc acttcttttt ctcgctgtcc tttctagagc actgccacca gtaggttatt 3960

tagcttggga aaggtggtgt ttctgtaaga aacctactgc ccaggcactg caaaccgcca 4020

cctccctata ctgcttggag ctgagcaaat caccacaaac tgtaatacaa tgatcctgta 4080

ttcagacaga tgaggctttc catgggacca caactatttt cagatgtgaa ccattaacca 4140

gatctagtca atcaagtctg tttactgcaa ggttcaactt attaacaatt aggcagactc 4200

tttatgcttg caaaaactac aaccaatgga atgtgatgtt catgggtata gttcatgtct 4260

gctatcatta ttcgtagata ttggacaaag aaccttctct atggggcatc ctctttttcc 4320

aacttggctg caggaatctt taaaagatgc ttttaacaga gtctgaacct atttcttaaa 4380

cacttgcaac ctacctgttg agcatcacag aatgtgataa ggaaatcaac ttgcttatca 4440

acttcctaaa tattatgaga tgctggcttg ggcagcatcc ccttgaactc ttcactcttc 4500

aaatgcctga ctagggagcc atgtttcaca aggtctttaa agtgactaat ggcatgagaa 4560

atacaaaaat actcagataa ggtaaaatgc catgatgcct ctgtcttctg gactggtttt 4620

cacattagaa gacaattgac aacagttaca taattcactc tgagtgtttt atgagaaagc 4680

cttcttttgg gggtcaacag ttttcctatg ctttgaaaca gaaaaatatg taccaagaat 4740

cttggtttgc cttccagaaa acaaaactgc atttcacttt cccggtgttc cccactgtat 4800

ctaggcaaca tagtattcat gactatggat aaactaaaca cgtgacacaa acacacacaa 4860

aagggaaccc agctctaata cattccaact cgtatagcat gcatctgttt attctatagt 4920

tattaagttc tttaaaatgt aaagccatgc tggaaaataa tactgctgag atacatacag 4980

aattactgta actgattaca cttggtaatt gtactaaagc caaacatata tatactatta 5040

aaaaggttta cagaatttta tggtgcatta cgtgggcatt gtctttttag atgcccaaat 5100

ccttagatct ggcatgttag cccttcctcc aattataaga ggatatgaac tgagtttttc 5160

ttttgttgtt tgttcttagc tgtaattcct atgcttctat ttcagagagc caggagagtt 5220

tgatattaaa ggaggttaaa actgtgatct tatgccatgt catcaatggc cacttagggg 5280

ccatggctga tgacacattc ttatctctac agtactaatg tgttattata gagccatgca 5340

ttttatttct gaataagaac atatttaaac taatattccc ttacaatatg gacagtatta 5400

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cataacttag gaaccaataa ccagggtgtt ttgtggttgg gggaggcacg gggtggagta 5520

ttctttttta tatcctcaaa acaaaaaaaa tcaatactta tatttcaatg gcaatctagt 5580

atttttttaa aagactgtat aggcatgaat aatagaggtg gtttgagttt tgtagggcca 5640

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ttatgccttc ttaactttat gagaattctc aggctgaact ataggccatt gttcccaggc 6060

aaatcaatac atcaatgcat cctcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaacc ggctaaaact 6120

gtgtcaaaat gttcttaagg agcctatggt ctccacggtg ctaaaaagag cctggtgctg 6180

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cttgttctaa ttagaagggg aagttagcca cagaaaatca acttatctat aattacaaaa 7020

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ctctgatact aaaacaaatg acactctaag aaagtttggg agccccatgc tgagaaccat 7140

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ttgaatggcg ttttattttc atggcctata agcaggtacc ttagtagggc agatatagga 7620

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<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

Met Ala Ala Arg Pro Leu Pro Val Ser Pro Ala Arg Ala Leu Leu Leu

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Ala Leu Ala Gly Ala Leu Leu Ala Pro Cys Glu Ala Arg Gly Val Ser

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Leu Trp Asn Gln Gly Arg Ala Asp Glu Val Val Ser Ala Ser Val Gly

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Ser Gly Asp Leu Trp Ile Pro Val Lys Ser Phe Asp Ser Lys Asn His

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Pro Glu Val Leu Asn Ile Arg Leu Gln Arg Glu Ser Lys Glu Leu Ile

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Ile Asn Leu Glu Arg Asn Glu Gly Leu Ile Ala Ser Ser Phe Thr Glu

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Thr His Tyr Leu Gln Asp Gly Thr Asp Val Ser Leu Ala Arg Asn Tyr

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Thr Val Ile Leu Gly His Cys Tyr Tyr His Gly His Val Arg Gly Tyr

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Ser Asp Ser Ala Val Ser Leu Ser Thr Cys Ser Gly Leu Arg Gly Leu

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Ile Val Phe Glu Asn Glu Ser Tyr Val Leu Glu Pro Met Lys Ser Ala

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Thr Asn Arg Tyr Lys Leu Phe Pro Ala Lys Lys Leu Lys Ser Val Arg

165 170 175

Gly Ser Cys Gly Ser His His Asn Thr Pro Asn Leu Ala Ala Lys Asn

180 185 190

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210 215 220

Arg Glu Phe Gln Arg Gln Gly Lys Asp Leu Glu Lys Val Lys Gln Arg

225 230 235 240

Leu Ile Glu Ile Ala Asn His Val Asp Lys Phe Tyr Arg Pro Leu Asn

245 250 255

Ile Arg Ile Val Leu Val Gly Val Glu Val Trp Asn Asp Met Asp Lys

260 265 270

Cys Ser Val Ser Gln Asp Pro Phe Thr Ser Leu His Glu Phe Leu Asp

275 280 285

Trp Arg Lys Met Lys Leu Leu Pro Arg Lys Ser His Asp Asn Ala Gln

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Leu Val Ser Gly Val Tyr Phe Gln Gly Thr Thr Ile Gly Met Ala Pro

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Ile Met Ser Met Cys Thr Ala Asp Gln Ser Gly Gly Ile Val Met Asp

325 330 335

His Ser Asp Asn Pro Leu Gly Ala Ala Val Thr Leu Ala His Glu Leu

340 345 350

Gly His Asn Phe Gly Met Asn His Asp Thr Leu Asp Arg Gly Cys Ser

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Cys Gln Met Ala Val Glu Lys Gly Gly Cys Ile Met Asn Ala Ser Thr

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Gly Tyr Pro Phe Pro Met Val Phe Ser Ser Cys Ser Arg Lys Asp Leu

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Glu Thr Ser Leu Glu Lys Gly Met Gly Val Cys Leu Phe Asn Leu Pro

