1.一种H5亚型禽流感病毒的增殖方法,其特征在于,所述的方法包括如下的步骤:
1)取H5亚型禽流感病毒用病毒稀释液进行稀释后接种10日龄的SPF鸡胚,在36℃培养,然后收获72h未死亡鸡胚的尿囊液,收集尿囊液,置-40℃保存;
2)将步骤1)收集的尿囊液再用病毒稀释液进行10倍倍比稀释,选取10-6~10-9范围稀释度的病毒液接种10日龄SPF鸡胚,置35.5℃培养,收获72h未死亡胚尿囊液,再取高稀释度且HA效价最高的尿囊液混合后作为种子液。
3)按照步骤3)的方法对步骤2)收集的种子液连续传代4次,再取高稀释度且HA效价为10log2、9log2、10log2的尿囊液混合,获得最终制备疫苗用的病毒液。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的H5亚型禽流感病毒,为Re-6、Re-7、Re-8株中的任一种或几种。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的病毒稀释液,是添加氨基酸混合物和维生素混合物的磷酸缓冲液。
4.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述的磷酸缓冲液的配比如下:1.56g的NaH2PO4·2H2O,3.58g的Na2HPO4·12H2O,9g的Nacl,加水至1000ml。
5.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述的病毒稀释液中氨基酸混合物的质量百分比为0.3%,维生素混合物的质量百分比为0.5%。
6.如权利要求3或5所述的方法,其特征在于,所述的氨基酸混合物的配比如下:40%天冬氨酸、30%脯氨酸、30%谷氨酰胺。
7.如权利要求3或5所述的方法,其特征在于,所述的维生素混合物的配比如下:40%维生素B3、30%维生素B1和30%维生素B7。
8.一种H5亚型禽流感病毒灭活疫苗的制备方法,其特征在于,所述的方法中使用的病毒液是使用权利要求1所述的方法制备的。
9.一种H5亚型禽流感病毒灭活疫苗的制备方法,其特征在于,所述的方法包括如下的步骤:
1)油相制备:取兽用白油95份,硬脂酸铝1份,置于油相制备罐中加热至80℃后,再加5份的司本-80,至温度达到115℃时,维持30min,冷却后备用;
2)水相制备:将病毒液灭活后加入水相中,取灭菌后的5份吐温-80,加入配液罐中,同时加入病毒液95份,搅拌20~30min,使吐温-80完全溶解;
所述的病毒液是使用权利要求1所述的方法制备的;
3)乳化:取油相2份放于高速剪切机内,开动电机慢速转动搅拌,同时加入水相1份,以10000r/min,乳化5分钟,乳化后,取10ml,以3000r/min离心15分钟完成制备。