本发明涉及生物技术领域，具体的说，涉及一种栗蘑的液态菌种培养方法。
背景技术：
栗蘑，又名灰树花、舞茸、贝叶多孔菌、云蕈、千佛菌、重菇，是一种真菌，属于食用菌类，含有丰富的氨基酸、蛋白质等多种微量元素，具有松蕈样芳香，栗蘑肉质柔嫩，味如鸡丝，脆似玉兰。它有利于大脑发育，抑制常见的高血压、糖尿病，抗衰老，栗蘑中己知的有效成分为β一葡聚糖，尤其是d一组分；它能提高人体t细胞的数量，增强机体对肿瘤的免疫力，具有明显抗肿瘤效果。而且，栗蘑的产出期在5-10月份，恰在其他食用菌菇产出的空档季节，产品竞争优势明显，销售市场十分广阔，有着巨大的发展空间。
但是，目前栗蘑的液态菌种的培养方法大都工艺较为繁琐，生产周期较长，污染较为严重、速度较慢，而且生产成本较高，同时，所制备得到的栗蘑的纯度较低，不适宜于工厂化生产。
技术实现要素：
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种栗蘑的液态菌种培养方法。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是一种栗蘑的液态菌种培养方法，具体包括以下步骤：
提供一种栗蘑的液态菌种培养基；
将栗蘑的原种接种到所述栗蘑的液态菌种培养基中进行密封培养，当所述栗蘑的原种的菌丝萌发后，每天摇动所述栗蘑的液态菌种培养基1次直至获得栗蘑的栽培种。
提供所述栗蘑的液态菌种培养基的步骤包括：
将松树枝200-300g、土豆200-400g和水1200ml-1800ml进行混合，然后依次经过煮沸、冷却、过滤处理得到滤液，将糖类物质15-30g加入到所述滤液中并溶解制得栗蘑的液态菌种营养滤液，取所述栗蘑的液态菌种营养滤液150ml置于培养瓶中，然后向所述培养瓶中加入洗净烘干的谷壳10-30g和碳酸钙1-5g，制得栗蘑的液态菌 种培养基。
基于上述，制备所述栗蘑的液态菌种营养滤液步骤中，所述糖类物质是指蔗糖、葡萄糖或麦芽糖等，优选地，用水浸泡新鲜麦粒300-400g，并在室温下促使所述麦粒发芽直至麦芽长度约为所述麦粒长度的3-6倍，然后，将所述麦芽烘干并磨成麦芽粉，然后向所述麦芽粉中加入所述麦芽粉5-7倍质量的所述滤液，经糖化、过滤后制得栗蘑的液态菌种营养滤液。
所述栗蘑的原种菌丝萌发后，每间隔24小时摇动所述栗蘑的液态菌种培养基1次，使得所述栗蘑的液态菌种培养基中的谷壳完全被浸湿。简言之，在培养期间，每天定时摇动所述栗蘑的液态菌种培养基1次，比如每天早上8点、每天上午10点或每天下午3点摇动所述栗蘑的液态菌种培养基1次，使谷壳完全浸没在所述栗蘑的液态菌种培养基中等。
所述栗蘑的原种是通过对栗蘑的母种进行一级培养或二级培养而获得的。
基于上述，所述栗蘑的母种进行一级培养的步骤包括：
将棉籽壳20-30g、谷壳20-30g、麸皮15-25g、玉米粉8-12g分别用水浸泡，过滤捞出后分别加水煮沸，捞出沥干，然后进行混合制得混合料，向所述混合料中加入蔗糖5-10g、碳酸钙1-5g和磷肥1-5g，混合均匀制得栗蘑的一级原种培养基；
对所述栗蘑的一级原种培养基进行高温灭菌、冷却处理，然后向所述栗蘑的一级原种培养基中接入栗蘑的母种进行培养，获得栗蘑的一级原种。
基于上述，其中制备栗蘑的一级原种培养基过程中，将所述棉籽壳浸泡30-35小时，且每5小时换水一次，所述谷壳浸泡3-4小时，所述麸皮、玉米粉浸泡1-3小时。
基于上述，所述栗蘑的母种进行二级培养的步骤包括：
将松针100-200g和水1200ml-1800ml进行混合、煮沸，冷却、过滤处理，制得栗蘑的二级原种营养液，然后将小麦20-30g、玉米25-40g、谷壳15-25g、米糠15-25g、蔗糖1-5g、石膏1-5g、磷肥1-5g混合均匀制得栗蘑的二级原种培养基混合料，并加入到与所述栗蘑的二级原种培养基混合料等质量的所述栗蘑的二级原种营养液中，混合均匀制得栗蘑的二级原种培养基；
将所述栗蘑的二级原种培养基进行高温灭菌、冷却处理，然后将栗蘑的一级原种接入到所述栗蘑的二级原种培养基中进行培养，获得栗蘑的二级原种。
基于上述，所述栗蘑的母种的培养方法包括如下步骤：
将土豆50-60g、琼脂8-14g、维生素b剂0.5-0.8g及葡萄糖5-7g加入1500ml的水中进行加热，直至所述琼脂全部煮化，得到栗蘑的母种培养基；对所述栗蘑的母种培养基进行高温灭菌、冷却处理，然后将栗蘑的菌株菌丝接入到所述栗蘑的母种培养基进行培养，获得所述栗蘑的母种。
