一种用于减轻血液中特异性自身抗体介导的细胞毒性的寡肽及其应用的制作方法

本发明涉及寡肽及其制备方法，具体是一种用于减轻血液中特异性自身抗体介导的细胞毒性的寡肽及其应用。

背景技术：

视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSDs)是一种严重的神经系统退行性疾病，在东亚地区发病率远高于欧美。绝大多数NMOSD患者血液中能够检测到水通道蛋白4(AQP4)的自身抗体，这已经成为诊断该疾病的重要标志物。虽然AQP4自身抗体产生的原因尚不清楚，但其致病机制却已经基本明了：该自身抗体穿越血脑屏障后攻击中枢神经系统的星形胶质细胞，通过特异性的细胞毒性作用导致星形胶质细胞凋亡，继而引起中枢神经系统发生脱髓鞘病变。在NMOSDs2015年的诊断标准中已将AQP4自身抗体阳性列为其中一项。在临床上，通常AQP4自身抗体浓度较低的患者能够获得较好的治疗效果。可见AQP4自身抗体的细胞毒性与疾病的产生和发展有着密切的关系。减轻AQP4自身抗体的细胞毒性将成为治疗NMOSD的有效方法。目前临床上常采用血浆置换的方法来降低AQP4自身抗体的有效浓度，但该方法在降低了AQP4自身抗体浓度的同时，也降低了其他治疗药物的浓度，且该方法不能保证百分之百有效。

目前针对NMOSD急性期患者的治疗方法主要有大剂量激素冲击，血浆置换及静脉注射大剂量免疫球蛋白。大剂量糖皮质激素冲击可抑制机体的免疫功能，从而减少AQP4自身抗体的产生，但长期使用降低了自身的免疫力，可诱发感染或加重感染，引起物质代谢和水盐代谢紊乱，出现类肾上腺皮质功能亢进综合征，如浮肿、低血钾、高血压、糖尿、皮肤变薄、满月脸、水牛背、向心性肥胖、多毛、痤疮、肌无力和肌萎缩等症状。血浆置换能够通过置换血清，降低患者急性期血清内的AQP4自身抗体的水平，但是由于置换的过程中也相应清除了血清中所有其他治疗药物和一些有益的细胞因子、趋化因子等，因此在减少AQP4自身抗体的同时也降低了其他治疗手段的效果。注射大剂量免疫球蛋白目前仍然缺少足够的证据支持其治疗的有效性。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种保护动物中枢神经系统、减少细胞毒性的用于减轻血液中特异性自身抗体介导的细胞毒性的寡肽及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种用于减轻血液中特异性自身抗体介导的细胞毒性的寡肽，所述寡肽的氨基酸序列从N端到C端依次为：TINWGGTEKPLPVDMV。该寡肽命名为LoopA寡肽。

作为本发明再进一步的方案：所述用于减轻血液中特异性自身抗体介导的细胞毒性的寡肽在制备诊断和治疗视神经脊髓炎谱系疾病的药物及装置中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明能够特异性地和视神经脊髓炎谱系疾病患者体液中致病的AQP4自身抗体结合，使其失去攻击中枢神经系统星形胶质细胞的能力，从而起到减轻AQP4自身抗体介导的细胞毒性的作用。

附图说明

图1为使用本发明后造动物模型的大鼠的运动功能评分曲线示意图。

图2为使用本发明后对造模动物脊髓进行免疫荧光实验的结果示意图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。

一种用于减轻血液中特异性自身抗体介导的细胞毒性的寡肽，所述寡肽的氨基酸序列从N端到C端依次为：TINWGGTEKPLPVDMV。所述用于减轻血液中特异性自身抗体介导的细胞毒性的寡肽在制备诊断和治疗视神经脊髓炎谱系疾病的药物及装置中的应用。

该氨基酸序列的设计依据的是水通道蛋白AQP4位于细胞膜外的一个环状结构，由于该环状结构位于细胞膜外，因此很容易成为其自身抗体的攻击靶点。

对Lewis大鼠行髓鞘置管手术，随后向大鼠鞘内注射视神经脊髓炎谱系疾病患者的血清及补体，通过患者血清中致病的AQP4自身抗体及补体联合发挥抗体依赖的补体介导的细胞毒性，来造视神经脊髓炎谱系疾病的大鼠模型。通过事先将一定量本发明所述的寡肽与患者血清及补体共孵育处理，由于本发明依据AQP4细胞膜外环状结构设计，因此能够中和患者血清中特定的AQP4自身抗体，从而大大降低了其细胞毒性，在大鼠动物模型的基础上有效地降低了行为学及组织学上的疾病症状。

采用本发明所述的寡肽中和视神经脊髓炎谱系疾病患者血清后再造模，Lewis大鼠的症状从行为学上得到减轻，如图1所示。

请参阅图2的免疫荧光检测，用本发明所述的寡肽中和视神经脊髓炎谱系疾病患者血清后造模组(LoopA处理组)相比未用本发明寡肽造模组，AQP4表达较多，GFAP表达较多(数据未显示)，GFAP为星形胶质细胞的标记蛋白，中枢神经系统中的AQP4绝大多数分布在星形胶质细胞的终足上，这些表明本发明所述的寡肽对星形胶质细胞的保护作用较好。MBP为成熟髓鞘的标志蛋白，通过比较MBP发现，LoopA处理组对脊髓髓鞘的保护较好，而MBP为成熟髓鞘的标记蛋白。

将本发明所述的寡肽固定于一定介质上，将患者血清通过该介质，由于本发明所述的寡肽能够特异性地与患者血清中致病的特定AQP4自身抗体相结合，因此该固定了本发明所述的寡肽的介质便具备了清除致病自身抗体的能力，因此能够起到类似血浆置换，但更优于血浆置换效果的过滤作用。

将本发明所述的寡肽固定于一定介质上，通过封闭处理后，将待检测患者的血清与之混合并孵育一段时间，随后通过多次洗涤将血清中未结合的自身抗体洗去，仅留下与该寡肽特异性结合的自身抗体，再通过与一定浓度螯合了特定酶的动物抗人二抗共孵育，通过加入酶底物进行显色反应来判断该患者血清中是否有针对该寡肽的致病自身抗体。通过上述方法来诊断该患者血清中是否含有针对该寡肽的致病自身抗体，实现针对性较高的特异性诊断，方便制定更具针对性的治疗方案。

本发明所述的寡肽是依据人体AQP4膜外抗原决定簇的氨基酸序列设计的，动物实验证实，该序列在视神经脊髓炎谱系疾病模型中能有效减轻视神经脊髓炎谱系疾病的疾病症状，保护动物中枢神经系统的星形胶质细胞及髓鞘，从行为学和组织学上减轻动物模型的疾病症状。

本发明能够特异性地和视神经脊髓炎谱系疾病患者体液中致病的AQP4自身抗体结合，使其失去攻击中枢神经系统星形胶质细胞的能力，从而起到减轻AQP4自身抗体介导的细胞毒性的作用。

上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利宗旨的前提下作出各种变化。