一种公共卫生场所空气采样中和培养基的制作方法

本发明涉及培养基制备技术领域，具体为一种公共卫生场所空气采样中和培养基。

背景技术：

公共卫生场所空气的微生物受到消毒剂的化学成分影响，首先解决公共场所空气中消毒作用的多种化学物质成分是关键核心部分，并且需要严格掌握其作用时间。这项技术是根据公共卫生场所中空气消毒剂与微生物接触一定时间之后，空气中的微生物发生变化评价空气消毒剂效果，以至于比较市面销售的各种空气消毒剂(包括室内空气消毒剂)及开发更有效地空气消毒剂的开发与生产。目前为止，除去空气中残留消毒剂化学成分的方法已有很多，例如来源于中国期刊网2016年7期《心理医生》，于2016年8月发表的残余消毒剂的清除方法，针对消毒剂中存在的酸、碱的成分，即选用吸附、稀释、离心、过滤等方法来除去残留化学成分。但是这些方法存在局限性，稀释方法的缺点是若标本中存活的菌数已经较少，经过再稀释后会使标本中的细菌大幅度降低，导致在检测室检验不出，致使假阴性的结果发生，过滤法使用过程相对比较复杂，对操作人员的技术要求较高，这些方法都比较简单，局限性比较大，目前方法中使用较多的是化学中和法，现在中和剂种类有很多，但针对不同消毒剂和细菌，至今尚无理想的中和剂来进行处理，所以如何采取空气样本中不含残余消毒剂多种化学物质是这项技术的将解决核心部分，才能使空气质量检测方法更准确、可靠。为此，我们选用新型空气采样中和培养基技术，全面去除残留的空气消毒剂各种化学成分，以培养空气中存在的细菌来考察对公共空气中进行消毒的空气消毒剂的效果高低，以至于评价公共卫生环境中的空气质量。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种公共卫生场所空气采样中和培养基，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种公共卫生场所空气采样中和培养基，该种公共卫生场所空气采样中和培养基的制备方法步骤如下：

s1：选取材料：选取卵磷脂20-30g，吐温-8020-60g，组氨酸2-10g，硫代硫酸钠2-10g，巯基乙酸钠1-2g，葡萄糖30-40g，胰蛋白胨20-30g，琼脂40-50g，氯化钠17g；

s2：过滤、溶解：将步骤s1选取的材料依次通入到活性炭过滤器内进行空气前过滤处理，然后将卵磷脂、吐温-80、组氨酸、硫代硫酸钠和巯基乙酸钠添加在加热装置中加热搅拌，搅拌时间25-35分钟，温度设置在80℃，溶解后形成溶液一，然后将葡萄糖、胰蛋白胨、琼脂和氯化钠添入到加热装置内，搅拌混合10-20分钟，溶解后形成溶液二，然后将溶液一内溶解的混合溶液加入到溶液二，搅拌混合10-16分钟，静置冷却10-20分钟最后将得到的混合料中加入80-120毫升的水充分搅拌10-20分钟，至各成分全部与水溶解均匀，溶解后形成培养基；

s3：调整ph：取与标准管同口径的试管三支，于第一、三管各加入欲测定ph的的培养基5ml，并于第一管中加入0.2g/l的酚红0.25ml作为测定管，充分混匀，在第二管加入蒸馏水5ml，标准管为ph标准比色管，然后精确缓慢的将矫正溶液向测定管进行矫正，直至颜色通过ph试纸测定后与标准管相同为止，颜色呈淡紫色，其ph值调节为7，每加一滴后都需要充分混匀，比色后再加第二滴准确记录加入的量；

s4：过滤澄清：将步骤s2中的培养基导入到容器内，以高压100-110kpa蒸汽融化10分钟后，静置高压锅内过夜12小时，次日将培养基倾出，用刀将底部沉渣切去，再融化即可收清晰的培养基；

s5：分装：向步骤s4中清晰的培养基加热融化，温度为120-130℃，时间为1小时，然后静置培养基30分钟，使得培养基内温度冷至50℃左右，以无菌手续倒入灭菌平皿内，平皿倒入的培养基约13-15mol/l，轻摇平皿底，使培养基平铺于平皿底部，待凝固后备用；

