本发明涉及多糖制备技术领域，具体涉及一种食用菌富硒多糖的制备方法及应用。
背景技术：
为了使人们在正常膳食之外再补充一些硒，科学家们研究了很多良好的补硒食品，例如硒酵母、富硒食用菌、富硒面粉、富硒大蒜、富硒蛋、硒盐等等举不胜举。而食用菌营养丰富、味道鲜美，富硒食用菌是一种颇有前途的富硒保健品。经测定，富硒菇的有机硒含量占全硒量的99.40-99.50%。
许多食用菌不仅含有丰富的蛋白质、多糖及其他生理活性成分,能提高人体免疫力、抗衰老、抗肿瘤等能力,具有很高的食用和药用价值, 而且有较强的富硒能力,能够通过菌丝细胞内物质代谢的转化，将无机硒结合到大分子活性物质(如蛋白质和多糖)上，转化为蛋白硒和多糖硒等有机形态的硒，从而弥补天然食用菌中的硒含量很低的缺点。因此,利用微生物学原理，发酵或培养出富硒食用菌产品，对于开发廉价的、高效的保健产品具有极其重要的价值。
技术实现要素：
本发明针对现有的技术问题，提供一种食用菌富硒多糖的制备方法及应用，其可以大大提高食用菌富硒多糖的提取，便于开发廉价的、高效的保健产品。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种食用菌富硒多糖的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：
（1）食用菌菌种的活化：制备PDA培养基，装入试管内，封口、灭菌，斜摆，制成斜面培养基，在无菌条件下，将冷藏保存的食用菌菌种转接活化，在25℃下进行菌种扩大培养，得到食用菌母种；
（2）食用菌富硒菌种的制备：将步骤（1）中的食用菌的菌种，置于富硒的原种培养基中，培养2-3天，制得食用菌富硒原种；
（3）食用菌发酵液的获取：制备富硒发酵液，并对富硒发酵液在常压下进行灭菌，灭菌温度为110℃，灭菌时间为24h，待灭菌后温度降至28℃时，在无菌条件下下接入所述步骤（2）制备的食用菌原种，之后置于30℃下进行发酵，发酵时间为48-60h，得到含有富硒的多糖发酵液；
（4）多糖提取液的超滤与浓缩：将所述步骤（3）得到的多糖发酵液利用
超滤膜进行超滤处理，超滤处理的压力为0.2-0.5Mpa,超滤处理的温度为30-40℃，之后，将超滤后将被截留的截留液置于70-80℃下，将其浓缩为原体积的1/8；
（5）多糖粉末提取：将所述步骤（4）的浓缩液置于超声波中，进行超声处理30min，然后将超声波处理液置于85℃热水中浸提，浸提时间为4h，之后将浸提液置于高速离心机中进行离心，离心速度为4500rpm，离心时间为20min，收集上清液，加入4-5倍体积的96%的乙醇，静置16h，再置于5000rpm的离心速度下离心15min，去沉淀，依次用无水乙醇、丙酮和无水乙醚洗涤3-4次，离心，沉淀真空干燥，得到富硒粗多糖粉末；
（6）脱蛋白处理：将所述步骤（5）得到的富硒粗多糖粉末溶解于15倍体积的蒸馏水中，用碳酸钠调节PH至7.8-8.2，之后加入质量为1/25粗多糖粉末的胰蛋白酶，60℃水解2-3h，支护用草酸调节PH为5.2-5.5，加入质量为1/20粗多糖粉末的木瓜蛋白酶，在75℃下水解3-4h，之后再利用碳酸钠调节ph至7，加入Sevag试剂，并充分振荡混合，静置3-5h，取上清液，之后置于离心机中离心3min，重复操作，直到不出现蛋白沉淀；
（7）脱蛋白富硒多糖提取：将所述步骤（6）得到的上清液中加入3-6倍体积的96%的乙醇醇析，得到沉淀，将沉淀依次用无水乙醇、丙酮和无水乙醚洗涤后，真空干燥，得到脱蛋白富硒多糖。
进一步，作为优选，步骤（1）中所述的PDA培养基为马铃薯300g、葡萄糖25g、琼脂30-35g、蛋白胨2-3g、磷酸二氢钾0.8g、硫酸镁0.2-0.3g、亚硒酸钠1-3g和水800-1000mL。
进一步，作为优选，所述步骤（2）中所述富硒的原种培养基的配方为：葡糖糖30g、黄豆粉20g、玉米粉25g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁0.8g、维生素B1为0.06g和维生素B2为0.03g，PH自然。
