本发明涉及药物化学，具体涉及环己烷类化合物或其立体异构体或盐，尤其涉及如式IB和式I所示的环己烷衍生物或其立体异构体或盐及其制备与应用。
背景技术：
：伴随着社会的飞速发展，人们生活节奏和压力日益增加，精神类疾病已经成为一种严重影响人类健康的疾病，为患者及其家庭带来了严重的后果。由于自杀、缺乏医疗照顾、较高的并发症风险(如营养不良、缺乏锻炼、肥胖和吸烟)等，导致患者平均寿命缩短。大量研究表明，精神疾病与中枢多种神经递质及受体功能异常相关，如脑内单胺递质，尤其是多巴胺(DA)系统和5-羟色胺(5-HT)系统与人体正常精神活动密切相关。当DA和5-HT系统功能紊乱时，易导致多种神经精神类疾病的发生，如精神分裂症、抑郁症、神经性疼痛、躁狂症、焦虑症、帕金森氏疾病等。专利WO9967206A1描述了环己烷类衍生物在疼痛疾病治疗中的应用，但是并未公开报道其在精神类疾病中的应用，尤其是对多巴胺D2/D3受体的作用。专利CN1829703A描述了具有(硫代)氨基甲酰基侧链的环己烷衍生物在调节多巴胺受体病症中的应用，其中由ForestLaboratories和GedeonRichter共同开发的D2/D3拮抗剂和5-HT1A部分激动剂卡利拉嗪(Cariprazine，RGH-188)目前已经完成临床实验处于注册审批阶段，用于精神分裂症和躁狂症及抑郁症的治疗。卡利拉嗪的化学结构如下式所示，该药物对D2/D3受体和5-HT1A的亲和力(Ki值)分别为0.72nmol、0.08nmol和3.42nmol，其对D2/D3受体虽然有一定的选择性，但仍不够理想，因此可能使该药物在临床上仍具有低概率(3mg剂量下有近5％的概率)的静坐不能、椎体外系反应的原因，因为这些副作用都跟D2受体的过度阻断有关。基于以上问题，专利CN103130737A对卡利拉嗪进行了进一步的结构修饰，以实现更高的D3受体选择性。但是，由于精神类疾病产生的原理有多种，虽然上述化合物目前对抗精神分裂具有较好的药效，但是还不能满足精神类疾病治疗的需要，宜进一步研究开发。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，研究设计改进环己烷衍生物结构，提供如式IB和式I所示的环己烷衍生物或其立体立体异构体或其盐，使其具有D2/D3拮抗剂作用和5-羟色胺吸收抑制作用，以及抗精神分裂作用，增加对精神类疾病治疗的广谱性，减少副作用。本发明提供的环己烷衍生物或其立体异构体或盐，其结构如下式IB所示：其中X为N或C；R为并且，所述R基团可任选的被一个或多个取代基取代，所述取代基选自卤素、取代或未取代的C1-C6烷基；所述卤素选自F、Cl、Br或I中的一种或多种；所述取代或未取代的C1-C6烷基选自取代或未取代的C1-C4烷基，例如甲基、乙基、丙基或丁基，所述取代基为卤素，例如F、Cl、Br或I中的一种或多种，所述取代的C1-C4烷基优选为三氟甲基。优选地，本发明提供的环己烷衍生物、或其立体异构体或盐，其结构如下式I所示：其中R为并且，所述R基团可任选的被一个或多个取代基取代，所述取代基选自卤素、取代或未取代的C1-C6烷基；所述卤素选自F、Cl、Br或I中的一种或多种；所述取代或未取代的C1-C6烷基选自取代或未取代的C1-C4烷基，例如甲基、乙基、丙基或丁基，所述取代基为卤素，例如F、Cl、Br或I中的一种或多种，所述取代的C1-C4烷基优选为三氟甲基。本发明所述环己烷衍生物的立体异构体为顺式立体异构体或反式立体异构体，优选为反式立体异构体。本发明所述环己烷衍生物的盐由环己烷衍生物与酸形成，所述酸为有机酸或无机酸，所述无机酸选自盐酸、硫酸、硝酸或磷酸；所述有机酸选自甲酸、乙酸、草酸丙二酸、马来酸、富马酸、琥珀酸或苯甲酸；以及其他生理学上可以接受的盐。优选的，本发明所述环己烷衍生物或其立体异构体或盐选自以下化合物或其盐：N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物1)N'-[反式-4-[2-[7-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物2)N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[c]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物3)N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[d]异噻唑)-3-