本发明涉及利用微生物获取目标产物的微生物技术，尤其涉及白黄小薄孔菌获取漆酶的培养基以及利用该菌获取漆酶溶液的方法。
背景技术：
漆酶(Laccase，EC 1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶，与植物的抗坏血酸氧化酶、哺乳动物的血浆铜蓝蛋白均属于蓝色多铜氧化酶家族。其在自然界中广泛分布于植物、真菌、少数昆虫和细菌中，一些动物肾脏(如猪肾)和血清中也发现了漆酶。研究证明，在降解木质纤维素的过程中只有漆酶不需要过氧化氢，同时将氧分子还原成水，对木质素及其前体类似物和与其结构相似的多种环境污染物具有广谱的适用性，表现出独特的降解机理，因此漆酶在纸浆造纸、能源开发、食品加工、环境污染物去毒与降解、生物合成、改善纤维素性能和生物检测等领域具有较高的研究价值和应用潜力。
白黄小薄孔菌生长于阔叶树倒木上，是一种新发现的多孔菌。若能利用白黄小薄孔菌获取漆酶未尝不是为漆酶的获取和利用提供更多可选性，基于如此精神，本发明公开一种适用于适于白黄小薄孔菌获取漆酶的培养基以及该菌生产漆酶溶液的方法。
技术实现要素：
本发明的目的之一在于提供一种适于白黄小薄孔菌获取漆酶的培养基。为了达成该目的，本发明对应的技术方案如下：
适于白黄小薄孔菌获取漆酶的培养基，由葡萄糖、酵母浸粉或蛋白胨、维生素B1或维生素B2、磷酸二氢钾组成。
为了达成本发明的上述目的之一，在基于上述初始的技术方案的基础上，在某些实施例中，各组份由左至右按重量份的配比为(2000～4000):(200～1400):(1～4):(100～400)。
为了达成本发明的上述目的之一，在基于上述初始的技术方案的基础上，在某些实施例中，所述培养的初始pH值为4.5～5.2。
为了达成本发明的上述目的之一，在基于上述初始的技术方案的基础上，在某些实施例中，酵母浸粉或蛋白胨中优选酵母浸粉。
为了达成本发明的上述目的之一，在基于上述初始的技术方案的基础上，在某些实施例中，维生素B1或维生素B2中优选维生素B1。
为了达成本发明的上述目的之一，在基于上述初始的技术方案的基础上，在某些实施例中，该培养基的初始pH值优选为4.8。
本发明的目的之二在于提供一种用白黄小薄孔菌生产漆酶溶液的方法。为了达成该目的，本发明对应的技术方案如下：
一种用白黄小薄孔菌生产漆酶溶液的方法，按如下步骤进行：a.将白黄小薄孔菌于固体培养基上活化；b.将步骤a的培养物制成种子发酵悬液；c.采用达成本发明目的之一的技术方案中的培养基培养种子发酵悬液，培养一段时间后获得所述漆酶溶液。
为了达成本发明的上述目的之二，在基于上述初始的技术方案的基础上，在某些实施例中，离心所得漆酶溶液的上清液是粗酶溶液。
为了达成本发明的上述目的之二，在基于上述初始的技术方案的基础上，在某些实施例中，步骤b中采用内切式匀浆机制得种子发酵悬液。
本发明培养基以及培养方法能够使白黄小薄孔菌高产漆酶，为漆酶的获取和利用提供了以白黄小薄孔菌为线索的新选择。
本发明人已经在此发明内容章节总地描述了本发明的精神；以下实施例的举例是为了方便本领域普通技术人员进一步了解本发明的实施过程所进行的描述，不能理解为对本发明精神具体化的限制。
具体实施方式
以下实施例所用的菌株为白黄小薄孔菌(Antrodiella albocinnamomea)菌株Si 29，采自河南省焦作市云台山自然保护区，寄主为阔叶树树桩。
以下实施例采用的漆酶活性的定义为：漆酶活性(U/mL)＝(A×V)/(t×ε×v×L)；其中：
A为样品的吸光值；
V为反应体系体积(mL)；
t为反应时间(min)；
ε为摩尔消光系数，已知420nm处ABTS摩尔消光系数ε420nm＝0.036LμM-1cm-1；
v为样品量(mL)；
L为比色杯光径(cm)；
即一个酶活力单位(U)被定义为28℃下1min内催化氧化1μmol ABTS所需的酶量。
以下实施例采用的漆酶活性的测试方法为：柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH 5.0)、粗酶溶液、1.0mmol/L ABTS【中文：2,2'-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐；英文：2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid)】按照体积比39:1:20配比成反应体系。在28℃下反应3min后，于420nm处测定吸光度。
实施例一
配置固体培养基：葡萄糖、蛋白胨、维生素B2、磷酸二氢钾按照10:5:0.005:1配比而成，琼脂粉适量，初始pH 5.0，121℃高压灭菌30min。
配置液体培养基：葡萄糖、蛋白胨、维生素B2、磷酸二氢钾按照10:5:0.005:1配比而成，初始pH 5.2，121℃高压灭菌30min。
将白黄小薄孔菌于固体培养基上活化，本实施例中活化采用28℃恒温培养箱培养7天备用。
