生物活性真菌的制作方法

文档序号:15303521发布日期:2018-08-31 20:39阅读:735来源:国知局
本发明涉及真菌、特别是轮层炭壳属(daldinia)属种的真菌性内生菌,由真菌产生的化合物,真菌的用途,由真菌产生的化合物和类似化合物的用途,以及相关方法。
背景技术
::微生物代表了在一系列工业领域中具有潜在应用的基因及化合物的宝贵来源。除了在环境净化以及在食品和化妆品的生产中的用途以外,科学文献还提供了大量作为抗生素、免疫抑制剂、抗癌剂、降胆固醇药物和农用化学品的主要来源的微生物。一种相对而言还未被开发的名为内生菌的微生物群体——其位于活体植物的组织中——为可给社会、尤其是农业带来重要益处的新化合物和基因提供了特别多样的来源。内生菌通常与其宿主形成共生关系,其中内生菌常常通过产生防御化合物而使宿主的适应性增强。同时,宿主植物为内生菌提供受保护的环境和营养素的益处。已开发且商业化的生物防护内生菌包括产生杀虫生物碱的neotyphodium物种,所述杀虫生物碱包括波胺(peramine)(吡咯并吡嗪)和黑麦草碱(吡咯里西啶(pyrrolizidine))。这些化合物可以在植物中积累到高的水平,它们在植物中用作对抗一系列昆虫害虫的有效摄食抑制剂。杀虫化合物——绿僵菌素(destruxin)——也已被明确鉴定为真菌的次级代谢产物。真菌的另一种抗微生物化合物是哌珀霉素(peptaibol),其由绿木霉(trichodermavirens)、欧洲栓皮栎(quercussuber)和trichodermacitrinoviridae产生,其显示出对一系列植物病原体——包括biscogniauxiamediterranea和apiognomoniaquercine——的抗真菌活性。最近的发现突显出内生菌应用的多样性,例如在能源(例如生物燃料)领域和农业领域中,其中在农业领域中已经鉴定出产生作为熏蒸剂应用的挥发性杀生物代谢物的真菌物种。例如,来自于洪都拉斯(honduras)的锡兰肉桂(cinnamomumzeylanicum)的真菌muscodoralbus产生了一组有效对抗土传病原体的挥发性抗微生物化合物,并且这使得开发了市售制品,所述市售制品已被评估为土壤熏蒸的生物替代品(例如真菌熏蒸剂)。此外,发现内生真菌ascocorynesarcoides——其产生在柴油、汽油和生物柴油中常见的各种烃——为人类提供了化石燃料的潜在替代品。对替代性土壤和检疫用熏蒸剂进行鉴定的需求日益增加,这是因为许多化学品都存在环境或抗性问题。例如,广泛使用的熏蒸剂溴甲烷已被鉴定为重要的臭氧消耗物,它使南极臭氧层空洞恶化,导致在南半球中紫外线照射增加和皮肤癌的发病率更高。此外,多用途熏蒸剂磷化氢已显示出在熏蒸后昆虫种群的抗性发生率增加,这在全球范围内具有生物安全风险和市场准入问题(例如储存谷物)。据估计,最高达100万内生生物体可能具有为农业、特别是在害虫和病害管理领域中提供巨大利益的基因和化合物。因此,需要分离和鉴定这些内生菌,并表征发挥其活性的化合物。本发明的目的是克服或至少缓解与现有技术相关的一种或多种困难或缺陷。技术实现要素:本专利申请记载了轮层炭壳属种的真菌,并且记载了所述真菌和由此产生的化合物,及其类似物的应用,特别是在对抗重要的农业害虫和病原体方面,它们具有广谱活性。对发挥活性的抗菌化合物进行表征。在一方面,本发明提供了一种基本上纯化或分离的轮层炭壳属属种的真菌。优选地,所述真菌由轮层炭壳属种(u254)组成。代表性样本于2015年9月22日以登录号v15/028236保藏于国家度量学会(nationalmeasurementinstitute)中。“基本上纯化的”意指真菌不含其他生物体。因此,该术语包括例如无菌培养中的真菌。优选地,真菌的纯度为至少约90%,更优选纯度为至少约95%,甚至更优选纯度为至少约98%。术语“分离的”意指将真菌从其原生环境中(例如,如果它是天然存在的,则为自然环境)移出。例如,存在于活体植物中的天然存在的真菌未被分离,但是与在天然系统中的某些或全部共存材料分开的相同真菌是经分离的。在其自然环境中,真菌可为内生菌,即在植物内共生生存。或者,真菌可为附生菌,即附着于植物上或在植物上生长。真菌可为利用有机碳而生长的异养生物,更具体而言为通过消耗腐质而获得营养素的腐生生物。本发明的真菌在其自然环境中可以与海桐(pittosporum)属植物相关联。在一个优选的实施方案中,所述海桐属植物是物种二色海桐(pittosporumbicolor)植物。例如,在2015年9月22日以登录号v15/028236保藏于国家度量学会的轮层炭壳属种分离株(u254)是由位于澳大利亚维多利亚州的亚拉山脉(yarraranges)内的凉爽温带雨林中的物种二色海桐植物分离得到。在本文中,“与......相关联”意指真菌生活在植物上、植物内或与植物非常接近的地方。例如,它可为内生的,例如生活在植物的内部组织内,或附生的,例如在植物外部生长。因此,在第二方面,本发明提供了一种从海桐属植物、优选物种二色海桐植物中基本上纯化或分离的轮层炭壳属属种真菌。在一个优选的实施方案中,将轮层炭壳属属种真菌作为轮层炭壳属种分离株(u254),于2015年9月22日以登录号v15/028236保藏于国家度量学会中。在本发明的第三方面,提供了一种培养轮层炭壳属属种真菌的方法。所述方法可以包括使所述真菌在含有碳水化合物来源的培养基中生长。在一个优选的实施方案中,轮层炭壳属属种真菌可如上所述。碳水化合物的来源可以是淀粉/糖基琼脂或肉汤如马铃薯葡萄糖琼脂(pda)、马铃薯葡萄糖肉汤或半强度马铃薯葡萄糖琼脂(hpda),或基于谷物的琼脂或肉汤如燕麦琼脂(oa)或燕麦肉汤。碳水化合物的其他来源可包括内生菌琼脂(endo)、含20%蔗糖的murashige和skoog(ms-suc)、半v8汁/半pda(v8pda)、水琼脂(wa)和酵母麦芽提取物琼脂(yme)。