本发明涉及一种n-[4-(烷氧基)-苯磺酰基]-5-芳基-恶唑-2-硫酮类神经氨酸酶抑制剂及其制备方法，属于药物化学技术领域。
背景技术：
板蓝根性寒、味苦，有凉血利咽、清热解毒的功能，它始载于《神农本草经》，是一种临床常用的中药。板蓝根中含有多种化学成分，其中，有研究表明板蓝根提取物中的表告依春(式-1)具有抗病毒活性,但对神经氨酸酶的抑制活性不高，ic50值为毫摩尔级别。
技术实现要素：
为了克服现有技术的不足，本发明以表告依春为现代化合物，进行结构修改。目的在于提供一种新型、高效的n-[4-(烷氧基)-苯磺酰基]-5-芳基-恶唑-2-硫酮类神经氨酸酶抑制剂及其制备方法。
本发明技术方案具体介绍如下。
本发明提供了一种n-[4-(烷氧基)-苯磺酰基]-5-芳基-恶唑-2-硫酮类神经氨酸酶抑制剂，其具有式ⅰ所示结构：
其中：
ar选自
中任意一种：其中：
r1选自甲氧基、甲基、氢、羟基、硝基、氟、氯、溴或氰基中任意一种；r1的位置为2、3或4位取代，或者为2,3二取代，2,4二取代，2,5二取代，3,4二取代，或3,5二取代；
r选自
中任意一种：其中：
r2选自甲氧基、甲基、氢、羟基、硝基、氟、氯、溴或氰基中任意一种；n＝2，3，4或8。
本发明中，优选的，r1选自甲氧基、甲基、氢、羟基、氯或溴中任意一种；r1的位置为2或4位取代，或者为2,4二取代或3,4二取代。
本发明还提供一种上述n-[4-(烷氧基)-苯磺酰基]-5-芳基-恶唑-2-硫酮类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，具体步骤如下：
(1)将芳香醛archo和高氯酸锂liclo4·3h2o、三甲基氰硅烷tmscn反应得到式ⅱ所示结构的氰基类似物；
(2)将式ⅱ所示结构的氰基类似物在还原剂和添加剂作用下，在溶剂中还原得到式ⅲ所示结构的羟基取代的氨类化合物；
(3)将式ⅲ所示结构的羟基取代的氨类化合物和二硫化碳在碱性溶液中回流反应，得到式ⅳ所示结构的中间体；
(4)将对羟基苯磺酸钠在碱性条件下与烷基化试剂反应，得到式ⅴ所示结构的醚类化合物；(5)将式ⅴ所示结构醚类化合物与氯化试剂反应，得到式ⅵ所示结构的磺酰氯类化合物；
(6)通过将式ⅵ所示结构的磺酰氯类化合物对式ⅳ所示结构的1，3-恶唑-2-硫酮类中间体中的亚氨基活泼氢的取代得到式ⅰ所示结构的n-[4-(烷氧基)-苯磺酰基]-5-芳基-恶唑-2-硫酮类神经氨酸酶抑制剂；其化学反应式如下所示：
上述步骤(2)中，还原剂选自h2、nabh4或lialh4中任意一种；添加剂选自钯碳、cf3cooh、ni、incl3或i2中任意一种。优选还原剂为nabh4，添加剂为cf3cooh。
上述步骤(2)中，式ⅱ所示结构的氰基类似物、还原剂和添加剂的投料摩尔比为1：(0.5～4)：(0.5～4)。优选反应物、还原剂和添加剂的投料摩尔比为1：3：1。
上述步骤(4)中，碱性试剂选自碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、氢化钠和三乙胺中任意一种。优选碱性试剂为氢化钠。
上述步骤(5)中，氯化试剂选自五氯化磷、三氯氧磷或二氯化砜中任意一种。优选氯化试剂为二氯化砜。
和现有技术相比，本发明的有益效果在于：
(1)本发明合成的化合物结构新颖，均为首次报道；
(2)本发明合成的化合物具有良好的神经氨酸酶抑制活性，ic50值可达24μm，活性比表告依春活性高100倍。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进行详细阐述。
本发明的n-[4-(烷氧基)-苯磺酰基]-5-芳基-恶唑-2-硫酮类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，具体步骤如下所述：
⑴100ml的茄形瓶中依次加入archo(1.0mmol)、tmscn(2.0mmol)和liclo4·3h2o(1.0mmol)，室温条件下反应0.5-1h。tlc检测确定原料反应完全，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取，合并有机相并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸馏浓缩后用硅胶柱层析分离得到醛基加成产物ⅱ；
⑵称取nabh4(3.0mmol)溶于thf(5.0ml)中，0℃下缓慢滴加cf3cooh(1.0mmol)。将化合物ⅱ溶于thf(2ml)中，加入到反应体系中，室温条件下反应12h。tlc检测确定原料反应完全，0℃下缓慢滴加饱和氯化铵溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取，合并有机相并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸馏浓缩后用硅胶柱层析分离得到化合物ⅲ；
