RIPK2抑制剂及用其治疗癌症的方法与流程

相关申请

这一申请要求2014年10月27日提交的美国临时申请号62/068,985的权益。上述申请的全部教导通过引用并入本文。

背景

受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶2(ripk2，也称为rick、rip2、cardiak和card3)已涉及多种功能，包括：针对先天免疫系统和适应性免疫系统的整合信号、调节细胞凋亡、控制生肌分化限制点、以及调节核因子-κβ(nfkb)和junn-末端激酶(jnk)激活作用。ripk2由n-末端丝氨酸/苏氨酸激酶催化结构域和含有半胱天冬酶激活和募集结构域(card)的c-末端区组成。

ripk2与clarp(半胱天冬酶样分子)物理相互作用，该clarp已知结合至具有死亡结构域的fas相关蛋白(fadd)和半胱天冬酶-8。ripk2的表达促进半胱天冬酶-8的激活作用并增强通过fas配体、fadd、clarp和半胱天冬酶-8诱导的细胞凋亡。缺失突变体分析显示，激酶结构域和半胱天冬酶-募集结构域都需要ripk2来促进细胞凋亡。显著地，ripk2突变体(其中在位置38的假定的atp结合位点的赖氨酸被甲硫氨酸替代)的表达用作cd95介导的细胞凋亡抑制剂。因此，ripk2代表可以调节由cd95/fas受体途径诱导的细胞凋亡的新颖的激酶。

因为ripk2的表达在多种细胞类型中影响细胞凋亡的调节，所以ripk2活性在疾病状态的发展中可以是重要的因素，在那些状态中调节细胞凋亡是至关重要的。显著地，ripk2蛋白质水平在具有阿尔茨海默病的患者的额皮质中是增加的(英达沃克(engidawork)等人，2001，生物化学和生物物理研究通讯(biochem.biophys.res.commun)281:84-93)。

ripk2缺陷小鼠的分析表明ripk2是调节先天免疫和适应性免疫和炎症应答所必需的。ripk2缺陷小鼠以期望的孟德尔比率出生，并展示没有通过流式细胞术测定确定的淋巴细胞的总(gross)发育异常或异常组成(克巴亚氏(kobayashi)等人，2002，自然(nature)416:194-199；芹(chin)等人，2002，自然(nature)416:190-194)。然而，这些小鼠表现出防御由细胞内病原体单核细胞增生李斯特氏菌(listeriamonocytogenes)感染的降低的能力(芹(chin)等人，2002)。ripk2缺乏的巨噬细胞和t细胞展示出严重降低的nfkb激活作用(克巴亚氏等人，2002；芹等人，2002)。ripk2缺乏也导致t.sub.h1细胞和自然杀伤细胞中的干扰素γ产生受损，并损害t.sub.h1细胞分化(克巴亚氏等人，2002；芹等人，2002)。ripk2缺陷小鼠的分析表明ripk2是用于免疫干预的候选靶标。

据报道ripk2通过肿瘤坏死因子(tnf)受体家族与涉及受体介导的信号转导的若干蛋白质物理相关，这些受体家族包括：tnfr-1、tnfr-2、fas(cd-95/apo-1)、淋巴毒素-β受体、cd40、cd30、ox-40、dr3、dr4和dr5。例如，ripk2与clarp物理相互作用，该clarp是半胱天冬酶-相关的蛋白质，该蛋白质与半胱天冬酶-8和fadd(与fas/cd-95和tnfr-1受体相关的蛋白质)相互作用(井原(inohara)等人，1998)。因此，clarp可以用作衔接子分子将ripk2与受体信号传导复合物的近端成分连接起来。

ripk2也与半胱天冬酶-1物理相互作用(托梅(thome)等人，1998；休姆(humke)等人，2000，细胞(cell)103:99-111)。该蛋白质相互作用由在ripk2的c-末端中的和在半胱天冬酶-1的前结构域中的card结构域介导(托梅等人，1998；休姆等人，2000)。ripk2通过促进其低聚而增强半胱天冬酶-1的激活作用，这导致相邻的前半胱天冬酶-1蛋白的加工(休姆等人，2000)。ripk2和半胱天冬酶-1之间的缔合作用通过iceberg蛋白质取消，iceberg蛋白通过其自身card结构域结合半胱天冬酶-1来抑制和/或置换ripk2。(休姆等人，2000)。

据报道，ripk2以神经生长因子(ngf)依赖性方式直接与p75受体缔合(卡西噶瑞(khursigara)等人，2001)，并与若干个受体相关蛋白(包括traf1、traf2、traf5和traf6)缔合(托梅等人，1998；麦卡锡(mccarthy)等人，1998)。cd40受体、ripk2、traf1和traf2的共表达导致ripk2与cd40的缔合(麦卡锡等人，1998)。同样，tnfr-1受体、ripk2、tradd、traf1和traf2的共表达导致ripk2与tnfr-1的缔合(麦卡锡等人，1998)。总的来说，这些数据表明ripk2是p75、cd40、fas/cd-95和tnfr-1受体信号传导复合物的成分。

ripk2活性似乎通过与配体的相互作用而改变。例如，包含对ripk2蛋白结合配偶体具有高亲和力的card结构域的多肽的表达可以阻止ripk2与其它含card结构域的蛋白质物理缔合(休姆等人，2000)。据报道，由card结构域介导的蛋白质-蛋白质相互作用被一氧化氮(no)破坏(泽赫(zech)等人，2003，生物化学杂志(biochemj.)371(第3部分):1055-64)。改变ripk2丝氨酸激酶活性的化合物也可以影响ripk2的功能。已经描述了评价ripk2激酶活性的方法(井原等人，1998；托梅等人，1998；麦卡锡等人，1998；纳瓦斯(navas)等人，1999)。已经公开了筛选调节丝氨酸-苏氨酸激酶活性的化合物的方法(us2003/0134310a1；wo02/14542)。此外，已经描述了设计用于抑制ripk2的反义寡核苷酸(u.s专利号6,426,221b1)。

由于靶向受体介导的调节细胞凋亡、细胞分化和免疫应答的信号传导通路的化合物的多重治疗价值以及ripk2所起的重要调节作用，本领域需要可以抑制ripk2的新型化合物。

发明概述

申请人现在已经发现某些吡咯并[3,2-d]嘧啶化合物是ripk2抑制剂(参见实例b)。申请人现在还发现，这些吡咯并[3,2-d]嘧啶化合物在细胞培养研究中对乳腺癌细胞、结肠癌细胞和卵巢癌细胞具有有效的抗癌活性(参见实例c-d)；并具有有效的抗炎/抗自身免疫性疾病(参见实例e)。基于这些发现，本文公开了吡咯并[3,2-d]嘧啶化合物，其药物组合物，以及用吡咯并[3,2-d]嘧啶化合物治疗癌症、自身炎症和自身免疫性疾病的方法。

本发明的一个实施例是由结构式(i)表示的化合物：

或其药学上可接受的盐。以下提供了每个变量的值。

本发明的另一个实施例是药物组合物，该药物组合物包括药学上可接受的载体或稀释剂以及上文描述的由结构式(i)表示的化合物或其药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施例是治疗患有癌症的受试者的方法，该方法包括向受试者给予有效量的结构式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施例是治疗患有自身炎症性疾病的受试者的方法，该方法包括向受试者给予有效量的结构式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施例是治疗患有自身免疫性疾病的受试者的方法，该方法包括向受试者给予有效量的结构式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施例是在需要抑制ripk2活性的受试者中抑制ripk2活性的方法，该方法包括向受试者给予有效量的由结构式(i)表示的化合物或其药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施例是用于疗法中的由结构式(i)表示的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，该疗法是治疗患有癌症的受试者。在一些实施例中，该疗法是治疗患有自身炎症性疾病的受试者。在一些实施例中，该疗法是治疗患有自身免疫性疾病的受试者。可替代地，该疗法在需要抑制ripk2活性的受试者中抑制ripk2活性。

本发明的另一个实施例是由结构式(i)表示的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗患有癌症的受试者的药物中的应用。

本发明的另一个实施例是由结构式(i)表示的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗患有自身炎症性疾病的受试者的药物中的应用。

