本发明涉及添加剂
技术领域：
，尤其是涉及一种辅酶混合溶液。本发明还涉及一种辅酶混合溶液的制备方法。
背景技术：
：ATP是细胞重要的供能物质和辅酶，而烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD，也称辅酶Ⅰ或线粒体素，是细胞内糖酵解途径和细胞呼吸的重要细胞因子。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADP也称辅酶Ⅱ，是合成核酸和脂肪酸的重要细胞因子。随着绿色酶化学工程的发展，利用生物酶在体外实现重要化合物的合成成为现实，大部分酶反应均需要辅酶的供能或质子转移、磷酸根转移。技术实现要素：本发明的目的是提供一种辅酶混合溶液，它具有能够较好促进酶化学反应的特点。本发明还公开了一种辅酶混合溶液的制备方法。本发明所采用的第一个技术方案是：辅酶混合溶液，所述辅酶混合溶液含ATP不少于50mg/ml、NAD不少于2mg/ml、NADP不少于5mg/ml，且含有NADH不少于0.5mg/mL、NADPH不少于0.2mg/mL、AMP不少于0.1mg/mL、ADP不少于0.1mg/mL。本发明所采用的第二个技术方案是：辅酶混合溶液的制备方法，依次包括以下步骤：（1）取含水量不高于50%的酿酒酵母，超声波破碎30—120min得到破碎酵母；（2）向破碎酵母中按破碎酵母重量1.5—2.5%的重量添加腺苷，之后加热到35—40°C形成混合料；（3）取硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖作为辅料，将辅料和混合料添加到水中，且采用磷酸调节PH为6.5—7.0，加热到35—40°C后，得到第一混合液，其中，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别为破碎酵母重量的0.15—0.25%、1.5—2.5%、4—6%，水的重量为破碎酵母重量的1—2倍；（4）继续搅拌第一混合液30—60min后，向第一混合液中添加色氨酸，搅拌反应30—60min得到第二混合液，其中，色氨酸的添加量按腺苷重量的5—15%；（5）静置第二混合液20—40min，然后向第二混合液中添加纯度不低于20%的NAD激酶继续反应25—35min得到第三混合液，其中，NAD激酶的添加量为腺苷重量的0.005—0.015%；（6）静置第三混合液至少30min，然后用磷酸调PH为2.5—3.5得第四混合液；（7）对第四混合液进行离心，取上清液，上清液经过离子交换柱处理后，再依次采用低盐洗脱、高盐洗脱，收集全部溶液，接着经纳滤浓缩15—25倍，即得辅酶混合溶液。本发明所具有的优点是：能够较好促进酶化学反应。本发明的辅酶混合溶液的化学成分较为合理，对酶化学反应具有较好的促进作用。本发明的辅酶混合溶液的制备方法利用酿酒酵母酶系添加基因工程NADH激酶作为工程酶系，添加原辅料转化生产三磷酸腺苷ATP的同时，联产含烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADP，确保得到成分合理的辅酶混合溶液。具体实施方式实施例1辅酶混合溶液的制备方法，依次包括以下步骤：（1）取含水量为20%的酿酒酵母。本实施例中，该酿酒酵母采用新鲜啤酒酵母。即，生产出之后，在不超过10min内取出的啤酒酵母。对酿酒酵母进行超声波破碎30min得到破碎酵母。本实施例中，取100kg破碎酵母进行后续步骤。（2）向破碎酵母中按破碎酵母重量1.5%的重量添加腺苷，之后加热到35°C形成混合料。即，腺苷的添加量为1.5kg。（3）取硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖作为辅料，将辅料和混合料添加到水中，且采用磷酸调节PH为6.5，加热到35°C后，得到第一混合液。其中，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别为破碎酵母重量的0.15%、1.5%、4%，水的重量为破碎酵母重量的1倍。即，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别是0.15kg、1.5kg、4kg，水为100kg。（4）继续搅拌第一混合液30min后，向第一混合液中添加色氨酸，搅拌反应30min得到第二混合液。其中，色氨酸的添加量按腺苷重量的5%。即，色氨酸的添加量为0.075kg。（5）静置第二混合液20min，然后向第二混合液中添加纯度为20%的NAD激酶继续反应25min得到第三混合液。其中，NAD激酶的添加量为腺苷重量的0.005%。即，0.000075kg。（6）静置第三混合液30min，然后用磷酸调PH为2.5得第四混合液。（7）对第四混合液进行离心，取上清液，上清液经过离子交换柱处理后，再依次采用低盐洗脱、高盐洗脱，收集全部溶液，接着经纳滤浓缩15倍，即得辅酶混合溶液1。其中，离子交换柱处理、低盐洗脱、高盐洗脱、纳滤浓缩均采用常规方式，不再赘述。实施例2辅酶混合溶液的制备方法，依次包括以下步骤：（1）取含水量为40%的酿酒酵母。