取菌饼接种于液体培养基中，本实施例中于恒温摇床28℃、150r/min振荡培养6天。再利用内切式匀浆机以5000r/min、1min将培养物制成种子发酵悬液，充分振荡备用。
将种子发酵悬液以5.0％(v/v)的接种量加入100mL液体培养基中，于恒温摇床28℃、150r/min振荡培养即制得含漆酶的溶液。
取含漆酶的溶液在4℃、12000r/min下离心15min，所得上清液即为粗酶溶液。
取制得的粗酶溶液测定漆酶活性，得本实施例的漆酶活性为102.22U/L。
实施例二
配置固体培养基：葡萄糖、蛋白胨、维生素B1、磷酸二氢钾按照20:1:0.01:1.5配比而成，琼脂粉适量，初始pH 5.2，121℃高压灭菌30min。
配置液体培养基：葡萄糖、酵母浸粉、维生素B2、磷酸二氢钾按照20:1:0.01:1.5配比而成，初始pH 5.2，121℃高压灭菌30min。
将白黄小薄孔菌于固体培养基上活化，本实施例中活化采用28℃恒温培养箱培养7天备用。
取菌饼接种于液体培养基中，本实施例中于恒温摇床28℃、150r/min振荡培养6天。再利用内切式匀浆机以5000r/min、1min将培养物制成种子发酵悬液，充分振荡备用。
将种子发酵悬液以5.0％(v/v)的接种量加入100mL液体培养基中，于恒温摇床28℃、150r/min振荡培养即制得含漆酶的溶液。
取含漆酶的溶液在4℃、12000r/min下离心15min，所得上清液即为粗酶溶液。
取制得的粗酶溶液测定漆酶活性，得本实施例的漆酶活性为107.22U/L。
实施例三
配置固体培养基：葡萄糖、蛋白胨、维生素B1、磷酸二氢钾按照20:3:0.005:2配比而成，琼脂粉适量，初始pH 5.0，121℃高压灭菌30min。
配置液体培养基：葡萄糖、酵母浸粉、维生素B1、磷酸二氢钾按照20:3:0.005:2配比而成，初始pH 5.0，121℃高压灭菌30min。
将白黄小薄孔菌于固体培养基上活化，本实施例中活化采用28℃恒温培养箱培养7天备用。
取菌饼接种于液体培养基中，本实施例中于恒温摇床28℃、150r/min振荡培养6天。再利用内切式匀浆机以5000r/min、1min将培养物制成种子发酵悬液，充分振荡备用。
将种子发酵悬液以5.0％(v/v)的接种量加入100mL液体培养基中，于恒温摇床28℃、150r/min振荡培养即制得含漆酶的溶液。
取含漆酶的溶液在4℃、12000r/min下离心15min，所得上清液即为粗酶溶液。
取制得的粗酶溶液测定漆酶活性，得本实施例的漆酶活性为110.67U/L。
实施例四
配置固体培养基：葡萄糖、酵母浸粉、维生素B2、磷酸二氢钾按照20:5:0.02:0.5配比而成，琼脂粉适量，初始pH 4.5，121℃高压灭菌30min。
配置液体培养基：葡萄糖、酵母浸粉、维生素B1、磷酸二氢钾按照20:5:0.02:0.5配比而成，初始pH 4.8，121℃高压灭菌30min。
将白黄小薄孔菌于固体培养基上活化，本实施例中活化采用28℃恒温培养箱培养7天备用。
取菌饼接种于液体培养基中，本实施例中于恒温摇床28℃、150r/min振荡培养6天。再利用内切式匀浆机以5000r/min、1min将培养物制成种子发酵悬液，充分振荡备用。
将种子发酵悬液以5.0％(v/v)的接种量加入100mL液体培养基中，于恒温摇床28℃、150r/min振荡培养即制得含漆酶的溶液。
取含漆酶的溶液在4℃、12000r/min下离心15min，所得上清液即为粗酶溶液。
取制得的粗酶溶液测定漆酶活性，得本实施例的漆酶活性为149.11U/L。
实施例五
配置固体培养基：葡萄糖、蛋白胨、维生素B2、磷酸二氢钾按照20:7:0.015:1配比而成，琼脂粉适量，初始pH 4.5，121℃高压灭菌30min。
配置液体培养基：葡萄糖、蛋白胨、维生素B1、磷酸二氢钾按照20:7:0.015:1配比而成，初始pH 4.5，121℃高压灭菌30min。
将白黄小薄孔菌于固体培养基上活化，本实施例中活化采用28℃恒温培养箱培养7天备用。
取菌饼接种于液体培养基中，本实施例中于恒温摇床28℃、150r/min振荡培养6天。再利用内切式匀浆机以5000r/min、1min将培养物制成种子发酵悬液，充分振荡备用。
将种子发酵悬液以5.0％(v/v)的接种量加入100mL液体培养基中，于恒温摇床28℃、150r/min振荡培养即制得含漆酶的溶液。
取含漆酶的溶液在4℃、12000r/min下离心15min，所得上清液即为粗酶溶液。
取制得的粗酶溶液测定漆酶活性，得本实施例的漆酶活性为109U/L。
通过以上实施举例，本发明之精神对于本领域普通技术人员而言已经能够清楚地掌握，所以，在本发明中未明确给出的另外的特征、优点和实施方案对于查看了本发明的本领域普通技术人员来说都是清楚的，因此，应该理解，吸取了本发明之后对本发明所作出的修饰和改进都在本专利的保护范围之内，对于在本发明的基础上作出的变劣性技术方案也属于本专利的保护范围内。