405 410 415

Glu Val Arg Glu Ser Phe Gly Gly Gln Lys Cys Gly Asn Arg Phe Val

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Glu Glu Gly Glu Glu Cys Asp Cys Gly Glu Pro Glu Glu Cys Met Asn

435 440 445

Arg Cys Cys Asn Ala Thr Thr Cys Thr Leu Lys Pro Asp Ala Val Cys

450 455 460

Ala His Gly Leu Cys Cys Glu Asp Cys Gln Leu Lys Pro Ala Gly Thr

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Ala Cys Arg Asp Ser Ser Asn Ser Cys Asp Leu Pro Glu Phe Cys Thr

485 490 495

Gly Ala Ser Pro His Cys Pro Ala Asn Val Tyr Leu His Asp Gly His

500 505 510

Ser Cys Gln Asp Val Asp Gly Tyr Cys Tyr Asn Gly Ile Cys Gln Thr

515 520 525

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Pro Gly Ile Cys Phe Glu Arg Val Asn Ser Ala Gly Asp Pro Tyr Gly

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Asn Cys Gly Lys Val Ser Lys Ser Ser Phe Ala Lys Cys Glu Met Arg

565 570 575

Asp Ala Lys Cys Gly Lys Ile Gln Cys Gln Gly Gly Ala Ser Arg Pro

580 585 590

Val Ile Gly Thr Asn Ala Val Ser Ile Glu Thr Asn Ile Pro Leu Gln

595 600 605

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Asp Met Pro Asp Pro Gly Leu Val Leu Ala Gly Thr Lys Cys Ala Asp

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Gly Lys Ile Cys Leu Asn Arg Gln Cys Gln Asn Ile Ser Val Phe Gly

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Val His Glu Cys Ala Met Gln Cys His Gly Arg Gly Val Cys Asn Asn

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Arg Lys Asn Cys His Cys Glu Ala His Trp Ala Pro Pro Phe Cys Asp

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Lys Phe Gly Phe Gly Gly Ser Thr Asp Ser Gly Pro Ile Arg Gln Ala

690 695 700

Asp Asn Gln Gly Leu Thr Ile Gly Ile Leu Val Thr Ile Leu Cys Leu

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Leu Ala Ala Gly Phe Val Val Tyr Leu Lys Arg Lys Thr Leu Ile Arg

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Leu Leu Phe Thr Asn Lys Lys Thr Thr Ile Glu Lys Leu Arg Cys Val

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Pro Lys Asp Asn Pro Arg Arg Leu Leu Gln Cys Gln Asn Val Asp Ile

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Arg Val Leu Pro Pro Leu His Arg Ala Pro Arg Ala Pro Ser Val Pro

820 825 830

Ala Arg Pro Leu Pro Ala Lys Pro Ala Leu Arg Gln Ala Gln Gly Thr

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Arg Thr Thr Arg Leu Thr His Ala Leu Ala Arg Thr Pro Gly Gln Trp

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Glu Thr Gly Leu Arg Leu Ala Pro Leu Arg Pro Ala Pro Gln Tyr Pro

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His Gln Val Pro Arg Ser Thr His Thr Ala Tyr Ile Lys

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<212> DNA

<213> 智人

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ttaaggaatc ttgtttgaga aaatgttgtt atgtggtttg tatgctactt ttggggggca 5760

gggctcattt cagcagccta aatctcctcc ttggataatg ttaatattat tattattatt 5820

aacaaaaaat atatattttt aaaaagttcc cttaatctat gacatggtag caatgatttc 5880

cctttggtgt cttaatggca tgtcagataa tttgtttttc cagagaagag agctcaaaga 5940

ggaattggga aaaataaatt gaactctgga atcttctctc tcaagtccta aaatgaacaa 6000

acagatatga ttgtgtttga gggaaatatg tccctagcag gaaaagaatt caaagaggtt 6060

caaagaatat gtcacttact cctacttgct gtaggaataa ccttgctgat aagaaaaaaa 6120

gggacaatat tggagaaact acctcttgtt taattgatct gtccaactct gagatcactt 6180

ggtaactggt ttcatgtgta tccaaaaatc agcatttgga tttaagcttt ctgaatttgg 6240

tagtttaaga aacagattta gtttttcagt ggttttaact catgtgaaat aatgattttc 6300

caccagctct gatgcaaaga gatataattt taatgaacga tttatccagc agtgtgttcc 6360

aggggttgcc tctccttatc tacggggatt actttgtaca tgcagataag ttttcgcaaa 6420

cctatttcca ttttcttttg taagcaaata aaactttaaa acaa 6464

<210> 4

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<212> PRT

<213> 智人

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Met Lys Ile Phe Gln Arg Lys Met Arg Tyr Trp Leu Leu Pro Pro Phe

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Pro Thr Arg Leu Arg Tyr Asn Val Ile Ser His Asp Ser Ile Gln Ile

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Gly Gln Phe Arg Ile Lys Asp Leu Glu Lys Arg Lys Asp Pro Lys Pro

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Arg Val Lys Val Val Asp Arg Gly Asn Gly Ser Arg Pro Ser Ser Pro

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Glu Glu Val Lys Phe Val Cys Gln Thr Pro Ala Ile Ala Asp Ile Val

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Ile Leu Val Asp Gly Ser Trp Ser Ile Gly Arg Phe Asn Phe Arg Leu

165 170 175

Val Arg His Phe Leu Glu Asn Leu Val Thr Ala Phe Asp Val Gly Ser

180 185 190

Glu Lys Thr Arg Ile Gly Leu Ala Gln Tyr Ser Gly Asp Pro Arg Ile

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Glu Trp His Leu Asn Ala Phe Ser Thr Lys Asp Glu Val Ile Glu Ala

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Val Arg Asn Leu Pro Tyr Lys Gly Gly Asn Thr Leu Thr Gly Leu Ala

225 230 235 240

Leu Asn Tyr Ile Phe Glu Asn Ser Phe Lys Pro Glu Ala Gly Ser Arg

245 250 255

Thr Gly Val Ser Lys Ile Gly Ile Leu Ile Thr Asp Gly Lys Ser Gln

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Asp Asp Ile Ile Pro Pro Ser Arg Asn Leu Arg Glu Ser Gly Val Glu