s6：灭菌：将步骤s5中凝固的培养基以后高压蒸汽进行灭菌，温度为115℃，时间为15-30min；

s7：检定和保存：培养基制成后须经检定方可使用，检定时将培养基放37℃温箱内培养24小时，制好的培养基放在4-6℃冰箱内备用。

优选的，所述步骤s2中的加热装置为电炉。

优选的，所述步骤s3中的矫正液为过酸或过碱溶液，且过酸或过碱溶液采用0.1mol/l盐酸溶液或者0.1mol/l氢氧化钠。

优选的，所述步骤s4中的容器为铝锅或者广口搪瓷容器。

优选的，所述步骤s5中的平皿的内径为九厘米。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：该种公共卫生场所空气采样中和培养基中和剂中的卵磷脂可中和季铵化合物，吐温-80可中和酚类化合物，硫代硫酸钠可中和具有氧化性的防腐剂如碘和氯，巯基乙酸钠可中和含汞防腐剂，组氨酸可中和醛类防腐剂，上述物质按比例混合后对残留公共卫生场所空气消毒剂具有切实可靠的中和作用，能与残留公共卫生场所空气消毒剂发生化学反应，生成对实验微生物没有杀灭或抑制其生长的作用、对培养成分没有破坏作用、对物理性状没有影响的中和产物，对相应残留公共卫生场所空气消毒剂具有切实可靠的中和作用。

附图说明

图1为本发明工作流程图；

图2为本发明一般培养基处理后的细菌浓度示意图；

图3为本发明培养基处理后的细菌浓度示意图；

图4为本发明细菌在培养基处理前后对照图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例一

一种公共卫生场所空气采样中和培养基，该种公共卫生场所空气采样中和培养基的制备方法步骤如下：

s1：选取材料：选取卵磷脂20g，吐温-8020g，组氨酸2g，硫代硫酸钠2g，巯基乙酸钠1g，葡萄糖30g，胰蛋白胨20g，琼脂40g，氯化钠17g；

s2：过滤、溶解：将步骤s1选取的材料依次通入到活性炭过滤器内进行空气前过滤处理，然后将卵磷脂、吐温-80、组氨酸、硫代硫酸钠和巯基乙酸钠添加在加热装置中加热搅拌，搅拌时间25分钟，温度设置在80℃，溶解后形成溶液一，然后将葡萄糖、胰蛋白胨、琼脂和氯化钠添入到加热装置内，搅拌混合10分钟，溶解后形成溶液二，然后将溶液一内溶解的混合溶液加入到溶液二，搅拌混合10分钟，静置冷却10分钟最后将得到的混合料中加入80毫升的水充分搅拌10分钟，至各成分全部与水溶解均匀，溶解后形成培养基；

s3：调整ph：取与标准管同口径的试管三支，于第一、三管各加入欲测定ph的的培养基5ml，并于第一管中加入0.2g/l的酚红0.25ml作为测定管，充分混匀，在第二管加入蒸馏水5ml，标准管为ph标准比色管，然后精确缓慢的将矫正溶液向测定管进行矫正，直至颜色通过ph试纸测定后与标准管相同为止，颜色呈淡紫色，其ph值调节为7，每加一滴后都需要充分混匀，比色后再加第二滴准确记录加入的量；

s4：过滤澄清：将步骤s2中的培养基导入到容器内，以高压100kpa蒸汽融化10分钟后，静置高压锅内过夜12小时，次日将培养基倾出，用刀将底部沉渣切去，再融化即可收清晰的培养基；

s5：分装：向步骤s4中清晰的培养基加热融化，温度为120℃，时间为1小时，然后静置培养基30分钟，使得培养基内温度冷至50℃左右，以无菌手续倒入灭菌平皿内，平皿倒入的培养基约13mol/l，轻摇平皿底，使培养基平铺于平皿底部，待凝固后备用；

s6：灭菌：将步骤s5中凝固的培养基以后高压蒸汽进行灭菌，温度为115℃，时间为15min；

s7：检定和保存：培养基制成后须经检定方可使用，检定时将培养基放37℃温箱内培养24小时，制好的培养基放在4℃冰箱内备用。

实施例二

一种公共卫生场所空气采样中和培养基，该种公共卫生场所空气采样中和培养基的制备方法步骤如下：

s1：选取材料：选取卵磷脂25g，吐温-8040g，组氨酸6g，硫代硫酸钠6g，巯基乙酸钠1.5g，葡萄糖35g，胰蛋白胨25g，琼脂45g，氯化钠17g；

s2：过滤、溶解：将步骤s1选取的材料依次通入到活性炭过滤器内进行空气前过滤处理，然后将卵磷脂、吐温-80、组氨酸、硫代硫酸钠和巯基乙酸钠添加在加热装置中加热搅拌，搅拌时间30分钟，温度设置在80℃，溶解后形成溶液一，然后将葡萄糖、胰蛋白胨、琼脂和氯化钠添入到加热装置内，搅拌混合15分钟，溶解后形成溶液二，然后将溶液一内溶解的混合溶液加入到溶液二，搅拌混合13分钟，静置冷却15分钟最后将得到的混合料中加入100毫升的水充分搅拌15分钟，至各成分全部与水溶解均匀，溶解后形成培养基；

