具有抗除草剂活性的玉米蛋白质、其编码基因及应用的制作方法

本发明属于抗除草剂蛋白质领域，具体涉及具有抗除草剂活性的玉米蛋白质、其编码基因及应用。

背景技术：

杂草是制约玉米产量的主要因素之一。玉米是我国的饲料生产的主要原料，其产量保障着我国的国家肉蛋类食品的供应。随着我国经济的发展，人力成本越来越高，玉米种植方式由小规模的精细种植转向机械化转变，机械化方式的推广使杂草问题成为影响玉米产量和品质的重要因素之一。抗除草剂玉米的培育解决了机械化除草的问题。目前，我国尚未开放转基因玉米的推广种植，但是，每年从国外大量进口转基因玉米作为饲料原料。

国外用于商业化生产的转基因玉米中抗除草剂基因多为来源于微生物的外源基因，来源于玉米基因组的抗除草剂基因比较少。

玉米内源的抗除草剂乙酰羟基酸合成酶(acetohydroxy acid synthase，简称AHAS)蛋白质由ahas基因突变产生，表达抗除草剂AHAS蛋白质可以使植物获得抗除草剂特性，解决田块中的杂草问题。AHAS蛋白质主要分布在微生物和植物中，在动物中几乎不存在，AHAS抑制除草剂对人畜无害。因此，发掘和研究具有抗除草剂活性的玉米AHAS蛋白质具有良好的创新性和经济价值。

目前，培育抗AHAS抑制除草剂玉米的方法为以玉米种子或者植株为材料进行化学或者物理诱变，进行植物体内基因组突变。这种方法获得抗除草剂玉米的试验时间长(大于3年)，获得新突变体难(突变结果为核苷酸单个碱基变化引起单个氨基酸的替换，容易与已经存在的突变重复)，而且成功几率小(通常突变成功率小于百万分之一)，很多实验室进行超过5年的研发无法获得新的突变体。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供具有抗除草剂活性的玉米蛋白质、其编码基因及应用，其为抗多类型除草剂活性的玉米AHAS突变体蛋白质，该蛋白质具有抗咪唑啉酮类、磺酰脲类或者嘧啶类等多类型除草剂的活性，其编码基因转化的植物具有抗咪唑啉酮类、磺酰脲类或者嘧啶类等多类型除草剂的活性。

与目前通过体内突变获得的氨基酸替换突变体不同，本发明采用氨基酸删除策略，通过基因体外突变，改造玉米AHAS蛋白质，获得玉米AHAS突变体蛋白质，使其具有抗除草剂活性。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

具有抗除草剂活性的玉米蛋白质，其为玉米AHAS突变体蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.5或SEQ ID No.6所示。

本发明其氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的抗除草剂活性的玉米蛋白质为前体全长蛋白质,该前体全长蛋白质删除信号肽后成为成熟蛋白质，对应于如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的前体全长蛋白质的氨基酸序列，成熟蛋白质的氨基酸序列分别如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示。

具有抗除草剂活性的基因，其为编码所述具有抗除草剂活性的玉米蛋白质的核苷酸序列。

进一步，所述氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的玉米蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，或者氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的玉米蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，或者氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的玉米蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的玉米蛋白质的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。

本发明所述具有抗除草剂活性的玉米蛋白质用于培育抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶类除草剂植物。

一种获得抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶类等多类型除草剂植物的方法，包括，将所述玉米AHAS突变体蛋白质的编码基因转化到植物中,使所述植物产生具有抗除草剂活性的玉米AHAS突变体蛋白质。

优选地，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示玉米蛋白质的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，或者氨基酸序列如SEQ ID No.2所示玉米蛋白质的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，或者氨基酸序列如SEQ ID No.5所示玉米蛋白质的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，氨基酸序列如SEQ ID No.6所示玉米蛋白质的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。

进一步，所述咪唑啉酮类除草剂为咪唑乙烟酸、甲氧咪草烟或者甲基咪草烟，但不限于这几种咪唑啉酮类除草剂。

又，所述磺酰脲类除草剂为氯磺隆和甲嘧磺隆，但不限于这2种磺酰脲类除草剂。

优选地，所述嘧啶类除草剂为双草醚，但不限于这种嘧啶类除草剂。

进一步，所述植物为玉米、水稻或棉花，但不限于这几种植物。

本发明抗除草剂活性的玉米蛋白质，其为玉米4号染色体或5号染色体中经过人工改造的AHAS突变体蛋白质，源于玉米基因组中ahas基因的表达，将野生型玉米ahas基因通过体外突变，获得玉米AHAS突变体蛋白质，氨基酸序列的特点为：与野生型AHAS相比，玉米AHAS突变体蛋白质缺失Trp542位点氨基酸，该突变体蛋白质对咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶类等多类型除草剂具有抗性。

本发明中，表达玉米4号染色体突变基因的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，对应的成熟蛋白质氨基酸序列如SEQ ID No.5所示，表达玉米5号染色体突变基因的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，对应的成熟蛋白质氨基酸序列如SEQ ID No.6所示。

将本发明获得的AHAS突变体蛋白质的编码基因转化到植物中，在植物中进行表达，使植物中含有AHAS突变体蛋白质，可使植物具有抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶羧酸类等多类型除草剂的活性。