275 280 285

Leu Phe Ala Ile Gly Val Lys Asn Ala Asp Val Asn Glu Leu Gln Glu

290 295 300

Ile Ala Ser Glu Pro Asp Ser Thr His Val Tyr Asn Val Ala Glu Phe

305 310 315 320

Asp Leu Met His Thr Val Val Glu Ser Leu Thr Arg Thr Leu Cys Ser

325 330 335

Arg Val Glu Glu Gln Asp Arg Glu Ile Lys Ala Ser Ala His Ala Ile

340 345 350

Thr Gly Pro Pro Thr Glu Leu Ile Thr Ser Glu Val Thr Ala Arg Ser

355 360 365

Phe Met Val Asn Trp Thr His Ala Pro Gly Asn Val Glu Lys Tyr Arg

370 375 380

Val Val Tyr Tyr Pro Thr Arg Gly Gly Lys Pro Asp Glu Val Val Val

385 390 395 400

Asp Gly Thr Val Ser Ser Thr Val Leu Lys Asn Leu Met Ser Leu Thr

405 410 415

Glu Tyr Gln Ile Ala Val Phe Ala Ile Tyr Ala His Thr Ala Ser Glu

420 425 430

Gly Leu Arg Gly Thr Glu Thr Thr Leu Ala Leu Pro Met Ala Ser Asp

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Leu Leu Leu Tyr Asp Val Thr Glu Asn Ser Met Arg Val Lys Trp Asp

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Ala Val Pro Gly Ala Ser Gly Tyr Leu Ile Leu Tyr Ala Pro Leu Thr

465 470 475 480

Glu Gly Leu Ala Gly Asp Glu Lys Glu Met Lys Ile Gly Glu Thr His

485 490 495

Thr Asp Ile Glu Leu Ser Gly Leu Leu Pro Asn Thr Glu Tyr Thr Val

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Thr Val Tyr Ala Met Phe Gly Glu Glu Ala Ser Asp Pro Val Thr Gly

515 520 525

Gln Glu Thr Thr Leu Ala Leu Ser Pro Pro Arg Asn Leu Arg Ile Ser

530 535 540

Asn Val Gly Ser Asn Ser Ala Arg Leu Thr Trp Asp Pro Thr Ser Arg

545 550 555 560

Gln Ile Asn Gly Tyr Arg Ile Val Tyr Asn Asn Ala Asp Gly Thr Glu

565 570 575

Ile Asn Glu Val Glu Val Asp Pro Ile Thr Thr Phe Pro Leu Lys Gly

580 585 590

Leu Thr Pro Leu Thr Glu Tyr Thr Ile Ala Ile Phe Ser Ile Tyr Asp

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Pro Ala Gln Gln Tyr Leu Glu Ile Asp Glu Val Thr Thr Asp Ser Phe

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Arg Val Thr Trp His Pro Leu Ser Ala Asp Glu Gly Leu His Lys Leu

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Met Trp Ile Pro Val Tyr Gly Gly Lys Thr Glu Glu Val Val Leu Lys

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Glu Glu Gln Asp Ser His Val Ile Glu Gly Leu Glu Pro Gly Thr Glu

675 680 685

Tyr Glu Val Ser Leu Leu Ala Val Leu Asp Asp Gly Ser Glu Ser Glu

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Val Val Thr Ala Val Gly Thr Thr Leu Asp Ser Phe Trp Thr Glu Pro

705 710 715 720

Ala Thr Thr Ile Val Pro Thr Thr Ser Val Thr Ser Val Phe Gln Thr

725 730 735

Gly Ile Arg Asn Leu Val Val Gly Asp Glu Thr Thr Ser Ser Leu Arg

740 745 750

Val Lys Trp Asp Ile Ser Asp Ser Asp Val Gln Gln Phe Arg Val Thr

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Tyr Met Thr Ala Gln Gly Asp Pro Glu Glu Glu Val Ile Gly Thr Val

770 775 780

Met Val Pro Gly Ser Gln Asn Asn Leu Leu Leu Lys Pro Leu Leu Pro

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Asp Thr Glu Tyr Lys Val Thr Val Thr Pro Ile Tyr Thr Asp Gly Glu

805 810 815

Gly Val Ser Val Ser Ala Pro Gly Lys Thr Leu Pro Ser Ser Gly Pro

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Gln Asn Leu Arg Val Ser Glu Glu Trp Tyr Asn Arg Leu Arg Ile Thr

835 840 845

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Pro Val Ser Val Pro Gly Pro Thr Leu Glu Thr Phe Val Gly Ala Asp

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Ile Asn Thr Ile Leu Ile Thr Asn Leu Leu Ser Gly Met Asp Tyr Asn

885 890 895

Val Lys Ile Phe Ala Ser Gln Ala Ser Gly Phe Ser Asp Ala Leu Thr

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Gln Glu Ser Thr Val Gly Gly Gly Thr Thr Arg His Cys Phe Tyr Gly

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Lys Ala Ile Lys Tyr Val Arg Asp Thr Leu Phe Thr Ala Glu Ser

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Gly Thr Arg Arg Gly Ile Pro Lys Val Ile Val Val Ile Thr Asp

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Gly Arg Ser Gln Asp Asp Val Asn Lys Ile Ser Arg Glu Met Gln

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Leu Asp Gly Tyr Ser Ile Phe Ala Ile Gly Val Ala Asp Ala Asp

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Tyr Ser Glu Leu Val Ser Ile Gly Ser Lys Pro Ser Ala Arg His

1175 1180 1185

Val Phe Phe Val Asp Asp Phe Asp Ala Phe Lys Lys Ile Glu Asp

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Val Val His Lys Asp Gly Ile Asp Leu Ala Gly Phe Lys Met Met

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Glu Met Phe Gly Leu Val Glu Lys Asp Phe Ser Ser Val Glu Gly

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Leu His Lys Asp Ala Leu Val Ser Gln Pro Thr Arg Tyr Leu His

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Leu Asn Lys Asn Ser Asp Pro Leu Val Gly Val Ile Leu Asp Asn

1310 1315 1320

Gly Gly Lys Thr Leu Thr Tyr Phe Asn Tyr Asp Gln Ser Gly Asp

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Phe Gln Thr Val Thr Phe Glu Gly Pro Glu Ile Arg Lys Ile Phe

1340 1345 1350

Tyr Gly Ser Phe His Lys Leu His Ile Val Val Ser Glu Thr Leu

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Val Lys Val Val Ile Asp Cys Lys Gln Val Gly Glu Lys Ala Met

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Asn Ala Ser Ala Asn Ile Thr Ser Asp Gly Val Glu Val Leu Gly

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Lys Met Val Arg Ser Arg Gly Pro Gly Gly Asn Ser Ala Pro Phe

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Gln Leu Gln Met Phe Asp Ile Val Cys Ser Thr Ser Trp Ala Asn

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Gly Pro Lys Gly Gln Gln Gly Glu Pro Gly Pro Lys Gly Pro Asp

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Gly Pro Arg Gly Glu Ile Gly Leu Pro Gly Pro Gln Gly Pro Pro

