茶氨酰氨基酸修饰的姜黄素，其合成，活性和应用的制作方法

本发明涉及1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-aa-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮，涉及它们的制备方法，涉及它们的抗肿瘤生长活性，因而本发明涉及它们在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明属于生物医药领域。

背景技术：

恶性肿瘤是严重危害人类健康的全球性问题。肿瘤患者发现病患时大多已是临床中晚期，治疗方法以放化疗为主，化疗是恶性肿瘤处于中晚期时的主要治疗手段。发明抗肿瘤药物是临床的迫切需求。此前，发明人曾公开1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰氨基酸苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮具有明显的抑制肿瘤细胞增殖的活性。后来发明人又公开抗黏附肽修饰的姜黄素在1μmol/kg剂量下可抑制s180小鼠肿瘤生长。可是最低有效剂量仍为1μmol/kg。为了降低最低有效剂量，发明人对姜黄素的酚羟基展开了各种修饰。经过3年探索，发现用茶氨酰-aa(aa选自l-lys残基,l-leu残基,l-asn残基,l-pro残基,l-gln残基,l-ser残基,l-val残基和l-tyr残基)修饰的姜黄素可使抗肿瘤生长的最低有效剂量降至0.1μmol/kg。有效剂量降低10倍表明，这种结构修饰有突出的技术效果。根据这些发现，发明人提出了本发明。

技术实现要素：

本发明的第一个内容是提供下式的1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-aa-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(式中aa选自l-lys残基,l-leu残基,l-asn残基,l-pro残基,l-gln残基,l-ser残基,l-val残基和l-tyr残基)。

本发明的第二个内容是提供1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-aa-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(式中aa选自l-lys残基,l-leu残基,l-asn残基,l-pro残基,l-gln残基,l-ser残基,l-val残基和l-tyr残基)的合成方法，该方法包括：

(1)制备6-(4-羟基-3-甲氧苯基)-5,6-己烯-2,4-二酮(1)；

(2)制备2-(4-甲酰基-2-甲氧基苯氧基)-乙酸苄酯(2)；

(3)以步骤(1)和步骤(2)的产物为反应原料制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(3)；

(4)将1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮皂化，得到1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰乙酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(4)；

(5)化合物4和l-茶氨酸苄酯偶联得到1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(5)；

(6)将化合物5皂化得到1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)；

(7)化合物6和l-氨基酸苄酯偶联得到权利要求1的1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-aa-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7)；

(8)化合物7皂化得到1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-aa-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(aa选自l-lys残基,l-leu残基,l-asn残基,l-pro残基,l-gln残基,l-ser残基,l-val残基和l-tyr残基)。

本发明的第三个内容是评价1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-aa-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮对s180小鼠肿瘤生长活性。

附图说明

图11-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-aa-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮的合成路线.7a中aa为l-lys残基；7b中aa为l-leu残基；7c中aa为l-asn残基；7d中aa为l-pro残基；7e中aa为l-gln残基；7f中aa为l-ser残基；7g中aa为l-val残基；7h中aa为l-tyr残基；i)三氧化二硼(b2o3),乙酰丙酮,硼酸三正丁酯,正丁胺,氯化氢水溶液(1m)；ii)碳酸钾,溴乙酸苄酯；iii)三氧化二硼(b2o3),硼酸三正丁酯,正丁胺,10％乙酸水溶液；iv)氢氧化钠水溶液(2m),丙酮；v)二环己基碳二亚胺(dcc),1-羟基苯并三唑(hobt),n-甲基吗啉(nmm),四氢呋喃(thf)。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1制备6-(4-羟基-3-甲氧苯基)-5,6-己烯-2,4-二酮(1)

将45.0ml(437.7mmol)乙酰丙酮，21.0g(301.6mmol)氧化硼和150.0ml无水乙酸乙酯于60℃回流1h。然后，往里加22.5g(148.0mmol)香草醛和41ml(293.0mmol)硼酸三丁酯。反应混合物70℃搅拌30min。于30min内继续往里加15ml(205.1mmol)正丁胺与135ml乙酸乙酯中的溶液。混合物于100℃搅拌3h后冷却至室温，并往里滴加150ml盐酸(1m)。混合物于50℃搅拌30min,静置，充分分层，水层用乙酸乙酯萃取3次。合并的乙酸乙酯层用饱和nacl溶液洗至中性，无水硫酸钠干燥,过滤，滤液减压浓缩至干，残留物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)得到10.05g(29％)目标化合物，为黄色固体。esi-ms(m/e)：235[m+h]⁺；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝15.74(s,1h),9.64(s,1h),7.50(d,j＝15.9hz,1h),7.30(s,1h),7.12(d,j＝8.1hz,1h),6.82(d,j＝8.1hz,1h),6.64(d,j＝15.9hz,1h),5.84(s,1h),5.14(s,2h),3.83(s,3h),2.12(s,3h)。

