发酵罐底物流加生产二十二碳六烯酸的方法与流程

文档序号:11936526阅读:来源:国知局

技术特征:

1.裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)LU310,已于2016年07月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏中心登记入册编号:CGMCC No.12528。

2.发酵罐底物流加生产二十二碳六烯酸的方法,其特征在于包括以下步骤:

1)菌种活化:将菌种转接于平板培养基中培养,得活化的菌种,所述菌种为权利要求1所述裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)LU310;

2)一级种子培养:将步骤1)得到的平板菌落中活化的菌种接入装有种子培养基的锥形瓶培养,得一级种子培养液;

3)二级种子培养:将步骤2)得到的一级种子培养液接入装有种子培养基的锥形瓶培养,得二级种子培养液;

4)摇瓶发酵:将步骤3)得到的二级种子培养液,以4%的接种量接入装有发酵培养基的锥形瓶中培养;

5)发酵罐培养:将步骤4)得到发酵培养液,以4%接种量接种于发酵培养基中培养,通过流加2M NaOH或1M柠檬酸自动控制发酵液pH,每4h取样测定葡萄糖浓度,每12h取样测定生物量、油脂和DHA产量。

3.如权利要求2所述发酵罐底物流加生产二十二碳六烯酸的方法,其特征在于在步骤1)中,所述平板培养基的组成为:葡萄糖30,酵母粉10,Na2SO4 12,MgSO4 2,KH2PO4 1,(NH4)2SO4 1,K2SO4 0.65,KCl 0.5,CaCl2.2H2O 0.17,琼脂15,单位为g/L,pH调至6.5。

4.如权利要求2所述发酵罐底物流加生产二十二碳六烯酸的方法,其特征在于在步骤1)中,所述培养的条件为:28℃培养24~48h。

5.如权利要求2所述发酵罐底物流加生产二十二碳六烯酸的方法,其特征在于在步骤2)中,所述种子培养基的组成为:葡萄糖30,酵母粉10,Na2SO4 12,MgSO4 2,KH2PO4 1,(NH4)2SO4 1,K2SO4 0.65,KCl 0.5,CaCl2.2H2O 0.17,单位为g/L,pH调至6.5。

6.如权利要求2所述发酵罐底物流加生产二十二碳六烯酸的方法,其特征在于在步骤2)中,所述培养的条件为28℃、200rpm培养24~48h。

7.如权利要求2所述发酵罐底物流加生产二十二碳六烯酸的方法,其特征在于在步骤3)中,所述种子培养基的组成为:葡萄糖30,酵母粉10,Na2SO4 12,MgSO4 2,KH2PO4 1,(NH4)2SO4 1,K2SO4 0.65,KCl 0.5,CaCl2.2H2O 0.17,单位为g/L,pH调至6.5;所述接入装有种子培养基的锥形瓶培养的一级种子培养液的接种量按体积百分比可为一级种子培养液的4%。

8.如权利要求2所述发酵罐底物流加生产二十二碳六烯酸的方法,其特征在于在步骤3)中,所述培养的条件为28℃、200rpm培养24h。

9.如权利要求2所述发酵罐底物流加生产二十二碳六烯酸的方法,其特征在于在步骤4)中,所述发酵培养基的组成为:葡萄糖120,谷氨酸钠5,玉米浆粉5,Na2SO4 12,MgSO4 2,KH2PO4 1,(NH4)2SO4 1,K2SO4 0.65,KCl 0.5,CaCl2.2H2O 0.17,FeSO4·7H2O 10,泛酸钙3.2,MnCl2·4H2O 3,ZnSO4·7H2O 3,NiSO4·6H2O 2,CuSO4·5H2O 2,CoCl2·6H2O 0.04,Na2MoO4·2H2O 0.04,单位为g/L;维生素的组成为:VB1 9.5,VB12 0.1,单位为mg/L,pH调至6.5;所述培养的条件可为28℃、200rpm培养120h。

10.如权利要求2所述发酵罐底物流加生产二十二碳六烯酸的方法,其特征在于在步骤5)中,所述发酵培养基的组成为:谷氨酸钠5,玉米浆粉5,Na2SO4 12,MgSO4 2,KH2PO41,(NH4)2SO4 1,K2SO4 0.65,KCl 0.5,CaCl2.2H2O 0.17,FeSO4·7H2O 10,泛酸钙3.2,MnCl2·4H2O 3,ZnSO4·7H2O 3,NiSO4·6H2O 2,CuSO4·5H2O 2,CoCl2·6H2O 0.04,Na2MoO4·2H2O 0.04,用于5L罐时葡萄糖120或用于1T罐时葡萄糖40,单位为g/L;维生素的组成为:VB19.5,VB12 0.1,单位为mg/L,pH调至6.5;所述培养的条件可在28℃和2vvm的通气量下培养。

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