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物4)N'-[反式-4-[2-[4-(6-氟-苯并[d]异恶唑)-3-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物5)N'-[反式-4-[2-[4-(3-氯-苯并[d]异恶唑)-6-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物6)N'-[反式-4-[2-[4-(6-氟-苯并[d]异恶唑)3-哌啶基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物7)N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌啶基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物8)N'-[反式-4-[2-[7-(苯并[b]噻吩)-7-哌啶基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物9)N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[c]噻吩)-7-哌啶基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物10)N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[d]异噻唑)-3-哌啶基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物11)N'-[反式-4-[2-[4-(3-氯-苯并[d]异恶唑)-6-哌啶基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物12)N'-[反式-4-[2-[4-(3-甲基-苯并[d]异恶唑)-6-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物13)N'-[反式-4-[2-[4-(6-甲基-苯并[d]异恶唑)-4-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物14)本发明的另一目的是提供所述环己烷衍生物、或其立体异构体或盐的制备方法，该方法包括下列步骤：4-乙基环己胺衍生物II与N,N-二甲酰基甲酰氯III在缚酸剂存在下反应，得到IB化合物IB：其中R、X同上述定义。所述化合物II与化合物III的摩尔比为1-1.5:1，反应温度为0℃-50℃，缚酸剂为有机碱性物或无机碱性物；所述有机碱性物选自三乙胺、二异丙基乙胺或吡啶中的一种或者几种，所述无机碱性物选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾中的一种或几种，所述缚酸剂(碱性物)与化合物II的摩尔比为1-1.5:1。本发明还提供了化合物II的制备方法，该方法包括下列步骤：或者其中R、X同上述定义，Pg为氨基保护基，选自苄基Bn、甲酸苄酯CBz或叔丁氧羰基Boc。式II化合物自身可以是顺式或者反式，亦可以最后使式IB化合物通过色谱分离或者结晶以获得其顺反立体异构体。(1)当X为氮时，采用哌嗪与溴代物进行偶联反应，得中间体IV；所述偶联反应是在钯催化下，强碱性物叔丁醇钾、叔丁醇钠、碳酸钾或碳酸铯的存在下进行，反应温度为50-150℃，哌嗪与溴代物摩尔比为1-5:1；或者，当X为C时，中间体IV可商业购得(上海竺钥化工)。(2)中间体IV与4-氨基保护的环己烷乙醛进行缩合亚胺还原反应，得中间体V；所述还原剂为硼化合物，如三乙酰氧基硼氢化钠或硼氢化合钠；中间体IV与4-氨基保护的环己烷乙醛投料摩尔比为1-1.2:1；硼化合物与中间体IV摩尔比为1-2:1；(3)脱氨基保护基；更为具体的是当Pg为叔丁氧羰基Boc时，加入酸脱氨基保护基；所述酸为氯化氢有机溶液或三氟乙酸等；或者，当Pg为苄基Bn或甲酸苄酯CBz时，使用钯碳加氢脱氨基保护基，加氢压力为0.1-1Mpa。本发明的又一目的是提供所述环己烷衍生物或其立体异构体、盐在制备抗神经精神性疾病药物中的应用。本发明所述的环己烷衍生物或其立体异构体、盐是根据化合物药效结构融合药物设计原理，将具有潜在对多巴胺D3受体作用的药效结构和具有潜在5-羟色胺吸收抑制作用的药效结构进行融合，经过对化合物的结构改造、制备、体外活性试验、体内抗精神分裂活性试验、构效关系研究以及再优化而得到的新化合物。