在一个优选的实施方案中,所述真菌可在包含马铃薯葡萄糖或燕麦的培养基中培养,所述培养基为例如pda、hpda、oa、马铃薯葡萄糖肉汤、燕麦肉汤或yme。优选的培养基可以选自oa、pda和yme中的一种或多种。最优选地,所述真菌可在包含燕麦的培养基中培养。真菌可在需氧或厌氧条件下,例如微需氧条件下培养。真菌可培养约1至约100天,更优选约1至约50天,更优选约1至约10至20天。真菌可在黑暗和/或光照条件下培养。例如,真菌可在持续的黑暗中,或者在约12小时黑暗和约12小时光照的方案下,或者在约12小时暗光和约12小时黑暗的方案下培养。优选地,真菌在持续的黑暗中培养。真菌也可在恒温的条件下,或在一定温度范围的条件下培养。优选地,真菌在室温下培养。在一个优选的实施方案中,真菌可在生物反应器中培养。“生物反应器”意指支持生物活性环境的设备或系统,例如在其中实施涉及本发明的真菌和/或其产物的化学过程的容器。所述化学过程可为需氧或厌氧的。生物反应器的体积尺寸可为毫升至立方米,例如约50毫升至约50,000升。生物反应器可以通过分批培养、分批补料培养、灌注培养或连续培养来操作,例如在搅拌罐式生物反应器中的连续培养。培养在生物反应器中的真菌可为悬浮或固定化的。在一个优选的实施方案中,所述方法可以包括另一步骤:从真菌细胞中、从培养基中或从与培养基或真菌相关联的空气空间中回收一种或多种由真菌产生的有机化合物。例如,有机化合物可从细胞内组织中、从真菌可能分泌液体于其中的培养基中或从真菌可能分泌蒸气于其中的空气空间中回收。最优选地,有机化合物可从真菌可能分泌蒸气于其中的空气空间中回收。蒸气可由真菌直接产生或由在气相与液相之间转换的分泌液体产生。回收有机化合物的步骤优选通过从培养基中分离细胞,或捕获与培养基或真菌相关联的蒸气来进行。然后优选通过选自气相色谱法、液相色谱法、分馏、低温蒸馏、膜分离和吸收色谱法(如压力、真空或变温吸附)的方法分离或纯化有机化合物。有机化合物可以通过质谱鉴定。优选的方法包括使用在70ev下以电子碰撞电离模式操作的三重四极质量选择性检测器。捕获可以在任何适当的质量范围内进行,例如对于小化合物,质量范围为m/z29至330,其中扫描时间为200毫秒。这可包括与参考文库(例如nist)进行质量碎片模式的比较。质谱仪可以与气相色谱仪联用(即gc-ms)。“有机化合物”意指化学化合物,其分子含有元素碳。在一个优选的实施方案中,有机化合物可以是烃如挥发性烃或液态烃。最优选地,有机化合物可以是挥发性烃。“烃”意指包含特别是元素碳和氢的有机化合物。在本文中,术语“挥发性的”意指可以在标准实验室温度和压力下蒸发或升华的有机化合物。挥发性有机化合物包括具有高蒸气压、低沸点和/或低分子量的那些。在一个优选的实施方案中,有机化合物的分子量可为约16至约500g/摩尔。优选地,有机化合物的分子量为约16至约400g/摩尔,更优选约16至约330g/摩尔。因此,在一个优选的实施方案中,有机化合物可选自下述中的一种或多种:(a)由以下物质组成的组:乙醛、戊烷、乙醇、3-戊醇、丙酮、2,3-丁二酮、异丁醇、乙酸乙酯、异戊醛、5,5-二甲基-1,3-环戊二烯、5,5-二甲基-1,3-环戊二烯、二环[4.1.0]庚-2-烯、1-甲基-1,4-环己二烯、(z)-3-甲基-1,3,5-己三烯、甲苯、4-甲基苯酚、3-甲基-1-丁醇、2-甲基-1-丁醇、(1z)-3-甲基-1,3,5-己三烯、(2z)-3-甲基-1,3,5-己三烯、对二甲苯、苯乙烯、二甲基环戊二烯、1,4-环己二烯、4-庚炔-2-醇、4-乙基-1-辛炔-3-醇、2,2,4,6,6-五甲基-庚烷、苯乙醇、愈创木烯、[1s-(1α,4α,7α)]-1,2,3,4,5,6,7,8-八氢-1,4,9,9-四甲基-4,7-桥亚甲基甘菊环(methanoazulene)、(e)-2-戊烯、(z)-2-戊烯、1-甲基-环己烯、3-甲基-环己烯、三环烯、α-蒎烯、1-异丙基-3-甲基环己烷、p-薄荷-3-烯、1-甲基-4-(1-甲基乙基)-环己烯、2-蒈烯、p-薄荷-1-烯、甲基异丙基苯、萜类和c7脂族/芳族不饱和烃;以及(b)大致具有下述特征的化合物,在通过质谱法分析时,其基峰m/z选自:43.2、59.1、67.0、68.1、71.1、79.0、79.1、81.0、82.0、91.0、95.0、97.0、98.0、108.0、109.9、115.0、124.0、132.9和192.8,或基峰为上述任意值±0.1。在一个更优选的实施方案中,有机化合物可选自下述中的一种或多种:(a)由以下物质组成的组:乙醛、戊烷、乙醇、3-戊醇、丙酮、乙酸乙酯、异戊醛、1-甲基-1,4-环己二烯、甲苯、4-甲基苯酚、3-甲基-1-丁醇、2-甲基-1-丁醇、苯乙烯、苯乙醇、(e)-2-戊烯、(z)-2-戊烯、1-甲基-环己烯、3-甲基-环己烯、三环烯、α-蒎烯、1-异丙基-3-甲基环己烷、p-薄荷-3-烯、1-甲基-4-(1-甲基乙基)-环己烯、2-蒈烯、p-薄荷-1-烯、甲基异丙基苯、萜类和c7脂族/芳族不饱和烃;以及(b)大致具有下述特征的化合物,在通过质谱法分析时,其基峰m/z选自:43.2、59.1、67.0、79.0、79.1、91.0、95.0、97.0和108.0,或基峰为上述任意值±0.1。在一个甚至更优选的实施方案中,有机化合物可选自下述中的一种或多种:乙醛、3-戊醇、异戊醛、3-甲基-1-丁醇、2-甲基-1-丁醇和1,4-环己二烯。即,至少一种有机化合物可为上述中的一种或上述任意两种或更多种或全部的结合物。例如,优选的结合物包括异戊醛和3-戊醇,以及异戊醛和3-戊醇中的任一种与乙醛、1,4-环己二烯和2-甲基-1-丁醇中的任意一种或多种。