用于延长蛋白质半衰期的方法与流程

文档序号:15733700发布日期:2018-10-23 21:06阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种延长蛋白质或(多)肽半衰期的方法,所述方法包括用精氨酸替换所述蛋白质或(多)肽的一个或更多个赖氨酸残基,其中,所述赖氨酸残基与泛素C末端的甘氨酸相连。

2.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为β-调理素。

3.权利要求2所述的方法,其中,所述β-调理素具有如SEQ No.1所示的氨基酸序列,且对应于所述β-调理素的N末端第62、124、153和158位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

4.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为生长激素(GH)。

5.权利要求4所述的方法,其中,所述生长激素具有如SEQ No.10所示的氨基酸序列,且对应于所述生长激素的N末端第64、67、96、141、166、171、184、194和198位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

6.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为胰岛素。

7.权利要求6所述的方法,其中,所述胰岛素具有如SEQ No.17所示的氨基酸序列,且对应于所述胰岛素的N末端第53和88位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

8.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为干扰素-α。

9.权利要求8所述的方法,其中,所述干扰素-α具有如SEQ No.22所示的氨基酸序列,且对应于所述干扰素-α的N末端第17、54、72、93、106、135、144、154、156、157和187位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

10.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为G-CSF。

11.权利要求10所述的方法,其中,所述G-CSF具有如SEQ No.31所示的氨基酸序列,且对应于所述G-CSF的N末端第11、46、53、64和73位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

12.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为干扰素-β。

13.权利要求12所述的方法,其中,所述干扰素-β具有如SEQ No.36所示的氨基酸序列,且对应于所述干扰素-β的N末端第4、40、54、66、73、120、126、129、136、144、155和157位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

14.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为红细胞生成素(EPO)。

15.权利要求14所述的方法,其中,所述红细胞生成素(EPO)具有如SEQ No.43所示的氨基酸序列,且对应于所述红细胞生成素(EPO)的N末端第47、72、79、124、143、167、179和181位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

16.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为BMP2。

17.权利要求16所述的方法,其中,所述BMP2具有如SEQ No.51所示的氨基酸序列,且对应于所述BMP2的N末端第32、64、127、178、185、236、241、272、278、281、285、287、290、293、297、355、358、379和383位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

18.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为FGF-1。

19.权利要求18所述的方法,其中,所述FGF-1具有如SEQ No.59所示的氨基酸序列,且对应于所述FGF-1的N末端第15、24、25、27、72、115、116、120、127、128、133和143位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

20.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为瘦蛋白。

21.权利要求20所述的方法,其中,所述瘦蛋白具有如SEQ No.64所示的氨基酸序列,且对应于所述瘦蛋白的N末端第26、32、36、54、56、74和115位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

22.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为VEGFA。

23.权利要求22所述的方法,其中,所述VEGFA具有如SEQ No.73所示的氨基酸序列,且对应于所述VEGFA的N末端第22、42、74、110、127、133、134、141、142、147、149、152、154、157、169、180、184、191和206位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

24.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为胃饥饿素/肥胖抑制素前激素原(prepro-GHRL)。

25.权利要求24所述的方法,其中,所述胃饥饿素/肥胖抑制素前激素原(prepro-GHRL)具有如SEQ No.78所示的氨基酸序列,且对应于所述G-CSF的N末端第39、42、43、47、85、100、111和117位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

26.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为食欲刺激激素(胃饥饿素)。

27.权利要求26所述的方法,其中,所述食欲刺激激素(胃饥饿素)具有如SEQ No.80所示的氨基酸序列,且对应于所述食欲刺激激素(胃饥饿素)的N末端第39、42、43和47位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

28.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为GLP-1。

29.权利要求28所述的方法,其中,所述GLP-1具有如SEQ No.89所示的氨基酸序列,且对应于所述GLP-1的N末端第117和125位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

30.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为IgG重链(HC)。

31.权利要求30所述的方法,其中,所述IgG重链(HC)具有如SEQ No.94所示的氨基酸序列,且对应于所述IgG重链(HC)的N末端第49、62、84、95、143、155、169、227、232、235、236、240、244、268、270、296、310、312、339、342、344、348、356、360、362、382、392、414、431、436和461位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

32.权利要求1所述的方法,其中,所述蛋白质为IgG轻链(LC)。

33.权利要求32所述的方法,其中,所述IgG轻链(LC)具有如SEQ No.101所示的氨基酸序列,且对应于所述IgG轻链(LC)的N末端第61、64、67、125、129、148、167、171、191、205、212和229位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

34.一种具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质的氨基酸序列的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换,且其中所述赖氨酸残基与泛素C末端的甘氨酸相连。

