一种贻贝肉和蒸煮液的酶解纯化工艺的制作方法

本发明涉及贻贝肉酶解用酶和酶解纯化工艺，属于生物科技技术领域。

背景技术：
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贻贝，属软体动物门(Mollosca)，瓣鳃纲，异柱目(Anisomyaria)，贻贝科(Mytidea)，是一种营足丝附着生活的双壳类软体动物，俗称“海红”、“壳菜”、“洗菜”，是我国重要的养殖贝类之一。贻贝生命力顽强，易于大量人工养殖，我国山东，辽宁、浙江、福建、广东、海南等沿海省份都有广阔的养殖海域。

贻贝肉鲜味美，营养丰富素有“海中鸡蛋”的美称，其营养成分高于一般的贝类、鱼和虾。每100g贻贝肉中含水分71.32，蛋白质15.82g，脂肪6.08g，碳水化合物3.34g，钙32mg，磷128mg，钠330mg，钾95mg，铁5.5mg。锌3mg。

贻贝的药用价值已经得到了普遍的认同，据《本草纲目》记载，贻贝能治疗“虚劳疲惫，精血衰老，吐血久痢，肠鸣腰痛”。

目前现有的贻贝研究过程中存在以下不足之处：

(1)对贻贝研究的学者只是提取贻贝肽或贻贝多糖，没有把贻贝肉蒸煮液中蛋白质和多糖综合考虑提取，造成贻贝资源的浪费。

(2)对贻贝的酶解用酶没有系统筛选，不能确定到底哪一种酶或哪几种酶最适合贻贝肉的酶解。

(3)对酶解产物的分子量没有测定。

技术实现要素：
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针对上述问题，本发明要解决的技术问题是提供一种贻贝肉和蒸煮液的酶解纯化工艺。

本发明的贻贝肉和蒸煮液的酶解纯化工艺步骤为：步骤一：将蒸煮贻贝的水用截留分子量10ku-50ku膜进行浓缩1-3倍，并进行脱盐得到浓缩液，将贻贝洗涤采肉后进行粉碎，均浆为均浆料。

步骤二：将浓缩液与贻贝肉均浆料适量混合为混合料，混合料中蛋白质底物浓度为5％-15％，将混合料升温至40℃-50℃，用NaOH溶液调整pH至7.5-9.0，加复合蛋白酶，其中复合蛋白酶中蛋白总量为1.0％-5.0％，搅拌酶解3h-6h，调酶解液pH至5.0-7.0，升温至70℃-95℃，灭酶10min-30min，用管式离心机进行固、液、油三相分离，得酶解液；

步骤三：酶解液经陶瓷膜滤清后为清液，清液由截留分子量3ku-30ku膜进行分离，截留液多次用纯水稀释后再通过该膜，透过液为贻贝低聚肽，截留液为贻贝多糖液；

步骤四：在透过液中加入1％-5％的β-环糊精脱腥，脱腥液通过颗粒活性炭柱进一步脱腥，脱色，过柱液通过陶瓷膜脱炭滤清，得精滤液；

步骤五：精滤液经减压蒸发浓缩得浓缩液，浓缩液经喷雾干燥得贻贝低聚肽粉，将步骤三中的截留液中加入3倍95％乙醇，搅拌，静止后，分取沉淀，干燥，即得贻贝粗多糖。

本发明的有益效果：(1)贻贝肉中和贻贝蒸煮液的蛋白质和多糖同时提取，使贻贝资源得到充分利用；

(2)酶解贻贝用的复合蛋白酶是经单酶系统筛选的基础上进行复配，并经实验验证，酶解收率≥90％。

(3)产品分子量小，分子量≤2000Du的低聚肽占总蛋白的比例≥90％，产品消化级收率高。

(4)工艺经脱腥处理，产品没有贻贝那种特有的腥味，口感好。

(5)由于采取综合利用措施，生产过程中除清洗设备废水排放外，生产过程中没有废弃物排放，做到绿色生产。

附图说明：

为了易于说明，本发明由下述的具体实施及附图作以详细描述。

图1为本发明的工艺流程结构示意图。

具体实施方式：

如图1所示，本具体实施方式采用以下技术方案：所述的贻贝肉和蒸煮液的酶解纯化工艺步骤为：步骤一：将蒸煮贻贝的水用截留分子量10ku-50ku膜进行浓缩1-3倍，并进行脱盐得到浓缩液，将贻贝洗涤采肉后进行粉碎，均浆为均浆料。

步骤二：将浓缩液与贻贝肉均浆料适量混合为混合料，混合料中蛋白质底物浓度为5％-15％，将混合料升温至40℃-50℃，用NaOH溶液调整pH至7.5-9.0，加复合蛋白酶，其中复合蛋白酶中蛋白总量为1.0％-5.0％，搅拌酶解3h-6h，调酶解液pH至5.0-7.0，升温至70℃-95℃，灭酶10min-30min，用管式离心机进行固、液、油三相分离，得酶解液；

步骤三：酶解液经陶瓷膜滤清后为清液，清液由截留分子量3ku-30ku膜进行分离，截留液多次用纯水稀释后再通过该膜，透过液为贻贝低聚肽，截留液为贻贝多糖液；

步骤四：在透过液中加入1％-5％的β-环糊精脱腥，脱腥液通过颗粒活性炭柱进一步脱腥，脱色，过柱液通过陶瓷膜脱炭滤清，得精滤液；

步骤五：精滤液经减压蒸发浓缩得浓缩液，浓缩液经喷雾干燥得贻贝低聚肽粉，将步骤三中的截留液中加入3倍95％乙醇，搅拌，静止后，分取沉淀，干燥，即得贻贝粗多糖。

实施例：

本实施例中用的贻贝从大连市普兰店区皮口镇农贸市场选购，洗涤、采肉、匀浆，测定蛋白质含量16.34％，多糖含量2.03％；贻贝蒸煮水从皮口镇某海产品加工厂取得，测定其蛋白质含量0.83％，多糖含量1.56％，贻贝肉和蒸煮液的酶解纯化工艺步骤为：步骤一：经膜浓缩至3∶1；

步骤二：贻贝匀浆14kg，加4倍量3∶1浓缩贻贝蒸煮液，蛋白质底物浓度为6.59％，将混合料液在搅拌下升温至45℃±1℃；用10％NaOH溶液调pH8.2±0.1，加复合蛋白酶(As1.397 30％-60％；2709碱性蛋白酶20％-50％；胰酶10-40％)198g(蛋白总量4.0％)，搅拌酶解4h；调酶解液pH6.0左右，升温至70℃15min灭酶；管式离心机分离，去除固形物和油脂，得酶解液；

步骤三：酶解液经过陶瓷膜进一步净化；净化液用截留分子量3ku有机膜分离，得截留液体积较少时，分2-3次加适量纯水稀释后，继续分离，将多糖中的低聚肽尽可能分离干净得到透过液为贻贝低聚肽，截留液为贻贝多糖液；

步骤四：将透过液加入反应釜中，加入蛋白总量3％的β-环糊精脱腥，60℃搅拌处理30min，处理液通过颗粒活性炭柱，进行脱色脱味精制；过柱液用陶瓷膜脱炭，得澄清精制液；

步骤五：将澄清精制液减压蒸发浓缩至固形物30％-40％，得浓缩液；浓缩液经喷雾干燥得贻贝低聚肽，总收率大86.7％；经测定贻贝低聚肽粉中低聚肽含量占总蛋白的比例达93.4％；且将步骤三中的截留液加入3倍95％乙醇，搅匀后静置过夜；分取沉淀，干燥，得贻贝粗多糖。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。