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Met Pro Gly Glu Lys Gly Glu Lys Gly Asp Thr Gly Leu Pro Gly

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Pro Gln Gly Ile Pro Gly Gly Val Gly Ser Pro Gly Arg Asp Gly

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Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ile Gly Ile Pro Gly Thr Pro Gly

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Val Pro Gly Ile Thr Gly Ser Met Gly Pro Gln Gly Ala Leu Gly

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Pro Pro Gly Val Pro Gly Ala Lys Gly Glu Arg Gly Glu Arg Gly

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Asp Leu Gln Ser Gln Ala Met Val Arg Ser Val Ala Arg Gln Val

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Cys Glu Gln Leu Ile Gln Ser His Met Ala Arg Tyr Thr Ala Ile

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Leu Asn Gln Ile Pro Ser His Ser Ser Ser Ile Arg Thr Val Gln

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Gly Pro Pro Gly Glu Pro Gly Arg Pro Gly Ser Pro Gly Ala Pro

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Gly Val Pro Gly Thr Pro Gly Glu Arg Gly Leu Thr Gly Ile Lys

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Gly Glu Lys Gly Asn Pro Gly Val Gly Thr Gln Gly Pro Arg Gly

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Pro Pro Gly Pro Ala Gly Pro Ser Gly Glu Ser Arg Pro Gly Ser

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Pro Gly Pro Pro Gly Ser Pro Gly Pro Arg Gly Pro Pro Gly His

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gccacaccta caagatcgat gtgcccaagt ctgccttggt tcaggttgac gctgaccctc 300

agcccctcag tgacgatggg gcttcgctct tggccctggg ggaggccagg gaggaacaga 360

acatcatctt caggcacaac atccgccttc agacgccaca gaaggactgc gagttggcag 420

gcagtgtcca ggacctcctg gcccgggtga agaagctgga ggaagagatg gtggagatga 480

aggaacagtg tagtgcccag cgctgctgcc agggagtcac tgatctaagc cgccactgca 540

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ctgagaactg cagcggacac ggcgagtgcg tgcgcggcgt gtgccagtgc cacgaagact 780

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gtgacacggg cgagtgctac tgcgaggagg gcttcacagg cctggactgt gcccaggtgg 900

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agccctccag ccaggtggat cactacctcc tcagctacta ccccctgggg aaggagctct 1020

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ctggaaccaa gtacatagtc accctgcgta acgtcaagaa tgaagtttct agcagcccac 1140

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ctgagaactc ccttgacgtg gagtgggaaa acccctcaac tgaggtggac tactacaagc 1260

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accccaagag ccgatatgac atcactggtc tgcacccggg gactgagtat aagatcacgg 1380

tggtgcccat gagaggagag ctggagggca agccgatcct cctgaatggc aggacagaaa 1440

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acaccaagga aatggcagtg cacaaggatg agagcagcac tgtcctgacg ggcctgaagc 1620

caggagaggc atacaaggtc tacgtgtggg ctgaaagggg caaccagggg agcaagaaag 1680

ctgacaccaa tgccctcaca gaaattgaca gcccagcaaa cctggtgact gaccgggtga 1740

ctgagaatac cgccaccatc tcctgggacc cggtacaggc caccattgac aagtacgtgg 1800

tgcgctacac ctctgctgac gaccaagaga ccagagaggt tctggtgggg aaggagcaga 1860

gcagcactgt cctgacaggc ctgaggccag gtgtggagta cacagtgcat gtctgggccc 1920

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aggcccagac agacattgac agcccccaaa acctggtgac cgaccgggtg acagagaata 2280

tggccactgt ctcctgggac ccggtgcggg ccaccattga caggtatgtg gtgcgctaca 2340

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tgtgagcagt cctcgcagga gacaccacca gctgtggcag cttggggcgg ggtgggtagt 4080

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Lys Lys Leu Glu Glu Glu Met Val Glu Met Lys Glu Gln Cys Ser Ala

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130 135 140

His Gly Thr Phe Ser Leu Glu Thr Cys Ser Cys His Cys Glu Glu Gly

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Arg Glu Gly Pro Ala Cys Glu Arg Leu Ala Cys Pro Gly Ala Cys Ser

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Gly His Gly Arg Cys Val Asp Gly Arg Cys Leu Cys His Glu Pro Tyr

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Ser Glu Asp Cys Ser Glu Lys Arg Cys Pro Gly Asp Cys Ser Gly His

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Gly Phe Cys Asp Thr Gly Glu Cys Tyr Cys Glu Glu Gly Phe Thr Gly

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Leu Asp Cys Ala Gln Val Val Thr Pro Gln Gly Leu Gln Leu Leu Lys

260 265 270

Asn Thr Glu Asp Ser Leu Leu Val Ser Trp Glu Pro Ser Ser Gln Val

275 280 285

Asp His Tyr Leu Leu Ser Tyr Tyr Pro Leu Gly Lys Glu Leu Ser Gly

290 295 300

Lys Gln Ile Gln Val Pro Lys Glu Gln His Ser Tyr Glu Ile Leu Gly

305 310 315 320

Leu Leu Pro Gly Thr Lys Tyr Ile Val Thr Leu Arg Asn Val Lys Asn

325 330 335

Glu Val Ser Ser Ser Pro Gln His Leu Leu Ala Thr Thr Asp Leu Ala

340 345 350

Val Leu Gly Thr Ala Trp Val Thr Asp Glu Thr Glu Asn Ser Leu Asp

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Val Glu Trp Glu Asn Pro Ser Thr Glu Val Asp Tyr Tyr Lys Leu Arg

370 375 380

Tyr Gly Pro Met Thr Gly Gln Glu Val Ala Glu Val Thr Val Pro Lys

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Ser Ser Asp Pro Lys Ser Arg Tyr Asp Ile Thr Gly Leu His Pro Gly

405 410 415

Thr Glu Tyr Lys Ile Thr Val Val Pro Met Arg Gly Glu Leu Glu Gly

420 425 430

Lys Pro Ile Leu Leu Asn Gly Arg Thr Glu Ile Asp Ser Pro Thr Asn

435 440 445

Val Val Thr Asp Arg Val Thr Glu Asp Thr Ala Thr Val Ser Trp Asp

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Pro Val Gln Ala Val Ile Asp Lys Tyr Val Val Arg Tyr Thr Ser Ala

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Asp Gly Asp Thr Lys Glu Met Ala Val His Lys Asp Glu Ser Ser Thr

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Val Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly Glu Ala Tyr Lys Val Tyr Val Trp

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Asn Thr Ala Thr Ile Ser Trp Asp Pro Val Gln Ala Thr Ile Asp Lys

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Leu Val Gly Lys Glu Gln Ser Ser Thr Val Leu Thr Gly Leu Arg Pro

