本发明属于医药领域，具体涉及一种从灰灰菜(chenopodiumalbumlinn)中分离得到新生物碱化合物，以及其在制备抗癌药物中的用途。
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：：灰灰菜(chenopodiumalbumlinn)为黎科黎属一年生草本植物，全草可入药，亦可作为野菜而食用，种子可榨油。灰灰菜广泛分布于我国大部分地区,资源非常丰富，是我国重要的药食两用植物。灰灰菜，味甘、平，具有清热、降压、杀虫、解毒等功效，临床上常用于治疗痢疾、腹泻等疾病。为充分开发灰灰菜在医药方面的潜在价值，深入挖掘其有效成分是非常必要的。技术实现要素：本发明的目的是涉及一种从灰灰菜(chenopodiumalbumlinn)中分离得到新生物碱化合物，以及其在制备抗癌药物中的用途。为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：一种新生物碱化合物，分子式为：c16h15no4，化学结构式如下：上述生物碱化合物的制备方法，包括如下步骤：（1）用乙醇提取灰灰菜，得到灰灰菜乙醇提取物；（2）采用酸溶碱沉法从灰灰菜乙醇提取物中分离出总生物碱；（3）将步骤（2）的总生物碱用石油醚溶解，上硅胶柱，用石油醚-乙酸乙酯洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯体积为8:1时的洗脱液，干燥得到亚馏分i；（4）将步骤（3）所得亚馏分i用石油醚溶解，上硅胶柱，用石油醚-丙酮洗脱，收集石油醚-丙酮体积为9:1时的洗脱液，干燥得到亚馏分ii；（5）将步骤（4）的亚馏分ii用纯甲醇溶解，上sephadexlh-20柱和toyopearlhw-40柱进行纯化，流动相为纯甲醇，然后再用半制备液相（c18柱）进行分离，流动相：90-95vt%的甲醇，吸收波长：210nm。优选地，步骤（1）采用浓度为85～95vt%的乙醇进行提取。料液比可控制在2:1～1:1w/w。优选地，步骤（2）所述酸溶碱沉法的具体操作为：将灰灰菜乙醇提取物用浓度为1.2～1.6wt%的盐酸溶液溶解，过滤除去酸不溶物后，再调节ph至8～10，用氯仿萃取，得到总生物碱。优选地，步骤（3）所述硅胶柱的硅胶目数为100～200目，步骤（4）所述硅胶柱的硅胶目数为200～300目。上述生物碱化合物作为活性成分在制备抗癌药物中的应用，如抗肝癌药物、抗乳腺癌药物、抗肺癌药物和抗结肠癌药物。本发明采用酸溶碱沉法富集灰灰菜中的总生物碱，综合利用各种柱层析色谱和半制备色谱从总生物碱中分离得到一种新生物碱化合物，该化合物结构新颖，并且提取与分离方法简便、快捷，效率较高。本发明发现该化合物具有显著的抗癌活性，在研制新的抗癌药物中具有潜在价值，提高灰灰菜在医药方面的经济效益。附图说明附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：图1是生物碱单体化合物1的制备流程图；图2是生物碱单体化合物1的偶联相关图。具体实施方式以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。实施例1一、生物碱单体的制备流程如图1所示，具体操作如下：（1）取干燥的灰灰菜地上部分18.0千克为原料，用90vt%的乙醇(11l×3)回流提取3次，每次2.5小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到1.6千克稠膏。将此稠膏分散在4000毫升1.4wt%hcl溶液中，静置24小时，过滤，除去酸不溶性成分，再用氨水将溶液调至ph=9.5，再用chcl3进行萃取，干燥，得到总生物碱21.6克。（2）将步骤（1）所得的总生物碱用石油醚溶解，上硅胶柱（硅胶100-200目），进行柱层析分离，依次采用15:1、8:1、4:1(v/v)的石油醚-乙酸乙酯洗脱，分别收集洗脱液，干燥得到3个亚馏分：a（4.58克）、b（8.95克）、c（3.95克）。