本发明涉及一种酿造型梨酒用复合澄清剂的制备方法，属于澄清剂制备技术领域。
背景技术：
梨不仅味道鲜美，而且含有多种维生素、微量元素及人体所需必需氨基酸，具有生津止渴、润肺止咳的功效。以鲜梨为原料发酵而成的酿造型梨酒更是营养丰富、风味独特，况且开发梨酒具有促进水果产业提升、增加产品附加值的作用，因此大力开发梨酒，具有重要经济效益和社会效益。但是在加工过程中，容易发生沉淀和混浊等问题，即破坏了梨酒的营养价值又影响梨酒的风味及品质。故加工过程中，在保持梨酒营养和口味的同时避免混浊、沉淀以及提高梨酒的稳定性，是科研工作者和生产者密切关心的问题，亟待解决。
酒液澄清是果酒品质优劣的重要指标之一，如何得到营养破坏少、澄清透明并能长期保存的果酒，是生产的关键。不同的果酒，必须依据其特征，经过试验选择最佳的澄清方式，在除去可能引起沉淀果胶、蛋白质、鞣质、纤维素等物质，另外，通过先进的技术在减少营养物质损失的情况下，防止上述沉淀析出，是得到营养破坏少、稳定性好果酒的关键所在。由于梨酒营养丰富，在加工和存储中极易发生沉淀和混浊的现象，影响营养、风味及口感，通常添加活性炭、单宁酸、皂土、明胶等单一的澄清剂，存在处理时间长、澄清效果不显著、影响酒体品质等一系列缺点。壳聚糖是果酒澄清中常用到的澄清剂，澄清效果好，但是处理时间较长。活性炭是在食品中经常用到的吸附剂，吸附能力强，但是对于产品的色泽及风味破坏严重。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题：针对目前澄清剂普遍存在处理时间长、澄清效果不显著，对产品色泽和风味破坏严重的问题，提供了一种用微生物对硅藻土进行改性，其代谢产物与硅藻土、蛋清等复配制备酿造型梨酒用复合澄清剂的方法，本发明首先将红平红球菌与硅藻土粉末混合发酵，通过微生物对硅藻土进行改性，增大硅藻土的吸附性和吸附容量，微生物的代谢产物中含有多种活性基团，可与果胶、蛋白质等产生沉淀，再将蛋清、壳聚糖与水混合制成胶体，蛋清可与单宁生成黏糊状化合物，吸附酒中的混浊微粒形成沉淀，并可除去色素，最后与硫酸铝配合得到复合澄清剂。本发明制备的澄清剂澄清效果明显，使用本发明制备的澄清剂处理过的梨酒的透光率达到了98.9～99.4%，并且处理时间短，能最大限度的保持梨酒的风味及营养价值，提高梨酒的稳定性，与现有的澄清剂相比，效果更佳显著。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
（1）称取20～30g葡萄糖、10～15g酵母膏、0.3～0.5g磷酸氢二钾、0.1～0.3g氯化钠和800～1000mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合1～2min后，置于灭菌罐中，在95～100℃下灭菌5～8min，得到发酵培养基；
（2）称取300～400g硅藻土，加入到球磨机中球磨25～30min，过80～100目筛，收集过筛物，得硅藻土粉末，并将其与上述发酵培养基混合均匀后，倒入发酵罐中，再按接种量为6～8%将红平红球菌接种到发酵培养基上，随后以5～7mL/min速率向发酵罐中通入空气，并在28～32℃、120～150r/min下好氧发酵6～8h后，停止通入空气，密封发酵罐，发酵3～4天；
（3）发酵结束，收集发酵罐中的物料，并置于离心机中，在4000～5000r/min下离心15～20min，分别收集上层液和沉淀，并将上层液进行喷雾干燥，得到干燥物，备用，再将沉淀用水清洗2～3次，去除表面残余菌体，得到改性硅藻土，备用；
