一种虎杖生物活性成分的提取方法与流程

文档序号:12452305阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种虎杖生物活性成分的提取方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:

步骤一:准备:称取虎杖,粉碎,过18-22目筛,投入到回流罐中;

步骤二:回流:加入虎杖重量6-10倍的75-85%的酒精,用1%的KOH溶液调节pH值为8.5-9.5,在55-65℃温度下回流2.5-3.5小时;

步骤三:二次回流:加入虎杖重量5-7倍的75-85%的酒精,用1%的KOH溶液调节pH值为8.5-9.5,在55-65℃温度下回流1.5-2.5小时;

步骤四:过滤:合并两次回流液体,用HCl中和至pH值为6.5-7.0,加入饱和硫酸铵至产生沉淀,过滤除去沉淀;

步骤五:回收酒精:从滤液中回收酒精至酒精含量为15%以下,得到醇提液;

步骤六:浓缩:将酒精含量为15%以下的醇提液浓缩至比重为1.0-1.5,得到浓缩浸膏;

步骤七:水沉:将浓缩浸膏用4-6倍重量的80-90℃的热水充分搅拌溶解,保温0.5-1.5小时后迅速高速离心过滤,除去水不溶性成分取上清液;

步骤八:再浓缩:将步骤七得到的上清液浓缩至比重为1.0-1.5,得到浓缩浸膏;

步骤九:再醇溶:将步骤八得到的浓缩浸膏用4-6倍重量的75-85%的酒精溶解过夜,高速离心分离醇不溶沉淀,取上清液;

步骤十:超滤:将从骤九得到的上清液中回收酒精至酒精含量小于15%,将上清液用磺化聚醚砜平板超滤,收集超滤液,用水稀释超滤液至酒精浓度为50%,看到絮状物,冷冻过夜,收集沉淀和上清液;

步骤十一:分离纯化大黄素:将步骤十得到的沉淀加到5%碳酸钠溶液中,再加入乙醚均匀混合,静置后分为乙醚层和碱液层,取碱液层酸化沉淀,将酸化沉淀物用丙酮重结晶,得到橙色针状结晶大黄素,其纯度为99.8%;

步骤十二:分离上清液:对步骤十得到的上清液用大孔树脂吸附,分别洗脱收集40%酒精溶液的洗脱液和80%酒精溶液的洗脱液;

步骤十三:分离纯化虎杖甙:将步骤十二得到的40%酒精洗脱液蒸发至无酒精味,用5倍纯水稀释,用5%的Na2CO3水溶液调节pH值至8.5-9.5,充分搅拌至完全溶解,然后高速离心过滤得上清液,将该上清液用盐酸酸化至pH 4.5-5.5,过夜冷藏,然后离心分离收集沉淀,对得到的沉淀用冷纯水洗涤4-6次,再用乙醚充分洗涤1-3次,然后将沉淀用该沉淀10倍重量80%的酒精一起加热溶解,冷却后高速离心沉淀得到上清液,将上清液稀释至酒精含量15%以下,酸化高速离心收集沉淀,对沉淀水洗4-6次,乙醚洗涤1-3次,真空干燥,得到无色针状结晶的虎杖甙,其纯为99.5%以上;

步骤十四:分离纯化白藜芦醇:将步骤十二得到的80%酒精洗脱液蒸发至酒精含量15%以下,5倍重量纯水稀释,用1%的KOH水溶液调节pH至10.5-11.5,完全溶解,然后离心过滤得上清液,将该上清液用盐酸酸化至pH5.0-6.0,冷藏过夜,收集沉淀,对沉淀用纯水洗涤4-6次,乙醚洗涤1-3次,再用1%的KOH水溶液调节pH至10.5-11.5,搅拌至完全溶解,再用盐酸酸化至pH 5.0-6.0,冷藏过夜沉淀,将所得沉淀用纯水洗涤2次,乙醚洗涤2次,真空干燥,得到白色针状结晶的白藜芦醇,其纯度为99.2%。