在本文中,“基峰”意指在通过质谱法分析化合物而获得的质谱中最强或最高的峰。化合物可以基峰为特征。通过质谱法对化合物进行分析优选如上所述进行。可以通过基峰表征的有机化合物也可以由质谱中显著的次峰来表征。优选的显著的次峰包括表3中所列的那些。在另一方面,本发明提供了一种产生一种或多种有机化合物的方法,所述方法包括在适合产生所述有机化合物的条件下,将轮层炭壳属属种真菌在培养基中培养。在适合产生所述有机化合物的条件下,在培养基中培养真菌可如上文所述。优选有机化合物为如上文所述的化合物。在另一个优选的实施方案中,所述方法可包括如上文所述,将产生的一种或多种有机化合物进行回收的另一步骤。因此,在其他方面,本发明提供了由轮层炭壳属属种的真菌产生的有机化合物。在优选的实施方案中,有机化合物通过如上所述的方法产生,所述方法包括在适合产生所述有机化合物的条件下,将轮层炭壳属属种真菌在培养基中培养。优选有机化合物如上文所述。因此,本发明至少部分基于这一发现:轮层炭壳属属种的真菌产生有机化合物。本发明还基于这一发现:那些化合物和类似化合物具有出人意料的性质以及各种有益用途。因此,在本发明的其他方面,提供了由轮层炭壳属属种的真菌产生的有机化合物作为生物燃料或生物燃料前体的用途,在生物熏蒸或生物保护中的用途,或在化妆品或制药工业中(例如作为表面活性剂)的用途。在一个优选的实施方案中,有机化合物可用于生物熏蒸或生物保护中。例如,有机化合物可以用作熏蒸剂。特别地,有机化合物可用于检疫及装运前熏蒸(qps)、建筑用(structural)熏蒸或土壤熏蒸。在一个优选的实施方案中,本发明提供了一种含有由轮层炭壳属属种的真菌产生的有机化合物的熏蒸剂。有机化合物可用于熏蒸各种物品,包括但不限于储存的谷物、土壤、木材、建筑物、新鲜农产品和进/出口商品。含有本发明有机化合物的熏蒸剂可以通过任何合适的方法施用。施用熏蒸剂的合适方法为本领域技术人员所熟知。例如,可通过直接施用于熏蒸区域和/或待熏蒸的物品来施用含有本发明有机化合物的熏蒸剂。这可包括喷雾、充气、浊化(clouding)、润湿、喷射、升华和喷粉进行的施用。例如,含有本发明有机化合物的熏蒸剂可以通过直接喷射到熏蒸区域来施用。施用可在有或没有载体气体如二氧化碳和空气的条件下,及在加热或不加热条件下进行。施用也可以在有或没有粘合剂如铝、锌和钙的金属粘合剂的情况下,通过粒化形式的潮湿活化来进行。有机化合物可以有效地抵抗害虫和病害,包括但不限于昆虫如谷蠹(grainborer)和谷盗(grainbeetle),包括选自以下的谷蠹和谷盗:谷蠹(lessergrainborer)(谷蠹(rhyzoperthadominica))、锯谷盗(sawtoothgrainbeetle)(锯谷盗(oryzaephilussuinamensis))、赤拟谷盗(rustredflourbeetle)(赤拟谷盗(triboliumcastaneum))和扁谷盗(flatgrainbeetle)(锈赤扁谷盗(crryptolestesferrugineus))。与常用的熏蒸剂比较,它们可具有选自以下的益处:对环境更安全且损害更小、不容易出现抗性、起作用更快。例如,在熏蒸约3至约10天后,更优选熏蒸约3至约7天后,昆虫死亡率可是明显的。对于目前使用的熏蒸剂,如磷化氢,昆虫死亡率直到熏蒸达约20天才明显。如上所述,一种或多种有机化合物可以由轮层炭壳属属种的真菌产生;例如通过培养轮层炭壳属属种的真菌,并且从真菌细胞中、从培养基中或从与培养基或真菌相关联的空气空间中回收一种或多种由所述真菌产生的有机化合物。或者,有机化合物可为合成的或以其他方式获得的,并且其组合物可根据需要通过混合而制成。例如,可提供一种或多种有机化合物,其与由轮层炭壳属属种真菌所生产的一种或多种有机化合物基本相同或是其类似物,并且可将其与其他组分混合以形成组合物。所述一种或多种有机化合物可通过合适的化学反应来合成。根据所需应用,其他组分可包括例如常用于组合物中的其他有机化合物或其他材料,如粘合剂、载体、推进剂、共沸物、表面活性剂等。这些制备材料和方法为本领域技术人员所熟知。因此,在其他方面,本发明提供了一种有机化合物,在用于生物熏蒸或生物保护时,所述有机化合物与通过在适于产生所述有机化合物的条件下在培养基中培养轮层炭壳属属种真菌而产生的有机化合物或其类似物基本相同。本发明还提供了一种用作熏蒸剂的组合物,其包含至少一种有机化合物,其中所述至少一种有机化合物与由轮层炭壳属属种真菌产生的一种或多种化合物或其类似物基本相同,所述一种或多种化合物由轮层炭壳属属种真菌在适于产生所述有机化合物的条件下在培养基中产生。本发明还提供了一种杀生物组合物,其包含至少一种有机化合物,其中所述至少一种有机化合物与通过在适于产生所述有机化合物的条件下在培养基中培养轮层炭壳属属种真菌而产生的一种或多种化合物或其类似物基本相同。“基本相同”意指例如相同的,或其立体异构体、区域异构体、骨架异构体、位置异构体、官能团异构体、结构异构体、构象异构体、互变异构体或其他异构体、同位素变体、衍生物或盐。“类似物”意指在某一结构部分上不同的类似化合物。该术语包括“基本相同”的化合物和衍生物,以及其他类似化合物。“衍生物”意指由另一种化合物获得或认为由另一种化合物衍生的有机化合物。衍生物的实例包括其中一个或多个键的饱和度已被改变(例如,单键已被改变为双键或三键)的化合物或其中一个或多个原子被不同原子或官能团替换的化合物。不同的原子和官能团的实例可以包括,但不限于,氢、卤素、氧、氮、硫、羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、胺、酰胺、酮和醛。例如,3-羟基-2-丁酮(acetoin)是乙酸乙酯的结构异构体(即相同的分子式)。类似地,3-羟基-2-丁酮与乙酸乙酯的不同在于某一结构部分(即,-och2ch3相比于-chohch3),因此可被认为是乙酸乙酯的类似物。