本发明的AHAS突变体蛋白质的编码基因的核苷酸序列不限于玉米内源序列，可以是表达所述蛋白质的人工合成核苷酸序列。

在水稻、玉米或者棉花中表达玉米AHAS突变体，得到转基因玉米M-MA1M5和M-MA2M5、转基因水稻R-MA1M5和R-MA2M5、转基因棉花C-MA1M5和C-MA2M5，在转基因植物和野生型植物苗期喷洒抗咪唑啉酮类、磺酰脲类或者嘧啶羧酸类等多类型除草剂，野生型植物植株全部死亡，转基因植物全部存活。说明表达本发明玉米AHAS突变体的植物具有抗咪唑啉酮类、磺酰脲类或者嘧啶羧酸类等多类型除草剂活性。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1)本发明采用氨基酸删除策略，对氨基酸进行定点突变，可对删除氨基酸后的突变体蛋白质进行体外抗除草剂活性测定，为开发更多新型抗除草剂AHAS突变体蛋白质提供基础，具有操作简单，筛选过程简单、创新性强等优点，发掘了玉米内源抗除草剂基因，增加抗除草剂基因的种类。

2)本发明的AHAS突变体蛋白质是通过体外突变获得的，体外突变具有可设计性强、试验时间短、创新性强等体内突变无法比拟的优点，获得突变体时间小于2个月，同时，通过特定的突变设计，避免与已报道AHAS突变体蛋白质重复。

3)将本发明AHSA突变体蛋白质的编码基因表达后，获得的AHAS全长突变体蛋白质和AHAS无信号肽成熟突变体蛋白质均具有抗咪唑啉酮类、磺酰脲类和嘧啶羧酸类等多类型除草剂的活性。

附图说明

图1为本发明实施例1中纯化后的AHAS蛋白质SDS-PAGE电泳图；

其中，泳道1：纯化后MA1M5S的蛋白质；泳道2：纯化后的MA2M5S蛋白质；泳道3：纯化后的MA1WS蛋白质；泳道4：纯化后的MA2WS蛋白质；Mk：蛋白质Marker，分子量已在图上标出。

图2-图3为本发明实施例2中突变体蛋白质MA1M5S和MA2M5S及其对照野生型蛋白质MA1WS和MA2WS分别对咪唑啉酮类除草剂(咪唑乙烟酸和甲氧咪草烟)的抗性曲线图。

图4为本发明实施例2中突变体蛋白质MA1M5S和MA2M5S及其对照野生型蛋白质MA1WS和MA2WS分别嘧啶羧酸类除草剂(双草醚)的抗性曲线图。

图5-图6为本发明实施例2中突变体蛋白质MA1M5S和MA2M5S及其对照野生型蛋白质MA1WS和MA2WS对磺酰脲类除草剂(氯嘧磺隆和甲嘧磺隆)的抗性曲线图。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。

以下实施例中，如无特殊说明为《分子克隆实验指南》(科学出版社，2002年)所记载方法。

引物合成和测序委托生工上海生物工程股份有限公司进行，试剂、菌株、载体等实验用品从杭州西格玛生物技术公司购买。

咪唑烟乙酸除草剂为山东先达公司的“豆说好”，稀释浓度为稀释200倍。甲基咪草烟除草剂为德国巴斯夫公司的“百垄通”，稀释浓度为稀释1000倍。甲氧咪草烟除草剂为美国氰胺公司的“金豆”，稀释浓度为稀释100倍。氯磺隆除草剂为江苏省激素研究所股份有限公司的“氯磺隆”，稀释浓度为稀释20000倍。甲嘧磺隆除草剂为江苏瑞邦农药厂的“森草净”，稀释浓度为稀释5000倍。双草醚除草剂为江苏省激素研究所股份有限公司的“双草醚”，稀释浓度为稀释1000倍。

实施例1获得玉米AHAS突变体蛋白质，包括以下步骤：

1.构建删除Trp542氨基酸的ahas基因

(1)通过多聚合链式反应(PCR)的方法，从玉米基因组中扩增出4号染色体上AHAS1所在的DNA片段ch4A(公共数据库NCBI序列号：NC_024462中15056-17296)，通过琼脂糖电泳分离、纯化出PCR产物，即ch4A。

其中，进行PCR反应使用的引物为：

ZM ch4-F：5’gtaaatccaaagagaccgtaaa；

ZM ch4-R：5’agctcatgcatgtcaaagata。

PCR反应体系为：2×高保真聚合酶预混液50μl、引物ZM ch4-F(10μM)4μl、引物ZM ch4-R(10μM)4μl、野生型玉米基因组DNA1μl和去离子水41μl，总体积为100μl。

PCR程序：a)95℃，10分钟；b)95℃，40秒；c)52℃，40秒；d)68℃，2分钟；e)循环步骤2-4，25次；f)68℃，10分钟；g)16℃，保存。

以ch4A为模板，使用引物MA1F和MA1R，扩增出ahas1基因ma1w(NCBI序列号：NC_024462中15108-17031)，将PCR产物进行T克隆(pGEMT，美国Promega公司)，获得T-MA1W。

其中，PCR反应体系和程序中，除模板和引物外，其它条件同上。

引物的具体序列为：

MA1F：5’cgcaaccatggccaccgccgccaccgcg；

MA1R：5’tcaatacacagtcctgccatcac。

(2)以T-MA1W为模板，使用引物MA1542WF和MA1542WR，进行PCR反应，将PCR产物进行T克隆，获得删除Trp542氨基酸的突变体克隆T-MA1M5。

