一种制备尿激酶的方法与流程

技术特征：

1.一种制备尿激酶的方法，包括：

a)将尿激酶基因克隆到载体中，得到克隆质粒；

b)将步骤a)得到的克隆质粒转染进Drosophila S2细胞，得到表达尿激酶的Drosophila S2细胞；

c)对步骤b)得到的表达尿激酶的Drosophila S2细胞进行培养，对培养后的细胞进行处理，得到尿激酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)中所述基因为人尿激酶全基因cDNA，克隆位点为NcoI和XhoI；

所述人尿激酶全基因cDNA末端加上可表达6个组氨酸的cDNA。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)中所述载体为pMT/Bip/V5-A。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)中所述质粒带有Bip信号序列、氨苄青霉素和嘌呤霉素抗性基因。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，处理具体为除去细胞培养上清液，加入表达液，对培养瓶进行摇晃，收集上清液，将上清液过柱，洗脱液洗脱，收集尿激酶。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述表达液为含500μM硫酸铜的无血清培养液。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，摇晃条件时间为72h，转速为225r/min。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述柱为镍柱；

所述洗脱液为含咪唑的TBS，pH为7.2。

9.根据权利要求1所述的方法，还包括，对步骤b)得到的表达尿激酶的Drosophila S2细胞进行筛选，得到高表达尿激酶的Drosophila S2细胞；

筛选培养液为含有10％的胎牛血清的Snyder培养液；

所述筛选培养液添加了氨苄青霉素和嘌呤霉素，氨苄青霉素浓度为50μg/ml，嘌呤霉素浓度为2μg/ml。

10.根据权利要求1所述的方法，还包括，将步骤c)得到的尿激酶透析进行纯化，得到高纯度的尿激酶；

所述透析袋为截留分子量为10KD，透析液为pH7.2的TBS，透析时间为24h。