本发明涉及一种防治植物真菌病害并且促进植物生长的微生物菌肥，属于微生物菌肥的制备
技术领域：
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背景技术：
：植物病害是严重危害农业生产的自然灾害之一，其中70%～80%的植物病害由致病真菌引起，同时致病真菌也是农作物连坐障碍的主要原因之一。据统计，每年世界粮食产量因真菌病害减产15%以上。植物真菌病害不仅直接造成农作物产量下降、品质降低还对农产品的安全性构成极大的威胁。真菌病害一直也是影响我国农业生产以及食品安全的重要问题。目前，防治植物真菌病害主要采用的是化学杀菌剂。随着化学杀菌剂的长期使用，植物病原菌不仅对杀菌剂产生抗性，而且化学杀菌剂还对环境造成严重的影响。此外，为了提高农作物产量，满足粮食需求，化肥的使用量日益增加。我国是世界上最大的化肥生产和消费国。过量施用化肥，造成土壤酸化、板结、肥力下降以及水体的污染。这种过量施用化学杀菌剂和化肥的不可持续的农业生产方式不仅严重污染了土地和水资源，还严重危害了人类健康。微生物杀菌剂和菌肥由于不污染环境，对人畜无害，不破坏土壤结构，持久增强肥力，促进作物的生长，增加产量，改善农产品的品质，符合绿色农业和可持续农业的发展，日益受到关注。随着微生物类群的研究，目前应用到农业生产的菌种达到110多种，但现有产品存在作用单一的问题，其应用受到一定的限制。为此，研制具有防治真菌病害和促进生长双重作用的微生物菌肥成为该领域急需解决的课题。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种防病抗病促生长微生物菌肥。本发明的目的还在于提供一种防病抗病促生长微生物菌肥的制备方法。本发明的构思如下：从重茬种植的草莓地中选择生长旺盛植株的根际土壤，从中分离筛选对草莓以及其他农作物致病真菌具有广泛抗病活性的细菌，同时从健康的草莓根部分离筛选不仅有广谱抗真菌活性还具有明显促生长的内生细菌，经培养制成微生物菌肥用于致病真菌的防治及促进农作物生长。从根际土壤中分离的具有广谱抗真菌活性的细菌，经鉴定为解淀粉芽孢杆菌，保藏单位：中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期：2015年12月14日，保藏编号：CGMCC11871。分离得到具有明显促进植物生长的内生细菌，经鉴定为枯草芽孢杆菌，保藏单位：中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期：2016年1月18日，保藏编号：CGMCC12063。将两种细菌分别发酵得到菌悬液，混合制成微生物菌肥。具体的，本发明给出的防病抗病促生长微生物菌肥由解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌分别发酵得到的菌悬液混合而成，每克产品的活菌总数大于2×108个，其中，两种菌的数量比为，解淀粉芽孢杆菌：枯草芽孢杆菌=（0.8～1.2）：（0.8～1.2）。解淀粉芽孢杆菌杆菌采用以下方法分离得到：以草莓常见病害灰霉病的病原菌灰葡萄孢菌为筛选菌，从重茬草莓根际土壤中分离筛选拮抗菌，从中得到一株对灰葡萄孢菌具有较强拮抗作用的细菌，经试验，此菌还对其他作物常见致病真菌具有广泛抗菌作用，经过鉴定为解淀粉芽孢杆菌。动物急性毒性实验确认安全后，保藏备用。枯草芽孢杆菌采用以下方法分离得到：从草莓植株根部分离内生菌，以病原菌灰葡萄孢菌为筛选菌，从中筛选抗真菌的内生细菌，然后经过促生长实验筛选，得到一株对种子发芽、植株的生长具有明显促进作用的内生菌。经鉴定为枯草芽孢杆菌。动物急性毒性实验确认安全后，保藏备用。本发明给出的防病抗病促生长微生物菌肥的制备方法包括以下步骤：（1）解淀粉芽孢杆菌菌悬液制备采用二级好氧分批发酵，种子培养基配方为：酵母膏5.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠10.0g，水1000mL，pH7.0～7.2；发酵培养基为：酵母膏8.0g，蛋白胨5.0g，氯化钠10.0g，硫酸镁0.5g，磷酸氢二钾3g，糖蜜50.0g，水1000mL，pH6.5～7.0，用质量分数为2%～3%的接种量接种，37℃，通气量为0.2～0.8L/Lmin(每分钟每升发酵液体积的通气体积)培养36h～40h，得到浓度大于2×108个/mL发酵液；（2）枯草芽孢杆菌菌悬液制备由于解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的生长世代不同，所以采用分别培养。培养基与步骤（1）相同，用质量分数为2%～3%的接种量接种，37℃，通气量为0.2～0.8L/Lmin(每分钟每升发酵液体积的通气体积)培养32h～36h，得到浓度大于2×108个/mL发酵液；（3）将解淀粉芽孢杆菌菌悬液和枯草芽孢杆菌菌悬液按体积比1：1混合，得到活菌数大于2×108个/mL混合菌液，最终pH为6.0～7.0，分装得到成品。本发明制备的防病抗病促生长微生物菌肥应用在以下方面：（1）应用于土壤改良及防治土传真菌病害。经稀释10～50倍之后，喷洒到土壤表面，用于土壤改良和防治土传真菌病害。（2）用于植物叶面和果实真菌病害防治及促生长。经稀释200倍以后，喷洒到植株表面，用于叶面及果实真菌病害防治，促进植物的生长。（3）应用范围包括蔬菜、水果和农作物。