其中，PCR反应体系和程序中，除模板和引物外其它条件与步骤(1)相同。

引物的具体序列为：

MA1542WF：5’cacctggggatggtggtgcaggaggacaggttctataaggcc；

MA1542WR：5’ggccttatagaacctgtcctcctgcaccaccatccccaggtg。

其中，MA1M5的DNA序列如SEQ ID NO.3所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

同理，构建玉米5号染色体上删除Trp542氨基酸的AHAS基因，具体为：

使用与上述步骤(1)-(2)中构建玉米4号染色体上删除Trp542氨基酸的AHAS基因时，相同的PCR方法，从玉米基因组中扩增出AHAS2所在的DNA片段ch5A(NCBI序列号：NC_024463中4261-6497)，再以ch5A为模板，使用引物MA2F和MA2R，进行PCR反应，扩增出ahas2基因ma2w(NCBI序列号：NC_024463中4520-6443)，将该PCR产物进行T克隆，获得T-MA2W，再以T-MA2W为模板，使用引物MA1542WF和MA1542WR(引物序列同步骤(2))进行PCR反应，将PCR产物进行T克隆，获得删除Trp542氨基酸的突变体克隆T-MA2M5，MA2M5的DNA序列如SEQ ID NO.4所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

其中，扩增ch5A时，使用的引物为ZM ch5-F和ZM ch5-R，具体序列如下：

ZM ch5-F：5’agcgctcactggacaccacgtt；

ZM ch5-R:：5’agcagggaggcggtgcttgct。

其中，扩增ahas2基因ma2w时，使用的引物MA2F和MA2R的具体序列如下：

MA2F：5’cgcaaccatggccaccgccgccgccgcg；

MA2R：5’tcagtacacagtcctgccatcac。

2.表达、纯化删除信号肽的玉米AHAS成熟蛋白质

(1)以上述步骤1(1)中获得的T-MA1W为模板，使用引物MABamF和MAEcoR进行PCR反应，将PCR产物进行T克隆，获得删除信号肽的ma1w基因克隆T-MA1WS。

其中，PCR反应体系和程序中，除模板和引物外其它条件与上述步骤1相同，引物的具体序列为：

MABamF：5’ggatccacaatgctacgtccgtggggccccaacgagccc；

MAEcoR：5’gaattctcagtacacagtcctgccatcaccat。

(2)构建蛋白质表达载体，将MA1WS克隆入pGEX4T2，获得表达无信号肽AHAS野生型蛋白质的载体4T2-MA1WS。

(3)将表达无信号肽AHAS野生型蛋白质的载体4T2-MA1WS转入表达菌株Rosetta中，培养、收获细胞，超声波破碎细胞，将离心获得上清液通过GST柱，清洗GST柱，洗脱，最终获得成熟的野生型蛋白质MA1WS。

用与上述步骤2(1)-(3)同样的方法，以步骤1中获得的T-MA2W为模板，使用引物MABamF和MAEcoR进行PCR反应，将PCR产物进行T克隆，构建蛋白质表达载体，获得无信号肽的表达成熟AHAS蛋白质载体4T2-MA2WS，再通过表达菌株Rosetta进行表达，获得无信号肽的成熟野生型蛋白质MA2WS。

用与上述步骤2(1)-2(3)同样的方法，以步骤1中获得的T-MA1M5为模板，使用引物MABamF和MAEcoR进行PCR反应，将PCR产物进行T克隆，构建蛋白质表达载体，获得无信号肽且删除Trp542氨基酸的表达成熟AHAS突变体蛋白质的载体4T2-MA1M5S，再通过表达菌株Rosetta进行表达，获得无信号肽而且删除Trp542氨基酸的成熟AHAS突变体蛋白质MA1M5S，其氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，DNA序列如SEQ ID NO.7所示。

用与上述步骤2(1)-2(3)同样的方法，以步骤1中获得的T-MA2M5为模板，使用引物MABamF和MAEcoR进行PCR反应，将PCR产物进行T克隆，构建蛋白质表达载体，获得无信号肽且删除Trp542氨基酸的表达成熟AHAS突变体蛋白质的载体4T2-MA2M5S，再通过表达菌株Rosetta进行表达，获得无信号肽而且删除Trp542氨基酸的成熟AHAS突变体蛋白MA2M5S，其氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，DNA序列如SEQ ID NO.8所示。

将获得的野生型蛋白质MA1WS、MA2WS和突变体蛋白质MA1M5S、MA2M5S进行SDS-PAGE电泳检测，获得蛋白质胶，蛋白质胶参见图1。

由图1可见，泳道1至泳道4中的AHAS蛋白质在90kDa位置具有明显条带，此位置与蛋白质理论大小相符。此外，该蛋白质条带在整个泳道的蛋白质条带中占主要比例，说明通过步骤2获得了高纯度的AHAS蛋白质。

实施例2检测AHAS突变体蛋白质对除草剂的抗性

分别以实施例1获得的玉米AHAS变体蛋白质MA1M5S和MA2M5S、野生型蛋白质MA1WS和MA2WS为检测主体，水为空白对照处理，以浓度在0-100μM的不同品种除草剂(咪唑烟乙酸、甲氧咪草烟、双草醚、氯嘧磺隆、甲嘧磺隆)为影响因素，进行抗除草剂生物测定。

在2ml离心管中配置溶液反应体系：450μl测定缓冲液，10μl AHAS蛋白质

(MA1M5S、MA2M5S、MA1WS或MA2WS，0.5μg/μl)，40μl影响因素溶液(水为空白对照处理，除草剂为影响因素)，总体积500μl。

AHAS活性测定缓冲液：100mM丙酮酸钠，10mM氯化镁，1mM TPP，50μM FAD，50mM磷酸盐，pH7.4。

反应程序：将含有不同影响因素反应体系的离心管置于37℃反应1小时；20μl30％硫酸终止反应。60℃反应0.5小时；加入250μl 1.7％α-萘酚，0.17％肌酸，60℃显色0.5小时。从离心管中取出200μl，检测含有不同影响因素的溶液在525nm吸光度值。

检测结果：以除草剂浓度为0(影响因素溶液为水对照)的野生型蛋白质MA1WS处理的525nm吸光度值为100％活性，计算野生型和突变体蛋白质在不同影响因素条件下的活性比例，绘制曲线图，结果参见图2-图6。