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Thr Val Leu Thr Gly Leu Arg Pro Gly Met Glu Tyr Met Val His Val

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Glu Asn Met Ala Thr Val Ser Trp Asp Pro Val Arg Ala Thr Ile Asp

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Pro Gly Val Glu Tyr Thr Val His Val Trp Ala Gln Lys Gly Ala Gln

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Val Trp Ala Gln Lys Gly Asn Gln Glu Ser Lys Lys Ala Asp Thr Lys

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Pro Gly Met Glu Tyr Met Val His Val Trp Ala Gln Lys Gly Ala Gln

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Glu Ser Lys Lys Ala Asp Thr Lys Ala Gln Thr Glu Leu Asp Pro Pro

965 970 975

Arg Asn Leu Arg Pro Ser Ala Val Thr Gln Ser Gly Gly Ile Leu Thr

980 985 990

Trp Thr Pro Pro Ser Ala Gln Ile His Gly Tyr Ile Leu Thr Tyr Gln

995 1000 1005

Phe Pro Asp Gly Thr Val Lys Glu Met Gln Leu Gly Arg Glu Asp

1010 1015 1020

Gln Arg Phe Ala Leu Gln Gly Leu Glu Gln Gly Ala Thr Tyr Pro

1025 1030 1035

Val Ser Leu Val Ala Phe Lys Gly Gly Arg Arg Ser Arg Asn Val

1040 1045 1050

Ser Thr Thr Leu Ser Thr Val Gly Ala Arg Phe Pro His Pro Ser

1055 1060 1065

Asp Cys Ser Gln Val Gln Gln Asn Ser Asn Ala Ala Ser Gly Leu

1070 1075 1080

Tyr Thr Ile Tyr Leu His Gly Asp Ala Ser Arg Pro Leu Gln Val

1085 1090 1095

Tyr Cys Asp Met Glu Thr Asp Gly Gly Gly Trp Ile Val Phe Gln

1100 1105 1110

Arg Arg Asn Thr Gly Gln Leu Asp Phe Phe Lys Arg Trp Arg Ser

1115 1120 1125

Tyr Val Glu Gly Phe Gly Asp Pro Met Lys Glu Phe Trp Leu Gly

1130 1135 1140

Leu Asp Lys Leu His Asn Leu Thr Thr Gly Thr Pro Ala Arg Tyr

1145 1150 1155

Glu Val Arg Val Asp Leu Gln Thr Ala Asn Glu Ser Ala Tyr Ala

1160 1165 1170

Ile Tyr Asp Phe Phe Gln Val Ala Ser Ser Lys Glu Arg Tyr Lys

1175 1180 1185

Leu Thr Val Gly Lys Tyr Arg Gly Thr Ala Gly Asp Ala Leu Thr

1190 1195 1200

Tyr His Asn Gly Trp Lys Phe Thr Thr Phe Asp Arg Asp Asn Asp

1205 1210 1215

Ile Ala Leu Ser Asn Cys Ala Leu Thr His His Gly Gly Trp Trp

1220 1225 1230

Tyr Lys Asn Cys His Leu Ala Asn Pro Asn Gly Arg Tyr Gly Glu

1235 1240 1245

Thr Lys His Ser Glu Gly Val Asn Trp Glu Pro Trp Lys Gly His

1250 1255 1260

Glu Phe Ser Ile Pro Tyr Val Glu Leu Lys Ile Arg Pro His Gly

1265 1270 1275

Tyr Ser Arg Glu Pro Val Leu Gly Arg Lys Lys Arg Thr Leu Arg

1280 1285 1290

Gly Arg Leu Arg Thr Phe

1295

<210> 7

<211> 2588

<212> DNA

<213> 智人

<400> 7

gatgggattg gggttttccc ctcccatgtg ctcaagactg gcgctaaaag ttttgagctt 60

ctcaaaagtc tagagccacc gtccagggag caggtagctg ctgggctccg gggacacttt 120

gcgttcgggc tgggagcgtg ctttccacga cggtgacacg cttccctgga ttggccagac 180

tgccttccgg gtcactgcca tggaggagcc gcagtcagat cctagcgtcg agccccctct 240

gagtcaggaa acattttcag acctatggaa actacttcct gaaaacaacg ttctgtcccc 300

cttgccgtcc caagcaatgg atgatttgat gctgtccccg gacgatattg aacaatggtt 360

cactgaagac ccaggtccag atgaagctcc cagaatgcca gaggctgctc cccccgtggc 420

ccctgcacca gcagctccta caccggcggc ccctgcacca gccccctcct ggcccctgtc 480

atcttctgtc ccttcccaga aaacctacca gggcagctac ggtttccgtc tgggcttctt 540

gcattctggg acagccaagt ctgtgacttg cacgtactcc cctgccctca acaagatgtt 600

ttgccaactg gccaagacct gccctgtgca gctgtgggtt gattccacac ccccgcccgg 660

cacccgcgtc cgcgccatgg ccatctacaa gcagtcacag cacatgacgg aggttgtgag 720

gcgctgcccc caccatgagc gctgctcaga tagcgatggt ctggcccctc ctcagcatct 780

tatccgagtg gaaggaaatt tgcgtgtgga gtatttggat gacagaaaca cttttcgaca 840

tagtgtggtg gtgccctatg agccgcctga ggttggctct gactgtacca ccatccacta 900

caactacatg tgtaacagtt cctgcatggg cggcatgaac cggaggccca tcctcaccat 960

catcacactg gaagactcca gtggtaatct actgggacgg aacagctttg aggtgcgtgt 1020

ttgtgcctgt cctgggagag accggcgcac agaggaagag aatctccgca agaaagggga 1080

gcctcaccac gagctgcccc cagggagcac taagcgagca ctgcccaaca acaccagctc 1140

ctctccccag ccaaagaaga aaccactgga tggagaatat ttcacccttc agatccgtgg 1200

gcgtgagcgc ttcgagatgt tccgagagct gaatgaggcc ttggaactca aggatgccca 1260

ggctgggaag gagccagggg ggagcagggc tcactccagc cacctgaagt ccaaaaaggg 1320

tcagtctacc tcccgccata aaaaactcat gttcaagaca gaagggcctg actcagactg 1380

acattctcca cttcttgttc cccactgaca gcctcccacc cccatctctc cctcccctgc 1440

cattttgggt tttgggtctt tgaacccttg cttgcaatag gtgtgcgtca gaagcaccca 1500

ggacttccat ttgctttgtc ccggggctcc actgaacaag ttggcctgca ctggtgtttt 1560

gttgtgggga ggaggatggg gagtaggaca taccagctta gattttaagg tttttactgt 1620

gagggatgtt tgggagatgt aagaaatgtt cttgcagtta agggttagtt tacaatcagc 1680

cacattctag gtaggggccc acttcaccgt actaaccagg gaagctgtcc ctcactgttg 1740