实施例2制备3-甲氧基-4-(氧基-2-乙酰苄酯基)苯甲醛(2)

将10g(65.8mmol)香草醛溶于100ml无水四氢呋喃。向该溶液分批加入10.9g(79.0mmol)碳酸钾并搅拌3h。然后向溶液中滴加9.3ml溴乙酸苄酯，室温搅拌48h，tlc监(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)显示反应结束。反应混合物过滤，滤液减压浓缩，残余物用100ml乙醚磨洗静置12h后倒掉乙醚，10ml乙醚磨洗3次，去乙醚，得到15.4g(78％)标题化合物，为无色固体。esi-ms(m/e)：301[m+h]⁺；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.86(s,1h),7.50(dd,j1＝8.4hz,j2＝1.8hz,1h),7.44(d,j＝1.8hz,1h),7.39(s,5h),7.11(d,j＝8.4hz,1h),5.21(s,2h),5.03(s,2h),3.84(s,3h)。

实施例3制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(3)

将5.55g(23.7mmol)6-(4-羟基-3-甲氧苯基)-5,6-己烯-2,4-二酮(1),0.83g(11.9mmol)氧化硼和100ml乙酸乙酯的悬浮液于70℃回流1h。之后，减压浓缩。残留物用100ml无水dmf溶解。往得到的溶液中加10.67g(35.6mmol)3-甲氧基-4-(氧基-2-乙酰苄酯基)苯甲醛(2)和11.15ml(41.0mmol)硼酸三丁酯。得到的溶液于80℃搅拌30min。之后，往里分4次滴加0.98ml(6.4mmol)正丁胺，用时1h，得到的溶液于80℃继续搅拌3h。之后，往里加200ml预热至60℃的10％乙酸水溶液。得到的溶液于80℃继续搅拌1h。反应混合物冷却至室温，过滤，滤饼用柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，得到6.63g(53％)标题化合物，为黄色固体。esi-ms(m/e)：517[m+h]⁺；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.69(s,1h),8.51(d,j＝7.5hz,1h),7.80(t,j＝5.7hz,1h),7.59(d,j＝3.0hz,1h),7.54(d,j＝3.0hz,1h),7.37(m,7h),7.16(m,1h),6.89(m,4h),6.09(s,1h),5.14(s,2h),4.62(s,2h),4.37(m,1h),3.87(s,3h),3.84(s,3h),3.04(qd,j1＝7.2hz,j2＝5.7hz,2h),2.15(m,2h),2.05(m,1h),1.90(m,1h),0.98(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例4制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(4)

将5g(9.7mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(3)用丙酮溶解。室温下往里加naoh水溶液(2m)，调节反应液ph为13并搅拌6h。tlc(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)显示反应完成。反应混合物用饱和khso4水溶液将ph调到7，减压浓缩，残余物用饱和khso4水溶液调ph到2。之后，用乙酸乙酯萃取3次。合并乙酸乙酯层，用饱和nacl溶液洗至中性，用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，残留物用无水乙醚磨洗，得到2.64g(64％)标题化合物，为红色固体。esi-ms(m/e)：425[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.55(s,1h),7.57(m,2h),7.37(m,2h),7.20(m,2h),6.79(m,4h),6.06(s,1h),4.74(s,2h),3.85(s,6h)。

实施例5制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(5)