由图2-图6可见，随着咪唑啉酮类、磺酰脲类或者嘧啶羧酸类等多类型除草剂的增加，野生型蛋白质MA1WS、MA2WS活性降低至0；而突变体蛋白质MA1M5S、MA2M5S活性在高浓度除草剂(甲嘧磺隆除外)中依然保持接近100％活性，在高浓度甲嘧磺隆中保持90％活性。因此，突变体蛋白质MA1M5S、MA2M5S对咪唑啉酮类、磺酰脲类或者嘧啶羧酸类等多类型除草剂具有抗性。

实施例3玉米ahas突变体基因在植物中的转化及表达

1.构建表达AHAS突变体蛋白质的表达元件

为了在单子叶及双子叶植物中表达AHAS突变体蛋白质，以pCambia 1300载体(简称1300)为载体，用辣椒斑驳病毒35S(简称35S)启动子和终止子构建AHAS表达元件，35S启动子和终止子DNA序列见http://www.snapgene.com/resources/plasmid_files/plant_vectors/pCAMBIA1300/，具体步骤如下：

(1)以实施例1步骤1中获得的T-MA1M5为模板，使用引物MABamF和MASacR，通过PCR和BamH1/Sac1双酶切，获得ahas突变体片段MA1M5T。

其中，引物序列为：

MABamF：5’ggatccacaatgctacgtccgtggggccccaacgagccc；

MASacR：5’gagctctcagtacacagtcctgccatcaccat。

(2)以1300载体为模板，使用引物35S-Hind和35S-Bam，通过PCR和BamH1/Hind3双酶切，获得启动子片段35S；

其中，引物序列为：

35S-Hind：5'gcgaagcttcatggagtcaaagattcaaa；

35S-Bam：5'gtgggatccagtcccccgtgttctctccaaatgaa。

(3)以1300载体为模板，使用引物ter-Sac和ter-Kpn，通过PCR和BamH1/Hind3双酶切，获得终止子片段ter；

其中，引物序列为：

ter-Sac：5'gtggagctcagtagatgccgaccggatctgt；

ter-Kpn：5'cagggtacccgccgaattaattcggggga。

(4)将1300进行HindIII/SacI双酶切，获得片段1300HS，与35S和MA1M5T进行连接、克隆，获得1300-35S-MA1M5。

(5)将1300-35S-MA1M5进行SacI/KpnI双酶切，与ter连接、克隆，获得表达AHAS突变体的载体1300-MA1M5。

用与上述步骤(1)-(5)同样的方法，以T-MA2M5为模板，获得表达AHAS突变体的载体1300-MA2M5。

(6)将1300-MA1M5和1300-MA2M5分别转入农杆菌菌株LBA4044中，获得表达AHAS突变体蛋白质的植物转化农杆菌。

2.获得表达AHAS突变体蛋白质的植物

转基因植物的获得方法为现有成熟技术，转基因植物制备委托上海博祈生物科技有限公司进行。

使用农杆菌介导法将载体1300-MA1M5和1300-MA2M5分别转入玉米、水稻和棉花中，获得转基因玉米M-MA1M5和M-MA2M5、转基因水稻R-MA1M5和R-MA2M5、转基因棉花C-MA1M5和C-MA2M5。

在获得的转基因植物：转基因玉米M-MA1M5和M-MA2M5、转基因水稻R-MA1M5和R-MA2M5、转基因棉花C-MA1M5和C-MA2M5和对应野生型植物的苗期喷除草剂，十天后，统计死亡率，结果参见表1。

表1

说明：*水稻自身对双草醚具有抗性，由实施例2中的蛋白质活性测定实验可以推断该抗性并非来源于本发明的AHAS突变体蛋白质。

由表1可知，野生型植物植株全部死亡，而转基因植物全部存活，说明表达本发明AHAS突变体蛋白质的植物具有抗咪唑啉酮类、磺酰脲类或者嘧啶羧酸类等多类型除草剂活性。

<110> 上海市农业科学院

<120> 具有抗除草剂活性的玉米蛋白质、其编码基因及应用

<130> 1711034

<160> 8

<170> PatentIn version 3.5

<210> SEQ ID NO.1

<211> 637

<212> PRT

<213> 玉米（Zea mays）

<400> 1

Met Ala Thr Ala Ala Thr Ala Ala Ala Ala Leu Thr Gly Ala Thr Thr

1 5 10 15

Ala Thr Pro Lys Ser Arg Arg Arg Ala His His Leu Ala Thr Arg Arg

20 25 30

Ala Leu Ala Ala Pro Ile Arg Cys Ser Ala Leu Ser Arg Ala Thr Pro

35 40 45

Thr Ala Pro Pro Ala Thr Pro Leu Arg Pro Trp Gly Pro Asn Glu Pro

50 55 60

Arg Lys Gly Ser Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly Val

65 70 75 80

Arg Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln

85 90 95

Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Ala Asn His Leu Phe Arg His Glu

100 105 110

Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Arg

115 120 125

Val Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val

130 135 140

Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Ile Val Ala Ile

145 150 155 160

Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu

165 170 175

Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu

180 185 190

Val Leu Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Val Val Gln Glu Ala Phe Phe

195 200 205

Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro Lys

210 215 220

Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Ala Trp Asp Thr Pro Met Ser

225 230 235 240

Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ala Thr Glu Phe

245 250 255

Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Val Leu

260 265 270

Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ser Gly Glu Glu Leu Cys Arg Phe

275 280 285

Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu Gly

290 295 300

Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met His

305 310 315 320

Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu

325 330 335

Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu Ala

340 345 350

Phe Ala Gly Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala Glu

355 360 365

Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val Lys

370 375 380

Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn Thr Leu Leu Glu Gly Ser Thr Ser Lys