本发明的另一个实施例是由结构式(i)表示的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗患有自身免疫性疾病的受试者的药物中的应用。

本发明的另一个实施例是由结构式(i)表示的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于在需要抑制ripk2活性的受试者中抑制ripk2活性的药物中的应用。

附图的简要说明

图1是说明在scid小鼠中hct116异种移植物对以不同剂量给予化合物a3治疗18天的体内反应的图表。

图2(a)-(c)是说明化合物a3对树突状细胞的细胞因子产生的影响的图表。图2(a)显示了在化合物a3存在下，用0.3ng/ml±1μg/mlmdp(即nod2激动剂)刺激小鼠骨髓树突状细胞24小时的结果。图2(b)显示了在化合物a3存在下，用0.3μg/mlpam3cys±1μg/mlmdp(即nod2激动剂)刺激小鼠骨髓树突状细胞24小时的结果。图2(c)显示了化合物a3对yfp阳性细胞百分比的影响(il-12p70水平，左图)以及对细胞活力的影响(tnfα，右图)。

发明详细说明

在第一实施例中，本发明涉及由化学式(i)表示的化合物：

或者其药学上可接受的盐，其中：

cy是脂环族的、杂环基、芳基或杂芳基；

y是不存在、-cr^br^b-、-o-、-nr^b-、-s(o)n-；

r1是脂环族的、杂环基、芳基或杂芳基，其各自任选地被1至3个由r^a单独地表示的基团取代；

r3是h，任选地被1至3个选自以下各项的基团取代的杂环基或杂芳基：-f、-cl、-br、i、-cn、no2、-or^b、-c1-c4烷基、-(c1-c3)亚烷基-or^b、-(c1-c3)亚烷基-nr^br^b、-c1-c4卤代烷基、-c1-c4卤代烷氧基、(c3-c8)环烷基、-nr^br^b、-c(＝o)nr^br^b、-nr^b(c＝o)nr^br^b、-s(o)nnr^br^b、c(＝o)or^b、-oc(＝o)or^b、-s(o)nr^b、-nr^bs(o)nr^b、-c(＝s)or^b、-o(c＝s)r^b、-nr^bc(＝o)r^b、-c(＝s)nr^br^b、-nr^bc(＝s)r^b、-nr^b(c＝o)or^b、-o(c＝o)nr^br^b、-nr^b(c＝s)or^b、-o(c＝s)nr^br^b、-nr(c＝s)nr^br^b、-c(＝s)r^b或-c(＝o)r^b；

每个r4独立地选自以下各项：-f、-cl、-br、i、-cn、-nr^br^b、-or^b、-c1-c4烷基、-(c1-c3)亚烷基-or^b、-(c1-c3)亚烷基-nr^br^b、-c1-c4卤代烷基或-c1-c4卤代烷氧基；

每个r^a独立地选自以下各项：-f、-cl、-br、i、-cn、or^b、-c1-c4烷基、(c2-c6)烯基、(c2-c6)炔基、-c1-c4卤代烷基、-c1-c4卤代烷氧基、-(c1-c3)亚烷基-or^b或-(c1-c3)亚烷基-nr^br^b；

每个r^b独立地是-h或-c1-c4烷基；

x是0、1、2、3或4；

每个m独立地是0、1、2或3；并且

每个n独立地是0、1或2。

在第二实施例中，本发明提供由结构式(ii)表示的化合物：

或其药学上可接受的盐。结构式(ii)中的变量的值如对于结构式(i)所描述的。

在第三实施例中，本发明提供由结构式(iii)表示的化合物：

或其药学上可接受的盐。结构式(iii)中的变量的值如对于结构式(i)或(ii)所描述的。

在第四实施例中，本发明提供由结构式(i)、(ii)或(iii)表示的化合物，其中r1是任选地取代的苯基、任选地取代的环戊基、任选地取代的环己基、任选地取代的噻吩基、任选地取代的吡啶基、任选地取代的噻唑基、任选地取代的吡咯基、任选地取代的咪唑基、任选地取代的呋喃基、任选地取代的唑基、任选地取代的异唑基、任选地取代的吡唑基、任选地取代的异噻唑基、任选地取代的嘧啶基、任选地取代的吡嗪基、任选地取代的哒嗪基、任选地取代的二唑基、任选地取代的四氢吡喃基、任选地取代的三唑基或任选地取代的噻二唑基，并且其余变量的值如上文对于结构式(i)、(ii)或(iii)所描述的。

在第五实施例中，本发明提供由结构式(i)、(ii)或(iii)表示的化合物，其中r1是任选地取代的苯基、任选地取代的环戊基、任选地取代的噻吩基或任选地取代的四氢吡喃基，并且其余变量的值如上文对于结构式(i)、(ii)或(iii)或者在第四实施例中所描述的。

在第六实施例中，本发明提供由结构式(i)、(ii)或(iii)表示的化合物，其中r3是任选地取代的单环杂环基或任选地取代的单环杂芳基，并且其余变量的值如上文对于结构式(i)、(ii)或(iii)或者在第四、第五实施例中所描述的。可替代地，r3是任选地取代的单环杂环基。

在第七实施例中，本发明提供由结构式(i)、(ii)或(iii)表示的化合物，其中m是0，并且其余变量的值如上文对于结构式(i)、(ii)或(iii)或者在第四、第五、第六实施例中所描述的。

在第八实施例中，本发明提供由结构式(i)、(ii)或(iii)表示的化合物，其中r3是任选地取代的氮杂环丁烷基、任选地取代的吗啉基、任选地取代的哌嗪基、任选地取代的哌啶基、任选地取代的四氢吡喃基、任选地取代的吡咯烷基、任选地取代的硫代吗啉基、任选地取代的四氢吡喃基、或任选地取代的四氢呋喃基、任选地取代的高吗啉基、任选地取代的高哌嗪基、任选地取代的硫代吗啉二氧化物或任选地取代的噻吩吗啉氧化物，并且其余变量的值如上文对于结构式(i)、(ii)或(iii)或者在第四、第五、第六或第七实施例中所描述的。

在第九实施例中，本发明提供由结构式(i)、(ii)或(iii)表示的化合物，其中r3是任选地取代的吗啉基、任选地取代的哌嗪基、任选地取代的哌啶基或任选地取代的硫代吗啉基，并且其余变量的值如上文对于结构式(i)、(ii)或(iii)或者在第四、第五、第六、第七或第八实施例中所描述的。

在第十实施例中，本发明提供由结构式(i)、(ii)或(iii)表示的化合物，其中该化合物由以下结构式表示：

或其药学上可接受的盐，其中r5是-c1-c4烷基或-(c1-c3)亚烷基-or^b，并且其余变量的值如上文对于结构式(i)、(ii)或(iii)或者在第四、第五、第六、第七、第八或第九实施例中所描述的。

在第十一实施例中，本发明提供由结构式(i)、(ii)或(iii)表示的化合物，其中该化合物由以下结构式表示：

或其药学上可接受的盐，其中y是不存在或-ch2-；并且y附接至苯环的间位或对位，并且其余变量的值如上文对于结构式(i)、(ii)或(iii)或者在第四、第五、第六、第七、第八或第九实施例中所描述的。

在第十二实施例中，本发明提供由结构式(i)、(ii)或(iii)表示的化合物，其中该化合物由以下结构式表示：

或其药学上可接受的盐，其中r5是-h、c1-c4烷基、-(c1-c3)亚烷基-or^b；y是不存在或-ch2-；并且y附接至苯环的间位或对位，并且其余变量的值如上文对于结构式(i)、(ii)或(iii)或者在第四、第五、第六、第七、第八或第九实施例中所描述的。

在第十三实施例中，本发明提供由结构式(i)、(ii)或(iii)表示的化合物，其中r1是

并且其余变量的值如上文对于结构式(i)、(ii)或(iii)或者在第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一或第十二实施例中所描述的。

在十四实施例中，本发明提供由结构式(i)、(ii)或(iii)表示的化合物，其中每个r^a独立地选自以下各项：-f、-cl或-ch3，并且其余变量的值如上文对于结构式(i)、(ii)或(iii)或者在第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二或第十三实施例中所描述的。