2.根据权利要求1所述的虎杖生物活性成分的提取方法,其特征在于,在步骤一中,所述的筛为20目。

3.根据权利要求1所述的虎杖生物活性成分的提取方法,其特征在于,在步骤二和步骤三中,所述的回流温度为60℃。

4.根据权利要求1所述的虎杖生物活性成分的提取方法,其特征在于,在步骤六和步骤八中所述的比重为1.15-1.20。

5.根据权利要求1所述的虎杖生物活性成分的提取方法,其特征在于,在步骤七中:所述的水沉温度为85℃。

6.根据权利要求1所述的虎杖生物活性成分的提取方法,其特征在于,在步骤十二中:所采用的大孔树脂为弱极性D101大孔树脂。

7.根据权利要求1-6任一项所述的虎杖生物活性成分的提取方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:

步骤一:准备:称取虎杖,粉碎,过20目筛,投入到回流罐中;

步骤二:回流:加入虎杖重量8倍的80%的酒精,用1%的KOH溶液调节pH值为9.0,在60℃温度下回流3小时;

步骤三:二次回流:加入虎杖重量6倍的80%的酒精,用1%的KOH溶液调节pH值为9.0,在60℃温度下回流2小时;

步骤四:过滤:合并两次回流液体,用HCl中和至pH值为6.5-7.0,加入饱和硫酸铵至产生沉淀,过滤除去沉淀;

步骤五:回收酒精:从滤液中回收酒精至酒精含量为15%以下,得到醇提液;

步骤六:浓缩:将酒精含量为15%以下的醇提液浓缩至比重为1.2,得到浓缩浸膏;

步骤七:水沉:将浓缩浸膏用5倍重量的90℃的热水充分搅拌溶解,保温1.0小时后迅速高速离心过滤,除去水不溶性成分取上清液;

步骤八:再浓缩:将步骤七得到的上清液浓缩至比重为1.2,得到浓缩浸膏;

步骤九:再醇溶:将步骤八得到的浓缩浸膏用5倍重量的重量浓度80%的酒精溶解过夜,高速离心分离醇不溶沉淀,取上清液;

步骤十:超滤:将从骤九得到的上清液中回收酒精至酒精含量小于15%,将上清液用磺化聚醚砜平板超滤,收集超滤液,用水稀释超滤液至酒精浓度为50%,看到絮状物,冷冻过夜,收集沉淀和上清液;

步骤十一:分离纯化大黄素:将步骤十得到的沉淀加到浓度5%碳酸钠溶液中,再加入乙醚均匀混合,静置后分为乙醚层和碱液层,取碱液层酸化沉淀,将酸化沉淀物用丙酮重结晶,得到橙色针状结晶大黄素,其纯度为99.8%;

步骤十二:分离上清液:对步骤十得到的上清液用弱极性D101大孔树脂吸附,分别洗脱收集40%酒精溶液的洗脱液和80%酒精溶液的洗脱液;

步骤十三:分离纯化虎杖甙:将步骤十二得到的40%酒精洗脱液蒸发至酒精含量15%以下,用5倍纯水稀释,用5%的Na2CO3水溶液调节pH值至9.0,充分搅拌至完全溶解,然后高速离心过滤得上清液,将该上清液用盐酸酸化至pH5.0,过夜冷藏,然后离心分离收集沉淀,对得到的沉淀用冷纯水洗涤5次,再用乙醚充分洗涤2次,然后将沉淀用10倍重量80%的酒精加热溶解,冷却后高速离心沉淀得到上清液,将上清液稀释至酒精浓度为15%以下,酸化高速离心收集沉淀,对沉淀水洗5次,乙醚洗涤2次,真空干燥,得到无色针状结晶的虎杖甙,其纯为99.5%以上;

步骤十四:分离纯化白藜芦醇:将步骤十二得到的80%酒精洗脱液蒸发至酒精含量15%以下,5倍纯水稀释,用1%的KOH水溶液调节pH至11.0,完全溶解,然后离心过滤得上清液,将该上清液用盐酸酸化至pH5.5,冷藏过夜,收集沉淀,对沉淀用纯水洗涤5次,乙醚洗涤2次,再用1%的KOH水溶液调节pH至11.0,搅拌至完全溶解,再用盐酸酸化至pH5.5,冷藏过夜沉淀,将所得沉淀用纯水洗涤2次,乙醚洗涤2次,真空干燥,得到白色针状结晶的白藜芦醇,其纯度为99.2%。

8.权利要求1-7任一项所述的虎杖生物活性成分的提取方法所制得虎杖生物活性成分。

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