35.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质为β-调理素、GLP-1、IgG重链、IgG轻链、食欲刺激激素(胃饥饿素)、G-CSF、VEGFA、瘦蛋白、FGF-1、BMP2、G蛋白偶联受体、人生长激素、生长激素释放激素(GHRH)、生长激素释放肽、食欲刺激激素前体、干扰素-α、干扰素-β、干扰素受体、集落刺激因子、胰高血糖素样肽、G蛋白偶联受体、白介素、白介素受体、酵素、白介素结合蛋白、细胞因子结合蛋白、巨噬细胞活化因子、巨噬细胞肽、B细胞因子、T细胞因子、蛋白A、过敏抑制剂、细胞坏死糖蛋白、免疫毒素、淋巴毒素、肿瘤坏死因子、肿瘤抑制因子、转移生长因子、α-1抗胰蛋白酶、白蛋白、α-乳白蛋白、载脂蛋白E、红细胞生成素、高度糖基化红细胞生成素、血管生成素、血红蛋白、凝血酶、凝血酶受体激活肽、血栓调节蛋白、第七因子、第七因子a、第八因子、第九因子、第十三因子、纤维蛋白溶酶原激活因子、纤维蛋白结合多肽、尿激酶、链激酶、水蛭素、蛋白C、C反应蛋白、肾素抑制剂、胶原蛋白酶抑制剂、过氧化物歧化酶、瘦蛋白、血小板源生长因子、上皮生长因子、表皮生长因子、血管抑素、血管紧张肽、骨生长因子、骨刺激蛋白、降血钙素、胰岛素、心钠素、软骨诱导因子、依降钙素、结缔组织激活因子、组织因子通道抑制剂、促卵泡激素、促黄体激素、促黄体激素释放激素、神经生长因子、甲状旁腺激素、松弛肽、分泌素、生长调节素、胰岛素样生长因子、肾上腺皮质激素、胰高血糖素、肠促胰酶肽、胰多肽、胃泌素释放肽、促肾上腺皮质激素释放因子、促甲状腺激素、自毒素、乳铁蛋白、肌生成抑制蛋白、受体、受体拮抗体、细胞表面抗原、病毒衍生的疫苗抗原、单克隆抗体、多克隆抗体或抗体片段。

36.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质是具有如SEQ No.1所示氨基酸序列的β-调理素,且对应于所述β-调理素的N末端第62、124、153和158位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

37.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质是具有如SEQ No.10所示氨基酸序列的生长激素,且对应于所述生长激素的N末端第64、67、96、141、166、171、184、194和198位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

38.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质是具有如SEQ No.17所示氨基酸序列的胰岛素,且对应于所述胰岛素的N末端第53和88位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

39.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质是具有如SEQ No.22所示氨基酸序列的干扰素-α,且对应于所述干扰素-α的N末端第17,54,72,93,106,135,144,154,156,157和187位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

40.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质是具有如SEQ No.31所示氨基酸序列的G-CSF,且对应于所述G-CSF的N末端第11、46、53、64和73位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

41.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质是具有如SEQ No.36所示氨基酸序列的干扰素-β,且对应于所述干扰素-β的N末端第4、40、54、66、73、120、126、129、136、144、155和157位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

42.根据权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质是具有如SEQ No.43所示氨基酸序列的红细胞生成素(EPO),且对应于所述红细胞生成素(EPO)的N末端第47、,72、79、124、143、167、179和181位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

43.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质是具有如SEQ No.51所示氨基酸序列的BMP2,且对应于所述BMP2的N末端第32、64、127、178、185、236、241、272、278、281、285、287、290、293、297、355、358、379和383位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

44.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白是具有如SEQ No.59所示氨基酸序列的FGF-1,且对应于所述FGF-1的N末端第15、24、25、27、72、115、116、120、127、128、133和143位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

45.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质是具有如SEQ No.64所示氨基酸序列的瘦蛋白,且对应所述瘦蛋白的N末端第26、32、36、54、56、74和115位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

46.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质是具有如SEQ No.73所示氨基酸序列的VEGFA,且对应于所述VEGFA的N末端第22、42、74、110、127、133、134、141、142、147、149、152、154、156、157、169、180、184、191和206位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

47.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质是具有如SEQ No.78所示氨基酸序列的胃饥饿素/肥胖抑制素前激素原(prepro-GHRL),且对应于所述胃饥饿素/肥胖抑制素前激素原(prepro-GHRL)的N末端第39、42、43、47、85、100、111和117位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

48.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质是具有如SEQ No.80所示氨基酸序列的食欲刺激激素(胃饥饿素),且对应于所述食欲刺激激素(胃饥饿素)的N末端第39、42、43和47位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