385 390 395 400

Lys Ser Phe Asp Phe Gly Ser Trp His Asp Glu Leu Asp Gln Gln Lys

405 410 415

Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Ile Phe Asn Glu Glu Ile Gln Pro

420 425 430

Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly Lys Ala Ile

435 440 445

Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr

450 455 460

Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ala Gly Leu Gly Ala

465 470 475 480

Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Asn Pro

485 490 495

Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met Asn

500 505 510

Ile Gln Glu Leu Ala Met Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys Val

515 520 525

Phe Val Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Glu Asp Arg

530 535 540

Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Phe Leu Gly Asn Pro Glu Asn

545 550 555 560

Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Ala Ile Ala Lys Gly Phe Asn

565 570 575

Ile Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys Ser Glu Val His Ala Ala Ile

580 585 590

Lys Lys Met Leu Glu Ala Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile Ile Val

595 600 605

Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Ala Phe

610 615 620

Lys Asp Met Ile Leu Asp Gly Asp Gly Arg Thr Val Tyr

625 630 635

<210> SEQ ID NO.2

<211> 637

<212> PRT

<213> 玉米（Zea mays）

<400> 2

Met Ala Thr Ala Ala Ala Ala Ser Thr Ala Leu Thr Gly Ala Thr Thr

1 5 10 15

Ala Ala Pro Lys Ala Arg Arg Arg Ala His Leu Leu Ala Thr Arg Arg

20 25 30

Ala Leu Ala Ala Pro Ile Arg Cys Ser Ala Ala Ser Pro Ala Met Pro

35 40 45

Met Ala Pro Pro Ala Thr Pro Leu Arg Pro Trp Gly Pro Thr Asp Pro

50 55 60

Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ser Leu Glu Arg Cys Gly Val

65 70 75 80

Arg Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln

85 90 95

Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Ala Asn His Leu Phe Arg His Glu

100 105 110

Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Arg

115 120 125

Val Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val

130 135 140

Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Met Val Ala Ile

145 150 155 160

Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu

165 170 175

Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu

180 185 190

Val Leu Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Val Val Gln Glu Ala Phe Phe

195 200 205

Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro Lys

210 215 220

Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val Trp Asp Lys Pro Met Ser

225 230 235 240

Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ala Thr Glu Leu

245 250 255

Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Val Leu

260 265 270

Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ser Gly Glu Glu Leu Arg Arg Phe

275 280 285

Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu Gly

290 295 300

Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met His

305 310 315 320

Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu

325 330 335

Ala Leu Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu Ala

340 345 350

Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Val Asp Ile Asp Pro Ala Glu

355 360 365

Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val Lys

370 375 380

Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn Ala Leu Leu Glu Gly Ser Thr Ser Lys

385 390 395 400

Lys Ser Phe Asp Phe Gly Ser Trp Asn Asp Glu Leu Asp Gln Gln Lys

405 410 415

Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Thr Ser Asn Glu Glu Ile Gln Pro

420 425 430

Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala Ile

435 440 445

Ile Gly Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr

450 455 460

Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ala Gly Leu Gly Ala

465 470 475 480

Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Ala Ser Val Ala Asn Pro

485 490 495

Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met Asn

500 505 510

Val Gln Glu Leu Ala Met Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys Val

515 520 525

Phe Val Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Glu Asp Arg

530 535 540

Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Glu Asn

545 550 555 560

Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Thr Ile Ala Lys Gly Phe Asn

565 570 575

Ile Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys Asn Glu Val Arg Ala Ala Ile

