本发明属于化学合成技术领域，涉及一种采用两步方法制备多烯酸磷脂化合物的方法，尤其是涉及一种制备工艺简单、反应条件温和、合成成本低的多烯酸磷脂化合物的制备方法。
背景技术：
磷脂广泛存在于动植物的组织及微生物中，是细胞膜、神经组织的主要成分。磷脂按来源分为动物来源、植物来源和微生物来源。目前，大豆磷脂与蛋黄磷脂是国内磷脂市场上的两种主要产品，然而两者所含不饱和脂肪酸主要为油酸(C18:1)、亚油酸(C18:2)和亚麻酸(C18:3)等，不饱和程度相对较低，且n–3的多烯酸(PUFAs)含量较少。因为以磷脂形式存在的多不饱和脂肪酸比以甘油三酯形式存在的更易被吸收。作为多烯酸磷脂，不但拥有磷脂和n–3多烯酸各自功能特性的基础上具有更多独特的生物学活性。多烯酸磷脂能够抑制肿瘤生长、降低血清脂质水平[Shahidi F，Omega-3(n-3)fatty acids in health and disease:Part 1-cardiovascular disease and cancer.Journal of Medicinal Food，2004，7(4):387-401]，显现更好的细胞膜穿透性，癌症治疗作用，增强学习记忆能力等。
目前，已经报道的多烯酸磷脂的合成方法主要如下有2种：
(1)含羟基的烷醇酰胺(由多烯酸与醇胺在碱催化剂作用下反应制备)与磷酸化试剂P2O5反应，可制得相应的磷酸酯，P2O5在反应过程中逐渐醇解，所以反应产物是由烷基磷酸单酯、烷基磷酸双酯、烷基磷酸三酯、多聚磷酸酯等组成的混合物(王学川，改性鱼油磷酸酯加脂剂的合成及应用，中国皮革，2003，32，13-15.)。
(2)将多不饱脂肪酸和磷酰化醇胺(由亚磷酸酯与醇胺在催化剂CCl4作用下反应制备)混合均匀，在酯缩合剂的作用下，制备得到系列多不饱和脂肪酰磷脂衍生物，酯缩合剂包括N，N-二甲基甲酰胺、三乙胺和草酰氯的二氯甲烷混合溶液(方华，一种多不饱和脂肪酰磷脂衍生物及其制备方法及其应用，中国专利ZL201510204484.6)。
然而，以上两种多烯酸磷脂的合成方法需要用到极易水解的P2O5或草酰氯，并且操作要求严格无水，否则反应无法进行，同时都需要加入催化剂以及一些有毒的有机溶剂，不利于产业化大生产。
技术实现要素：
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种制备工艺简单、反应条件温和、合成成本低、溶剂毒性小的多烯酸磷脂化合物的制备方法。
为了实现本发明的技术目的，发明人通过大量试验研究并不断探索，最终获得了如下技术方案：
一种两步法制备多烯酸磷脂化合物的方法，该方法分两步进行，第一步在NaClO的作用下获得中间产物二乙基磷酰化-3-氨基-1-丙醇，第二步在N,N-二环己基碳二亚胺的作用下获得目标产物多烯酸磷脂化合物，化学反应如下：
其中R是碳原子数为16～25的不饱和烃基。
优选地，如上所述两步法制备多烯酸磷脂化合物的方法，其中的R是碳原子数为20～22的n-3不饱和烃基。
进一步优选地，如上所述两步法制备多烯酸磷脂化合物的方法，其中该方法具体包括如下步骤：
1)第一步反应在容器中加入3-氨基-1-丙醇和二乙基亚磷酸酯，并置于低温冷却泵中，在搅拌的情况下，慢慢滴加NaClO水溶液，反应结束后，有机溶剂萃取，获得中间产物(O,O)-二乙基磷酰化-3-氨基-1-丙醇；
2)第二步反应在另一个容器中加入多烯酸和步骤1所述的中间产物，置于室温中，在搅拌的情况下，慢慢滴加溶于乙酸乙酯的N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)溶液，反应结束后，除去固体N,N-二环己基脲，获得目标产物多烯酸磷脂粗产物，常压硅胶柱层析即得多烯酸磷脂。
进一步优选地，如上所述两步法制备多烯酸磷脂化合物的方法，其中的低温冷却泵其温度是0-5℃。
进一步优选地，如上所述两步法制备多烯酸磷脂化合物的方法，其中步骤1)中3-氨基-1-丙醇、二乙基亚磷酸酯和NaClO的摩尔用量比为(1～1.5)：1：(6～13)。