本发明相对现有技术具有突出的实质性特点和显著的进步，具体的说，本发明所提供的栗蘑的液态菌种培养方法，在栗蘑的液态菌种培养的过程中，不需要对培养基进行连续摇动，只需每天对栗蘑的液态菌种培养基摇动一次即可，降低了培养过程所利用的设备的利用率，从而降低了生产成本，而且该培养方法简单、易于操作；每天采用定时摇动保证了所述栗蘑的液态菌种菌丝营养液的均匀性。进一步讲，栗蘑的菌丝的生长以谷壳为载体，利用谷壳之间的间隙吸收营养，并附着在液态表面上的谷壳上进行生长，无需额外向其培养基中通入无菌空气，减少了繁杂的操作和许多昂贵的无菌设备，节约了成本并缩短了菌种的培育时间。
更进一步讲，本发明中所述栗蘑的液态菌种培养基的原料经过煮汁后再使用，使得菌种培养基的养料分布比较均匀，有利于栗蘑的菌丝体吸收利用，产出的菌种整齐均匀。在菌种培育的各阶段采用不同的培养基原料，使得不同培养阶段的栗蘑的能够对培养基中的营养成分充分吸收，达到最好的培育效果。
具体实施方式
下面通过具体实施方式，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供一种栗蘑的液态菌种培养方法，选用粗柄栗蘑的926号原种作为栗蘑的栽培种的菌株进行培养，具体包括以下步骤：
将松树枝200g、土豆200g和水1800ml混合、煮沸并保持30分钟，然后冷却至室温，过滤后制得滤液；将蔗糖30g加入到所述滤液中并溶解制得栗蘑的液态菌种营养滤液，取所述栗蘑的液态菌种营养滤液150ml置于培养瓶中，然后向所述培养瓶中加入洗净烘干的谷壳20g和碳酸钙5g，制得栗蘑的液态菌种培养基。
将所述栗蘑的液态菌种培养基放置于灭菌锅中，在1.5kg/cm3、110℃下灭菌0.5小时，取出冷却至室温后，将装有所述栗蘑的液态菌种培养基的三角瓶置于接种箱中密封2小时，然后将粗柄栗蘑的926号原种接入到所述栗蘑的液态菌种培养基中，置于30℃的培养室中进行密封培养，当所述栗蘑的原种菌丝萌发后，每天上午10点整 定时摇动所述培养基1次至所述培养基中的谷壳完全被浸湿，直至获得粗柄栗蘑的926号栽培种。
为了更好的了解不同时期栗蘑的菌丝体的生长情况，确定液态培养时间，在生长时间为0-144h范围内，利用专用的采样器每12h进行1次取样，测定栗蘑的菌丝生物量。具体操作步骤为：栗蘑的菌种每阶段培养结束后选用采样器抽取所述三角瓶中适量的液体，以转速为4000r/min速度离心15min，然后弃去清液，将得到的栗蘑的菌丝体用蒸馏水清洗数次后，置于真空干燥箱中，40℃下烘干至恒重，计算培养得到的栗蘑的菌丝生物量。
实施例2
本实施例提供一种栗蘑的液态菌种培养方法，选用粗柄栗蘑的926号原种作为栗蘑的栽培种的菌株进行培养，具体培养步骤如下：将松树枝300g、土豆400g和水1800ml混合、煮沸并保持30分钟，然后冷却至室温，过滤后制得滤液；取新鲜的麦粒400g，在清水中浸泡12小时，室温下让其发芽，待其芽长约为麦粒的3倍时，取出在60-80℃下烘干，磨成麦芽粉，然后将所述麦芽粉加入所述滤液中，加入的所述滤液是所述麦芽粉的6倍，在50℃的条件下糖化6小时经4层纱布过滤后制得栗蘑的液态菌种营养滤液；取所述栗蘑的液态菌种营养滤液150ml置于培养瓶中，然后向所述培养瓶中加入洗净烘干的谷壳20g和碳酸钙5g，制得栗蘑的液态菌种培养基。
将所述栗蘑的液态菌种培养基放置于灭菌锅中，在1.5kg/cm3、110℃下灭菌0.5小时，取出冷却至室温后，将装有所述栗蘑的液态菌种培养基的三角瓶置于接种箱中密封2小时，然后将粗柄栗蘑的926号原种接入到所述栗蘑的液态菌种培养基中，置于30℃的培养室中进行密封培养，当所述栗蘑的原种菌丝萌发后，每天上午10点整定时摇动所述培养基1次至所述培养基中的谷壳完全被浸湿，直至获得粗柄栗蘑的926号栽培种。
实验测得采用此液态菌种培养基培养出的粗柄栗蘑的926号的生物量为平均值为8.545g/l，生产成本为0.355元/g。
实施例3
本实施例提供一种栗蘑的液态菌种培养方法，选用粗柄栗蘑的926号原种作为栗蘑的栽培种的菌株进行培养，与实施例1不同的是，所述粗柄栗蘑的926号栽培种的培养过程中所采用的培养基原料如下：麦麸40g、玉米粉20g、黄豆粉10g、kh2po41g、 mgso41g，实验测得采用此液态菌种培养基培养出的粗柄栗蘑的926号的生物量为平均值为7.148g/l，生产成本为0.465元/g。
实施例4
本实施例提供一种栗蘑的液态菌种培养方法，选用粗柄栗蘑的926号原种作为栗蘑的栽培种的菌株进行培养，与实施例1、实施例2和实施例3均不同的是，所述粗柄栗蘑的926号栽培种的培养过程中所采用的培养基原料如下：土豆200g、蔗糖30g、酵母膏5g、kh2po40.5g、mgso40.5g，实验测得采用此液态菌种培养基培养出的粗柄栗蘑的926号的生物量为平均值为6.754g/l，生产成本为0.41元/g。
最后应当说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本发明技术方案的精神，其均应涵盖在本发明请求保护的技术方案范围当中。