本发明还包括由结构描述的和/或以示例的名称描述的化合物。本发明同时包括这些化合物的中性形式及其药学上可接受的盐。用这些化合物治疗和/或这些化合物的应用包括这些化合物的中性形式及其药学上可接受的盐。

术语“烷基”单独使用或作为较大部分(如“烷氧基”或“卤代烷基”等)的一部分使用，意指饱和脂肪族直链或支链的一价烃基。除非另有说明，烷基基团典型地具有1-4个碳原子，即(c1-c4)烷基。如在此使用的，“(c1-c4)烷基”基团是意指具有1至4个碳原子的、以直链或支链安排的基团。

“烷氧基”是指通过氧连接原子附接的烷基，由-o-烷基表示。例如，“(c1-c4)烷氧基”包括甲氧基、乙氧基、丙氧基或丁氧基。

术语“卤代烷基”和“卤代烷氧基”意指按照可能的情况用一个或多个卤素原子取代的烷基或烷氧基。术语“卤素”是指f、cl、br或i。优选地，在卤代烷基或卤代烷氧基中的卤素是f。

“羟基烷基”是被羟基取代的烷基基团。

“烷氧基烷基”是被烷氧基取代的烷基基团。

“烯基”意指支链的或直链的含有至少一个双键的一价烃基。烯基可以是单或多不饱和的，并可以以e或z构型存在。除非另有说明，烯基基团典型地具有2-6个碳原子，即(c2-c6)烯基。例如，“(c2-c6)烯基”意指具有2-6个碳原子的、以直链或支链安排的基团。

“炔基”意指支链的或直链的含有至少一个三键的一价烃基。除非另有说明，炔基基团典型地具有2-6个碳原子，即(c2-c6)炔基。例如，“(c2-c6)炔基”意指具有2-6个碳原子的、以直链或支链安排的基团。

“环烷基”意指饱和脂肪族环烃，典型地含有3至8个环碳原子，即(c3-c8)环烷基。(c3-c8)环烷基包括但并不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。

“脂环族的”意指c3-c12单环的(c3-c8)或多环的(c7-c12，例如二环、三环、四环、螺环等)烃，其是完全饱和或具有一个或多个不饱和键但不是芳香族基团，即(c3-c8)环烷基或(c3-c8)环烯基。脂环族基团的实例是环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基和环己烯基等。

独自地或作为较大部分(如在“芳烷基”、“芳烷氧基”、或“芳氧基烷基”中)的一部分来使用的术语“芳基基团”意指碳环芳香族环。它还包括与环烷基或脂环族基团稠合的苯环。术语“芳基”可以与术语“芳基环”、“碳环芳香族环”、“芳基基团”和“碳环芳香族基团”互换地使用。芳基基团典型地具有六至十四个环原子。实例包括苯基、萘基、蒽基、1,2-二氢萘基、1,2,3,4-四氢萘基、芴基、茚满基、茚基等。“取代的芳基基团”是在任何一个或多个可取代的环原子处进行取代，该环原子是与氢键合的环碳原子。

术语“杂芳基”、“杂芳香族的”、“杂芳基环”、“杂芳基基团”、“杂芳香族环”和“杂芳香族基团”在本文中可互换使用。“杂芳基”当单独地或作为较大部分(如在“杂芳烷基”或“杂芳基烷氧基”中)的一部分使用时，是指具有五至十四个选自碳以及至少至少一个(典型地1至4个，更典型地1或2个)杂原子(例如，氧、氮或硫)的环原子的芳香族环基团。“杂芳基”包括单环的环以及多环的环，其中单环杂芳香族环稠合到一个或多个其他的芳香族环或杂芳香族环上。同样地，“5-14元杂芳基”包括单环、二环或三环系统。

单环5-6元杂芳基基团的实例包括呋喃基(例如2-呋喃基、3-呋喃基)、咪唑基(例如n-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基)、异唑基(例如3-异唑基、4-异唑基、5-异唑基)、二唑基(例如1,2,3-二唑基、1,2,4-二唑基、1,3,4-二唑基)、唑基(例如2-唑基、4-唑基、5-唑基)、吡唑基(例如3-吡唑基、4-吡唑基、5-吡唑基)、吡咯基(例如1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基)、吡啶基(例如2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基)、嘧啶基(例如2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基)、哒嗪基(例如3-哒嗪基、4-哒嗪基)、噻唑基(例如2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基)、异噻唑基、三唑基(例如1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,3,4-三唑基)、四唑基(例如四唑基)和噻吩基(例如2-噻吩基、3-噻吩基)。多环的芳香族杂芳基基团的实例包括咔唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、吲哚基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并唑基、喹啉基、异喹啉基、吲唑基、异吲哚基、吖啶基或苯并异唑基。“取代的杂芳基基团”是在任何一个或多个可取代的环原子处进行取代，该环原子是与氢键合的环碳原子或环氮原子。

“杂环基”意指饱和的或不饱和的任选地含有一个或多个双键的非芳香族4-12元环自由基。其可以是单环、二环、三环、螺环或稠合的。杂环烷基含有1至4个杂原子，这些杂原子可以是相同的或不同的，选自以下各项：n、o或s。杂环基环任选地含有一个或多个双键和/或是任选地与一个或多个芳香族环(例如苯环)稠合。术语“杂环基”旨在包括所有可能的同分异构体形式。杂环烷基的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、吗啉基、硫代吗啉基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、乙内酰脲基、戊内酰胺基(valerolactamyl)、环氧乙烷基、环氧丙烷基、二氢咪唑、二氢呋喃基、二氢吡喃基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢噻吩基、二氢硫代苯基、二氢硫代吡喃基、四氢咪唑、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻吩基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢硫代苯基和四氢硫代吡喃基。多环的杂环烷基基团的实例包括二氢吲哚基、二氢异吲哚基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并呋喃基、二氢异苯并呋喃基、二氢苯并三唑基、二氢苯并噻唑基、二氢苯并唑基、二氢喹啉基、四氢喹啉基、二氢异喹啉基、四氢异喹啉基、二氢吲唑基、二氢吖啶基、四氢吖啶基、二氢苯并异唑基、苯并二氢吡喃、苯并吡喃、异苯并二氢吡喃和异苯并吡喃。

术语“螺”是指脂环族的或杂环基，其在分子中与另一个脂环族的或杂环基基团共享一个环碳原子。

本文所述的某些化合物可以以各种立体异构体或互变异构形式存在。立体异构体是仅在它们的空间排布方面不同的化合物。当所公开的化合物通过结构被命名或描述而不指示立体化学时，应当理解的是，该名称或结构涵盖所有可能的立体异构体、几何异构体(包括基本上纯的立体异构体或几何异构体)以及它们的组合。

当通过名称或结构描述几何异构体时，应当理解的是，命名或描述的几何异构体的几何异构的纯度为按重量计至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％纯度。几何异构的纯度通过将混合物中命名或描绘的几何异构体的重量除以混合物中所有几何异构体的总重量来确定。

可以通过熟知的方法将对映异构体的和非对映异构体的混合物解析为它们的组分对映异构体或立体异构体，这些熟知的方法例如手性相气相色谱法、手性相高效液相色谱法、以手性盐复合物的形式结晶化合物，或在手性溶剂中结晶化合物。对映异构体和非对映异构体还可以通过熟知的不对称合成方法从非对映异构体或对映体纯的中间体、试剂、以及催化剂得到。

当化合物通过指示单一对映异构体的名称或结构表示时，除非另有说明，该化合物是至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％的光学纯度(也称为“对映体纯”)。光学纯度是在混合物中的命名或描述的对映异构体的重量除以在混合物中的两种对映异构体的总重量。

当所公开的化合物的立体化学通过结构命名或描述，并且命名或描述的结构涵盖多于一种的立体异构体(例如像在非对映异构体对中)时，应当理解的是，包括所涵盖的立体异构体之一或所涵盖的立体异构体的任何混合物。进一步理解的是，命名或描述的立体异构体的立体异构体纯度至少为按重量计60％、70％、80％、90％、99％或99.9％。在这种情况下的立体异构纯度通过将在混合物中的通过名称或结构所涵盖的立体异构体的总重量除以在混合物中的所有立体异构体的总重量来确定。