s3：调整ph：取与标准管同口径的试管三支，于第一、三管各加入欲测定ph的的培养基5ml，并于第一管中加入0.2g/l的酚红0.25ml作为测定管，充分混匀，在第二管加入蒸馏水5ml，标准管为ph标准比色管，然后精确缓慢的将矫正溶液向测定管进行矫正，直至颜色通过ph试纸测定后与标准管相同为止，颜色呈淡紫色，其ph值调节为7，每加一滴后都需要充分混匀，比色后再加第二滴准确记录加入的量；

s4：过滤澄清：将步骤s2中的培养基导入到容器内，以高压105kpa蒸汽融化10分钟后，静置高压锅内过夜12小时，次日将培养基倾出，用刀将底部沉渣切去，再融化即可收清晰的培养基；

s5：分装：向步骤s4中清晰的培养基加热融化，温度为125℃，时间为1小时，然后静置培养基30分钟，使得培养基内温度冷至50℃左右，以无菌手续倒入灭菌平皿内，平皿倒入的培养基约14mol/l，轻摇平皿底，使培养基平铺于平皿底部，待凝固后备用；

s6：灭菌：将步骤s5中凝固的培养基以后高压蒸汽进行灭菌，温度为115℃，时间为22.5min；

s7：检定和保存：培养基制成后须经检定方可使用，检定时将培养基放37℃温箱内培养24小时，制好的培养基放在5℃冰箱内备用。

实施例三

一种公共卫生场所空气采样中和培养基，该种公共卫生场所空气采样中和培养基的制备方法步骤如下：

s1：选取材料：选取卵磷脂30g，吐温-8060g，组氨酸10g，硫代硫酸钠10g，巯基乙酸钠2g，葡萄糖40g，胰蛋白胨30g，琼脂40-50g，氯化钠17g；

s2：过滤、溶解：将步骤s1选取的材料依次通入到活性炭过滤器内进行空气前过滤处理，然后将卵磷脂、吐温-80、组氨酸、硫代硫酸钠和巯基乙酸钠添加在加热装置中加热搅拌，搅拌时间35分钟，温度设置在80℃，溶解后形成溶液一，然后将葡萄糖、胰蛋白胨、琼脂和氯化钠添入到加热装置内，搅拌混合20分钟，溶解后形成溶液二，然后将溶液一内溶解的混合溶液加入到溶液二，搅拌混合16分钟，静置冷却20分钟最后将得到的混合料中加入120毫升的水充分搅拌20分钟，至各成分全部与水溶解均匀，溶解后形成培养基；

s3：调整ph：取与标准管同口径的试管三支，于第一、三管各加入欲测定ph的的培养基5ml，并于第一管中加入0.2g/l的酚红0.25ml作为测定管，充分混匀，在第二管加入蒸馏水5ml，标准管为ph标准比色管，然后精确缓慢的将矫正溶液向测定管进行矫正，直至颜色通过ph试纸测定后与标准管相同为止，颜色呈淡紫色，其ph值调节为7，每加一滴后都需要充分混匀，比色后再加第二滴准确记录加入的量；

s4：过滤澄清：将步骤s2中的培养基导入到容器内，以高压110kpa蒸汽融化10分钟后，静置高压锅内过夜12小时，次日将培养基倾出，用刀将底部沉渣切去，再融化即可收清晰的培养基；

s5：分装：向步骤s4中清晰的培养基加热融化，温度为130℃，时间为1小时，然后静置培养基30分钟，使得培养基内温度冷至50℃左右，以无菌手续倒入灭菌平皿内，平皿倒入的培养基约15mol/l，轻摇平皿底，使培养基平铺于平皿底部，待凝固后备用；

s6：灭菌：将步骤s5中凝固的培养基以后高压蒸汽进行灭菌，温度为115℃，时间为30min；

s7：检定和保存：培养基制成后须经检定方可使用，检定时将培养基放37℃温箱内培养24小时，制好的培养基放在6℃冰箱内备用。

由图2可知一般的培养基对消毒剂中和不充分，抑制细菌的生长，导致细菌浓度不能够增加，由图3可知，根据实施例一、二、三的实验结果总结得出：最佳实施方案为实施例二，实施例二中的中和培养基相对实施例一和实施例二的中和培养基其微生物的回收率明显较高，而实施例一和三种细菌生长的速度还是有所抑制，增长速度较慢，所以该中和剂可消除空气消毒剂对检测结果的干扰，更好的残留公共卫生场所空气消毒剂中的微生物数量，提高残留公共卫生场所空气消毒剂中的微生物检测的准确性。。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。