药理研究结果表明：本发明的环己烷衍生物或其立体异构体、盐对D3受体、5-羟色胺具有较强亲和力，而对D2受体亲和力则较弱，表现出对D3/D2受体的高选择性，达到了意想不到的效果。体外受体结合试验表明：本发明的环己烷衍生物或其立体异构体、盐所涉及的大部分化合物特别对多巴胺D3受体、5-HT1A受体具有强亲和力(Ki<10nmol)，对多巴胺D2受体则弱亲和力(Ki>50nmol)，体现出良好的D3/D2受体选择性，以及对5-HT1A受体的强亲和力。体内抗精神分裂活性试验表明，本发明的环己烷衍生物或其立体异构体、盐有较强的抗精神分裂症症状作用。构效关系研究表明，对多巴胺D3受体、5-HT1A受体的强亲和力和对D3/D2受体的高选择性，以及具有抗精神分裂症症状作用，与本发明的所述环己烷衍生物系列化合物结构中的苯并杂环片段例如苯并噻吩、苯并异噻唑、苯并异恶唑片段有密切关系(现有卡利拉嗪的相应片段是2,3二氯苯)。因此，本发明的环己烷衍生物或其立体异构体、盐可用于制备神经精神类疾病药物。本发明所述的药物是指由所述环己烷衍生物或其立体异构体、盐作为活性成分与药用辅料组成的药物组合物。本发明所述的药物组合物可以选择任何便利的给药方式。例如口服、胃肠道、口腔、舌下、鼻腔、直肠或者透皮给药。可以开发成不同剂型如固体剂型和液体剂型，例如悬浮剂、片剂、胶囊。固体片剂形式的组合物可以包含制剂中常规使用的填充剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂。液体制剂采用适当的液体载体例如水溶性溶剂如水、乙醇或者甘油，或者非水溶性溶剂如聚乙二醇或者油中的混悬剂或者溶液。更为具体的，本发明所述药物组合物是由式IB或式I所示的环己烷衍生物或其立体异构体、盐作为活性成分与药用辅料组成的固体片剂。所述固体片剂由下列重量配比的成分组成：所述稀释剂选自淀粉、乳糖或微晶纤维素；所述粘合剂选自羟基苯甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；所述崩解剂选自羟基乙基淀粉钠或交联聚维酮，所述润滑剂为硬脂酸镁。优选的，本发明提供由N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲化合物作为活性成分与药用辅料组成的固体片剂。所述固体片剂由下列重量配比的成分组成：其中稀释剂选自淀粉、乳糖或微晶纤维素，粘合剂选自羟基苯甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮，崩解剂选自羟基乙基淀粉钠或交联聚维酮，润滑剂为硬脂酸镁。或者，本发明所述药物组合物是由式IB或式I所示的环己烷衍生物或其立体异构体、盐作为活性成分与药用辅料组成的混悬剂。所述混悬剂由下列重量配比的成分组成：所述助悬剂选自黄原胶或微晶纤维素；所述防腐剂选自苯甲酸钠、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸乙酯，所述稀释剂选自水或山梨醇；所述缓冲剂为柠檬酸盐；所述共溶剂选自环糊精、乙醇、丙二醇或聚乙二醇；调味剂可以是本领域技术人员众所周知的甜味剂(如糖、糖精等)；着色剂可以是脂溶性着色剂或水溶性着色剂，如胡萝卜素、可可色素、焦糖色素等。优选的，本发明提供由N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲化合物作为活性成分与药用辅料组成的混悬剂。所述混悬剂由下列重量配比的成分组成：所述助悬剂选自黄原胶或微晶纤维素，防腐剂选自苯甲酸钠、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯，稀释剂选自水、山梨醇，缓冲剂为柠檬酸盐，共溶剂选自环糊精、乙醇、丙二醇或聚乙二醇，调味剂可以是本领域技术人员众所周知的甜味剂(如糖、糖精等)；着色剂为脂溶性着色剂或水溶性着色剂，如胡萝卜素、可可色素或焦糖色素等。本发明的又一目的是提供所述环己烷衍生物或其立体异构体、盐在制备抗神经精神性疾病药物中的应用，所述应用是指制备对神经精神类疾病具有改善/治疗作用的药物，可用于制备改善/治疗精神分裂、精神紊乱、精神障碍、精神错乱、情绪紊乱、双相类精神障碍、抑郁症、恐惧症、强制性障碍、焦虑症或认知障碍疾病的药物。急性毒性实验表明，本发明所述的环己烷衍生物或其立体异构体、盐仅有极低的毒性(LD50＞1000mg/Kg)，极优于卡利拉嗪(Cariprazine)(LD50＝75.3mg/Kg)。说明本发明药物毒性小，安全性好。