通过将轮层炭壳属属种真菌在适于产生所述有机化合物的条件下在培养基中培养而产生的有机化合物——其中本发明的此方面的有机化合物与其或其类似物基本相同——可为如上文所述的有机化合物,可如上文所述产生。在一个优选的实施方案中,至少一种有机化合物为挥发性有机化合物。在另一个优选的实施方案中,至少一种有机化合物的分子量为约16至约500g/摩尔,更优选约16至约400g/摩尔,并且甚至更优选约16至约330g/摩尔。因此,优选至少一种有机化合物可选自:(a)由以下物质组成的组:乙醛、戊烷、乙醇、3-戊醇、丙酮、2,3-丁二酮、异丁醇、乙酸乙酯、异戊醛、5,5-二甲基-1,3-环戊二烯、5,5-二甲基-1,3-环戊二烯、二环[4.1.0]庚-2-烯、1-甲基-1,4-环己二烯、(z)-3-甲基-1,3,5-己三烯、甲苯、4-甲基苯酚、3-甲基-1-丁醇、2-甲基-1-丁醇、(1z)-3-甲基-1,3,5-己三烯、(2z)-3-甲基-1,3,5-己三烯、对二甲苯、苯乙烯、二甲基环戊二烯、1,4-环己二烯、4-庚炔-2-醇、4-乙基-1-辛炔-3-醇、2,2,4,6,6-五甲基-庚烷、苯甲醛、苯乙醇、愈创木烯、[1s-(1α,4α,7α)]-1,2,3,4,5,6,7,8-八氢-1,4,9,9-四甲基-4,7-桥亚甲基甘菊环(methanoazulene)、(e)-2-戊烯、(z)-2-戊烯、1-甲基-环己烯、3-甲基-环己烯、三环烯、α-蒎烯、1-异丙基-3-甲基环己烷、p-薄荷-3-烯、1-甲基-4-(1-甲基乙基)-环己烯、2-蒈烯、p-薄荷-1-烯、甲基异丙基苯、萜类、c7脂族/芳族不饱和烃、4-羟基-2-丁酮、丁酸、亚甲基环己烷、4-甲基环己烷、1,3-环庚二烯、丁醛、螺[2.4]庚-4,6-二烯和3-羟基-2-丁酮;以及(b)大致具有下述特征的化合物,在通过质谱法分析时,其基峰m/z选自:43.2、59.1、67.0、68.1、71.1、79.0、79.1、81.0、82.0、91.0、95.0、97.0、98.0、108.0、109.9、115.0、124.0、132.9和192.8,或基峰为上述任意值±0.1。在一个更优选的实施方案中,至少一种有机化合物可选自:(a)由以下物质组成的组:乙醛、戊烷、乙醇、3-戊醇、丙酮、乙酸乙酯、异戊醛、1-甲基-1,4-环己二烯、甲苯、4-甲基苯酚、3-甲基-1-丁醇、2-甲基-1-丁醇、苯乙烯、苯甲醛、苯乙醇、(e)-2-戊烯、(z)-2-戊烯、1-甲基-环己烯、3-甲基-环己烯、三环烯、α-蒎烯、1-异丙基-3-甲基环己烷、p-薄荷-3-烯、1-甲基-4-(1-甲基乙基)-环己烯、2-蒈烯、p-薄荷-1-烯、甲基异丙基苯、萜类和c7脂族/芳族不饱和烃、4-羟基-2-丁酮、丁酸、亚甲基环己烷、4-甲基环己烷、1,3-环庚二烯、丁醛、螺[2.4]庚-4,6-二烯和3-羟基-2-丁酮;以及(b)大致具有下述特征的化合物,在通过质谱法分析时,其基峰m/z选自:43.2、59.1、67.0、79.0、79.1、91.0、95.0、97.0和108.0,或基峰为上述任意值±0.1。在一个甚至更优选的实施方案中,至少一种有机化合物可选自下述中的一种或多种:乙醛、3-戊醇、异戊醛、3-甲基-1-丁醇、2-甲基-1-丁醇、1,4-环己二烯、4-羟基-2-丁酮、丁酸、亚甲基环己烷、4-甲基环己烷、1,3-环庚二烯、丁醛、螺[2.4]庚-4,6-二烯和3-羟基-2-丁酮。在另一个更优选的实施方案中,至少一种有机化合物可选自乙醛、3-戊醇、异戊醛和3-羟基-2-丁酮中的一种或多种。即,至少一种有机化合物可为上述中的一种或上述任意两种或更多种或全部的结合物。例如,优选的结合物包括异戊醛和/或3-羟基-2-丁酮与3-戊醇,以及异戊醛、3-羟基-2-丁酮和3-戊醇中的任意一种或多种与乙醛、1,4-环己二烯、2-甲基-1-丁醇、1,3-环庚二烯和4-甲基环己烯中的任意一种或多种。在另一方面,本发明提供了一种用于抑制昆虫或微生物的方法,所述方法包括将昆虫或微生物暴露于如上所述的有机化合物、用作熏蒸剂的组合物或杀生物组合物。在一个优选的实施方案中,昆虫为储存谷物的害虫,包括但不限于赤拟谷盗(triboliumcastaneum)、谷蠹(rhyzoperthadominica)、锈赤扁谷盗(cryptolestesferrugineus)和锯谷盗(oryzaephilussuinamensis)。同样在一个优选的实施方案中,微生物为选自镰孢属(fusarium)、葡萄孢属(botrytis)、链格孢属(alternaria)或丝核菌属(rhizoctonia)中的一种或多种的真菌,例如物种轮枝样镰刀菌(fusariumverticillioides)、灰葡萄孢(botrytiscinerea)、链格孢(alternariaalternata)和禾谷丝核菌(rhizoctoniacerealis),以及假单胞菌属(pseudomonas)的细菌,如物种丁香假单胞菌(pseudomonassyringae)。如本文所用,“昆虫”和“微生物”被认为包括种群。对昆虫或微生物的抑制可为正常活性减小的形式。对于昆虫,这可包括例如预防或减少昆虫增殖、生长或繁殖。在优选的实施方案中,所述杀生物组合物例如通过上述熏蒸导致昆虫死亡。昆虫暴露于每升环境(例如容器、器皿、仓库等)中的有机化合物的量可为约100至约200,优选约50至约200,更优选约20至约200微升。对于微生物,抑制可包括预防或减少增殖或生长。例如,在暴露(例如熏蒸)约1至约10天后,更优选在暴露约1至约4天后,生长的减少是明显的。基于上面提到的保藏物,轮层炭壳属属种的真菌的整个基因组均以引用的方式纳入本文。