⑶25ml的茄形瓶中依次加入化合物ⅲ(1.0mmol)，h2o(5ml)，na2co3(2.0mmol)和cs2(1.5mmol)，油浴加热至100℃下回流反应12h，tlc检测确定原料反应完全，反应体系冷却到室温后，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。合并有机相并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸馏浓缩后用硅胶柱层析分离得到化合物iv。
⑷称取4-羟基苯磺酸钠(1.0mmol)溶于dmf(5ml)中，冰浴条件下加入nah(1.2mmol)搅拌30min，然后加入烷基化试剂(1.2mmol)室温条件下过夜反应，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取，合并有机相并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥处理并浓缩，硅胶柱层析得到化合物ⅴ；
⑸25ml的茄形瓶中依次加入化合物ⅴ(1.0mmol)，dmf(1.0ml)和socl2(1.2mmol)，室温下搅拌5min，将混合物倒入冰水中，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取，合并有机相并用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥处理并浓缩，硅胶柱层析得到化合物ⅳ。
⑹称取化合物ⅳ(0.1mmol)溶于二氯甲烷中，依次加入et3n(1ml)和化合物ⅵ(0.12mmol)，室温条件下反应。tlc检测确定原料反应完全用，用二氯甲烷(3×10ml)萃取，合并有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥处理并蒸馏浓缩得到粗产品。硅胶柱层析得到n-【4-(烷氧基)-苯磺酰基】-5-芳基-恶唑-2-硫酮i。
神经氨酸酶抑制活性的测试：将样品用dmso稀释成试验浓度，96孔荧光酶标板内加入神经氨酸酶检测缓冲液，神经氨酸酶，milli-q水以及待筛选的神经氨酸酶抑制剂样品，同时设3组空白对照实验组。室温摇床振动混匀，37℃孵育2min后，每孔加入10μl神经氨酸酶荧光底物，再振动混匀，37℃孵育30min后进行荧光测定。在荧光酶标仪上设定激发波长为322nm，发射波长为450nm，测定荧光强度(rfu)，计算每个样品浓度梯度的抑制率，再通过origin拟合得到相应的ic50。
实施例1：3-(4-丁氧基)苯磺酰基-5-4-(氯苯乙烯基)恶唑-2-硫酮
ic50值：64μm。
1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.01(d,j＝9.0hz,2h),7.35–7.30(m,4h),6.99(d,j＝9.0hz,2h),6.62(d,j＝15.5hz,1h),6.20(dd,j＝15.5,8.5hz,1h),4.86–4.81(m,1h),4.56(m,2h),4.05(t,j＝6.5hz,2h),1.85–1.80(m,2h),1.56–1.49(m,2h),1.02(t,j＝7.5hz,3h)
实施例2：3-(4-苄氧基)苯基磺酰基-5-(4-氯苯乙烯基)恶唑-2-硫酮
ic50值：45μm。
1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.03(d,j＝9.0hz,2h),7.45-7.41(m,4h),7.40-7.39(m,1h),7.3-7.30(m,4h),7.08(d,j＝9.0hz,2h),6.62(d,j＝15.5hz,1h),6.20(dd,j＝15.5,8.0hz,1h),5.16(s,2h),4.86-4.82(m,1h),4.61–4.52(m,2h).
实施例3：3-(4-苄氧基)苯基磺酰基-5-(2-噻吩)恶唑-2-硫酮
ic50值：24μm。
1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.98(d,j＝8.5hz,2h),7.43-7.40(m,5h),7.32-7.31(m,1h),7.09-7.07(m,3h),6.98(s,1h),5.22-5.20(m,1h),5.17(s,2h),5.01–4.97(m,1h),4.73-4.70(m,1h).