药理试验表明，本发明的环己烷衍生物或其立体异构体或盐是一类新型的抗神经精神性疾病的治疗药物，有较好的临床应用前景，为患者带来福音，有良好的社会效益。并且本发明化合物制备方法简单易行，宜于工业化生产，有较大的应用价值。具体实施方式以下实施例所用原料和试剂除特别说明外，均可市售得到。实施例11-苯并[b]噻吩-4-哌嗪盐酸盐的制备将7.20g4-溴苯并[b]噻吩、19.9g哌嗪酐、4.70g叔丁氧基钠、0.32g(R)-(+)-2,2′-双(二苯膦基)-1,1′-二萘(BINAP)、0.63g二钯三(二亚苄基丙酮)和150ml甲苯的混合物在氮气氛围中回流1小时。在反应溶液中倒入150ml水，然后用100ml×3乙酸乙酯萃取，经水洗后，无水硫酸镁干燥，使溶剂在减压下蒸发(0.01MPa，45℃)。剩余物通过硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇:25％氨水＝100:10:1)提纯，获得4.60g黄色油形式的1-苯并[b]噻吩-4-基-哌嗪。将2ml浓盐酸加入含有4.6g1-苯并[b]噻吩-4-基-哌嗪的甲醇溶液(25ml)中，并将溶剂在减压条件下蒸发(0.01MPa，45℃)。在剩余物中加入乙酸乙酯(50ml)，沉淀结晶经过滤，在15ml甲醇中回流溶解后冷却至室温(25℃)重结晶，获得无色针状结晶的1-苯并[b]噻吩-4-基-哌嗪盐酸盐。实施例2反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]环己基-氨基甲酸叔丁酯的制备将2.54g(10mmol)1-苯并[b]噻吩-4-哌嗪盐酸盐(实施例1制得)和2.40g(10mmol)反式-2-{1-[4-(N-叔丁氧碳基)氨基]环己基}-乙醛溶于120ml二氯甲烷中，在室温(25℃±2℃)下加入1.40ml(10mmol)三乙胺缓慢搅拌10分钟，然后逐步加入3.16g(14.8mmol)三乙酰氧基硼氢化钠，室温下继续搅拌反应24小时，反应结束后加入10％碳酸氢钠溶液120ml。反应体系直接萃取分液，有机相用无水硫酸钠干燥，最后过滤旋蒸至干，固体用15ml乙酸乙酯回流溶解冷却至室温(25℃±2℃)结晶得到3.70g目标产物。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.81(1H,brs)，7.78(1H,d,J＝5.5Hz)，7.73(1H,d,J＝8.1Hz)，7.41(1H,m)，7.30(1H,d,7.6Hz)，6.94(1H,d,J＝7.6Hz)，3.54(1H,m)，3.35-3.23(8H,m)，2.46(2H,m)，1.86-1.65(8H,m)，1.51-1.49(1H,m)，1.42(9H,s)，1.37-1.35(2H,m)。实施例3反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]环己胺的制备冰水浴下，将4.43g反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]环己基-氨基甲酸叔丁酯(实施例2制得)置于反应瓶中，加入80ml饱和氯化氢的乙酸乙酯溶液，搅拌反应8小时进行脱保护反应，最后生成白色沉淀，得到标题化合物的盐酸盐3.42g。将上述固体加入50ml二氯甲烷溶液中，50ml饱和碳酸氢钠溶液搅拌半小时后，分液萃取，有机相浓缩(0.01MPa，40℃)得到目标产物3.30g。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.78(1H,d,J＝5.5Hz)，7.76(1H,d,J＝8.1Hz)，7.37(1H,m)，7.29(1H,d,7.6Hz)，6.96(1H,d,J＝7.6Hz)，3.48-3.38(8H,m)，2.53(1H,m)，2.46(2H,m)，1.78-1.63(8H,m)，1.51-1.49(1H,m)，1.42(2H,brs)，1.37-1.35(2H,m)。实施例4N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物1)的制备将1.73g反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]环己氨(实施例3制得)溶于50ml二氯甲烷中，加入三乙胺1.40ml，接着加入5.50mmol的N,N-二甲酰基甲酰氯。室温(25℃±2℃)搅拌48小时。