aattttctct aacttcaagg cccatatctg tgaaatgctg gcatttgcac ctacctcaca 1800

gagtgcattg tgagggttaa tgaaataatg tacatctggc cttgaaacca ccttttatta 1860

catggggtct agaacttgac ccccttgagg gtgcttgttc cctctccctg ttggtcggtg 1920

ggttggtagt ttctacagtt gggcagctgg ttaggtagag ggagttgtca agtctctgct 1980

ggcccagcca aaccctgtct gacaacctct tggtgaacct tagtacctaa aaggaaatct 2040

caccccatcc cacaccctgg aggatttcat ctcttgtata tgatgatctg gatccaccaa 2100

gacttgtttt atgctcaggg tcaatttctt ttttcttttt tttttttttt tttctttttc 2160

tttgagactg ggtctcgctt tgttgcccag gctggagtgg agtggcgtga tcttggctta 2220

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gaggggtg 2588

<210> 8

<211> 393

<212> PRT

<213> 智人

<400> 8

Met Glu Glu Pro Gln Ser Asp Pro Ser Val Glu Pro Pro Leu Ser Gln

1 5 10 15

Glu Thr Phe Ser Asp Leu Trp Lys Leu Leu Pro Glu Asn Asn Val Leu

20 25 30

Ser Pro Leu Pro Ser Gln Ala Met Asp Asp Leu Met Leu Ser Pro Asp

35 40 45

Asp Ile Glu Gln Trp Phe Thr Glu Asp Pro Gly Pro Asp Glu Ala Pro

50 55 60

Arg Met Pro Glu Ala Ala Pro Pro Val Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro

65 70 75 80

Thr Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ser Trp Pro Leu Ser Ser Ser

85 90 95

Val Pro Ser Gln Lys Thr Tyr Gln Gly Ser Tyr Gly Phe Arg Leu Gly

100 105 110

Phe Leu His Ser Gly Thr Ala Lys Ser Val Thr Cys Thr Tyr Ser Pro

115 120 125

Ala Leu Asn Lys Met Phe Cys Gln Leu Ala Lys Thr Cys Pro Val Gln

130 135 140

Leu Trp Val Asp Ser Thr Pro Pro Pro Gly Thr Arg Val Arg Ala Met

145 150 155 160

Ala Ile Tyr Lys Gln Ser Gln His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys

165 170 175

Pro His His Glu Arg Cys Ser Asp Ser Asp Gly Leu Ala Pro Pro Gln

180 185 190

His Leu Ile Arg Val Glu Gly Asn Leu Arg Val Glu Tyr Leu Asp Asp

195 200 205

Arg Asn Thr Phe Arg His Ser Val Val Val Pro Tyr Glu Pro Pro Glu

210 215 220

Val Gly Ser Asp Cys Thr Thr Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser

225 230 235 240

Ser Cys Met Gly Gly Met Asn Arg Arg Pro Ile Leu Thr Ile Ile Thr

245 250 255

Leu Glu Asp Ser Ser Gly Asn Leu Leu Gly Arg Asn Ser Phe Glu Val

260 265 270

Arg Val Cys Ala Cys Pro Gly Arg Asp Arg Arg Thr Glu Glu Glu Asn

275 280 285

Leu Arg Lys Lys Gly Glu Pro His His Glu Leu Pro Pro Gly Ser Thr

290 295 300

Lys Arg Ala Leu Pro Asn Asn Thr Ser Ser Ser Pro Gln Pro Lys Lys

305 310 315 320

Lys Pro Leu Asp Gly Glu Tyr Phe Thr Leu Gln Ile Arg Gly Arg Glu

325 330 335

Arg Phe Glu Met Phe Arg Glu Leu Asn Glu Ala Leu Glu Leu Lys Asp

340 345 350

Ala Gln Ala Gly Lys Glu Pro Gly Gly Ser Arg Ala His Ser Ser His

355 360 365

Leu Lys Ser Lys Lys Gly Gln Ser Thr Ser Arg His Lys Lys Leu Met

370 375 380

Phe Lys Thr Glu Gly Pro Asp Ser Asp

385 390

<210> 9

<211> 9205

<212> DNA

<213> 智人

<400> 9

gagaacggcg cgcgccccgc tcggcagctg cggcggcggc tggtgtaggc gctcacgtca 60

gggctgggag gagggggttc gcagctcaga gagagagaga catgaggcaa cctggcagga 120

agcgagaaag agttcggcga agaaggagtg agttctagag acgccccgcg agcaggaccc 180

gcgcctgcag gagagcctgg ccgacccggc tcctcgcctt ctctgcgcgc tctcccgcgt 240

ccgctttcag caccccgagc ggagaacagt tcccggcagc ccgcagcgct gccgagtggc 300

cgccggccgg ccgagtaccc ggagctccag ggggctcagg agcaccctct gagaacccgc 360

tgtgcaccca ccttttcccc tcttttggtg ggcaagtaag cacgggggaa aagcatccgg 420

tggcctcagg gagccctgaa gaaaccgaag cagaatgtac cagggacaca tgcagaaaag 480

taaagaacaa ggatatggaa aactaagcag tgatgaagac ctcgaaataa ttgttgatca 540

aaagcaggga aaaggctcta gggcggcaga taaggctgtt gccatggtga tgaaggagat 600

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tgagcaacaa gaaagcagac ccctcctgag tccctccatc gatgactttc tctgtgaaac 720

caaatcggaa gcaatagcaa ggccagtaac atccaataca gctgtattga ccactggctt 780

agatctcctc gacctgagtg aaccagtctc tcaaacccaa accaaagcca agaagtcaga 840

gccctcatca aaaacctcat ccctcaagaa aaaggccgat ggatctgacc tcatcagcac 900

ggatgctgag cagagaggcc agcctctcag agtcccggag acttcatcct tagatctaga 960

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tgagtcggct tcagaattgg aattagtggc tccgactcag gctcgactga ccaaagaaca 1200

tcgctgggga agcgcattac tttctagaaa ccactcctta gaagaagagt ttgaaagggc 1260

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aatggctcgg aggaactgga tatctgagaa ccaagaagcc cagaaccaag taaccatctc 1380

ggctagtgag aagggatatt actttcacac tgaaaacccc ttcaaggact ggcctggagc 1440

atttgaagaa ggcttaaaaa ggctgaagga aggggatctg ccagtcacca tcctgttcat 1500

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ccaggcggag aatgaaaatg aacaagcagc tattgtcgcc ctccagaggt gcttagaatt 1620