包括在本教导中的是本文公开的化合物的药学上可接受的盐。所公开的化合物具有碱性胺基基团并且因此可以与药学上可接受的一种或多种酸形成药学上可接受的盐。本文描述的化合物的适合的药学上可接受的酸加成盐包括无机酸(例如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸、以及硫酸)的盐以及有机酸(例如苯磺酸、苯甲酸、柠檬酸、乙磺酸、葡糖酸、乙醇酸、羟乙基磺酸、乳酸、乳糖酸、甲磺酸、琥珀酸和对甲苯磺酸)的盐。具有酸性基团(例如羧酸)的本教导的化合物可以与药学上可接受的一种或多种碱形成药学上可接受的盐。适合的药学上可接受的碱性盐包括铵盐、碱金属盐(例如，钠盐和钾盐)以及碱土金属盐(例如，镁盐和钙盐)。具有季铵基团的化合物还包括反阴离子，例如氯离子、溴离子、碘离子、乙酸根、高氯酸根等。这类盐的其他实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、硝酸盐、柠檬酸盐或它们的混合物(包括外消旋混合物)、琥珀酸盐、苯甲酸盐以及与氨基酸(例如谷氨酸)形成的盐。

本文所述的化合物可以抑制ripk2。因此，通常本文所述的化合物在与这种激酶相关的疾病或病症的治疗中是有用的。

在一个实施例中，本文所述的化合物是ripk2抑制剂，并对治疗与此类一种或多种激酶相关的疾病(例如癌症)是有用的。可替代地，本文所述的化合物是ripk2抑制剂，并对治疗与ripk2相关的疾病(例如癌症、自身炎症性疾病或自身免疫性疾病)是有用的。

本教导的另一个方面涉及治疗患有癌症受试者的方法，该方法包括向受试者给予有效量的本文描述的化合物。在一个实施例中，本文描述的化合物抑制肿瘤的生长。

可以通过本教导的方法治疗(包括减少复发的可能性)的癌症包括乳腺癌、结肠癌或卵巢癌。在一个实施例中，癌症选自以下各项：白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、乳腺癌、脑癌、结肠癌、结肠直肠癌、头颈癌、肝细胞癌、肺腺癌、转移性黑素瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌和肾癌。在一个实施例中，癌症是肺癌、结肠癌、脑癌、神经母细胞瘤、前列腺癌、黑色素瘤、多形性成胶质细胞瘤或卵巢癌。在另一个实施例中，癌症是肺癌、乳腺癌、结肠癌、脑癌、神经母细胞瘤、前列腺癌、黑色素瘤、多形性成胶质细胞瘤或卵巢癌。在又另一个实施例中，癌症是乳腺癌、结肠癌或肺癌。在另一个实施方案中，癌症是乳腺癌。在又另一个实施例中，癌症是基底亚型乳腺癌或宫腔b型亚型乳腺癌。在又另一个实施例中，癌症是基底亚型乳腺癌。在又另一个实施例中，基底亚型乳腺癌是er(雌激素受体)、her2和pr(孕酮受体)阴性乳腺癌。在又另一个实施例中，癌症是软组织癌。“软组织癌”是本领域公认的术语，其涵盖从身体的任何软组织衍生的肿瘤。这些软组织连接、支撑或围绕身体的各种结构和器官，包括但不限于平滑肌、骨骼肌、肌腱、纤维组织、脂肪组织、血管和淋巴管、血管周围组织、神经、间充质细胞和滑膜组织。因此，软组织癌可以是脂肪组织癌、肌肉组织癌、神经癌、关节组织癌、血管癌、淋巴管癌和纤维组织癌。软组织癌可以是良性的或恶性的。通常，恶性软组织癌是指肉瘤或软组织肉瘤。有很多类型的软组织瘤，包括脂肪瘤、成脂肪细胞瘤、冬眠瘤、脂肪肉瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、神经纤维瘤、神经鞘瘤(schwannoma/neurilemoma)、神经瘤、恶性神经鞘瘤、神经纤维肉瘤、神经原性肉瘤、结节性腱鞘炎、滑膜肉瘤、血管瘤、血管球瘤、血管外皮细胞瘤、血管内皮瘤、血管肉瘤、卡波西氏肉瘤、淋巴管瘤、纤维瘤、弹性纤维瘤、表皮纤维瘤病、纤维组织细胞瘤、纤维肉瘤、纤维瘤病、隆凸性皮肤纤维肉瘤(dfsp)、恶性纤维组织细胞瘤(mfh)、粘液瘤、颗粒细胞瘤、恶性间叶瘤、软组织泡状肉瘤、上皮样肉瘤、透明细胞肉瘤和促结缔组织增生性小细胞瘤。在特别实施例中，软组织癌是选自下组的肉瘤，该组由以下各项组成：纤维肉瘤、胃肠肉瘤、平滑肌肉瘤、去分化的脂肪肉瘤、多形脂肪肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、圆细胞肉瘤和滑膜肉瘤。

本教导的另一个方面涉及治疗患有自身免疫性疾病的受试者的方法，该方法包括向受试者给予有效量的本文描述的化合物。在一个实施例中，本文描述的化合物抑制肿瘤的生长。

这些自身免疫性疾病包括但不限于：类风湿性关节炎(ra)、系统性红斑狼疮(sle)、多发性硬化症(ms)、克罗恩病、银屑病和哮喘。

本教导的另一个方面涉及治疗患有自身炎症性疾病的受试者的方法，该方法包括向受试者给予有效量的本文描述的化合物。

这些自身炎症性疾病包括但不限于：家族性地中海热(fmf)、肿瘤坏死因子(tnf)受体相关周期性综合征(traps)、甲羟戊酸激酶缺乏/高免疫球蛋白d综合征(mkd/hids)、穆-韦二氏综合征(mws)、家族性寒冷性自身炎症综合征(fcas)、新生儿多系统炎性疾病(nomid)、定期发烧、口疮性口炎、咽炎和腺炎(pfapa综合征)、化脓性无菌性关节炎、坏疽性脓包病、痤疮(papa)、白细胞介素-1受体拮抗剂缺乏(dira)、贝切特氏病、马吉德综合征(majeedsyndrome)、慢性复发性多病灶骨髓炎(crmo)、施尼茨综合征(schnitzlersyndrome)和布劳综合征(blausyndrome)。

在一些实施例中，本教导提供了治疗患有癌症的受试者的方法，该方法包括向受试者给予有效量的由结构式(i)表示的化合物组合有效的抗癌疗法。在一个实施例中，该癌症是转移性癌症。“转移性癌症”是从其主要部位扩散到身体其他部位的癌症。

本文描述的抗癌疗法包括给予抗癌剂。“抗癌剂”是化合物，其当以有效量向患有癌症的受试者给予时可以实现(部分地或基本地)一种或多种以下情况：阻止生长、减少肿瘤的程度(例如减小肿瘤的大小)、抑制癌症的生长速度、以及改良或改善与癌症相关的临床症状或指征(如组织或血清成分)或增加受试者的寿命。

适合用于本文所述的方法的抗癌剂包括任何已经批准用于治疗癌症的抗癌剂。在一个实施例中，该抗癌剂包括但不限于：靶向抗体、血管生成抑制剂、烷基化剂、抗代谢物、长春花生物碱、紫杉烷、鬼臼毒素、拓扑异构酶抑制剂、激素抗肿瘤剂和其他抗肿瘤剂。

在一个实施例中，可以用于本文所述的方法中的抗癌剂包括但不限于：紫杉醇、多西他赛、5-氟尿嘧啶、曲妥珠单抗、拉帕替尼、贝伐单抗、来曲唑、戈舍瑞林、他莫昔芬、西妥昔单抗、帕尼单抗、吉西他滨、卡培他滨、伊立替康、奥沙利铂、卡铂、顺铂、多柔比星、表柔比星、环磷酰胺、甲氨蝶呤、长春碱、长春新碱、阿糖胞苷、依托泊苷、柔红霉素、博来霉素、丝裂霉素和阿霉素及其组合。

在一个实施例中，同时给予抗癌剂和由结构式(i)表示的化合物。当同时给予时，抗癌剂和该化合物可以以相同的配制品或以不同的配制品给予。可替代地，该化合物和另外的抗癌剂分别地在不同时间给予。