（4）取鸡蛋，并人工将蛋清与蛋白进行分离，收集蛋清，称取100～200g蛋清加入到盛有300～400mL去离子水的烧杯中，并置于数显恒温磁力搅拌机上，控制搅拌机温度为30～40℃，转速为200～220r/min，搅拌1～2min后，再加入15～20g壳聚糖，升温至50～60℃，搅拌混合3～5min，得到胶体；
（5）按重量份数计，称取10～20份步骤（3）备用的干燥物、8～12份步骤（3）备用的改性硅藻土、15～20份上述胶体和1～3份硫酸铝，加入到烧杯中，搅拌混合3～5min后，置于真空冷冻机中冻干，将干燥后的物料置于球磨机中球磨25～30min，并过80～100目筛，收集过筛颗粒，装袋，即可得到酿造型梨酒用复合澄清剂。
本发明的应用方法：将本发明制备的澄清剂与45～50℃热水按质量比1:10混合均匀，得到澄清剂溶液，随后按质量比1:130～1:150将澄清剂溶液加入到酿造型梨酒中，搅拌5～10min，然后在常温下静置1～2h，再将梨酒加入到布氏漏斗中抽滤，收集滤液，即可。经检测，使用本发明制备的澄清剂处理过的梨酒的透光率达到了98.9～99.4%，比使用蛋清处理过的梨酒的透光率提高了11.8～12.3%，可溶性固形物的含量比未处理梨酒中降低了0.33～0.41%，可溶性固化物没有明显损失，保持了梨酒的营养成分，并且将经本发明制备的澄清剂处理过的梨酒放制在冰柜中，控制冰柜温度在2～5℃冷冻7天，无混浊和沉淀产生，再将处理后的梨酒进行水浴加热至80～85℃，保温15～20min，冷却后无失光、混浊现象发生，经本发明处理后的梨酒稳定性好。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）本发明制备的澄清剂能最大限度的保持梨酒的风味及营养价值，提高梨酒的稳定性，与现有的澄清剂相比，效果更佳显著；
（2）本发明中操作简单，值得推广与使用。
具体实施方式
首先称取20～30g葡萄糖、10～15g酵母膏、0.3～0.5g磷酸氢二钾、0.1～0.3g氯化钠和800～1000mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合1～2min后，置于灭菌罐中，在95～100℃下灭菌5～8min，得到发酵培养基；然后称取300～400g硅藻土，加入到球磨机中球磨25～30min，过80～100目筛，收集过筛物，得硅藻土粉末，并将其与上述发酵培养基混合均匀后，倒入发酵罐中，再按接种量为6～8%将红平红球菌接种到发酵培养基上，随后以5～7mL/min速率向发酵罐中通入空气，并在28～32℃、120～150r/min下好氧发酵6～8h后，停止通入空气，密封发酵罐，发酵3～4天；发酵结束，收集发酵罐中的物料，并置于离心机中，在4000～5000r/min下离心15～20min，分别收集上层液和沉淀，并将上层液进行喷雾干燥，得到干燥物，备用，再将沉淀用水清洗2～3次，去除表面残余菌体，得到改性硅藻土，备用；取鸡蛋，并人工将蛋清与蛋白进行分离，收集蛋清，称取100～200g蛋清加入到盛有300～400mL去离子水的烧杯中，并置于数显恒温磁力搅拌机上，控制搅拌机温度为30～40℃，转速为200～220r/min，搅拌1～2min后，再加入15～20g壳聚糖，升温至50～60℃，搅拌混合3～5min，得到胶体；最后按重量份数计，称取10～20份备用的干燥物、8～12份备用的改性硅藻土、15～20份上述胶体和1～3份硫酸铝，加入到烧杯中，搅拌混合3～5min后，置于真空冷冻机中冻干，将干燥后的物料置于球磨机中球磨25～30min，并过80～100目筛，收集过筛颗粒，装袋，即可得到酿造型梨酒用复合澄清剂。