acagcccaac aacttaaaag ctttgatggc cttggctgtg agttatacta acactggcca 1680

tcagcaggat gcctgtgacg ctctgaagaa ttggattaag caaaatccaa agtacaaata 1740

ccttgtgaaa agcaagaagg gatctccagg cctcacccgg cggatgtcta agtccccagt 1800

tgatagctct gttctggaag gggtgaagga attatatctg gaagctgccc accaaaatgg 1860

agatatgatc gacccagacc tgcagacagg tctaggggtt ctgttccacc tgagtggaga 1920

atttaataga gcaatagatg catttaacgc tgccttaact gttcggccag aggactattc 1980

actatggaac cgcctcgggg cgaccttggc gaacggagac cgcagcgagg aagccgtgga 2040

ggcctatacg cgagcactgg agattcagcc aggattcatc cggtccagat acaacctagg 2100

aataagctgc atcaacctgg gcgcctacag agaagcggtc agcaattttc tcactgccct 2160

cagtttgcaa agaaagagca ggaatcagca gcaagttcct catcctgcaa tctctgggaa 2220

tatctgggct gccctcagaa ttgcgctctc tctgatggac caaccagaac tcttccaggc 2280

ggctaatctt ggtgacctgg atgtcctctt aagagctttc aacttggatc cttgaagaaa 2340

gaataatacc agtactaata atccctgatc tgtgtgattg tactgaaaaa tcaaaaacta 2400

ttttattatg aatttcaaaa ggataaatca aatattcaaa aggccatggt catatagccc 2460

aaggaaatta attcctgtgg acaatgccca gtctctgttc agatccaaaa gcacaaaatg 2520

ttgtatatag agtcaaagtc aggctcaaaa gaagaattaa gagactcaag acaaaccaag 2580

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tctttgggtt ttttgtctcc ccttgcagct gatgacacat ctgaggaact tgttcatggg 2700

aaacatggaa aaagcactgc ctcagattgg gaaattctga ctgtttctga actgtcttct 2760

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gagagggagc tttgctggca aaagcagttt ttgcactaga aatttttgct gttcccaatc 2940

taaacttttc tggtattgta tatatgcact ttaatatctt atttatgcct tgctggagtt 3000

ttgttttgtt gctccaattt ttaacttggg ggtgaaagat ttaagaactc agcctcacta 3060

gatcaacgga ccaaataaac aattcctgaa gacagttttt catagtgtag gattttgaag 3120

aagtgttttt cttaaagcag atacgatgac ataaggcgta aatatggcaa acagatcttt 3180

tcattcacgt gctttctggg tctgtatgaa cataagtaag acacaaggta ctgtctcttc 3240

atgcattctc tgcaggaaga aagtttgatg gtatcgtgat ttctattgag ttcaaattaa 3300

cttgcttaag tgtcatactt tactggcttt gccctgcaca ccaatattcc ttttaaacca 3360

taaatatttt aaataatatt tcttaagagt gataaataac attttttcct aaaaattatg 3420

ttttcttagt ttcataataa tctgcactgt tcatcccctt gcattctaag tgatagaaga 3480

gcaacacttt caaaccaaat ctcactgaat gccagtgatt tcatatgaaa gatgcatgcc 3540

tctttggctc tttgaacatt tagcaagtat tgggaatttt ctattagcag tggtgtttta 3600

attggttgaa ttccacttag ttctccacag tgttttgtat gtgtttgggg cttggtgatt 3660

attttgaaag atacattttt taaagaatta ggaacatttt ttgcaaaatg ctaatcagaa 3720

tataattttc ccaatgtcag gtatagaagt tatcccattc ttctttacct ggtctccttc 3780

cttcgtctag aaccttcccc acagtagcta atcctaacaa ctttttattt atgttctttg 3840

ataataatag ctcatcccgc tcatgattat agctacccac aaaaaataaa acaacaacaa 3900

caaaaaagac tccacagaat tgggatcaaa acagtctaat tggctgggga ataagcttct 3960

actgaggagt aaatgtgcac acgtgcttat caattgaatg cgaggtacag gaataaaatc 4020

ctctcctctg ttacatctga agtccttggg ttgtgagagg gcctcaagtt aacagaaacc 4080

acaagtcctt gaggcttaca tatgttataa cctattctag tttataaaga caaaaagctg 4140

aggccactgt gaggagtgcc aggttttgat agtcattgtc aaagttgact tgggccaggt 4200

ggtagctcca gctggtcagc agaaggcaga ggcattcagg cactcatcat gggtagcagc 4260

gaccacccag tctcagaccg tgcttctcta cagtctcagc agcaaagtaa agctcaacaa 4320

tgctttcaag aatggtattg taagaattgt agaattcgag aaacccagtc tggtaaggac 4380

tcttggggcc agcctccaag ccatggcagg gcctgcttga atatgcctga ttaagcatcc 4440

tttccttccc tgctccttcc tcctgccatc tctgtacctt gaccagaaag tcggcatgaa 4500

tagttcatgg acaaaggatt gaatagcctc tgaacaaagg attcaaagca aactttgtaa 4560

gtgttctgtg atgccattct atactttgag cagcagctga atctgcagcc tggatttaaa 4620

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ctagtgtatg tagtatctgt cagatctaag atttttatag gctgtcaaga agtccagaat 4860

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aaccattatt aaaacatgag tgacaggcca ggtgcggtgg ctcacgcctg taatcctagc 4980

actttgggag gcagaggcgg gcagaccacg aggtcaggag ttcgagacca gcctgaccaa 5040

catggtgaaa ccccgtcttt attaagaata caaaaattag ccgggtgtag tggtatgcac 5100

ctgtaatacc agctactcag gaggctgagg caggagaatc acttgaacca gggaggcgga 5160

ggttgcagtg agccgagatt gcaccgctgc actccagtct gggtgacaga gcgagactcc 5220

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agcaagactt tagaacagtc tttttgtata aatcatatac agtaaatgtt ttgtttctta 5340

gaagtgcatc tactttattt tttggcagaa caatttttgg catcttatct tcatggcatg 5400

aaattgtcat ttaaattact ctttccgttt gaaaggggag ggtatcctta tttcccttct 5460

gaggtactct gagaaggctt tgagtttcct ttttcatgta ttaatgtata acagcctaac 5520

agctcctaga agagggtatt cttactagaa tggctacata cgggtgactt cagttacata 5580

caggtgactt ccagggactg acttcgcctg tagattggat gaaaataaag agaaagccag 5640

tgattattgc tgagtttcaa aatataacca tttctagtag gctacttcta catgctgttg 5700

taccttcctg gtgaggagga gacagaggga taggggagag gaggaggaat aaaaatccct 5760

ctcactgggc caatcatact gattcattcc ctttacttcc tccaaaactc actccccatg 5820

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tgctttctca gtcaatctgg attcctacta gaacagaaaa gtaaggaaac ataactgggt 5940