在一个优选的实施方案中,于2015年9月22日以登录号v15/028236在国家度量学会保藏的轮层炭壳属种(u254)的整个基因组均以引用的方式纳入本文。现在将参考所附实施例和附图对本发明进行更详细地描述。然而,应该理解以下描述仅是说明性的,决不应该将其理解为对上述的本发明的一般性的限制。附图说明图1a-1f示出了系统发生树,其示出了轮层炭壳属种(u254)和光轮层炭壳菌(d.eschscholtzii)、黑轮层炭壳(d.concentrica)、蔡氏轮层炭壳菌(d.childiae)/d.pyrenaica、光泽轮层炭壳(d.vernicosa)/轮层炭壳(d.loculata)/d.novae-zelandiae、d.petriniae,以及其各自同宗(allies)的系统发生关系。分离株u254以图1b中的实心黑色正方形表示。图2示出在昆虫试验中,暴露于轮层炭壳属种(u245)之后,赤拟谷盗(triboliumcastaneum)的死亡百分比,所述轮层炭壳属种(u245)生长在不同培养基中(棒形从左至右为:hpda-半强度马铃薯葡萄糖琼脂、oa-燕麦琼脂、pda、endo-内生菌琼脂、ms-suc-含20%蔗糖的murashige和skoog、v8pda-半v8汁/半pda、wa-水琼脂、yme-酵母麦芽提取物琼脂)。棒形表示在5%显著性水平下的最小显著差异(lsd)。具体实施方式实施例1——内生菌鉴定在澳大利亚的维多利亚州和北部地区开展了广泛的内生菌发现计划。从100多种植物物种中分离出1000多种内生真菌。生物活性的初步筛选鉴定了约250种具有不同程度的生物活性的分离株。实施例2——轮层炭壳属种(u254)的分离轮层炭壳属种(u254)的单一内生真菌分离株采集自澳大利亚维多利亚州的亚拉山脉内的凉爽温带雨林。所述分离株作为来自亚拉山脉中的二色海桐的叶部组织的内生菌进行采集。宿主植物海桐属由大约200个物种构成,广泛分布在澳大利亚、大洋洲、东亚和非洲部分地区。许多物种在全球范围内广泛栽培,并作为观赏植物种植。二色海桐是在成熟时,高度通常为3至10米的灌木或乔木。叶互生,常常为狭长卵形到狭长椭圆形,通常3至8厘米长,5至18毫米宽。叶缘为平坦的至反向弯曲的。叶端为微尖至钝形。下部的叶面通常披有稠密的毛,并且随着年龄增长几乎不会脱落。叶柄通常长2至3毫米。花通常是在端部、单朵或少数几朵在一起。萼片通常长3至6毫米,具有少许至许多的毛。花瓣通常长8至11毫米,黄色,带有紫色-栗色斑纹。子房是毛茸茸的。蒴果为球形,常常长5至8毫米,有毛,灰色,并且在内表面上有暗色的瓣膜。种子为几个至许多个,颜色为红色。实施例3——轮层炭壳属种(u254)的形态学特征将轮层炭壳属种(u254)的菌落置于燕麦琼脂(oa)上生长,并且在3-5天内达到9厘米培养皿的边缘。它们最初带白色、毡状、无环纹(azonate)、边缘弥散,变成带有深灰色、绿色和白色色调的灰色;反面由奶油色至黄色。未观察到常规轮层炭壳属类型的共同固有的结构,而是营养型菌丝体分化成气孔结构的网络,其由黑色、厚壁、结壳菌丝构成,产生厚壁的厚膜孢子样结构,保持无菌。所述菌丝为分枝、透明和光滑的。实施例4——轮层炭壳属种(u254)的分子特征通过5.8s-its核糖体基因区域的序列同源性的比较,对轮层炭壳属种(u254)进行系统发生分析。使分离株在oa上生长,利用qiagen血液和组织试剂盒(qiagenbloodandtissuekit)按照制造商说明书(qiagen,德国),采集其中的菌丝体并且将其用于dna提取。核糖体基因区域使用包含通用引物its5(5'-ggaagtaaaagtcgtaacaagg-3')和its4(5'-tcctccgcttattgatatgc-3')的kapa2grobustpcr试剂盒来扩增。pcr条件如下:94℃,5分钟(1个循环);94℃,30秒;50℃,30秒;72℃,2分钟(35个循环);72℃,7分钟(1个循环)。然后将扩增子提交给macrogen(韩国首尔)进行纯化和测序。对ncbi核苷酸数据库(blastn-模式标本参数)进行的序列同源性搜索鉴定出密切相关的真菌以分离u254,其中轮层炭壳属物种是最接近的匹配项(例如96%)(表1)。收集这些序列和其他轮层炭壳属物种(模式标本)的序列,使用muscle算法(源自stadler等人)在mega5中进行比对。基于序列比对,使用最大似然(ml)和最大简约(mp)分析推断系统发生关系。对于ml分析,使用最邻近交换方法应用tamura-nei模型获得谱系图(phenogram)。对于mp分析,使用subtree-pruning-regrafting算法(搜索级3)获得谱系图。在这两种分析中,比对缺口和缺失数据将从数据集中删除(完全删除选项),并通过计算1000次引导复制来评估分支的可信度。系统发生树具有与stadler等人(2014)相似的拓扑结构,形成5条清晰的轮层炭壳属分化枝,其由光轮层炭壳菌(daldiniaeschscholtzii)(a)、黑轮层炭壳(daldiniaconcentrica)(b)、光泽轮层炭壳(daldiniavernicosa)(c1)、daldinianovae-zelandiae(c2)、轮层炭壳(daldinialoculata)/daldinialoculatoides(c3)、daldiniachilde/pyrenaica(d),和daldiniapetrinae(e)构成。轮层炭壳属种(u254),连同冷杉轮层炭壳(daldiniagrandis)和daldiniagelatinosa,簇生在daldinialoculatoides和轮层炭壳分化枝上(分化枝c3)(红色正方形-轮层炭壳属种u254)(图1)。尽管引导支持率低(与stadler等人,2014一致),但分离株u254显然是轮层炭壳属物种,并且可能属于daldinialoculatoides/轮层炭壳分化枝。