580 585 590

Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile Ile Val

595 600 605

Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Ala Phe

610 615 620

Lys Asp Met Ile Leu Asp Gly Asp Gly Arg Thr Val Tyr

625 630 635

<210> SEQ ID NO.3

<211> 1914

<212> DNA

<213> 玉米（Zea mays）

<400> 3

atggccaccg ccgccaccgc ggccgccgcg ctcaccggcg ccactaccgc tacgcccaag 60

tcgaggcgcc gagcccacca cttggccacc cggcgcgccc tcgccgcgcc catcaggtgc 120

tcagcgttgt cacgcgccac gccgacggct cccccggcca ctccgctacg tccgtggggc 180

cccaacgagc cccgcaaggg ctccgacatc ctcgtcgagg ctctcgagcg ctgtggcgtc 240

cgtgacgtct tcgcctaccc cggcggcgca tccatggaga tccaccaggc actcacccgc 300

tcccccgtca tcgccaacca cctcttccgc cacgaacaag gggaggcctt cgccgcctcc 360

ggctacgcgc gctcctcggg ccgcgttggc gtctgcatcg ccacctccgg ccccggcgcc 420

accaacctag tctctgcgct cgcagacgcg ttgctcgact ccgtccccat tgtcgccatc 480

acgggacagg tgccgcgacg catgattggc accgacgcct ttcaggagac gcccatcgtc 540

gaggtcaccc gctccatcac caagcacaac tacctggtcc tcgacgtcga cgacatcccc 600

cgcgtcgtgc aggaggcctt cttcctcgca tcctctggtc gcccggggcc ggtgcttgtt 660

gacatcccca aggacatcca gcagcagatg gcggtgccgg cctgggacac gcccatgagt 720

ctgcctgggt acatcgcgcg ccttcccaag cctcccgcga ctgaatttct tgagcaggtg 780

ctgcgtcttg ttggtgaatc acggcgccct gttctttatg ttggcggtgg ctgtgcagca 840

tcaggtgagg agttgtgccg ctttgtggag ttgactggaa tcccagtcac aactactctt 900

atgggccttg gcaacttccc cagcgacgac ccactgtcac tgcgcatgct tggtatgcat 960

ggcacagtgt atgcaaatta tgcagtggat aaggccgatc tgttgcttgc atttggtgtg 1020

cggtttgatg atcgtgtgac agggaaaatt gaggcttttg caggcagagc taagattgtg 1080

cacattgata ttgatcctgc tgagattggc aagaacaagc agccacatgt gtccatctgt 1140

gcagatgtta agcttgcttt gcagggcatg aatactcttc tggaaggaag cacatcaaag 1200

aagagctttg acttcggctc atggcatgat gaattggatc agcaaaagcg ggagtttccc 1260

cttgggtata aaatcttcaa tgaggaaatc cagccacaat atgctattca ggttcttgat 1320

gagttgacga aggggaaggc catcattgcc acaggtgttg ggcagcacca gatgtgggcg 1380

gcacagtatt acacttacaa gcggccaagg cagtggctgt cttcagctgg tcttggggct 1440

atgggatttg gtttgccggc tgctgctggt gctgctgtgg ccaacccagg tgtcactgtt 1500

gttgacatcg acggagatgg tagcttcctc atgaacattc aggagctagc tatgatccgt 1560

attgagaacc tcccagtcaa ggtctttgtg ctaaacaacc agcacctcgg gatggtggtg 1620

caggaggaca ggttctataa ggccaataga gcacacacat tcttgggaaa cccagagaac 1680

gaaagtgaga tatatccaga ttttgtggca attgccaaag ggttcaacat tccagcagtc 1740

cgtgtgacaa agaagagcga agtccatgca gcaatcaaga agatgcttga ggctccaggg 1800

ccgtacctct tggatataat cgtcccgcac caggagcatg tgttgcctat gatccctagt 1860

ggtggggctt tcaaggatat gatcctggat ggtgatggca ggactgtgta ttga 1914

<210> SEQ ID NO.4

<211> 1914

<212> DNA

<213> 玉米（Zea mays）

<400> 4

atggccaccg ccgccgccgc gtctaccgcg ctcactggcg ccactaccgc tgcgcccaag 60

gcgaggcgcc gggcgcacct cctggccacc cgccgcgccc tcgccgcgcc catcaggtgc 120

tcagcggcgt cacccgccat gccgatggct cccccggcca ccccgctccg gccgtggggc 180

cccaccgatc cccgcaaggg cgccgacatc ctcgtcgagt ccctcgagcg ctgcggcgtc 240

cgcgacgtct tcgcctaccc cggcggcgcg tccatggaga tccaccaggc actcacccgc 300

tcccccgtca tcgccaacca cctcttccgc cacgagcaag gggaggcctt tgcggcctcc 360

ggctacgcgc gctcctcggg ccgcgtcggc gtctgcatcg ccacctccgg ccccggcgcc 420

accaaccttg tctccgcgct cgccgacgcg ctgctcgatt ccgtccccat ggtcgccatc 480

acgggacagg tgccgcgacg catgattggc accgacgcct tccaggagac gcccatcgtc 540

gaggtcaccc gctccatcac caagcacaac tacctggtcc tcgacgtcga cgacatcccc 600

cgcgtcgtgc aggaggcttt cttcctcgcc tcctctggtc gaccggggcc ggtgcttgtc 660

gacatcccca aggacatcca gcagcagatg gcggtgcctg tctgggacaa gcccatgagt 720

ctgcctgggt acattgcgcg ccttcccaag ccccctgcga ctgagttgct tgagcaggtg 780

ctgcgtcttg ttggtgaatc ccggcgccct gttctttatg ttggcggtgg ctgcgcagca 840

tctggtgagg agttgcgacg ctttgtggag ctgactggaa tcccggtcac aactactctt 900

atgggcctcg gcaacttccc cagcgacgac ccactgtctc tgcgcatgct aggtatgcat 960

ggcacggtgt atgcaaatta tgcagtggat aaggccgatc tgttgcttgc acttggtgtg 1020

cggtttgatg atcgtgtgac agggaagatt gaggcttttg caagcagggc taagattgtg 1080

cacgttgata ttgatccggc tgagattggc aagaacaagc agccacatgt gtccatctgt 1140

gcagatgtta agcttgcttt gcagggcatg aatgctcttc ttgaaggaag cacatcaaag 1200

aagagctttg actttggctc atggaacgat gagttggatc agcagaagag ggaattcccc 1260

cttgggtata aaacatctaa tgaggagatc cagccacaat atgctattca ggttcttgat 1320

gagctgacga aaggcgaggc catcatcggc acaggtgttg ggcagcacca gatgtgggcg 1380

gcacagtact acacttacaa gcggccaagg cagtggttgt cttcagctgg tcttggggct 1440

atgggatttg gtttgccggc tgctgctggt gcttctgtgg ccaacccagg tgttactgtt 1500

gttgacatcg atggagatgg tagctttctc atgaacgttc aggagctagc tatgatccga 1560

attgagaacc tcccggtgaa ggtctttgtg ctaaacaacc agcacctggg gatggtggtg 1620

caggaggaca ggttctataa ggccaacaga gcgcacacat acttgggaaa cccagagaat 1680

gaaagtgaga tatatccaga tttcgtgacg atcgccaaag ggttcaacat tccagcggtc 1740

cgtgtgacaa agaagaacga agtccgcgca gcgataaaga agatgctcga gactccaggg 1800

ccgtacctct tggatataat cgtcccacac caggagcatg tgttgcctat gatccctagt 1860

ggtggggctt tcaaggatat gatcctggat ggtgatggca ggactgtgta ctga 1914

<210> SEQ ID NO.5

<211> 582

<212> PRT

<213> 玉米（Zea mays）

<400> 5

Leu Arg Pro Trp Gly Pro Asn Glu Pro Arg Lys Gly Ser Asp Ile Leu

1 5 10 15

Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly Val Arg Asp Val Phe Ala Tyr Pro