（3）将亚馏分b用石油醚溶解，上硅胶柱（硅胶200-300目），进行柱层析分离，依次用12:1、9:1、6:1、4:1(v/v)的石油醚-丙酮洗脱，分别收集洗脱液，干燥得到亚馏分b1（1.84克）、b2（3.46克）、b3（2.05克）、b4（1.26克）。（4）将步骤（4）的亚馏分b2用纯甲醇溶解，上sephadexlh-20柱和toyopearlhw-40柱进行纯化，流动相为纯甲醇，然后再用半制备液相（c18柱）进行分离，流动相：90-95vt%的甲醇，吸收波长：210nm，流速：7ml/min，如分离的单体不够纯净，可重复进行半制备色谱分离，直至分离得到生物碱单体化合物1（8.25毫克），过sephadexlh-20柱和toyopearlhw-40柱的顺序并无特别的要求。化合物的1hnmr(dmso-d6，400mhz)和13cnmr(dmso-d6，100mhz)数据见table1。表1化合物1的1hnmr、13cnmr和hmbc相关数据利用化合物1的波谱数据和理化性质，鉴定该化合物为一生物碱化合物，分子式：c16h15no4，结构式为：，命名为：n-benzylalternamideb。化合物1的hmbc、1h-1hcosy等偶联相关见图2。二、化合物1的抗癌活性（1）仪器、试剂和细胞株灭菌锅，酶标仪，co2恒温培养箱，显微镜，co2恒温培养箱，96孔微量稀释板，高速离心机。胰酶，pbs，mtt液，dmso，优级新生牛血清。阳性对照品：顺铂。肝癌细胞（smmc-7721），乳腺癌细胞（mcf-7），肺癌细胞（a-549）、hct116（人结肠癌细胞）。（2）mtt法原理3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯四氮唑溴盐（mtt）是一种能够接受h+的黄色染料。在活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶和细胞色素c的作用下，mtt代谢生成蓝紫色formazan结晶，此结晶的量与活细胞数目成正比关系且该结晶在dmso溶液中存在最大吸收峰约570nm。因此，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，间接反映活细胞数量，进而评价药物对细胞增殖的影响。（3）测定方法取对数生长期的细胞，消化后充分吹打成单细胞悬液，计数后稀释成1×104cell/ml接种到96孔微量培养板内，培养12h后加入化合物1。同时设置对照组和空白组，并且每个细胞株，每个浓度梯度需做三组平行实验。当细胞在37℃、5%co2条件下培养48h后，离心除去培养液，用pbs冲洗2-3次，加5mg/mlmtt液并用生理盐水分别配置20μl/孔，培养4h后除去培养液，再加入dmso100μl/孔。在培养箱中培养直至固体物充分溶解，然后用酶标仪酶标仪上测定570nm处的光密度值。根据下面公式计算肿瘤细胞生成抑制率，再以药物浓度对肿瘤细胞生成抑制率作图得到计量曲线，从曲线上读取药物的半数抑制浓度（ic50）值。计算公式：细胞的抑制率%=[(对照组的od值-加药组的od值)/对照组od的值]×100%。（4）实验结果采用mtt法对分离得到的化合物1进行了抗肿瘤细胞活性测试，按照测定方法计算细胞的抑制率，并以药物浓度的对数值为横坐标，细胞抑制率为纵坐标，拟合回归方程，计算ic50值。筛选结果见表2。表2化合物1的抗癌活性筛选结果（5）结论上述mtt法药理筛选结果表明，化合物1对肿瘤细胞增殖具有显著地抑制作用，可以作为细胞增殖抑制剂或抗肿瘤剂用于抗肿瘤的研究。因此，本发明所述的新生物碱化合物对于研制具有抗肿瘤的药物具有重要意义。最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12当前第1页12