因为它不像分化枝中的其他物种那样在体外产生变形结构,所以它是一种新的轮层炭壳属物种。表1——轮层炭壳属种(u254)与来自ncbi序列同源性检索的其他密切相关物种(模式样本)之间的核糖体基因序列的比较。实施例5——轮层炭壳属种u254的生物活性建立体外生物测定法以测试轮层炭壳属种(u254)抵抗一系列昆虫害虫(赤拟谷盗(triboliumcastaneum))和植物病原性真菌(灰葡萄孢(botrytiscinerea)、链格孢(alternariaalternata)和禾谷丝核菌(rhizoctoniacerealis))的生物活性。生物测定使用9厘米对合(split)培养皿,其具有穿过培养皿中心的不渗透隔膜,将培养皿完全分成两半。这仅允许挥发性化合物通过隔膜以抵抗测试生物体,并且防止内生菌(或其液体渗出物)与测试生物体之间的任何直接接触。对于昆虫测定,将轮层炭壳属种u254接种到培养皿中,所述培养皿含有oa、半强度马铃薯葡萄糖琼脂(hpda)、马铃薯葡萄糖琼脂(pda)、内生菌琼脂(endo)、含20%蔗糖的murashige和skoog(ms-suc)、半v8汁/半pda(v8pda)、水琼脂(wa)和酵母麦芽提取物琼脂(yme)。将含有来自内生菌的活跃生长的菌丝体的琼脂块放置在距培养皿边缘约13毫米处(即在培养皿的一半处)。使内生真菌在室温下(在黑暗中)生长6天。随后,通过将四种昆虫置于滤纸和食物来源(小麦粉)上,将昆虫害虫接种到培养皿的另一半。培养皿用低密度聚乙烯(ldpe)塑料膜(约0.01毫米厚)密封并用铝箔覆盖(即保持在黑暗中)。在3、7、10、14、18和25天后,通过测量昆虫的活动度评估生存力(非活跃——死亡;活跃——活的)。将测量结果与对照进行比较并表示为与对照相比的死亡百分比(图2)。使用如在genstat第14版中实施的anova进行数据分析。实验完全随机地进行4次平行测定。在赤拟谷盗暴露于生长在oa上的内生菌3天后,轮层炭壳属种(u254)导致其死亡率为100%。在暴露3和7天时,轮层炭壳属种(u254)在oa上的杀虫生物活性显著高于在所有其他培养基上的,在暴露10至25天时,hpda则提供等效活性(最大杀虫活性——94%)。对于植物病原性真菌测定,将轮层炭壳属种(u254)接种到含有pda的对合培养皿上。将含有来自内生菌的活跃生长的菌丝体的琼脂块放置在距培养皿边缘约13毫米处(即在培养皿的一半处)。使内生真菌在室温下(在黑暗中)生长6天。随后,通过将含有活跃生长的菌丝的琼脂块放置在距培养皿边缘约13毫米处,将植物病原性真菌接种到培养皿的另一半。培养皿用ldpe塑料膜(约0.01毫米厚)密封并用铝箔覆盖。在2、5、7和11天后,通过测量植物病原性真菌的径向生长来评估生存力。将测量结果与对照进行比较并表示为与对照相比的抑制百分比(表2)。使用如在genstat第14版中实施的anova进行数据分析。该实验完全随机地进行3次平行测定。轮层炭壳属种(u254)在所有的时间点处均能完全抑制灰葡萄孢和禾谷丝核菌的生长,而链格孢的生长最少被抑制76.3%。表2——在植物病原性真菌测定中,轮层炭壳属种(u254)对3种植物病原性真菌(灰葡萄孢、链格孢和禾谷丝核菌)的抑制百分比。实施例6——轮层炭壳属种(u254)的挥发油(volatolome)对轮层炭壳属种(u254)的培养物之上的顶部空间中的气体进行分析。将分离株在微需氧条件下培养,其包括在20ml玻璃小瓶中使真菌在oa和yme斜面上生长,其中琼脂:空气比为1:2.5。将小瓶用带有聚四氟乙烯(ptfe)隔膜的螺帽盖密封,并在室温下生长9天。进行顶空固相微萃取(spme)以捕获由轮层炭壳属种(u254)产生的挥发物。使用涂有75微米carboxen/pdms的stableflex纤维(supelco)吸附来自小瓶顶部空间的挥发物。使用专用的maestro软件通过gerstel多用途采样器进行自动采样。在开始工作之前将纤维在270℃下调理60分钟,并在每个试样之间调理30分钟。对于每个样品,将纤维插入小瓶中并且在室温下孵育7分钟以吸收挥发物,然后将纤维插入agilent7890气相色谱(gc)系统的无分流进样口中,其中内容物被热解吸(250℃下6分钟)到经由吹扫接头与agilent惰性熔融二氧化硅2米×250微米内径(无膜)(柱2)耦联的agilentdb-624毛细管柱(25米×250微米内径,1.4微米膜厚度,柱1)上,所述吹扫接头通过agilent辅助电子压力控制模块(agilentauxiliaryelectronicpressurecontrol)控制。柱温箱的程序设计如下:35℃(3分钟),以3℃/分钟至200℃,然后以25℃/分钟至250℃(2分钟)。载气为氦气,对于柱1的恒定流速为1毫升/分钟,对于柱2为1.8毫升/分钟。gc与agilent7000gc/ms三重四极质量选择性检测器(质谱仪,ms)连接,所述检测器在70ev下以电子碰撞电离模式操作。在色谱运行期间,输送管路的温度保持在280℃。源温度为280℃。在mz为29至330的质量范围内进行采集,扫描时间为200毫秒。通过使用标准化学数据库进行库比较,对由轮层炭壳属种(u254)产生的挥发物进行首次鉴定。二次确认鉴定通过比较真实标准物的质谱数据和真菌挥发物的数据来进行。在本报告中,所有化学名称都遵循标准化学数据库的命名法。在所有情况下,还分析了未接种的对照小瓶,并且将在其中发现的化合物从支持真菌生长的小瓶中出现的那些化合物中扣除。对真菌挥发物的试验性鉴定是基于与这些化学数据库中的质谱数据和真实标准物的质谱数据(在可能的情况下)相比的所观察到的质谱数据进行的。gc-ms分析(0至65分钟)鉴定出由轮层炭壳属种(u254)产生的31种挥发性代谢物,所述轮层炭壳属种(u254)于室温下,在oa和yme上生长9天(表3)。