反应结束加入50ml水萃取分液，有机相浓缩(0.01MPa，45℃)，用甲醇:二氯甲烷＝1:10柱层析(400目硅胶型号)收集目标组份，浓缩得到1.89g无定形的目标产物。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.79(1H,d,J＝5.5Hz)，7.76(1H,d,J＝8.1Hz)，7.33(1H,m)，7.28(1H,d,7.6Hz)，6.96(1H,d,J＝7.6Hz)，6.48(1H,brs)，3.44-3.36(8H,m)，3.58(1H,m)，3.01(6H,s)，2.46(2H,m)，1.68-1.42(8H,m)，1.52-1.48(1H,m)，1.38-1.36(2H,m)。实施例5N'-[反式-4-[2-[7-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物2)的制备7-溴苯并[b]噻吩为起始原料制备，参照实施例1-4方法制备化合物2。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.78(1H,d,J＝5.6Hz)，7.76(1H,d,J＝8.0Hz)，7.31(1H,m)，7.27(1H,d,7.6Hz)，6.98(1H,d,J＝7.2Hz)，6.44(1H,brs)，3.48-3.42(8H,m)，3.54(1H,m)，3.00(6H,s)，2.46(2H,m)，1.68-1.42(8H,m)，1.52-1.48(1H,m)，1.38-1.36(2H,m)。实施例6N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[C]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物3)的制备以4-溴苯并[c]噻吩为起始原料，参照实施例1-4方法制备化合物3。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.33(2H,s)，7.27-7.25(1H,m)，7.27(1H,d,7.6Hz)，6.77(1H,d,J＝7.2Hz)，6.73(1H,d,J＝7.2Hz)，6.44(1H,brs)，3.48-3.42(8H,m)，3.54(1H,m)，2.99(6H,s)，2.46(2H,m)，1.68-1.42(8H,m)，1.52-1.48(1H,m)，1.46-1.42(2H,m)。实施例7N'-[反式-4-[2-[4-(6-氟-苯并[d]异恶唑)-4-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物5)的制备以6-氟-3-溴-1,2苯并[d]异恶唑为起始原料，参照实施例1-4方法制备化合物5。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.41(1H,d)，7.12(1H,d)，6.98(1H,s)，6.52(1H,brs)，3.55(1H,m)，3.46-3.42(8H,m)，2.99(6H,s)，2.45(2H,m)，1.68-1.40(8H,m)，1.50-1.48(1H,m)，1.37-1.35(2H,m)。实施例8N'-[反式-4-[2-[4-(3-氯-苯并[d]异恶唑)-6-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物6)的制备以3-氯-6-溴-苯并[d]异恶唑为起始原料制备，参照实施例1-4方法制备化合物6。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.25(1H,d)，6.78(1H,s)，6.72(1H,d)，6.51(1H,brs)，3.54(1H,m)，3.46-3.42(8H,m)，2.99(6H,s)，2.45(2H,m)，1.67-1.40(8H,m)，1.50-1.48(1H,m)，1.42-1.35(2H,m)。实施例9N'-[反式-4-[2-[4-(6-氟-苯并[d]异恶唑)-4-哌啶基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲(化合物7)的制备以6-氟-3-哌啶-4-基-1,2苯并[d]异恶唑为起始原料(购于上海竺钥化工)，参照实施例2-4方法制备化合物7。