本发明取得的有益效果是：由解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌制成的混合菌剂，可应用于蔬菜、水果及农作物，起到防治真菌病害、消除连作障碍、促进生长、增加产量的作用。避免了同类产品效果差、效果单一等缺点。具体实施方式以下实施例用于说明本发明。实施例1一种防病抗病促生长混合菌肥，其组成按活菌数比表示为：解淀粉芽孢杆菌：枯草芽孢杆菌＝1.1：0.9；且每克产品的活菌总数为3.1×108个/g。其制备方法是：（1）解淀粉芽孢杆菌菌悬液制备采用二级好氧分批发酵。种子培养基配方为：酵母膏5.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠10.0g，水1000mL，pH7.0；发酵培养基为：酵母膏8.0g，蛋白胨5.0g，氯化钠10.0g，硫酸镁0.5g，磷酸氢二钾3g，糖蜜50.0g，水1000mL，pH6.8。用质量分数为3%的接种量接种，37℃，通气量为0.4L/Lmin(每分钟每升发酵液体积的通气体积)培养38h，得到浓度为3.4×108个/mL发酵液。（2）枯草芽孢杆菌菌悬液制备采用二级好氧分批发酵。培养基同解淀粉芽孢杆菌。用质量分数为3%的接种量接种，37℃，通气量为0.8L/Lmin(每分钟每升发酵液体积的通气体积)培养36h，得到浓度为2.8×108个/mL发酵液。（3）将解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的菌悬液按体积比1：1混合，得到活菌数为3.1×108个/mL混合菌液，最终pH为6.4，分装得到成品。产品的性能：产品效力以产品中各种菌的活菌数表示(个/g)。每克产品活菌总数为3.1×108个/g，其中解淀粉芽孢杆菌为1.7×108个/g，枯草芽孢杆菌为1.4×108个/g。产品应用效果：2013年9月至2014年5月，在山东省临沂市兰陵县向城镇曹湾村进行应用效果实验。因本地点连续几年种植大棚黄瓜，有较大机率发生连坐障碍（重茬）。黄瓜品种为德瑞特。实施过程为2013年9月整地施肥，9月17日育苗，11月20日定植，畦宽40cm，株距25cm。2014年2月开始采摘计产，以后每隔半月采摘计产一次，2014年5月20日收秧计产结束。分组及施用方法如下：处理组：在对照组的基础上，每亩将2L菌液稀释至30kg中，均匀喷洒在土壤表面，播种。12月，每亩将1L菌液在灌溉时随水冲施。开花前，每亩用150mL菌液稀释至30L水中，叶面均匀喷施一次，然后每隔20天喷施一次，共三次。浇水次数和用量同对照组。对照组1：为常规施肥，即整地时施用复合肥100kg/亩，鸡粪15方/亩，硫酸钾75kg/亩，中间不再追肥。12月起，每隔一星期施用百菌清一次，浇水一次。对照组2：在对照组的基础上，每次施用菌肥时，施用等量的清水。12月起，每隔一星期施用百菌清一次，浇水一次。（1）菌肥对黄瓜抗病生长的效果对兰陵县向城镇曹湾村示范点每处取4各点，每点依次取4株，对株高、节间、果位径粗、瓜长、单果重进行统计及差异性比较。表1菌肥对黄瓜抗病生长的效果抗病促生长菌肥可以代替农药百菌清起到抗病效果，并显著增加黄瓜单果的重量。（2）菌肥对黄瓜产量的效果处理和对照组实验小区面积为30m2，各三个重复。表2菌肥对黄瓜增产分组小区产量（kg/30m2）亩产（kg）增产（kg）增产率（%）增加效益（元、/亩）处理组507.7±3.1a11282.01154.911.404041.8对照组1455.6±4.810127.2---对照组2455.9±4.510131.64.40.0415.40实施例2一种防病抗病促生混合菌肥，其组成按活菌数比表示为：解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌＝1.0：1.0；且每克产品的活菌总数2.92×108个/g。其制备方法与实施例1相同。产品性能：产品效力以产品中各种菌的活菌数表示(个/g)，每克产品活菌总数为2.92×108个/g，其中，解淀粉芽孢杆菌为1.46×108个/g，枯草芽孢杆菌为1.46×108个/g。产品应用效果：2014年10月至2015年6月，在河北省石家庄市栾城去冶河镇烨河村进行菌肥对小麦的应用效果实验。小麦品种为石新828。常规实施过程为2014年10月5日整地施肥，播种，播种量为13.5kg/亩，2015年3月25日化学除草剂进行化学除草。2015年3月27追肥浇水，5月12小麦病虫害防治，6月10小区取样测定产量。分组及施用方法如下：对照组：常规管理。处理组：在整地施肥的基础上，每亩使用菌肥750mL菌液稀释至30L中，均匀喷洒在土壤表面，播种。于小麦分蘖拔节期和抽穗期使用菌肥250mL稀释至50L进行叶面喷施各一次。常规化学除草和浇水，不进行常规的追肥和病虫害防治。处理和对照组实验面积为50m2，各三个重复。（1）菌肥对小麦生长的效果分组基本苗（万）次生根（个）分蘖数（个）处理组85.7±0.85.17±0.12.47±0.14对照组75.9±0.45.13±0.092.9±0.06（2）菌肥对小麦产量的效果分组亩穗数（万）穗粒数（个）千粒重（g）亩产（kg）增产/亩（kg）增产率（%）处理组51.4±0.234.1±0.0541.0±0.3610.8±1.2888.7416.97对照组50.0±0.331.1±0.0439.5±0.5522.1±2.16--当前第1页1 2 3