20 25 30

Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val

35 40 45

Ile Ala Asn His Leu Phe Arg His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala

50 55 60

Ser Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Arg Val Gly Val Cys Ile Ala Thr

65 70 75 80

Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu

85 90 95

Leu Asp Ser Val Pro Ile Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg

100 105 110

Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr

115 120 125

Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Asp Asp Ile

130 135 140

Pro Arg Val Val Gln Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro

145 150 155 160

Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala

165 170 175

Val Pro Ala Trp Asp Thr Pro Met Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg

180 185 190

Leu Pro Lys Pro Pro Ala Thr Glu Phe Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu

195 200 205

Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala

210 215 220

Ala Ser Gly Glu Glu Leu Cys Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro

225 230 235 240

Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro

245 250 255

Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr

260 265 270

Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp

275 280 285

Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu Ala Phe Ala Gly Arg Ala Lys Ile

290 295 300

Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro

305 310 315 320

His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn

325 330 335

Thr Leu Leu Glu Gly Ser Thr Ser Lys Lys Ser Phe Asp Phe Gly Ser

340 345 350

Trp His Asp Glu Leu Asp Gln Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr

355 360 365

Lys Ile Phe Asn Glu Glu Ile Gln Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu

370 375 380

Asp Glu Leu Thr Lys Gly Lys Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln

385 390 395 400

His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln

405 410 415

Trp Leu Ser Ser Ala Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala

420 425 430

Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile

435 440 445

Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Met Ile

450 455 460

Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys Val Phe Val Leu Asn Asn Gln His

465 470 475 480

Leu Gly Met Val Val Gln Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala

485 490 495

His Thr Phe Leu Gly Asn Pro Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp

500 505 510

Phe Val Ala Ile Ala Lys Gly Phe Asn Ile Pro Ala Val Arg Val Thr

515 520 525

Lys Lys Ser Glu Val His Ala Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Ala Pro

530 535 540

Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu

545 550 555 560

Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Met Ile Leu Asp Gly

565 570 575

Asp Gly Arg Thr Val Tyr

580

<210> SEQ ID NO.6

<211> 582

<212> PRT

<213> 玉米（Zea mays）

<400> 6

Leu Arg Pro Trp Gly Pro Thr Asp Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu

1 5 10 15

Val Glu Ser Leu Glu Arg Cys Gly Val Arg Asp Val Phe Ala Tyr Pro

20 25 30

Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val

35 40 45

Ile Ala Asn His Leu Phe Arg His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala

50 55 60

Ser Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Arg Val Gly Val Cys Ile Ala Thr

65 70 75 80

Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu

85 90 95

Leu Asp Ser Val Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg

100 105 110

Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr

115 120 125

Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Asp Asp Ile

130 135 140

Pro Arg Val Val Gln Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro

145 150 155 160

Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala

165 170 175

Val Pro Val Trp Asp Lys Pro Met Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg

180 185 190

Leu Pro Lys Pro Pro Ala Thr Glu Leu Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu

195 200 205

Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala

210 215 220

Ala Ser Gly Glu Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro

225 230 235 240

Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro

245 250 255

Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr

260 265 270

Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ala Leu Gly Val Arg Phe Asp

275 280 285

Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile

290 295 300

Val His Val Asp Ile Asp Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro

305 310 315 320

His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn

325 330 335

Ala Leu Leu Glu Gly Ser Thr Ser Lys Lys Ser Phe Asp Phe Gly Ser

340 345 350

Trp Asn Asp Glu Leu Asp Gln Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr

355 360 365

Lys Thr Ser Asn Glu Glu Ile Gln Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu

370 375 380

Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala Ile Ile Gly Thr Gly Val Gly Gln

385 390 395 400

His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln

405 410 415

Trp Leu Ser Ser Ala Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala

420 425 430

Ala Ala Gly Ala Ser Val Ala Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile

435 440 445

Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met Asn Val Gln Glu Leu Ala Met Ile

450 455 460

Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys Val Phe Val Leu Asn Asn Gln His

465 470 475 480

Leu Gly Met Val Val Gln Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala

485 490 495

His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp

500 505 510

Phe Val Thr Ile Ala Lys Gly Phe Asn Ile Pro Ala Val Arg Val Thr

515 520 525

Lys Lys Asn Glu Val Arg Ala Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro