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.41(1H,d)，7.12(1H,d)，6.97(1H,s)，6.51(1H,brs)，3.55-3.53(1H,m)，2.99(6H,s)，2.78-2.76(1H，m)，2.66-2.37(4H,m)，2.46-2.40(2H,m)，1.78-1.68(12H,m)，1.50-1.48(1H,m),1.37-1.34(2H,m)。实施例10N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲化合物1的固体片剂按照下表中的配方制备1000片，每片重200mg。制备方法：将活性成分、乳糖、微晶纤维素和羟基乙基淀粉钠混合，加入高剪切湿法制粒机中，在一定转速下搅拌均匀；然后向混合物中加入羟丙甲基纤维素水溶液50.0g，在高速剪切条件下制得合适的颗粒；然后采用流化床干燥湿颗粒；将所得干颗粒与硬脂酸镁混合均匀，压片。实施例11N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]环己基]-N,N-二甲基脲化合物1的口服混悬液按照下表中的口服混悬液的配方(按照规格10mg/ml)制备1000瓶，每瓶5ml。组成成分用量(g)实施例4制得的化合物1(活性成分)50.0水3500.0聚乙二醇50.0山梨醇500.0微晶纤维素25.0黄原胶5.0对羟基苯甲酸甲酯1.25对羟基苯甲酸乙酯1.25柠檬酸盐调pH4～8制备方法：将对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸乙酯在热水中溶解后冷却至室温(25℃±2℃)，依次加入山梨醇、聚乙二醇、黄原胶、柠檬酸盐、平均粒度为30μm的化合物1和微晶纤维素，搅拌均匀，获得口服混悬液。实施例12药理实验一、本发明环己烷衍生物的体外生物活性研究按照江苏恒谊药业有限公司专利CN103130737A描述的多巴胺D2/D3受体结合试验以及5-HT1A受体结合试验的方法进行药理实验。使用非线性分析程序由浓度-依赖反应计算出IC50值。使用Cheng-Prussoff公式由IC50值计算出Ki值。即：Ki＝IC50/(1+[L]/KD)，Ki为药物与受体的亲和力，L为待测化合物浓度，KD为放射性配基与受体的亲和力。(一)多巴胺D2受体结合试验1、实验材料：①、D2受体细胞转染：用含有D2受体蛋白基因的质粒载体转染HEK293细胞，使用磷酸钙转染法，并从转染后的细胞中，通过含G418的培养液培养，以及挑选细胞单克隆和放射性配基结合实验，最终获得能稳定表达D2受体蛋白的稳定细胞株。②、受体结合实验材料：同位素配基[3H]Spiperone(113.0Ci/mmol)；购自Sigma公司；(+)spiperone，购自RBI公司；GF/B玻璃纤维滤纸，购自Whatman公司；Tris进口分装；PPO、POPOP购自上海试剂一厂；脂溶性闪烁液。BeckmanLS-6500型多功能液体闪烁计数仪。2、实验方法：①、细胞：用含以上各种基因的重组病毒分别感染HEK-293细胞，48-72小时后受体蛋白在膜上大量表达，将细胞1000rpm离心5min后弃培液，收胞体，保存于-20℃冰箱内备用。实验时用Tris-HCl反应缓冲液(pH＝7.5)重悬。②、受体竞争结合实验：将待测化合物与放射性配基各20μL及160μL受体蛋白加入反应试管中，使受试化合物及阳性药物终浓度均为10μmol/L，30℃水浴孵育50min后，即刻移至冰浴终止其反应；在Millipore细胞样品收集器上，经过GF/C玻璃纤维滤纸快速抽滤，并用洗脱液(50mMTris-HCl，pH7.5)3mL×3次，用微波5～6min烘干，将滤纸移入0.5mL离心管中，加入500μL脂溶性闪烁液。避光静置30min以上，计数测定放射性强度。化合物浓度为10umol/L，按以下公式计算各化合物对同位素配基结合的抑制率百分率：抑制率(I％)＝总结合管cpm-化合物cpm/总结合管cpm-非特异结合管cpm×100％。(二)多巴胺D3受体结合试验化合物10umol/L浓度，实验方法参照JournalofPharmacologyandExperimentalTherapeutics2010，333(1):328进行。(三)5-HT1A受体结合试验1、实验材料：5-HT1A受体同位素配基[3H].8-OH-DPAT(购自PE公司)，(+)5-hydroxytrptamine(购自Sigma公司)，GF/B玻璃纤维滤纸(购自Whatman公司)，脂溶性闪烁液：PPO，POPOP(购自上海试剂一厂)，甲苯(购自国药集团化学试剂有限公司)，Tris进口分装。