冰浴下将2g(4.7mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(4),1.69g(5.6mmol)盐酸茶氨酸苄酯和0.761g(5.64mmol)n-羟基苯并三唑(hobt)用50ml无水四氢呋喃溶解。向溶液中滴入由1.16g(5.63mmol)二环己基羰二亚胺(dcc)和10ml无水四氢呋喃的溶液。反应液用n-甲基吗啉调ph到8，室温搅拌12h。tlc(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)显示反应完成。反应液减压浓缩至干，残余物用150ml乙酸乙酯溶解。过滤、滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液洗3次，饱和硫酸氢钾水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液洗3次，饱和碳酸氢钠水溶液洗3次及饱和氯化钠水溶液洗3次。合并的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残留物用柱层析(二氯甲烷/甲醇＝80/1)纯化，得到2.24g(71％)标题化合物，为黄色固体。esi-ms(m/e)：673[m+h]⁺；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.69(s,1h),8.51(d,j＝7.5hz,1h),7.80(t,j＝5.7hz,1h),7.59(d,j＝3.0hz,1h),7.54(d,j＝3.0hz,1h),7.37(m,7h),7.16(m,1h),6.89(m,4h),6.09(s,1h),5.14(s,2h),4.62(s,2h),4.37(m,1h),3.87(s,3h),3.84(s,3h),3.04(qd,j1＝7.2hz,j2＝5.7hz,2h),2.15(m,2h),2.05(m,1h),1.90(m,1h),0.98(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例6制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)

将2.24g(3.3mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸苄酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(5)用丙酮溶解，室温下向溶液中滴加naoh水溶液(2m)至反应液ph为13，搅拌6h，tlc(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)显示反应完成。用饱和khso4水溶液将反应液ph调到7，减压浓缩，残余物用饱和khso4水溶液调ph到2。之后，用乙酸乙酯萃取3次，合并的乙酸乙酯层用饱和nacl水溶液洗至中性，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到1.07g(55％)标题化合物，为红色糖浆。esi-ms(m/e)：581[m-h]^-；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.42(s,1h),8.1(m,1h),7.77(m,1h),7.57(m,1h),7.37(m,1h),7.24(m,2h),7.10(m,2h),6.96(d,j＝5.1hz,1h),6.79(m,3h),6.06(s,1h),4.57(s,2h),4.20(m,1h),3.82(s,6h),3.01(m,2h),2.09(m,3h),1.77(m,1h),0.95(t,j＝4.5hz,3h)。

实施例7制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-lys-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7a)

冰浴下将1.3g(2.23mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6),1g(2.68mmol)hcl·lys(boc)-obzl和0.36g(2.68mmol)用20ml无水四氢呋喃溶解。之后，往里滴加0.55g(2.68mmol)二环己基羰二亚胺(dcc)和5ml无水四氢呋喃的溶液。反应液用n-甲基吗啉(nmm)调ph为8，室温搅拌12h，tlc(二氯甲烷/甲醇＝50/1)显示反应结束。反应液减压浓缩至干，残余物用150ml二氯甲烷溶解，抽滤、滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液洗3次，饱和硫酸氢钾水溶液洗3次，饱和氯化钠水溶液洗3次，饱和碳酸氢钠水溶液洗3次及饱和氯化钠水溶液洗3次。合并的二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干。残留物用柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝50/1)，得到925mg黄色固体。冰浴下将该黄色固体用10ml氯化氢的乙酸乙酯溶液溶解(4m),溶液搅拌4h后tlc监测，反应结束后，抽干，加入干燥ea，抽干，重复三次，加入无水乙醚，抽干，重复3次，得到黄色固体，过c18柱纯化得306mg(35.6％)标题化合物，黄色固体，两步总产率16.4％。mp:191-193℃；(c＝0.1，甲醇)；esi/ms(m/e)：801[m+h]⁺¹；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.72(s,1h),8.59(d,j＝7.8hz,1h),8.11(d,j＝8.1hz,1h),7.80(m,3h),7.57(d,j＝14.7hz,2h),7.37(m,7h),7.23(d,j＝8.4hz,1h),7.18(d,j＝8.1hz,1h),6.96(d,j＝8.4hz,1h),6.83(m,3h),6.10(s,1h),5.14(s,2h),4.61(s,2h),4.41(m,1h),4.28(m,1h),3.87(s,3h),3.84(s,3h),3.04(dq,j1＝6.0hz,j2＝7.2hz,2h),2.72(m,2h),2.29-1.24(m,10h),0.99(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例8制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-leu-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7b)