术语“有效量”意指当向受试者给予一种量，该量导致有益的或希望的结果(包括临床结果)，例如相比于对照在受试者中限制、抑制或减轻癌症(例如，由临床症状或癌细胞的量确定)。

如在此使用的，“治疗患有癌症的受试者”包括实现(部分地或基本地)一种或多种以下情况：阻止生长、减少肿瘤的程度(例如减小肿瘤的大小)、抑制癌症的生长速度、以及改良或改善与癌症相关的临床症状或指征(如组织或血清成分)或增加受试者的寿命；并减少癌症复发的可能性。

通常，在此教导的化合物的有效量依赖于多种因素而变化，例如给定的药物或化合物、药物配制品、给药途径、疾病或病症的类型、被治疗的受试者或宿主的身份等，但是可以由本领域技术人员常规地确定。本教导的化合物的有效量可以由普通技术人员通过本领域已知的常规方法来容易地确定。

在实施例中，在此教导的化合物的有效量范围从约0.1mg/kg至约1000mg/kg体重，可替代地约1mg/kg至约500mg/kg体重，并且另一个可替代地，从约20mg/kg至约300mg/kg体重。在另一个实施例中，在此教导的化合物的有效量范围从约0.5mg/m²至约5000mg/m²，可替代地约从5mg/m²至约2500mg/m²，并且另一个可替代地，从约50mg/m²至约1000mg/m²。本领域技术人员将理解某些因素可以影响有效治疗遭受癌症的受试者或降低癌症复发可能性所需的剂量。这些因素包括但不限于：疾病或病症的严重度、之前的治疗、受试者的一般健康状况和/或年龄和存在的其他疾病。

此外，对于本文描述的方法(包括治疗患有癌症的受试者或降低癌症复发可能性)，用有效量的本教导的化合物的受试者的“治疗”或给药方案可以由单次给予、或可替代地包括一系列应用组成。例如，本教导的化合物可以以每周至少一次给予。然而，在另一个实施例中，对于给定的治疗，向受试者给予化合物可以从约每周一次至每日一次。治疗周期的长度取决于各种因素，例如疾病的严重程度、患者的年龄、本教导的化合物的浓度和活性或其组合。也应理解，在具体治疗方案过程中可能提高或降低用于治疗的化合物的有效剂量。通过本领域已知的标准诊断测定，剂量的变化可以产生并且变得显而易见。在某些情况下，可能需要长期给予(chronicadministration)。

“受试者”是哺乳动物，优选人类，但还可以是需要兽医治疗的动物，例如伴侣动物(例如，狗、猫等)、家畜(例如，母牛、绵羊、猪、马等)和实验动物(例如，大鼠、小鼠、豚鼠等)。

如本领域技术人员将理解的，取决于所选择的给药途径，可以以多种形式向患者给予本文所教导的化合物。本教导的化合物可以例如通过口服、胃肠外、口腔、舌下、鼻、直肠、贴片、泵、或经皮给予，以及以相应地配制的药物组合物给予。肠胃外给予包括静脉内、腹膜内、皮下、肌内、经上皮、鼻、肺内、鞘内、直肠、和局部给予模式。肠胃外给予可以是通过在选定的时间段内连续输注。

本文所教导的化合物可以适合地配制在用于向受试者给予的药物组合物中。本教导的药物组合物任选地包括用于其的一种或多种药学上可接受的载体和/或稀释剂，例如乳糖、淀粉、纤维素以及右旋糖。还可以包括其他赋形剂，例如调味剂；增甜剂；以及防腐剂，例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯以及对羟基苯甲酸丁酯。适合的赋形剂的更完整的列表可以在药物赋形剂手册(handbookofpharmaceuticalexcipients)(第5版，药物出版社(pharmaceuticalpress)(2005))中找到。本领域技术人员知道如何制备适合用于各种类型的给药途径的配制品。用于选择和制备合适配制品的常规方法和成分描述于例如雷明顿的药学科学(remington'spharmaceuticalsciences)(2003-第20版)和美国药典：国家处方集(theunitedstatespharmacopeia:thenationalformulary)(usp24nf19)，在1999年出版。载体、稀释剂和/或赋形剂是“可接受的”的意思是与该药物组合物的其他成分相容并且不会对它的接受者有害。

典型地，对于口服治疗性给予，本教导的化合物可与赋形剂结合并且以可摄入片剂、口含片剂、锭剂、胶囊、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂等形式使用。

典型地，对于肠胃外给予，本教导的化合物的溶液通常可以在与表面活性剂(如羟丙基纤维素)适当混合的水中制备。分散体也可以在有或没有醇的甘油、液体聚乙二醇、dmso及其混合物中，以及在油中制备。在普通贮存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物生长。

典型地，对于可注射应用，用于临时制备无菌可注射溶液或分散体本文所述的化合物的无菌水溶液或分散体和无菌粉末是合适的。

对于鼻给予，本教导的化合物可以配制成气溶胶、滴剂、凝胶剂和粉剂。气溶胶制剂通常包括活性物质在生理上可接受的水性或非水性溶剂中的溶液或细悬浮液，并且通常以无菌形式、以单剂量或多剂量形式存在于密封容器中，其可以采取盒或再填充的形式以与雾化装置一起使用。可替代地，密封容器可以是整体分配装置，例如单剂量鼻吸入器或配有量阀的气溶胶分配器，该量阀意图在使用后处理。当剂型包括气溶胶分配器时，其将包含推进剂，其可以是压缩气体，例如压缩空气或有机推进剂，例如氟氯烃。气溶胶剂型也可以采用泵-雾化器的形式。

对于口腔或舌下给予，本教导的化合物可以与载体如糖、阿拉伯树胶、黄蓍胶或明胶和甘油一起配制成片剂、锭剂或软锭剂。

对于直肠给予，本文所述的化合物可以配制成含有常规栓剂基质(如可可脂)的栓剂形式。

本发明的化合物可以通过本领域技术人员已知的方法制备，如下面的一般方案和方法以及由随后的制备实施例所示。所有的起始材料是可商购的或通过本领域技术人员已知的方法和下述方法进行制备的。

1h-吲唑核心的一般合成方法在文献(施密特(schmidta)等人，欧洲有机化学杂志(eur.j.org.chem.)2008，4073-4095)中进行了综述。

在一种方法中，5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶环可以通过如下活化：脱质子化作用(deportation)，然后通过亲电子的猝灭有效地引入卤素(例如br，i)或金属(例如snr3，b(or)2)(方案1)，其适于进行交联偶联反应(如也裂解芳基芳基磺酰胺基团的铃木-宫浦(suzuki-miyarua)交联偶联所示例的)。最终的胺化可以通过合适的金属催化剂、有或没有引入另外的保护基团来促进。在高温下在snar反应下可以实现相同的转化。

方案1.c-n偶联反应的脱质子化-亲电子活化

在另一个方法中，该环可以通过薗头(sonogashira)反应引发，随后是中间体9的碱诱导的闭环按顺序合成(方案2)。可商购的嘧啶8也可以通过引入缺少的官能团，通过6的胺化或7的卤化以方案中呈现的多种方法合成。

方案2.薗头偶联和c-n偶联反应

实例

实例a：合成

一般方法

按原样使用可商购的起始材料、试剂和溶剂。通常，在惰性气氛(如氮气或氩气)下进行无水反应。rxncx是指可从沃特斯(waters)购得的离子交换树脂。

用biotageinitiator微波反应器进行微波反应。反应进程一般通过tlc，使用merck硅胶板，通过在254nmuv下可视化；通过分析hplc；或通过lcms(brukerexquire4000)来监测。中间体或最终产物的快速柱色谱纯化使用来自emd化学品或silicycle的230-400目硅胶60进行，或使用具有kp-sil或hp-sil二氧化硅盒的biotageisolera或kp-nh碱性改性二氧化硅和相应的样品进行纯化。在具有varianmonochrom10uc-18反相柱的varianprepstar型号sd-1hplc系统上，使用约5％-30％mecn或meoh/0.05％tfa-h2o至70％-90％mecn或meoh/0.05％tfa-h2o，经20-40-min时间在30-50ml/min的流速下进行反相hplc纯化。还使用装备有kp-c18-hs柱的biotageisolera，使用在h2o中的5％-95％meoh(或mecn)之间/0.1％tfa的梯度进行反相纯化。在bruker400mhz光谱仪上记录质子nmr，并且使用brukeresquire4000光谱仪获得质谱。