细胞：用基因重组稳定表达5-HT1A受体的HEK-293细胞，用DMEM+10％血清的细胞培养液培养3-5后，用PBS收细胞，将细胞用-4度3000转离心10分钟后弃上清液，收胞体，存于-80度冰箱保存。实验时用D1BindingBuffer(pH7.4)重悬。2、实验方法：粗筛测定每个化合物10umol/L浓度对[3H]8-OH-DPAT与5-HT1A受体结合的竞争抑制率。具体实验数据如表1所示。表1：化合物对D2和D3受体结合试验及5-HT1A受体的亲核力(Ki：nmol)结论：从表1实验结果可以看出，本发明系列化合物对D3的亲核力很强，对D2亲核力非常弱，两者相差近万倍，说明本发明系列化合物对D2/D3受体选择性很强，避免了对D2受体选择产生的副作用；同时对5-HT1A受体也表现出较强的亲核力，增加了抗神经精神类疾病的广谱性。实施例13本发明环己烷衍生物的体内抗精神分裂活性试验1、MK-801模型(1)、MK-801诱导小鼠精神分裂症实验模型建立Sprague-Dawley大鼠100只(上海莱克实验动物有限公司提供)，均为雄性，按体重均衡随机分为10组：空白对照组，MK-801模型对照组，本发明环己烷衍生物C1-C8组(分别对应本发明化合物1至化合物7，化合物14)(0.3mg/kg)、阳性对照药卡利拉嗪(按照专利CN103130737A方法制备)组(0.3mg/kg)。每只动物于实验前一天放入隔音箱适应30min，第二天给予受试物后30分钟，用浓度为0.3mg/kg的MK-801溶液，按照5.0mL/kg小鼠体重进行腹腔注射诱导建立小鼠精神分裂症实验模型。给药方式：本发明环己烷衍生物组、阳性对照药卡利拉嗪组为口服灌胃，MK-801模型对照组为腹腔注射给药。(2)、旷场跑动行为学观察小鼠给药MK-801后，立即放入隔音箱，观察记录2.5小时内小鼠自主活动的总路程。改善率＝(模型对照组活动总路程-给药组活动总路程)/(模型对照组活动总路程)×100％。(3)、统计方法全部数据以表示，用SPSS17.0软件统计包处理，进行两个样本均数比较的t检验及单因素方差分析，以P<0.05为显著性差异。(4)、实验结果具体结果参看下表2。表2：单次口服给予本发明环己烷衍生物对MK-801诱导小鼠精神分裂症模型旷场运动总路程的影响表2结果显示，与MK-801模型对照组相比较，阳性对照药卡利拉嗪组和本发明的环己烷衍生物化合物1至化合物7均降低了大鼠150分钟内的总活动路程。其中*P<0.05，****P<0.0001。本试验结果表明：①与空白对照组相比较，MK-801模型对照组旷场运动距离明显增加，说明MK-801能造成小鼠精神分裂症。②与MK-801模型阳性对照药卡利拉嗪组相比较，阳性对照药卡利拉嗪组在剂量0.3kg/kg下明显抑制MK-801诱导的大鼠高自发活动(P<0.0001)；本发明的环己烷衍生物化合物1、2、3和5在剂量0.3kg/kg下均能显著抑制MK-801诱导的大鼠高自发活动(P<0.0001)，本发明的环己烷衍生物化合物6、7和14在剂量0.3kg/kg下也能明显抑制MK-801诱导的大鼠高自发活动(P<0.05)，与阳性对照药卡利拉嗪组相当。由于MK-801诱导的旷场运动模型与精神分裂症症状密切相关，因此说明本发明的环己烷衍生物系列有较强的抗精神分裂症状作用。实施例14本发明环己烷衍生物急性毒性研究评价ICR小鼠口服给予本发明化合物，观察其口服给予后动物出现的毒性征状和死亡情况，用Bliss法统计，比较其急性毒性。实验方案(1)、溶媒配制：称取适量吐温-80，用去离子水稀释至浓度为5％(g/v)吐温-80。(2)、给药制剂：分别称取所需的供试品，用5％吐温80溶液配制成浓度为0.94、1.88、3.75、7.5、15、30、60mg/mL(分别相当于18.75、37.5、75、150、300、600、1200mg/kg)混悬液。(3)、给药途径：供试品及溶媒对照组(0.5％吐温-80)的给药途径均为口服。一般症状观察：给药当天于第一次给药后约10分钟、0.5、2、4、6小时分别观察1次；观察期第2-6天，每天观察2次，上、下午各1次。观察内容包括但不限于：一般状况、行为活动、步态姿势、眼、口、鼻、胃肠道、皮肤被毛、泌尿生殖道。实验结果见表4。表4：化合物单次口服给药急性毒性实验结果结论：表明本发明的环己烷衍生物急性毒性远远低于阳性对照药卡利拉嗪(RGH-188，75.3mg/kg)，安全性良好。当前第1页1 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