进一步，作为优选，所述步骤（3）中发酵液的配比为：马铃薯30g、蛋白胨2g、酵母膏3g、葡萄糖5g、琼脂粉2g、玉米淀粉10g和蒸馏水600-1000mL。
进一步，作为优选，所述步骤（5）中所述超声波的功率为600-1000W。
进一步，作为优选，所述步骤（3）中发酵的条件为PH为7.8-8，通气量为0.3-0.5vvm,在发酵过程中，机械搅拌的转速为200-350rpm。
进一步，本发明还提供了一种食用菌富硒多糖的应用，其特征在于：其应用在制备增强机体抗氧化功能和免疫调节功能的保健药品或者添加剂中。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明利用食用菌可以很好的提取富硒多糖，提取效率高，利用发酵液进行富硒食用菌发酵，提高了食用菌发酵效率，而在多糖提取之前，利用超滤膜先进行超滤处理，可以防止发酵液内有不良杂质（比如重金属等），在多糖提取时，采用超声波、多次离心，提高了多糖的提取效率，而在去蛋白质时，加入了多种去除蛋白酶，提高了富硒多糖的纯度，保证了保健品的质量。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一
一种食用菌富硒多糖的制备方法及应用，其特征在于，其包括以下步骤：
（1）食用菌菌种的活化：制备PDA培养基，装入试管内，封口、灭菌，斜摆，制成斜面培养基，在无菌条件下，将冷藏保存的食用菌菌种转接活化，在25℃下进行菌种扩大培养，得到食用菌母种，所述的PDA培养基为马铃薯300g、葡萄糖25g、琼脂302g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾0.8g、硫酸镁0.2g、亚硒酸钠1g和水800mL；
（2）食用菌富硒菌种的制备：将步骤（1）中的食用菌的菌种，置于富硒的原种培养基中，培养2-3天，制得食用菌富硒原种，所述富硒的原种培养基的配方为：葡糖糖30g、黄豆粉20g、玉米粉25g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁0.8g、维生素B1为0.06g和维生素B2为0.03g，PH自然；
（3）食用菌发酵液的获取：制备富硒发酵液，并对富硒发酵液在常压下进行灭菌，灭菌温度为110℃，灭菌时间为24h，待灭菌后温度降至28℃时，在无菌条件下下接入所述步骤（2）制备的食用菌原种，之后置于30℃下进行发酵，发酵时间为48-60h，得到含有富硒的多糖发酵液，发酵液的配比为：马铃薯30g、蛋白胨2g、酵母膏3g、葡萄糖5g、琼脂粉2g、玉米淀粉10g和蒸馏水800mL，发酵的条件为PH为7.8，通气量为0.4vvm,在发酵过程中，机械搅拌的转速为250rpm；
（4）多糖提取液的超滤与浓缩：将所述步骤（3）得到的多糖发酵液利用
超滤膜进行超滤处理，超滤处理的压力为0.3Mpa,超滤处理的温度为35℃，之后，将超滤后将被截留的截留液置于705℃下，将其浓缩为原体积的1/8；
（5）多糖粉末提取：将所述步骤（4）的浓缩液置于超声波中，进行超声处理30min，所述超声波的功率为800W，然后将超声波处理液置于85℃热水中浸提，浸提时间为4h，之后将浸提液置于高速离心机中进行离心，离心速度为4500rpm，离心时间为20min，收集上清液，加入4.5倍体积的96%的乙醇，静置16h，再置于5000rpm的离心速度下离心15min，去沉淀，依次用无水乙醇、丙酮和无水乙醚洗涤3-4次，离心，沉淀真空干燥，得到富硒粗多糖粉末，；
（6）脱蛋白处理：将所述步骤（5）得到的富硒粗多糖粉末溶解于15倍体积的蒸馏水中，用碳酸钠调节PH至7.8，之后加入质量为1/25粗多糖粉末的胰蛋白酶，60℃水解2h，支护用草酸调节PH为5.2，加入质量为1/20粗多糖粉末的木瓜蛋白酶，在75℃下水解3h，之后再利用碳酸钠调节ph至7，加入Sevag试剂，并充分振荡混合，静置3-5h，取上清液，之后置于离心机中离心3min，重复操作，直到不出现蛋白沉淀；