530 535 540

Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu

545 550 555 560

Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Met Ile Leu Asp Gly

565 570 575

Asp Gly Arg Thr Val Tyr

580

<210> SEQ ID NO.7

<211> 1749

<212> DNA

<213> 玉米（Zea mays）

<400> 7

ctacgtccgt ggggccccaa cgagccccgc aagggctccg acatcctcgt cgaggctctc 60

gagcgctgtg gcgtccgtga cgtcttcgcc taccccggcg gcgcatccat ggagatccac 120

caggcactca cccgctcccc cgtcatcgcc aaccacctct tccgccacga acaaggggag 180

gccttcgccg cctccggcta cgcgcgctcc tcgggccgcg ttggcgtctg catcgccacc 240

tccggccccg gcgccaccaa cctagtctct gcgctcgcag acgcgttgct cgactccgtc 300

cccattgtcg ccatcacggg acaggtgccg cgacgcatga ttggcaccga cgcctttcag 360

gagacgccca tcgtcgaggt cacccgctcc atcaccaagc acaactacct ggtcctcgac 420

gtcgacgaca tcccccgcgt cgtgcaggag gccttcttcc tcgcatcctc tggtcgcccg 480

gggccggtgc ttgttgacat ccccaaggac atccagcagc agatggcggt gccggcctgg 540

gacacgccca tgagtctgcc tgggtacatc gcgcgccttc ccaagcctcc cgcgactgaa 600

tttcttgagc aggtgctgcg tcttgttggt gaatcacggc gccctgttct ttatgttggc 660

ggtggctgtg cagcatcagg tgaggagttg tgccgctttg tggagttgac tggaatccca 720

gtcacaacta ctcttatggg ccttggcaac ttccccagcg acgacccact gtcactgcgc 780

atgcttggta tgcatggcac agtgtatgca aattatgcag tggataaggc cgatctgttg 840

cttgcatttg gtgtgcggtt tgatgatcgt gtgacaggga aaattgaggc ttttgcaggc 900

agagctaaga ttgtgcacat tgatattgat cctgctgaga ttggcaagaa caagcagcca 960

catgtgtcca tctgtgcaga tgttaagctt gctttgcagg gcatgaatac tcttctggaa 1020

ggaagcacat caaagaagag ctttgacttc ggctcatggc atgatgaatt ggatcagcaa 1080

aagcgggagt ttccccttgg gtataaaatc ttcaatgagg aaatccagcc acaatatgct 1140

attcaggttc ttgatgagtt gacgaagggg aaggccatca ttgccacagg tgttgggcag 1200

caccagatgt gggcggcaca gtattacact tacaagcggc caaggcagtg gctgtcttca 1260

gctggtcttg gggctatggg atttggtttg ccggctgctg ctggtgctgc tgtggccaac 1320

ccaggtgtca ctgttgttga catcgacgga gatggtagct tcctcatgaa cattcaggag 1380

ctagctatga tccgtattga gaacctccca gtcaaggtct ttgtgctaaa caaccagcac 1440

ctcgggatgg tggtgcagga ggacaggttc tataaggcca atagagcaca cacattcttg 1500

ggaaacccag agaacgaaag tgagatatat ccagattttg tggcaattgc caaagggttc 1560

aacattccag cagtccgtgt gacaaagaag agcgaagtcc atgcagcaat caagaagatg 1620

cttgaggctc cagggccgta cctcttggat ataatcgtcc cgcaccagga gcatgtgttg 1680

cctatgatcc ctagtggtgg ggctttcaag gatatgatcc tggatggtga tggcaggact 1740

gtgtattga 1749

<210> SEQ ID NO.8

<211> 1749

<212> DNA

<213> 玉米（Zea mays）

<400> 8

ctccggccgt ggggccccac cgatccccgc aagggcgccg acatcctcgt cgagtccctc 60

gagcgctgcg gcgtccgcga cgtcttcgcc taccccggcg gcgcgtccat ggagatccac 120

caggcactca cccgctcccc cgtcatcgcc aaccacctct tccgccacga gcaaggggag 180

gcctttgcgg cctccggcta cgcgcgctcc tcgggccgcg tcggcgtctg catcgccacc 240

tccggccccg gcgccaccaa ccttgtctcc gcgctcgccg acgcgctgct cgattccgtc 300

cccatggtcg ccatcacggg acaggtgccg cgacgcatga ttggcaccga cgccttccag 360

gagacgccca tcgtcgaggt cacccgctcc atcaccaagc acaactacct ggtcctcgac 420

gtcgacgaca tcccccgcgt cgtgcaggag gctttcttcc tcgcctcctc tggtcgaccg 480

gggccggtgc ttgtcgacat ccccaaggac atccagcagc agatggcggt gcctgtctgg 540

gacaagccca tgagtctgcc tgggtacatt gcgcgccttc ccaagccccc tgcgactgag 600

ttgcttgagc aggtgctgcg tcttgttggt gaatcccggc gccctgttct ttatgttggc 660

ggtggctgcg cagcatctgg tgaggagttg cgacgctttg tggagctgac tggaatcccg 720

gtcacaacta ctcttatggg cctcggcaac ttccccagcg acgacccact gtctctgcgc 780

atgctaggta tgcatggcac ggtgtatgca aattatgcag tggataaggc cgatctgttg 840

cttgcacttg gtgtgcggtt tgatgatcgt gtgacaggga agattgaggc ttttgcaagc 900

agggctaaga ttgtgcacgt tgatattgat ccggctgaga ttggcaagaa caagcagcca 960

catgtgtcca tctgtgcaga tgttaagctt gctttgcagg gcatgaatgc tcttcttgaa 1020

ggaagcacat caaagaagag ctttgacttt ggctcatgga acgatgagtt ggatcagcag 1080

aagagggaat tcccccttgg gtataaaaca tctaatgagg agatccagcc acaatatgct 1140

attcaggttc ttgatgagct gacgaaaggc gaggccatca tcggcacagg tgttgggcag 1200

caccagatgt gggcggcaca gtactacact tacaagcggc caaggcagtg gttgtcttca 1260

gctggtcttg gggctatggg atttggtttg ccggctgctg ctggtgcttc tgtggccaac 1320

ccaggtgtta ctgttgttga catcgatgga gatggtagct ttctcatgaa cgttcaggag 1380

ctagctatga tccgaattga gaacctcccg gtgaaggtct ttgtgctaaa caaccagcac 1440

ctggggatgg tggtgcagga ggacaggttc tataaggcca acagagcgca cacatacttg 1500

ggaaacccag agaatgaaag tgagatatat ccagatttcg tgacgatcgc caaagggttc 1560

aacattccag cggtccgtgt gacaaagaag aacgaagtcc gcgcagcgat aaagaagatg 1620

ctcgagactc cagggccgta cctcttggat ataatcgtcc cacaccagga gcatgtgttg 1680

cctatgatcc ctagtggtgg ggctttcaag gatatgatcc tggatggtga tggcaggact 1740

gtgtactga 1749