化合物名称是使用cambridgesoft-perkinelmer’schembiodrawultra11.0或12.0版内置的软件生成的。

缩略语：

ac乙酰基

aq水性

anh无水的

ar氩气(在实验部分中)；芳香族/杂芳香族基团，在方案中

binap2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘基

boc叔丁氧羰基

br.宽

calcd计算的

d双峰(仅当在1hnmr谱中使用时)

d天

dcm二氯甲烷

dipea二异丙基乙胺

dmfn,n-二甲基甲酰胺

dmso二甲基亚砜

dppf1,1'-双(二苯膦基)二茂铁

h小时

hal卤素

hplc高效液相色谱

i.p.腹腔内注射

lc-ms液相色谱与质谱联用

lda二异丙氨基锂

min分钟

m多重峰

mw微波辐射

msesi质谱，电喷雾离子化

nd未测定

nmp1-甲基-2-吡咯烷酮

nmr核磁共振

o/n过夜

pin频哪醇

prep制备型

p.o.口腔给予

q.d.每天一次给药

q.w.每周一次给药

rt室温

rp反相

s单峰

satd饱和的

sms起始材料

snar亲核性芳香取代

spe固相萃取

t三重峰

tbtuo-(苯并三唑-1-基)-n,n,n′,n′-四甲基脲四氟磷酸酯

temp.温度

tfa三氟乙酸

tlc薄层色谱法

thf四氢呋喃

xs过量

xantphos4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨

起始材料的制备

一般方法a(薗头偶联，2-氯-4-(ar/烷基乙炔基)嘧啶-5-胺的制备)

将在et3n(0.9m)或在et3n/dmf(1:1v/v，0.8m)中的卤代嘧啶(1.0当量)、乙炔(1当量)用ar脱气，用cui(0.1-0.2当量)和pd(pph3)2cl2(0.03当量)或pd(pph3)4(0.07当量)填充并在100℃下密封加热直至完成。将反应冷却至室温，过滤或可替代地在减压下浓缩并在通过研磨或快速色谱法进行纯化之前经受水处理(aqueousworkup)。

一般方法b(t-buok-诱导的环化作用)

在室温下，将2-氯-4-(芳基(烷基)乙炔基)嘧啶-5-胺在无水的nmp(0.25m)中的溶液用一次性添加的t-buok(2当量)处理(放热的)。将反应暂时地在室温下搅拌并然后在50℃下搅拌0.5-1h。随后，将该反应冷却至室温，并用h2o稀释。将产物通过过滤收集并用h2o冲洗。

一般方法c(布赫瓦尔德-哈特维希pd-催化的胺化作用)

将干燥的小瓶用在无水的二烷(0.07m)中的2-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶或叔丁基2-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-羧酸酯(1当量)、k2co3(10当量)、arnh2(1.8当量)和pd(oac)2(0.1当量)填充。将反应混合物用ar脱气并用xantphos(0.2mmol)填充。将反应小瓶密封，重复脱气并将反应在室温下暂时地搅拌，然后在油浴中在100℃下搅拌过夜。典型地，将反应混合物冷却至室温，使用dcm和meoh过滤以转移并清洗。将滤液在减压下浓缩，通过快速色谱法(在dcm中的etoac或在dcm中的meoh)进行纯化。在boc保护材料(在第一步骤中观察到一些boc损失)的情况下，将该材料吸收进dcm/tfa(5:1v/v)中并在室温下搅拌1h。然后将反应在减压下浓缩，并通过快速色谱法或/和rphplc进行纯化。

一般方法d(酸催化的胺化作用)

向2-氯-6-(邻甲苯基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶在i-proh中的溶液添加胺或苯胺(4-6当量)和在二烷中的hcl(4m，2当量)。可替代地，使用胺的hcl盐(4-6当量)和dipea(2-4当量)。在微波反应器中，将密封的小瓶在170℃下经受微波辐射2-8h(高压：>10巴)。将反应混合物通过反相色谱法进行纯化。

一般方法e(铃木-宫浦偶联)

向二烷(49ml)和h2o(12ml)、2-氯-6-碘-5-(苯基磺酰基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶(0.744g，1.8mmol)、邻甲苯基硼酸(0.264g，1.9mmol)、k2co3(1.01g，7.3mmol)的脱气混合物中添加pd(dppf)cl2·dcm(0.145g，0.18mmol)。重复脱气，并将反应在油浴中在ar下在105℃下加热过夜。然后将该反应冷却，在减压下浓缩并通过快速色谱法(etoac-dcm-10％)进行纯化

一般方法f(用boc基团保护)

将5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶、boc2o(2-4当量)、dmap(0.2-0.4当量)和dipea(1.5当量)在etoac中在室温下搅拌过夜。然后将该反应在减压下浓缩并通过快速色谱法进行纯化。

中间体：

2-(4-(3-氨基苯基)哌嗪-1-基)乙醇的合成

a.2-羟基-1-(4-(3-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙酮：

在室温下，将1-(3-硝基苯基)哌嗪(0.67g，3.2mmol)、2-羟基乙酸(0.261g，3.4mmol)、dipea(1.2ml，6.9mmol)的无水的dmf(10ml)溶液用一次性添加的tbtu(1.10g，3.4mmol)处理。将反应在室温下搅拌2h，用过量h2o和冰稀释并过滤以得到呈黄色固体的2-羟基-1-(4-(3-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(0.546g，64％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm7.66(t,j＝2.10hz,1h),7.60(d,j＝7.78hz,1h),7.48(t,j＝8.20hz,1h),7.40(dd,j＝8.30,2.10hz,1h),4.69(t,j＝5.50hz,1h),4.13(d,j＝5.50hz,2h),3.56-3.66(m,4h),3.23-3.32(m,4h)；msesi[m+h]⁺266.2[c12h15n3o4+h]⁺计算值266.11。

b.1-(4-(3-氨基苯基)哌嗪-1-基)-2-羟基乙酮：

在h2(1atm)下在室温下，将2-羟基-1-(4-(3-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(0.546g，2.06mmol)和pd/c(224mg，0.2mmol)在meoh(200ml)中搅拌1天。将反应通过硅藻土过滤，用meoh冲洗反应烧瓶和过滤垫。在减压下浓缩提供呈白色固体的1-(4-(3-氨基苯基)哌嗪-1-基)-2-羟基乙酮(0.404g，83％)。)。¹hnmr(400mhz,cd3od)δppm7.00(t,j＝8.00hz,1h),6.39(s,1h),6.37(d,j＝8.00hz,1h),6.30(d,j＝8.00hz,1h),4.27(s,2h),3.68-3.79(m,2h),3.49-3.58(m,2h),3.12(d,j＝4.77hz,4h)；msesi[m+h]⁺236.2[c12h17n3o2+h]⁺计算值235.28。

c.2-(4-(3-氨基苯基)哌嗪-1-基)乙醇：

在0℃下，将1-(4-(3-氨基苯基)哌嗪-1-基)-2-羟基乙酮(0.404g，1.72mmol)的无水的thf(24ml)溶液在ar下用逐滴添加的lialh4(1.0m，在thf中，6.9ml，6.9mmol)处理。在另外的5min之后，将冷浴去除并允许该反应温至室温并然后在回流下加热过夜。然后将反应混合物冷却至室温并在0℃下小心地(逐滴)倾倒进过量na2so4·10h2o在dcm中的搅拌悬浮液中。随后，将反应在室温下搅拌30min并过滤以得到呈浅棕褐色胶的2-(4-(3-氨基苯基)哌嗪-1-基)乙醇(0.52g)，将其未经进一步纯化而使用。¹hnmr(400mhz,cd3od)δppm6.99(t,j＝8.03hz,1h),6.40(s,1h),6.37(d,j＝8.03hz,1h),6.29(d,j＝8.03hz,1h),3.73(t,j＝6.00hz,2h),3.12-3.19(m,4h),3.04-3.11(m,2h),2.93-2.98(m,2h),2.59(t,j＝6.00hz,2h)；msesi[m+h]⁺222.2[c12h19n3o+h]⁺计算值222.15。