实例1
首先称取20g葡萄糖、10g酵母膏、0.3g磷酸氢二钾、0.1g氯化钠和800mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合1min后，置于灭菌罐中，在95℃下灭菌5min，得到发酵培养基；然后称取300g硅藻土，加入到球磨机中球磨25min，过80目筛，收集过筛物，得硅藻土粉末，并将其与上述发酵培养基混合均匀后，倒入发酵罐中，再按接种量为6%将红平红球菌接种到发酵培养基上，随后以5mL/min速率向发酵罐中通入空气，并在28℃、120r/min下好氧发酵6h后，停止通入空气，密封发酵罐，发酵3天；发酵结束，收集发酵罐中的物料，并置于离心机中，在4000r/min下离心15min，分别收集上层液和沉淀，并将上层液进行喷雾干燥，得到干燥物，备用，再将沉淀用水清洗2次，去除表面残余菌体，得到改性硅藻土，备用；取鸡蛋，并人工将蛋清与蛋白进行分离，收集蛋清，称取100g蛋清加入到盛有300mL去离子水的烧杯中，并置于数显恒温磁力搅拌机上，控制搅拌机温度为30℃，转速为200r/min，搅拌1min后，再加入15g壳聚糖，升温至50℃，搅拌混合3min，得到胶体；最后按重量份数计，称取10份备用的干燥物、8份备用的改性硅藻土、15份上述胶体和1份硫酸铝，加入到烧杯中，搅拌混合3min后，置于真空冷冻机中冻干，将干燥后的物料置于球磨机中球磨25min，并过80目筛，收集过筛颗粒，装袋，即可得到酿造型梨酒用复合澄清剂。
将本发明制备的澄清剂与45℃热水按质量比1:10混合均匀，得到澄清剂溶液，随后按质量比1:130将澄清剂溶液加入到酿造型梨酒中，搅拌5min，然后在常温下静置1h，再将梨酒加入到布氏漏斗中抽滤，收集滤液，即可。经检测，使用本发明制备的澄清剂处理过的梨酒的透光率达到了98.9%，比使用蛋清处理过的梨酒的透光率提高了11.8%，可溶性固形物的含量比未处理梨酒中降低了0.33%，可溶性固化物没有明显损失，保持了梨酒的营养成分，并且将经本发明制备的澄清剂处理过的梨酒放制在冰柜中，控制冰柜温度在2℃冷冻7天，无混浊和沉淀产生，再将处理后的梨酒进行水浴加热至80℃，保温15min，冷却后无失光、混浊现象发生，经本发明处理后的梨酒稳定性好。
实例2
首先称取25g葡萄糖、13g酵母膏、0.4g磷酸氢二钾、0.2g氯化钠和900mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合1min后，置于灭菌罐中，在98℃下灭菌6min，得到发酵培养基；然后称取350g硅藻土，加入到球磨机中球磨28min，过90目筛，收集过筛物，得硅藻土粉末，并将其与上述发酵培养基混合均匀后，倒入发酵罐中，再按接种量为7%将红平红球菌接种到发酵培养基上，随后以6mL/min速率向发酵罐中通入空气，并在30℃、135r/min下好氧发酵7h后，停止通入空气，密封发酵罐，发酵3天；发酵结束，收集发酵罐中的物料，并置于离心机中，在4500r/min下离心18min，分别收集上层液和沉淀，并将上层液进行喷雾干燥，得到干燥物，备用，再将沉淀用水清洗2次，去除表面残余菌体，得到改性硅藻土，备用；取鸡蛋，并人工将蛋清与蛋白进行分离，收集蛋清，称取150g蛋清加入到盛有350mL去离子水的烧杯中，并置于数显恒温磁力搅拌机上，控制搅拌机温度为35℃，转速为210r/min，搅拌1min后，再加入18g壳聚糖，升温至55℃，搅拌混合4min，得到胶体；最后按重量份数计，称取15份备用的干燥物、10份备用的改性硅藻土、18份上述胶体和2份硫酸铝，加入到烧杯中，搅拌混合4min后，置于真空冷冻机中冻干，将干燥后的物料置于球磨机中球磨28min，并过90目筛，收集过筛颗粒，装袋，即可得到酿造型梨酒用复合澄清剂。