由轮层炭壳属种(u254)产生的代谢物代表许多结构类别,包括醇类(例如乙醇、3-甲基-1-丁醇)、醛类(例如乙醛、异戊醛)、酯类(例如乙酸乙酯)、萜类和c7脂族/芳族不饱和烃类以及它们的相关衍生物(c7,例如1-甲基环己烯、1-甲基-1,4-环己二烯、甲苯)。c7化合物代表挥发油内的主要结构类别,在所产生的化合物中约占三分之一。表3——对由轮层炭壳属种(u254)产生的挥发性化合物进行的gc-ms顶空分析,所述轮层炭壳属种(u254)在室温下在oa和yme上生长9天。1-碎片模式与nist库中化合物的光谱相匹配(>75%)2-碎片模式与nist库中化合物的光谱相匹配(>90%)3-碎片模式与真实标准物的光谱和保留时间相匹配+-显著性峰;++-主峰(majorpeak);+++-优势峰(dominantpeak)对于大规模的捕获,将真菌接种到120个标准oa培养皿上,并在25℃下于黑暗中孵育3天。将18.5升干燥器在150℃下烘烤3天,并在层流柜内使其冷却。在干燥器内以重叠的方式,将真菌培养皿在无盖下堆叠,以防止它们与培养皿的琼脂接触,同时允许最大的空气交换。使用ldpe塑料膜将干燥器密封并将其包裹在铝箔中(即在黑暗中)。使用其中钻有两个孔的硅橡胶塞封闭盖中的分接头(tap)开口。将两支特氟隆管穿过这些孔,一支通向干燥器底部上方约2厘米处,一支稍短的通向距离干燥器顶部约5厘米处充当空气入口。将supelcovoststack采样管(tenaxta:石油木炭,2:1)连接到入口(干燥器外部)以净化进入系统的空气。对于出口处,连接一个填充有约100克无水硫酸钠的30×5厘米玻璃柱,以除去气相中过量的水分。将第二个采样管连接到玻璃柱的末端以捕获由真菌培养物产生的挥发物(真菌挥发物捕集器,fvt)。对整个系统施加负压以产生约40-60毫升/分钟的流速,同时引导培养物顶空物质通过第二捕集器以吸附存在的任何挥发物。将系统在室温下静置7天,然后取出捕集器并置于agilent7890gc的烘箱内,并且连接至gcapc(辅助压力控制)模块。使高纯度氮气以约25毫升/分钟的初始速率通过捕集器。将一块不锈钢管连接到捕集器的出口,通入位于金属块顶部的玻璃小瓶中,金属块部分浸没在液氮中作为冷阱。将fvt在环境温度下干燥吹扫30分钟,然后加热至200℃以热解吸挥发物,所述挥发物在冷阱中回收。随后将fvt再与干燥器连接,再保持7天,并重复该过程。通过这种布置,每周回收约300-450毫克混合烃挥发物。将回收的提取物合并,并且在连接到如上所述的短惰性柱(柱2)的agilentj&wdb-624的60m(长)×0.53毫米(内径)×3微米(膜厚)(柱1)上进行分析。载气为氦气,对于柱1的恒定流速为3.8毫升/分钟,对于柱2为1.8毫升/分钟。温度的程序设计是在110℃下11分钟,然后以20℃/分钟升温到250℃(7分钟)。gc与上述agilent7000gc/ms连接。使用专用的maestro软件通过gerstel多用途采样器进行自动采样。将0.2微升回收挥发物的等分试样以5:1分流比注入分流/无分流进样口。gc-ms分析(0至65分钟)鉴定出由轮层炭壳属种(u254)产生的19种挥发性代谢物,所述轮层炭壳属种(u254)于室温下,在oa上生长14天(表4)。由轮层炭壳属种(u254)产生的代谢物代表许多结构类别,包括醇类(例如3-戊醇)、酯类(例如乙酸乙酯)、萜类和c7脂族/芳族不饱和烃类以及它们的相关衍生物(c7,例如1-甲基-1,4-环己二烯)。c7化合物代表挥发油内的主要结构类别,在所产生的化合物中约占三分之一。表4——对从轮层炭壳属种(u254)回收的挥发性化合物进行的gc-ms顶空分析,所述轮层炭壳属种(u254)于室温下,在oa上生长14天。1-碎片模式与nist库中化合物的光谱相匹配(>75%)2-碎片模式与nist库中化合物的光谱相匹配(>90%)3-碎片模式与真实标准物的光谱和保留时间相匹配+-显著性峰;++-主峰;+++-优势峰实施例7——来自轮层炭壳属种的挥发油的化合物的杀虫活性针对总共20种化学标准品,评估了它们对抗存储的谷物害虫——赤拟谷盗——的杀虫活性。这些化学标准品代表了轮层炭壳属种的挥发油中的化合物,或者这些化学标准品是这些化合物的结构类似物(表5)。生物测定在90毫米对合培养皿中进行(如实施例5)。通过将4只昆虫置于饲料(小麦粉和酵母)上,将昆虫害虫接种到培养皿的一半上。然后将一种化学标准品分成等分(5微升)并置于在培养皿的另一半上的滤纸上。立即用密封培养皿,并将其包覆于铝箔中(即在黑暗中)且保持在室温下。每天通过评估昆虫活动作为死亡率的指标来监测昆虫的死亡率。死亡率通过比较死亡的昆虫数量和培养皿中昆虫的总数量来计算,并表示为死亡率百分比(表6)。使用如在genstat第14版中实施的anova进行数据分析。对于每种内生菌,实验完全随机地进行5次平行测定。表5——由轮层炭壳属种(u254)产生的挥发性化合物(20)及其结构类似物对赤拟谷盗(t.castaneum)的杀虫活性(深灰色:100%死亡率;中灰色:36-99%死亡率;浅灰色:1-35%死亡率;白色:0%死亡率)。表6——由轮层炭壳属种产生的挥发性化合物及其结构类似物对赤拟谷盗的杀虫活性水平的分类。实施例8——来自轮层炭壳属种(u254)的挥发油中的重要化合物的杀虫剂量响应建立杀虫剂量响应测定法,以评估四种重要化合物(3-戊醇、异戊醛、3-羟基-2-丁酮和乙醛)对存储的谷物害虫——赤拟谷盗的剂量响应。生物测定在1升schott瓶中进行。通过将9-12只昆虫置于饲料(小麦粉和酵母)上,将昆虫害虫接种到生物测定中。然后将杀生物化合物分成等分进入生物测定中(体积为20-200微升),确保不与昆虫直接接触。立即用密封瓶子并使其保持在室温下。