本实施例中，该酿酒酵母采用普通酿酒酵母。对酿酒酵母进行超声波破碎60min得到破碎酵母。本实施例中，取100kg破碎酵母进行后续步骤。（2）向破碎酵母中按破碎酵母重量2%的重量添加腺苷，之后加热到37°C形成混合料。即，腺苷的添加量为2kg。（3）取硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖作为辅料，将辅料和混合料添加到水中，且采用磷酸调节PH为6.7，加热到37°C后，得到第一混合液。其中，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别为破碎酵母重量的0.2%、2%、5%，水的重量为破碎酵母重量的1.5倍。即，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别是0.2kg、2kg、5kg，水为150kg。（4）继续搅拌第一混合液50min后，向第一混合液中添加色氨酸，搅拌反应50min得到第二混合液。其中，色氨酸的添加量按腺苷重量的10%。即，色氨酸的添加量为0.2kg。（5）静置第二混合液30min，然后向第二混合液中添加纯度为30%的NAD激酶继续反应30min得到第三混合液。其中，NAD激酶的添加量为腺苷重量的0.01%。即，0.0002kg。（6）静置第三混合液50min，然后用磷酸调PH为3得第四混合液。（7）对第四混合液进行离心，取上清液，上清液经过离子交换柱处理后，再依次采用低盐洗脱、高盐洗脱，收集全部溶液，接着经纳滤浓缩20倍，即得辅酶混合溶液2。其中，离子交换柱处理、低盐洗脱、高盐洗脱、纳滤浓缩均采用常规方式，不再赘述。实施例3辅酶混合溶液的制备方法，依次包括以下步骤：（1）取含水量为50%的酿酒酵母。本实施例中，本实施例中，该酿酒酵母采用新鲜啤酒酵母。即，生产出之后，在不超过10min内取出的啤酒酵母。对酿酒酵母进行超声波破碎120min得到破碎酵母。本实施例中，取100kg破碎酵母进行后续步骤。（2）向破碎酵母中按破碎酵母重量2.5%的重量添加腺苷，之后加热到40°C形成混合料。即，腺苷的添加量为2.5kg。（3）取硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖作为辅料，将辅料和混合料添加到水中，且采用磷酸调节PH为7，加热到40°C后，得到第一混合液。其中，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别为破碎酵母重量的0.25%、2.5%、6%，水的重量为破碎酵母重量的2倍。即，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别是0.25kg、2.5kg、6kg，水为200kg。（4）继续搅拌第一混合液60min后，向第一混合液中添加色氨酸，搅拌反应60min得到第二混合液。其中，色氨酸的添加量按腺苷重量的15%。即，色氨酸的添加量为0.375kg。（5）静置第二混合液40min，然后向第二混合液中添加纯度为40%的NAD激酶继续反应35min得到第三混合液。其中，NAD激酶的添加量为腺苷重量的0.015%。即，0.000375kg。（6）静置第三混合液60min，然后用磷酸调PH为3.5得第四混合液。（7）对第四混合液进行离心，取上清液，上清液经过离子交换柱处理后，再依次采用低盐洗脱、高盐洗脱，收集全部溶液，接着经纳滤浓缩25倍，即得辅酶混合溶液3。其中，离子交换柱处理、低盐洗脱、高盐洗脱、纳滤浓缩均采用常规方式，不再赘述。实施例4与实施例1的区别仅在于：所用酿酒酵母为普通酿酒酵母。制备出辅酶混合溶液4。实施例5与实施例2的区别仅在于：所用酿酒酵母为新鲜啤酒酵母。即，生产出之后，在不超过10min内取出的啤酒酵母。制备出辅酶混合溶液5。实施例6与实施例3的区别仅在于：所用酿酒酵母为普通酿酒酵母。制备出辅酶混合溶液6。效果例采用常规方式对辅酶混合溶液的成分进行检测，结果见下表：辅酶混合溶液1辅酶混合溶液2辅酶混合溶液3辅酶混合溶液4辅酶混合溶液5辅酶混合溶液6ATP（mg/ml）505358555153NAD（mg/ml）2.12.5222.22.1NADP（mg/ml）55.25.25.15.25.1NADH（mg/ml）0.550.610.650.50.610.55NADPH（mg/ml）0.280.300.300.20.240.22AMP（mg/ml）0.120.150.140.10.140.15ADP（mg/ml）0.150.160.180.10.130.11由上表可知，采用本发明的辅酶混合溶液的制备方法所制备的辅酶混合溶液含ATP不少于50mg/ml、NAD不少于2mg/ml、NADP不少于5mg/ml，且含有少量NADH、NADPH、AMP、ADP，可以作为酶化学反应的辅酶溶液。以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的
技术领域：
，均同理包括在本发明的专利保护范围内。当前第1页1 2 3