将本发明制备的澄清剂与48℃热水按质量比1:10混合均匀，得到澄清剂溶液，随后按质量比1:140将澄清剂溶液加入到酿造型梨酒中，搅拌8min，然后在常温下静置1h，再将梨酒加入到布氏漏斗中抽滤，收集滤液，即可。经检测，使用本发明制备的澄清剂处理过的梨酒的透光率达到了99.1%，比使用蛋清处理过的梨酒的透光率提高了12.0%，可溶性固形物的含量比未处理梨酒中降低了0.38%，可溶性固化物没有明显损失，保持了梨酒的营养成分，并且将经本发明制备的澄清剂处理过的梨酒放制在冰柜中，控制冰柜温度在4℃冷冻7天，无混浊和沉淀产生，再将处理后的梨酒进行水浴加热至83℃，保温18min，冷却后无失光、混浊现象发生，经本发明处理后的梨酒稳定性好。
实例3
首先称取30g葡萄糖、15g酵母膏、0.5g磷酸氢二钾、0.3g氯化钠和1000mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合2min后，置于灭菌罐中，在100℃下灭菌8min，得到发酵培养基；然后称取400g硅藻土，加入到球磨机中球磨30min，过100目筛，收集过筛物，得硅藻土粉末，并将其与上述发酵培养基混合均匀后，倒入发酵罐中，再按接种量为8%将红平红球菌接种到发酵培养基上，随后以7mL/min速率向发酵罐中通入空气，并在32℃、150r/min下好氧发酵8h后，停止通入空气，密封发酵罐，发酵4天；发酵结束，收集发酵罐中的物料，并置于离心机中，在5000r/min下离心20min，分别收集上层液和沉淀，并将上层液进行喷雾干燥，得到干燥物，备用，再将沉淀用水清洗3次，去除表面残余菌体，得到改性硅藻土，备用；取鸡蛋，并人工将蛋清与蛋白进行分离，收集蛋清，称取200g蛋清加入到盛有400mL去离子水的烧杯中，并置于数显恒温磁力搅拌机上，控制搅拌机温度为40℃，转速为220r/min，搅拌2min后，再加入20g壳聚糖，升温至60℃，搅拌混合5min，得到胶体；最后按重量份数计，称取20份备用的干燥物、12份备用的改性硅藻土、20份上述胶体和3份硫酸铝，加入到烧杯中，搅拌混合5min后，置于真空冷冻机中冻干，将干燥后的物料置于球磨机中球磨30min，并过100目筛，收集过筛颗粒，装袋，即可得到酿造型梨酒用复合澄清剂。
将本发明制备的澄清剂与50℃热水按质量比1:10混合均匀，得到澄清剂溶液，随后按质量比1:150将澄清剂溶液加入到酿造型梨酒中，搅拌10min，然后在常温下静置2h，再将梨酒加入到布氏漏斗中抽滤，收集滤液，即可。经检测，使用本发明制备的澄清剂处理过的梨酒的透光率达到了99.4%，比使用蛋清处理过的梨酒的透光率提高了12.3%，可溶性固形物的含量比未处理梨酒中降低了0.41%，可溶性固化物没有明显损失，保持了梨酒的营养成分，并且将经本发明制备的澄清剂处理过的梨酒放制在冰柜中，控制冰柜温度在5℃冷冻7天，无混浊和沉淀产生，再将处理后的梨酒进行水浴加热至85℃，保温20min，冷却后无失光、混浊现象发生，经本发明处理后的梨酒稳定性好。