通过评估昆虫活动作为死亡率的指标,在三天暴露期间,每天都监测昆虫的死亡率。死亡率通过比较死亡的昆虫数量和生物测定中昆虫的总数量来计算,并表示为死亡率百分比。使用如在genstat第14版中实施的anova进行数据分析。对于每种内生菌,实验完全随机地进行4次平行测定。在所有测试的化合物中,3-戊醇对赤拟谷盗表现出最高的杀生物活性,其中在20-200微升范围内的任意体积在一天后均显示出100%死亡率。3-羟基-2-丁酮和异戊醛在20-200微升范围内的体积下对赤拟谷盗表现出杀生物活性,其中在50-200微升范围内的体积在暴露1天后都显示出100%死亡率。乙醛在20-200微升范围内的体积下对赤拟谷盗表现出杀生物活性,其中在100-200微升范围内的体积在暴露1天后显示出98.2-100%死亡率(表7)。表7——四种重要化合物对赤拟谷盗在暴露1天后的剂量响应(20-200微升)。实施例9——3-戊醇、3-羟基-2-丁酮和异戊醛单独的杀细菌效果,以及与来自轮层炭壳属种(u254)的挥发油中的其他重要化合物协同的杀细菌效果建立了杀细菌生物测定法,以评估最具杀虫活性的候选化合物在单独施用或与来自轮层炭壳属种的挥发油中的其他化合物协同施用时,对植物病原性细菌丁香假单胞菌的影响。通过在营养琼脂(na)上划线培养来自活跃生长的培养物(过夜)中的细菌细胞,将病原体接种到培养皿的三分之一上。然后将候选化合物分成等分(10微升——除了乙醛:由于其高挥发性而为20微升),并且置于在培养皿的另一三分之一上的滤纸上。在协同处理中,将第二种化合物(乙醛、2-甲基-1-丁醇、1,4环己二烯、1,3环庚二烯、4-甲基环己烯)添加到在培养皿的最后三分之一上的滤纸上。包括未经处理的对照,并且其不包含化合物。立即用密封培养皿并使其保持在室温下。3天后,目测评估病原体的生长,并且基于以下标准进行评分:2——与对照的生长相当;1——比对照的生长更小;0——没有生长。通过在新鲜na培养皿上由原始划痕进行传代培养,评估具有100%抑制作用的化合物结合物的抑制细菌活性或杀细菌活性。使用如在genstat第14版中实施的anova进行数据分析。对于每种化合物结合物,实验完全随机地进行4次平行测定。在单独或组合使用时,乙醛和异戊醛对丁香假单胞菌(p.syringae)均表现出高的杀细菌活性。3-羟基-2-丁酮和3-戊醇在单独使用时对丁香假单胞菌未表现出任何活性,但是在与乙醛组合时表现出高的杀细菌活性。在与乙醛、2-甲基-1-丁醇、1,4-环己二烯、1,3-环庚二烯或4-甲基环己烯组合时,异戊醛完全抑制丁香假单胞菌的生长(表8)。认为在与其他生物活性化合物一起施用时异戊醛和乙醛的增强的生物活性可归咎于化合物的不同作用模式,因为它们具有不同的结构并且来自不同的化学类别(醇、醛、烃)。表8——重要的轮层炭壳属种(u254)化合物在对丁香假单胞菌的杀生物活性方面的杀细菌和协同效果。实施例10——3-戊醇、3-羟基-2-丁酮和异戊醛单独的杀真菌活性,以及与来自轮层炭壳属种(u254)的挥发油中的重要化合物协同的杀真菌活性建立了一种杀真菌生物测定法,以评估来自轮层炭壳属种的挥发油中的重要化合物在单独施用或在与来自轮层炭壳属种的挥发油中的其他化合物协同施用时对植物病原性真菌轮枝样镰刀菌的作用。通过将含有活跃生长的菌丝的琼脂块置于pda上,将病原体接种到培养皿的三分之一上。然后将候选化合物分成等分(10微升)并且置于在培养皿的另一三分之一上的滤纸上。在协同处理中,将第二种化合物(乙醛、1,4-环己二烯、2-甲基-1-丁醇、1,3-环庚二烯、4-甲基环己烯)添加到在培养皿的最后三分之一上的滤纸上。立即用密封培养皿,并使其保持在室温下。4天后,通过测量菌落半径(在两个交替的平面上)确定病原体的生长。将测量结果与对照进行比较,并且表示为相对于对照培养皿的抑制百分比(无生长=100%)。通过将原始块放在新鲜的pda培养皿上来评估具有100%抑制作用的化合物结合物的抑制真菌活性或杀真菌活性。使用如在genstat第14版中实施的anova进行数据分析。对于每种化合物结合物,实验完全随机地进行4次平行测定。异戊醛和乙醛在分离使用或与任何测试化合物组合使用时均对轮枝样镰刀菌(f.verticillioides)表现出高的杀真菌活性,完全(100%)抑制病原体的生长(表9)。在分离使用时,3-戊醇对轮枝样镰刀菌具有中等杀真菌活性,而3-羟基-2-丁酮没有表现出活性。当与乙醛组合时,这两种化合物都显示出100%的抑制作用,当与其他化合物组合时,这两种化合物显示出不同的抑制率(7.4%至74.9%)。表9——重要的轮层炭壳属种(u254)化合物在对轮枝样镰刀菌的杀生物活性方面的杀真菌和协同效果。应理解,在不脱离如本文所概述的本发明精神的情况下,可以进行各种改变、修改和/或添加。除上下文另有要求外,本文使用的术语“包含(comprise)”及该术语的变型如“包含(comprising)”、“包含(comprises)”和“包含(comprised)”并不旨在以任何方式限制或排除其他附加物、组分、整体或步骤。本说明书对任何现有技术的引用并非、也不应当被视为承认或以任何形式暗示此现有技术在澳大利亚或任何其他管辖区中构成公知常识的一部分,或者此现有技术可被合理地预期被本领域技术人员确定、理解和/或认为是相关的。参考文献1.stadler,m.,t.,fournier,j.,decock,c.,schmieschek,b.,tichy,h.v.,&d.(2014).apolyphasictaxonomyofdaldinia(xylariaceae).studiesinmycology,77,1-143.当前第1页12当前第1页12
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