2-氯-4-(苯基乙炔基)嘧啶-5-胺的合成

a.-氯-n-(二苯亚甲基)-4-(苯基乙炔基)嘧啶-5-胺

在添加binap(108mg，0.17mmol)之前，将在无水的phme(32ml)中的5-溴-2-氯-4-(苯基乙炔基)嘧啶(wo2013/078254p.166)(0.82g，2.9mmol)、二苯甲酮亚胺(0.58g，3.2mmol)、pd(oac)2(26mg，0.11mmol)和cs2co3(1.40g，4.3mmol)用ar脱气。将反应在油浴中在105℃下密封加热17h，冷却至室温，用dcm稀释并通过2um玻璃料过滤。在减压下浓缩并通过快速色谱法(dcm-etoac)进行纯化得到呈橙色胶的2-氯-n-(二苯亚甲基)-4-(苯基乙炔基)嘧啶-5-胺(0.71g)。msesi[m+h]⁺394.2[c25h16cln3+h]⁺计算值394.1。

b.2-氯-4-(苯基乙炔基)嘧啶-5-胺

在室温下，将2-氯-n-(二苯亚甲基)-4-(苯基乙炔基)嘧啶-5-胺(0.28g，0.71mmol)在thf(6ml)和水性hcl(2.7m，1.5ml)中搅拌23h。将反应吸收进etoac中，用饱和水性nahco3洗涤，干燥(na2so4)，在减压下浓缩并通过快速色谱法(dcm-meoh)进行纯化以得到呈浅黄色固体的2-氯-4-(苯基乙炔基)嘧啶-5-胺(116mg，72％)。msesi[m+h]⁺230.1,[c12h8cln3+h]⁺计算值230.04。

2-氯-4-(邻甲苯基乙炔基)嘧啶-5-胺的合成

下加热3h。添加水和etoac，将各相分离并将水性层用更多的etoac萃取。将合并的有机萃取物干燥(na2so4)，过滤并且在减压下浓缩。将粗产物用et2o研磨，以给出呈黄色固体的标题化合物(5.92g，81％)。

表1根据一般方法a合成的中间体

通过一般方法a合成2-氯-6-(邻甲苯基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶

在0℃下，将t-buok(5.65g，50.4mmol)添加至2-氯-4-(邻甲苯基乙炔基)嘧啶-5-胺(5.92g，24mmol)的nmp(100ml)溶液中。将反应温至室温并搅拌1h。然后将反应混合物冷却至0℃并添加2m水性hcl来中和(ph7.0)。添加h2o和etoac，将各相分离并将水性层用etoac萃取。将合并的有机萃取物干燥(na2so4)，过滤并且在减压下浓缩。将该粗品用et2o研磨并过滤。将滤液在减压下浓缩并通过快速色谱法(100gsio20-40％etoac/己烷)进行纯化以给出黄色固体，将该固体与通过过滤分离的产物合并(4.46g，75％)。

经铃木-宫浦偶联合成2-氯-6-(邻甲苯基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶：

a.2-氯-5-(苯基磺酰基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶

将t-buok(0.780g，6.9mmol)以四部分添加至在无水的thf(40ml)中的2-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶(0.861g，5.6mmol)中，伴随在h2o浴中冷却。将反应搅拌10min，经15min添加phso2cl(0.9ml，7.0mmol)并将反应在室温下搅拌过夜。在减压下将thf去除，将残余物吸收进etoac中，用盐水(2x)洗涤并干燥(na2so4)以得到呈白色固体的2-氯-5-(苯基磺酰基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶(1.59g，97％)，将其未经进一步纯化而使用。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δppm9.22(s,1h),7.91-7.99(m,3h),7.65-7.71(m,1h),7.52-7.60(m,2h),6.82(d,j＝3.76hz,1h)；msesi[m+h]⁺294.1,[c12h8cln3o2s+h]⁺计算值294.0。

a.2-氯-6-碘-5-(苯基磺酰基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶。

将lda(6.2ml，1.0m，在thf中，6.2mmol)经8min逐滴添加至在-78℃下在ar下搅拌的2-氯-5-(苯基磺酰基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶(1.59g，5.4mmol)的无水的thf(95ml)溶液中。然后将该反应在该温度下搅拌80min，而后经若干分钟经插管添加i2(1.58g，6.2mmol，在4ml无水的thf中)。将伴随冷却的搅拌继续3h，然后将冷浴去除并在45min之后添加h2o(20ml)。将反应用dcm(500ml)稀释，洗涤(盐水，2x)，干燥(na2so4)并在减压下浓缩。通过快速色谱法(etoac-dcm0-10％)进行纯化得到呈白色固体的2-氯-6-碘-5-(苯基磺酰基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶(1.05g，46％)。msesi[m+h]⁺419.9，[c12h7clin3o2s+h]⁺计算值419.9。

b.2-氯-6-(邻甲苯基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶。

向二烷(49ml)和h2o(12ml)、2-氯-6-碘-5-(苯基磺酰基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶(0.744g，1.8mmol)、邻甲苯基硼酸(0.264g，1.9mmol)、k2co3(1.01g，7.3mmol)的脱气混合物中添加pd(dppf)cl2·dcm(0.145g，0.18mmol)。重复脱气并将反应在油浴中在ar下在105℃下加热过夜。然后将该反应冷却，在减压下浓缩并通过快速色谱法(etoac-dcm0-10％)进行纯化以得到呈白色固体的2-氯-6-(邻甲苯基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶(0.32g，74％)。¹hnmr(400mhz,cd3od)δppm8.72(s,1h),7.55(d,j＝7.28hz,1h),7.32-7.43(m,3h),6.69(s,1h),2.49(s,3h)；msesi[m+h]⁺244.1,[c13h10cln3+h]⁺计算值244.06。

表2以下中间体根据一般方法b进行合成：

本发明的示例性化合物的制备

n,6-二苯基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2-胺(实例a1)的合成

a.叔丁基2-氯-6-苯基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-羧酸酯。

在室温下，将2-氯-6-苯基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶(83.8mg，0.365mmol)、boc2o(350mg，1.60mmol)、dmap(29mg，0.23mmol)和dipea(0.1ml，0.57mmol)在etoac(24ml)中搅拌22h。然后将该反应在减压下浓缩并通过快速色谱法(0至30％etoac，在dcm中)进行纯化以得到呈白色固体的叔丁基2-氯-6-苯基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-羧酸酯(0.106g，88％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δppm9.31(s,1h),7.41-7.53(m,5h),6.68(d,j＝0.75hz,1h),1.37(s,9h)；msesi[m+h]⁺330.2,[c17h16cln3o2+h]⁺计算值330.09。

b.n,6-二苯基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2-胺)

将干燥小瓶用在无水的二烷(3ml)中的叔丁基2-氯-6-苯基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-羧酸酯(62mg，0.19mol)、k2co3(245mg，1.8mmol)、phnh2(32mg，0.34mmol)和pd(oac)2(5.6mg，0.025mmol)填充。将反应混合物用ar脱气并用xantphos(28.5mg，0.049mmol)填充。将反应小瓶密封，重复脱气并将反应在室温下暂时地搅拌然后在油浴中在100℃下搅拌22h。将反应混合物冷却至室温，使用dcm和meoh过滤以转移并清洗。将滤液在减压下浓缩并通过快速色谱法(etoac在dcm中)进行纯化以得到粗的叔丁基2-氯-6-苯基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-羧酸酯(msesi[m+h]⁺387.3，[c23h22n4o2+h]⁺计算值387.17)，将其吸收在dcm/tfa(25ml，5:1v/v)中并在室温下搅拌1h。然后将该反应在减压下浓缩并通过快速色谱法(etoac在dcm中，0->60％)进行纯化。用己烷、然后用et2o-己烷(1:1v/v)研磨得到呈浅黄色固体的n,6-二苯基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2-胺(50mg，92％)。¹hnmr(400mhz,cd3od)δppm8.70(s,1h),7.95(d,j＝8.30hz,2h),7.55-7.65(m,5h),7.42-7.49(m,2h),7.26(t,j＝7.50hz,1h),6.91(s,1h)；msesi[m+h]⁺287.2,[c18h14n4+h]⁺计算值287.12。

n-(3-吗啉代苯基)-6-(邻甲苯基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2-胺(实例a3)的合成