（7）脱蛋白富硒多糖提取：将所述步骤（6）得到的上清液中加入4倍体积的96%的乙醇醇析，得到沉淀，将沉淀依次用无水乙醇、丙酮和无水乙醚洗涤后，真空干燥，得到脱蛋白富硒多糖。
实施例二
一种食用菌富硒多糖的制备方法及应用，其特征在于，其包括以下步骤：
（1）食用菌菌种的活化：制备PDA培养基，装入试管内，封口、灭菌，斜摆，制成斜面培养基，在无菌条件下，将冷藏保存的食用菌菌种转接活化，在25℃下进行菌种扩大培养，得到食用菌母种，所述的PDA培养基为马铃薯300g、葡萄糖25g、琼脂35g、蛋白胨3g、磷酸二氢钾0.8g、硫酸镁0.3g、亚硒酸钠3g和水1000mL；
（2）食用菌富硒菌种的制备：将步骤（1）中的食用菌的菌种，置于富硒的原种培养基中，培养2.5天，制得食用菌富硒原种，所述富硒的原种培养基的配方为：葡糖糖30g、黄豆粉20g、玉米粉25g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁0.8g、维生素B1为0.06g和维生素B2为0.03g，PH自然；
（3）食用菌发酵液的获取：制备富硒发酵液，并对富硒发酵液在常压下进行灭菌，灭菌温度为110℃，灭菌时间为24h，待灭菌后温度降至28℃时，在无菌条件下下接入所述步骤（2）制备的食用菌原种，之后置于30℃下进行发酵，发酵时间为48-60h，得到含有富硒的多糖发酵液，发酵液的配比为：马铃薯30g、蛋白胨2g、酵母膏3g、葡萄糖5g、琼脂粉2g、玉米淀粉10g和蒸馏水600-1000mL，发酵的条件为PH为8，通气量为0.5vvm,在发酵过程中，机械搅拌的转速为350rpm；
（4）多糖提取液的超滤与浓缩：将所述步骤（3）得到的多糖发酵液利用
超滤膜进行超滤处理，超滤处理的压力为0.5Mpa,超滤处理的温度为40℃，之后，将超滤后将被截留的截留液置于80℃下，将其浓缩为原体积的1/8；
（5）多糖粉末提取：将所述步骤（4）的浓缩液置于超声波中，进行超声处理30min，所述超声波的功率为1000W，然后将超声波处理液置于85℃热水中浸提，浸提时间为4h，之后将浸提液置于高速离心机中进行离心，离心速度为4500rpm，离心时间为20min，收集上清液，加入5倍体积的96%的乙醇，静置16h，再置于5000rpm的离心速度下离心15min，去沉淀，依次用无水乙醇、丙酮和无水乙醚洗涤4次，离心，沉淀真空干燥，得到富硒粗多糖粉末，；
（6）脱蛋白处理：将所述步骤（5）得到的富硒粗多糖粉末溶解于15倍体积的蒸馏水中，用碳酸钠调节PH至8.2，之后加入质量为1/25粗多糖粉末的胰蛋白酶，60℃水解3h，支护用草酸调节PH为5.5，加入质量为1/20粗多糖粉末的木瓜蛋白酶，在75℃下水解4h，之后再利用碳酸钠调节ph至7，加入Sevag试剂，并充分振荡混合，静置4h，取上清液，之后置于离心机中离心3min，重复操作，直到不出现蛋白沉淀；
（7）脱蛋白富硒多糖提取：将所述步骤（6）得到的上清液中加入6倍体积的96%的乙醇醇析，得到沉淀，将沉淀依次用无水乙醇、丙酮和无水乙醚洗涤后，真空干燥，得到脱蛋白富硒多糖。
此外，本发明还提供了一种食用菌富硒多糖的应用，其特征在于：其应用在制备增强机体抗氧化功能和免疫调节功能的保健药品或者添加剂中。
本发明利用食用菌可以很好的提取富硒多糖，提取效率高，利用发酵液进行富硒食用菌发酵，提高了食用菌发酵效率，而在多糖提取之前，利用超滤膜先进行超滤处理，可以防止发酵液内有不良杂质（比如重金属等），在多糖提取时，采用超声波、多次离心，提高了多糖的提取效率，而在去蛋白质时，加入了多种去除蛋白酶，提高了富硒多糖的纯度，保证了保健品的质量。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。