进一步优选地，如上所述两步法制备多烯酸磷脂化合物的方法，其中步骤2)中多烯酸、(O,O)-二乙基磷酰化-3-氨基-1-丙醇和N,N-二环己基碳二亚胺的摩尔用量比为(0.8～1.3)：1：(1～1.4)。
进一步优选地，如上所述两步法制备多烯酸磷脂化合物的方法，其中步骤1)中所述的有机溶剂选自如下的一种：乙酸乙酯，叔戊醇，体积比1:3的叔丁醇/乙酸乙酯。
再进一步优选地，如上所述两步法制备多烯酸磷脂化合物的方法，其中的多烯酸选自如下的一种或两种以上：二十二碳六烯酸，二十碳五烯酸，二十二碳五烯酸，二十碳四烯酸。
与现有技术相比，本发明提供的方法具有制备工艺简单、反应条件温和、合成成本低的有点，并且避免了使用有毒的CCl4，三乙胺等有机试剂，同时该反应的技术路线可适用于公斤级中试的制备，是一种制备多烯酸磷脂化合物高效且便捷的方法。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。另外，实施例中未注明具体技术操作步骤或条件者，均按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：
在200mL三颈瓶中，加入0.1mol(7.5g)3-氨基-1-丙醇和0.1mol(13.8g)二乙基亚磷酸酯并置于0℃低温冷却泵中，在搅拌的情况下，慢慢滴加1.25mol(92.5g)次氯酸钠水溶液(密度按1.0g/mL算，NaClO含量按8％算)，反应结束后，乙酸乙酯萃取一次，干燥，浓缩获得8.6g(O，O)-二乙基磷酰化-3-氨基-1-丙醇中间产物，待用。在另一个100mL圆底烧瓶中加入0.03mol(10g)多烯酸(即含有20～22个碳原子的n-3不饱和烃基的脂肪酸混合物)和0.03mol(6.33g)上述中间产物，置于室温中，在搅拌的情况下，慢慢滴加溶于30mL乙酸乙酯的0.036mol(7.42g)N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)溶液，反应结束后，除去固体N，N-二环己基脲，获得目标产物多烯酸磷脂粗产物，常压硅胶柱层析即得11.8g多烯酸磷脂，收率76％。
实施例2：
在200mL三颈瓶中，加入0.1mol(7.5g)3-氨基-1-丙醇和0.1mol(13.8g)二乙基亚磷酸酯并置于5℃低温冷却泵中，在搅拌的情况下，慢慢滴加1.0mol(74g)次氯酸钠水溶液(密度按1.0g/mL算，NaClO含量按8％算)，反应结束后，乙酸乙酯萃取一次，干燥，浓缩获得7.2g(O，O)-二乙基磷酰化-3-氨基-1-丙醇中间产物，待用。在另一个100mL圆底烧瓶中加入0.03mol(10g)多烯酸(即含有20～22个碳原子的n-3不饱和烃基的脂肪酸混合物)和0.03mol(6.33g)上述中间产物，置于室温中，在搅拌的情况下，慢慢滴加溶于30mL乙酸乙酯的0.033mol(6.80g)DCC溶液，反应结束后，除去固体N，N-二环己基脲，获得目标产物多烯酸磷脂粗产物，常压硅胶柱层析即得11.2g多烯酸磷脂，收率72％。
实施例3：
在20L玻璃反应釜瓶中，加入10mol(750g)3-氨基-1-丙醇和10mol(1380g)二乙基亚磷酸酯，调节低温冷却循环泵温度使釜内反应液温度低于5℃，在搅拌的情况下，慢慢滴加120mol(8.9kg)次氯酸钠水溶液(密度按1.0g/mL算，NaClO含量按8％算)，反应结束后，乙酸乙酯萃取一次，干燥，浓缩获得703g(O，O)-二乙基磷酰化-3-氨基-1-丙醇中间产物，待用。在另一个5L三角烧瓶中加入3mol(1kg)多烯酸(即含有20～22个碳原子的n-3不饱和烃基的脂肪酸混合物)和3mol(633g)上述中间产物，置于室温中，在搅拌的情况下，慢慢滴加溶于1200mL乙酸乙酯的4.2mol(865g)DCC溶液，反应结束后，除去固体N，N-二环己基脲，获得目标产物多烯酸磷脂粗产物，常压硅胶柱层析即得1078g多烯酸磷脂，收率68.9％。