将含有在i-proh(10ml)中的2-氯-6-(邻甲苯基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶(0.73g，3.0mmol)、3-吗啉代苯胺(0.71g，4.0mmol)、hcl(4m，在二烷中，1.5ml，6mmol)的密封的小瓶在微波反应器(高压)中在170℃下加热2h。将反应混合物通过反相色谱法进行纯化，并使用porapak柱转换为游离碱。将粗产物溶解在dcm中并使用et2o进行沉淀以获得呈米黄色固体的标题化合物(593mg，51％)。将标题化合物悬浮在dcm(40ml)中并添加hcl(1m，在et2o中，5ml)。将溶液超声处理直至完全溶解。将混合物在真空中浓缩并用et2o研磨以给出呈二hcl盐的标题化合物(687mg，50％，棕色固体)。

表3以下实例根据一般方法c或d进行制备

实例b：ripk2抑制测定

活性ripk2从lifetechnologies购买，作为在昆虫细胞中表达的人类ripk2激酶的催化结构域(氨基酸1-299)的his标签。氨基末端6组氨酸，sumo标记的人类ttk(残基1-275)在大肠杆菌中表达，并通过ni²⁺琼脂糖凝胶过滤和离子交换层析纯化至>95％同质性(homogeneity)。

使用间接elisa检测系统测量ripk2活性。将his-ripk2(0.6nm)在6μmatp(sigmacat#a7699)、20mmhepes、ph7.5、1mmegta、2.5mmmgcl2、2.5mmmncl2和0.01％tritonx-100存在下在预先涂有氨基末端6组氨酸的、sumo标记的ttk(氨基酸残基1-275)的96孔微量滴定板中温育。允许该反应进行30分钟，随后用洗涤缓冲液(补充有0.2％吐温20的磷酸盐缓冲盐水)对该板洗涤5次，并用1:3000稀释的第一抗体(细胞信号传导cat#9381)温育30分钟。将该板用洗涤缓冲液洗涤5次，在与辣根过氧化物酶(bioradcat#1721019，1:3000浓度)偶联的第二抗体的存在下温育30分钟，用洗涤缓冲液再洗涤5次，并在tmb底物(sigmacat#t0440)的存在下温育。允许该比色反应继续5分钟，随后添加终止液(0.5nh2so4)，并通过使用单色或基于滤光片的读板器(分子装置m5或beckmandtx880)在450nm下检测进行定量。

在固定浓度(10μm)或可变抑制剂浓度(典型地，在10点剂量反应滴定中50μm至0.1μm)下确定化合物抑制。将化合物在酶的存在下预温育15分钟，然后添加atp，并且使用上述活性测定对剩余的活性进行定量。使用下式确定化合物的％抑制：％抑制＝100x(1-(实验值-背景值)/(高活性对照-背景值))。使用具有下式的非线性4点对数曲线拟合(xlfit4，idbs)测定ic50值：(a+(b/(1+((x/c)^d))))，其中a＝背景值、b＝范围、c＝拐点、d＝曲线拟合参数。

在表1中表示化合物实例的ic50值范围，用“a”、“b”和“c”指示，分别为小于或等于0.1μm的值；大于0.1μm和小于或等于0.5μm的值；以及大于0.5μm的值。

表1.本发明的实例化合物的针对ripk2数据的体外活性。

实例c：本发明实例的化合物的针对癌细胞系的活性

在化合物覆盖之前24小时，将乳腺癌细胞(mda-mb-231和mda-mb-468)、结肠癌细胞(hct116和ht-29)和卵巢癌细胞(skov-3和ovcar-3)接种(根据细胞生长速率，在80μl每孔中1000至4000)到96孔板中。将化合物制备为在100％dmso中的10mm储备溶液，将其用含有10％fbs(胎牛血清)的dmem(达尔伯克改良伊格尔培养基(dulbecco'smodifiedeagle'smedium))细胞生长培养基(invitrogen公司，伯灵顿，on，加拿大)稀释至浓度范围为50nm至250μm。将每个浓度的等分试样(20μl)覆盖在96孔板中的80μl预接种细胞中，使最终浓度为10nm至50μm。在进行磺酰罗丹明b(sulforhodamineb)测定(srb)之前，将细胞培养5天以确定化合物的细胞生长抑制活性。

通过轻轻吸出培养基并添加每孔50μl冰冷的10％三氯乙酸将细胞固定在原位，并在4℃下温育30-60分钟。将这些板用h2o洗涤五次并允许风干5min。向每孔中添加在1％(v/v)乙酸中的50μl0.4％(w/v)srb溶液并在室温下温育30min，完成染色反应。染色后，将这些板用1％乙酸洗涤4次以除去未结合的染料，然后允许风干5分钟。将染色剂用每孔100μl10mmtris(ph10.5)溶解。在570nm读取吸光度。通过与仅经dmso处理的细胞(100％)进行比较，计算相对生长抑制的百分比(％)。确定了具有细胞毒活性的化合物的gi50。使用graphpadprism软件(graphpad软件有限公司，圣地亚哥，ca，usa)计算gi50。gi50(生长抑制)是引起细胞生长50％抑制的化合物浓度。

在表2中列出了化合物实例针对乳腺癌细胞系(mda-mb-231，mda-mb-468)、结肠癌细胞系(hct116，ht-29)和卵巢癌细胞系(ovcar-3，skov-3)的gi50值范围。实例化合物表现出对乳腺癌、结肠癌和卵巢癌细胞的生长抑制/细胞杀伤活性的变化。gi50范围表示为“a”、“b”和“c”，分别为小于或等于1μm的值；大于1μm和小于或等于10μm的值；和大于10μm的值。

表2.本发明实例化合物的体外细胞抗增殖活性数据

实例d：hct116异种移植物对用本发明的示例性化合物治疗的体内反应

hct116结肠癌细胞从atcc(美国模式培养物集存库)购买并在补充有10％胎牛血清的dmem(达尔伯克改良伊格尔培养基，购自gibco)中培养，。在6-8周龄的雄性cb-17scid小鼠的右侧皮下注射500万个细胞。当平均肿瘤体积达到80-120mm³时，将小鼠随机分为5组(n＝5)并以所示剂量接受载体(10％nmp，40％peg，50％h2o)或化合物。

每周测定三次肿瘤体积与体重。肿瘤体积通过以下公式计算：x²y/2。用化合物开始治疗后肿瘤生长抑制百分比如下计算：tgi＝100x1-(化合物治疗组的肿瘤体积最终-肿瘤体积最初)/(化合物对照组的肿瘤体积最终-肿瘤体积最初)。

测试结果显示在图1中。

实例e：实例a3对树突细胞的细胞因子生成的影响

在实例a3的存在下，用0.3ng/mllps±1μg/mlmdp(即nod2激动剂)将il-12-黄色荧光蛋白(yfp)报道物(reporter)小鼠骨髓树突状细胞刺激24小时(图2a)。在实例a3的存在下，用0.3μg/mlpam3cys±1μg/mlmdp(即nod2激动剂)将il-12-黄色荧光蛋白(yfp)报道物小鼠骨髓树突状细胞刺激24小时(图2b)。流式细胞术分析实例a3导致平均荧光强度yfp(即il-12的量；左图)的剂量依赖性降低。实例a3的这种效应是依赖于mdp的，并且表明它涉及阻断nod2-ripk2应答。实例a3对yfp阳性细胞的百分比(即，il-12阳性细胞的百分比；中间图)具有最小的影响，并且通过7aad排除(右图)评估对细胞存活率没有可测量的影响。数据表示为一式三份测量的平均值±sem。通过elisa技术用可商购的试剂盒测量来自a的细胞培养物上清液中il-12p70(图2c，左图)和tnfα(图2c，右图)的水平。实例a3引起两种细胞因子水平的剂量依赖性降低。数据表示为一式三份测量的平均值±sem。