1.一种创制耐热芥蓝种质的方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1. 构建含有如SEQ ID NO:1所示MBF1c基因的重组超表达载体;
S2. 将S1得到的重组超表达载体转化农杆菌,得到重组农杆菌;
S3. 用重组农杆菌转染芥蓝外植体,经培养获得转化植株,筛选得到耐热芥蓝。
2.根据权利要求1所述创制耐热芥蓝种质的方法,其特征在于,所述超表达载体的构建方法为:
S11. 利用超表达引物扩增得到MBF1c基因的ORF全长;
S12. 将S11克隆的片段连接到pBE-GFP载体,制得MBF1c基因的重组超表达载体。
3.根据权利要求2所述创制耐热芥蓝种质的方法,其特征在于,所述引物如SEQ ID NO:3~4所示,分别为:
MBF1-yxb –F: CGCGGGCCCGGGATCCATGCCGAGCAGAT;
MBF1-yxb –R: GGCGACCGGTGGATCCTTGACATGTTT。
4.根据权利要求2所述创制耐热芥蓝种质的方法,其特征在于,所述连接方法采用infusion技术。
5.根据权利要求1所述创制耐热芥蓝种质的方法,其特征在于,在农杆菌转染芥蓝外植体前,将所述芥蓝外植体放入分化培养基中,于25℃黑暗预培养2d。
6.根据权利要求1所述创制耐热芥蓝种质的方法,其特征在于,所述农杆菌转染芥蓝外植体后培养步骤如下:
S31. 外植体侵染后接种至分化培养基中,在25±1℃条件下恒温黑暗培养2d;
S32. 抑菌培养:接种于抑菌培养基中25 ℃培养3~5d;
S33. 筛选培养:接种于卡那霉素筛选培养基上,每两周继代一次,继代2~3次,直到只有少许外植体能在筛选培养基上长出抗性芽,而大部分外植体在含卡那霉素的筛选培养基上褪绿,变黄白化为止;
S34. 生根培养:当分化的不定芽伸长至1.5~2.5 cm时,将其自基部切下,接种于生根培养基中诱导其生根,炼苗2~3 d,移栽获得抗性芥蓝苗。
7.根据权利要求6所述创制耐热芥蓝种质的方法,其特征在于,所述重组农杆菌转染芥蓝外植体时的OD600为0.4~0.8,转染时间为9min。
8.根据权利要求6所述创制耐热芥蓝种质的方法,其特征在于,所述卡那霉素浓度为10mg/L。
9.根据权利要求6所述创制耐热芥蓝种质的方法,其特征在于,所述芥蓝外植体为无菌带柄子叶和下胚轴。
10.根据权利要求9所述创制耐热芥蓝种质的方法,其特征在于,所述无菌带柄子叶和下胚轴获得方法为:将芥蓝种子经75%酒精、2%次氯酸钠消毒后,用无菌水浸泡,倒去无菌水,吸去种子表面的水分,在25~28℃黑暗条件下培养2d,然后把种子取出放到25℃、光照2000 lx 14 h/d培养条件下培养,待芥蓝小苗子叶展平时切下子叶和下胚轴即可。