本发明涉及一种从枝菌根真菌摩西球囊霉的培养基及培养方法,具体为涉及一种摩西球囊霉(Glomus mosseae)的培养基及培养方法。
背景技术:
自然界中普遍存在着由真菌与植物根形成的共生体——菌根,丛枝菌根是菌根中最普遍、数量最多的一种。丛枝菌根真菌(Arbuscular Mycorrhizal Fungi,AM)是土壤中存在的一类有益微生物,约占土壤微生物总量的5%~36%,是生物量最大的一类土壤真菌,它能够与80%以上的陆生植物形成良好的互利共生体,能够在植物根系皮层细胞内形成丛枝,部分形成泡囊结构,因此该类真菌被称为丛枝菌根真菌,属于球囊霉真菌。
摩西球囊霉菌属于从枝菌根真菌中的一种,近年来,如何获得高产量、高密度、高质量的菌根菌剂,是国际上倍受关注的微生物热点课题。现有条件下,只能采用将丛枝菌根真菌与植物共生的方法进行开放式培养,主要方法有:盆钵培养法、营养薄层法、静水培养法、气雾培养法、双重无菌培养法、玻璃珠培养法、大田培养法等技术,但这些技术存在的问题是:产孢量少、保存时间短、操作技术难度大、易受到污染、培养成本和技术要求高等。目前我国关于丛枝菌根真菌的生产与应用仍然处于起步阶段,关于丛枝菌根真菌摩西球囊霉的培养方法报道还较少。
技术实现要素:
本发明的目的是提供一种摩西球囊霉的培养基及离体纯培养方法,所采用的技术方案如下。
(1)单孢离体培养基配制。
固体培养基的组分为:淀粉2%、硝酸钾0.1%、磷酸氢二钾0.05%、硫酸镁0.05%、氯化钠0.05%、硫酸亚铁0.01%、琼脂粉2%,pH值7.0~7.2。
作为优选,可采用液体培养基替代固体培养基,液体培养基的组分为:淀粉2%、硝酸钾0.1%、磷酸氢二钾0.05%、硫酸镁0.05%、氯化钠0.5%、硫酸亚铁0.01%、蛋白胨0.5%、酵母粉0.5%,pH值7.0~7.2。
(2)单孢获取。
称取20g含有摩西球囊霉(编号为HEBO7B)的沸石沙,在体式显微镜下挑取该菌株的单个孢子,在生物显微镜下,观察孢子形态。
孢子果:黄棕至浅褐色,多为不规则圆形,内含1至多个孢子,200-600μm,有菌丝被。
孢子:浅黄至黄褐色,幼嫩孢子乳白色。球形、近球形、不规则。孢子壁:3层。1无色透明,易脱落,厚约0.5-1μm,Melzer′s试剂中呈浅粉红色;L2无色透明,0.8-1.6μm。L3浅黄至黄棕色,层积壁,厚1.5-3μm,在连点处增厚至6μm。
连孢菌丝:宽8μm.连点漏斗状,漏斗底部有厚凹隔。
(3)培养基接种培养。
将上述获得的摩西球囊霉单胞子,接种到培养基中,恒温30℃静置培养7~10天,出现黄绿色-黄褐色菌丝。
(4)形态鉴定。
吸取少量培养基,在显微镜下观察,形态学鉴定符合上述摩西球囊霉的特征,鉴定为摩西球囊霉菌株。
本发明实现了摩西球囊霉的实验室分离纯培养,打破了丛枝菌根真菌依赖作物共生的限制,具有广阔的应用前景。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式,还包括各具体实施方式间的任意组合。
实施例1。
本实施方式摩西球囊霉的培养基及离体纯培养方法按以下步骤实现。
(1)株单孢离体培养基配制。
固体培养基组分为:淀粉2%、硝酸钾0.1%、磷酸氢二钾0.05%、硫酸镁0.05%、氯化钠0.05%、硫酸亚铁0.01%、琼脂粉2%,pH值7.0~7.2。
(2)单孢获取。
称取20g含有摩西球囊霉(编号为HEBO7B)的沸石沙,在体式显微镜下挑取该菌株的单个孢子,在生物显微镜下,观察孢子形态。
孢子果:黄棕至浅褐色,多为不规则圆形,内含1至多个孢子,200-600μm,有菌丝被。
孢子:浅黄至黄褐色,幼嫩孢子乳白色。球形、近球形、不规则。孢子壁:3层。1无色透明,易脱落,厚约0.5-1μm,Melzer′s试剂中呈浅粉红色;L2无色透明,0.8-1.6μm。L3浅黄至黄棕色,层积壁,厚1.5-3μm,在连点处增厚至6μm。
连孢菌丝:宽8μm.连点漏斗状,漏斗底部有厚凹隔。
(3)培养基接种培养。
将上述获得的摩西球囊霉单胞子,接种到固体培养基中,恒温30℃静置培养7天,出现黄绿色-黄褐色菌丝。
(4)形态鉴定。
挑取少量培养基中的菌丝,在显微镜下观察,形态学鉴定符合上述摩西球囊霉的特征,鉴定为摩西球囊霉菌株。
实施例2 。
本实施方式摩西球囊霉的培养基及离体纯培养方法按以下步骤实现。
(1)株单孢离体培养基配制。
液体培养基为:淀粉2%、硝酸钾0.1%、磷酸氢二钾0.05%、硫酸镁0.05%、氯化钠0.5%、硫酸亚铁0.01%、蛋白胨0.5%、酵母粉0.5%,pH值7.0~7.2。
(2)单孢获取。
称取20g含有摩西球囊霉(编号为HEBO7B)的沸石沙,在体式显微镜下挑取该菌株的单个孢子,在生物显微镜下,观察孢子形态。
孢子果:黄棕至浅褐色,多为不规则圆形,内含1至多个孢子,200-600μm,有菌丝被。孢子:浅黄至黄褐色,幼嫩孢子乳白色。球形、近球形、不规则。孢子壁:3层。1无色透明,易脱落,厚约0.5-1μm,Melzer′s试剂中呈浅粉红色;L2无色透明,0.8-1.6μm。L3浅黄至黄棕色,层积壁,厚1.5-3μm,在连点处增厚至6μm。连孢菌丝:宽8μm.连点漏斗状,漏斗底部有厚凹隔。
(3) 培养基接种培养。
将上述获得的摩西球囊霉单胞子,接种到液体培养基中,恒温30℃震荡培养10天。
(4)形态鉴定。
吸取少量液体培养基,在显微镜下观察,形态学鉴定符合上述摩西球囊霉的特征,鉴定为摩西球囊霉菌株。