一种高效重组表达限制性内切酶的方法与流程

文档序号:11505928阅读:来源:国知局

技术特征:

技术总结
一种高效重组表达限制性内切酶的方法,包括如下步骤:(1)先将限制性内切酶基因插入,再将载体转化导入大肠杆菌,筛选培养、测序,获得限制性内切酶的重组表达质粒,质粒载体为利用乳糖操纵子和T7启动子调控,IPTG诱导的pET系列表达载体;(2)将限制性内切酶的重组表达质粒转化至BL21(DE3)pLysS感受态细胞中,筛选获得限制性内切酶的重组表达菌株;(3)扩大培养限制性内切酶的重组表达菌株并诱导表达限制性内切酶。本发明方法利用葡萄糖对乳糖操纵子表达系统本底表达的抑制作用,以及BL21(DE3)pLysS菌株自身对乳糖操纵子表达系统本底表达的严苛控制作用,省略了对宿主DNA的甲基化保护步骤,不仅大大简化了重组表达过程,可以应用于多种限制酶的重组表达。

技术研发人员:高嵩;张坤晓;许恒皓;李肖;胡艳红;张颖;吴胜月
受保护的技术使用者:淮海工学院
技术研发日:2017.01.17
技术公布日:2017.08.18
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