aggaatgtcc acttacgttt cacaaactca cttttagagt ttcatgccac tttcctcatt 6000

cttctcttta agatactatt atattgaacg tgggacccat gtctaaatac ttgtatagat 6060

aaatatttct tgtatattct tcccatacaa gcaagacttg aatacagttg tagctagtcc 6120

cacttttata ataaaagctt ccaaactctt tatcataaac tttgtctgtg agcttgggaa 6180

tacagagaaa gcaagttgat cattctgaga cccttcctca tttgccctga atcagttccc 6240

caagattgga ctgtacttta agctagttgt tgtagcagtg gtggttgttg ttttatatct 6300

tgagatactt ctagaacatt ctagaaacag ggtattctaa aggcttactt tatatgccat 6360

cctttttgaa ccctcttatt ttagaaatta ttacacgtgc acacttatga tttcaacctt 6420

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tctcatgtgg tattttgcct tgaacgaagt ttccactacc tgcagcttct gcagaaatac 7740

caaaataaca cagtctagag acaagtgtcc caatgtcaga actgttttct caggaccttc 7800

tctataagag aaaactaact tgcaatgctg cagaatgtca gagcaaaacc ctgatgagct 7860

ccgtgggata cttaatagaa gcctgcactc aaaataatat taagatggaa acaacaacaa 7920

caattaggca gttctttgct caactataaa atgtgtatca ttcattgggg gagggggagg 7980

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tgcatggata ccatacaaga attctgccat gtgagaaatg tgttcatgat ggactacatt 8160

accagtagtt aagggaaata cagcaaactt aagtttttac caacttcctt tcatgttccc 8220

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aaaaaaactg attaatttat taaacttttt acaaactgta acaaacattt aactatttag 8340

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aatgttgttt tgagacaatt cttctgtgat gcttcctcct catgctcata aatgtttaaa 8460

gtcttgggat ttcattttca ggctgaaata gataacaaga aaaaaattta agtttaaatg 8520

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tgcaatttta aactatgttt tcaaataaac tttgtctgcg gcttcgaggt cttttcagga 8940

atctttcaaa atgggatttg gggatcagaa ctccttctga tcaaatggaa tccaatttgt 9000

actactggct aaaggtcctt ttattaaata ttgaatatca ctacatatga ttttgcatga 9060

gctatctgga aatcaggaat gcatttttgg atataaaaca aaactttaaa aatcttcctc 9120

ctttgttaat tttttaagac taaaatatta tttaacctga aattgaattt tgtgattctt 9180

tttagaataa aaatattaaa ataaa 9205

<210> 10

<211> 626

<212> PRT

<213> 智人

<400> 10

Met Tyr Gln Gly His Met Gln Lys Ser Lys Glu Gln Gly Tyr Gly Lys

1 5 10 15

Leu Ser Ser Asp Glu Asp Leu Glu Ile Ile Val Asp Gln Lys Gln Gly

20 25 30

Lys Gly Ser Arg Ala Ala Asp Lys Ala Val Ala Met Val Met Lys Glu

35 40 45

Ile Pro Arg Glu Glu Ser Ala Glu Glu Lys Pro Leu Leu Thr Met Thr

50 55 60

Ser Gln Leu Val Asn Glu Gln Gln Glu Ser Arg Pro Leu Leu Ser Pro

65 70 75 80

Ser Ile Asp Asp Phe Leu Cys Glu Thr Lys Ser Glu Ala Ile Ala Arg

85 90 95

Pro Val Thr Ser Asn Thr Ala Val Leu Thr Thr Gly Leu Asp Leu Leu

100 105 110

Asp Leu Ser Glu Pro Val Ser Gln Thr Gln Thr Lys Ala Lys Lys Ser

115 120 125

Glu Pro Ser Ser Lys Thr Ser Ser Leu Lys Lys Lys Ala Asp Gly Ser

130 135 140

Asp Leu Ile Ser Thr Asp Ala Glu Gln Arg Gly Gln Pro Leu Arg Val

145 150 155 160

Pro Glu Thr Ser Ser Leu Asp Leu Asp Ile Gln Thr Gln Leu Glu Lys

165 170 175

Trp Asp Asp Val Lys Phe His Gly Asp Arg Asn Thr Lys Gly His Pro

180 185 190

Met Ala Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Arg Thr Gly Ser Lys Glu Leu

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Leu Trp Ser Ser Glu His Arg Ser Gln Pro Glu Leu Ser Gly Gly Lys

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Ser Ala Leu Asn Ser Glu Ser Ala Ser Glu Leu Glu Leu Val Ala Pro

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Thr Gln Ala Arg Leu Thr Lys Glu His Arg Trp Gly Ser Ala Leu Leu

245 250 255

Ser Arg Asn His Ser Leu Glu Glu Glu Phe Glu Arg Ala Lys Ala Ala

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Asn Pro Phe Lys Asp Trp Pro Gly Ala Phe Glu Glu Gly Leu Lys Arg

325 330 335

Leu Lys Glu Gly Asp Leu Pro Val Thr Ile Leu Phe Met Glu Ala Ala

340 345 350

Ile Leu Gln Asp Pro Gly Asp Ala Glu Ala Trp Gln Phe Leu Gly Ile

355 360 365

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Arg Cys Leu Glu Leu Gln Pro Asn Asn Leu Lys Ala Leu Met Ala Leu

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Leu Lys Asn Trp Ile Lys Gln Asn Pro Lys Tyr Lys Tyr Leu Val Lys

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Ser Lys Lys Gly Ser Pro Gly Leu Thr Arg Arg Met Ser Lys Ser Pro

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Val Asp Ser Ser Val Leu Glu Gly Val Lys Glu Leu Tyr Leu Glu Ala

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Gly Val Leu Phe His Leu Ser Gly Glu Phe Asn Arg Ala Ile Asp Ala

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Arg Leu Gly Ala Thr Leu Ala Asn Gly Asp Arg Ser Glu Glu Ala Val

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Glu Ala Tyr Thr Arg Ala Leu Glu Ile Gln Pro Gly Phe Ile Arg Ser

530 535 540

Arg Tyr Asn Leu Gly Ile Ser Cys Ile Asn Leu Gly Ala Tyr Arg Glu

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Ala Val Ser Asn Phe Leu Thr Ala Leu Ser Leu Gln Arg Lys Ser Arg

565 570 575

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Asp Pro

625