49.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质是具有如SEQ No.89所示氨基酸序列的GLP-1,且对应于所述GLP-1的N末端第117和125位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

50.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质是具有如SEQ No.94所示氨基酸序列的IgG重链(HC),且对应于所述IgG重链(HC)的N末端第49、62、84、95、143、155、169、227、232、235、236、240、244、268、270、296、310、312、339、342、344、348、356、360、362、382、392、414、431、436和461位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

51.权利要求34所述的具有延长的半衰期的蛋白质,其中,所述蛋白质是具有如SEQ No.101所示氨基酸序列的IgG轻链(LC),且对应于所述IgG轻链(LC)的N末端第61、64、67、125、129、148、167、171、191、205、212和229位的一个或更多个赖氨酸残基被精氨酸替换。

52.一种用于预防和/或治疗糖尿病和/或肥胖的药物组合物,其中,所述药物组合物包括权利要求36中的β-调理素以及药学上可接受的赋形剂。

53.一种用于预防和/或治疗侏儒症、歌舞伎综合征和/或卡恩斯-塞尔综合征(KSS)的药物组合物,其中,所述药物组合物包括权利要求37中的生长激素以及药学上可接受的赋形剂。

54.一种用于治疗糖尿病的药物组合物,其中,所述药物组合物包括权利要求38中的胰岛素以及药学上可接受的赋形剂。

55.一种用于预防和/或治疗免疫疾病和/或癌症和/或感染性疾病的药物组合物,其中,所述免疫疾病包括多发性硬化、自身免疫性疾病、类风湿性关节炎;所述癌症包括实体肿瘤和/或血癌;所述感染性疾病包括病毒感染、艾滋病相关疾病和丙肝,所述药物组合物包括权利要求39中的干扰素-α以及药学上可接受的赋形剂。

56.一种用于预防和/或治疗嗜中性白细胞减少症的药物组合物,其中,所述药物组合物包括权利要求40中的G-CSF以及药学上可接受的赋形剂。

57.一种用于预防和/或治疗免疫疾病和/或癌症和/或感染性疾病的药物组合物,其中,所述免疫疾病包括多发性硬化、自身免疫性疾病、类风湿性关节炎;所述癌症包括实体肿瘤和/或血癌;所述感染性疾病包括病毒感染、艾滋病相关疾病和丙肝,所述药物组合物包括权利要求41中的干扰素-β以及药学上可接受的赋形剂。

58.一种用于预防和/或治疗贫血的药物组合物,其中,所述药物组合物包括权利要求42中的红细胞生成素(EPO)以及药学上可接受的赋形剂。

59.一种用于预防和/或治疗贫血和骨病的药物组合物,其中,所述药物组合物包括权利要求43中的BMP2以及药学上可接受的赋形剂。

60.一种用于预防和/或治疗神经元疾病的药物组合物,其中,所述药物组合物包括权利要求44中的FGF-1以及药学上可接受的赋形剂。

61.一种用于预防和/或治疗脑部疾病、心脏病和/或肥胖的药物组合物,其中,所述药物组合物包括权利要求45中的瘦蛋白以及药学上可接受的赋形剂。

62.一种用于预防和/或治疗抗衰老、毛发生长、疤痕和/或血管生成相关疾病的药物组合物,其中,所述药物组合物包括权利要求46中的VEGFA以及药学上可接受的赋形剂。

63.一种用于预防和/或治疗肥胖、营养不良和/或诸如神经性食欲缺乏的饮食失调,例如神经性食欲缺乏的药物组合物,其中,所述药物组合物包括权利要求47中的胃饥饿素/肥胖抑制素前激素原(prepro-GHRL)以及药学上可接受的赋形剂。

64.一种用于预防和/或治疗肥胖、营养不良和/或诸如神经性食欲缺乏的饮食失调的药物组合物,其中,所述药物组合物包括权利要求48中的食欲刺激激素(胃饥饿素)以及药学上可接受的赋形剂。

65.一种用于预防和/或治疗糖尿病的药物组合物,其中,所述药物组合物包括权利要求49中的GLP-1以及药学上可接受的赋形剂。

66.一种用于预防和/或治疗癌症的药物组合物,其中,所述药物组合物包括权利要求50中的IgG重链(HC)以及药学上可接受的赋形剂。

67.一种用于预防和/或治疗癌症的药物组合物,其中,所述药物组合物包括权利要求51中的IgG轻链(LC)以及药学上可接受的赋形剂。

68.一种表达载体,所述表达载体包含:(a)启动子;(b)编码权利要求34-51中任一所述蛋白质的核苷酸序列;和任选的连接子,其中所述启动子和核苷酸序列是可操作地连接。

69.一种宿主细胞,所述宿主细胞包含权利要求68所述的表达载体。

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