冰浴冷却条件下，取3.04g(5.22mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)、1.61g(6.26mmol)hcl·leu-obzl、0.85g(6.26mmol)n-羟基苯并三唑(hobt)用干燥thf溶解，向溶液中滴入由干燥thf溶解1.29g(6.26mmol)二环己基羰二亚胺(dcc)得到的溶液。向反应液滴加n甲基吗啉(nmm)，调ph值到8。反应混合物室温搅拌12h，tlc监测。反应结束后，反应液减压浓缩至干，得到的残余物用150ml二氯甲烷溶解抽滤、滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗3次、饱和氯化钠水溶液洗3次、饱和硫酸氢钾水溶液洗3次、饱和氯化钠水溶液洗3次、饱和碳酸氢钠水溶液洗3次、饱和氯化钠水溶液洗3次；合并的二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩至干；柱层析分离纯化(二氯甲烷/甲醇＝60/1)，得到0.93g(22.7％)标题化合物，为黄色固体。mp:135.2-136.2℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：786[m+h]⁺；ir(cm^-1):3282,3068,2958,2934,2872,1738,1629,1585,1541,1507,1449,1370,1339,1252,1215,1125,1030,963,844,696；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.71(s,1h),8.50(d,j＝6.6hz,1h),8.09(d,j＝5.2hz,1h),7.78(t,j＝6.0hz,1h),7.57(m,2h),7.36(m,7h),7.22(d,j＝7.80hz,1h),7.17(d,j＝8.1hz,1h),6.96(d,j＝8.4hz,1h),6.81(m,3h),6.09(s,1h),5.13(s,2h),4.61(s,2h),4.37(m,2h),3.87(s,3h),3.84(s,3h),3.04(qd,j1＝6.9hz,j2＝6.0hz,2h),2.28(m,1h),2.08(m,2h),1.92(m,1h),1.77(m,1h),1.58(m,2h),0.99(t,j＝6.9hz,3h),0.87(d,j＝5.7hz,3h),0.82(d,j＝5.4hz,3h)。

实施例9制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-asn-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7c)

采用实例8的方法从4.12g(7.08mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)和2.20g(8.50mmol)hcl·asn-obzl得到1.18g(21.2％)标题化合物，为黄色固体。mp186-187℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：787[m+h]⁺；ir(cm^-1):3417,3281,3077,2936,1735,1664,1641,1586,1548,1509,1450,1421,1269,1139,1031,964；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝8.55(d,j＝6.9hz,1h),8.09(d,j＝8.1hz,1h),7.75(t,j＝6.3hz,1h),7.55(m,2h),7.39(m,8h),7.23(d,j＝7.8hz,1h),7.18(d,j＝7.8hz,1h),6.98(m,2h),6.82(m,3h),6.10(s,1h),5.11(s,2h),4.72(m,1h),4.62(s,2h),4.40(m,1h),3.87(s,3h),3.85(s,3h),3.05(qd,j1＝7.2hz,j2＝6.3hz,2h),2.58(m,2h),2.08(m,2h),1.95(m,1h),1.74(m,1h),0.99(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例10制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-pro-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7d)

采用实施例8的方法从4.04g(6.94mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)和2.01g(8.33mmol)hcl·pro-obzl得到1.84g(34.5％)标题化合物，为黄色固体。mp112-113℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：770[m+h]⁺；ir(cm^-1):3322,3070,2936,1740,1626,1583,1507,1446,1381,1214,1165,1126,1029,965；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.70(s,1h),8.22(d,j＝8.1hz,1h),7.74(t,j＝5.7hz,1h),7.57(m,2h),7.37(m,7h),7.20(dd,j＝13.5hz,j＝1.2hz,1h),7.14(dd,j＝13.5hz,j＝1.2hz,1h),6.96(d,j＝9.6hz,1h),6.82(m,3h),6.09(s,1h),5.14(s,2h),4.61(m,3h),4.41(m,1h),3.87(s,3h),3.84(s,3h),3.67(m,2h),3.04(qd,j1＝7.2hz,j2＝5.7hz,2h),2.19(m,3h),1.92(m,4h),1.89(m,1h),0.99(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例11制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-gln-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7e)

采用实施例8的方法从4.11g(7.07mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)和2.31g(8.48mmol)hcl·gln-obzl得到532mg(9.4％)标题化合物，为黄色固体。mp217-219℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：801[m+h]⁺；ir(cm^-1):3449,3278,3086,2970,2936,1733,1641,1582,1552,1510,1446,1374,1339,1244,1218,1171,1137,1029,967,696；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝8.61(d,j＝6.9hz,1h),8.13(d,j＝8.1hz,1h),7.80(t,j＝6.3hz,1h),7.55(m,2h),7.37(m,8h),7.23(d,j＝7.8hz,1h),7.15(d,j＝7.8hz,1h),6.98(d,j＝8.4hz,1h),6.86(m,4h),6.06(s,1h),5.13(s,2h),4.62(s,2h),4.42(m,1h),4.40(m,1h),3.87(s,3h),3.84(s,3h),3.05(qd,j1＝7.2hz,j2＝6.3hz,2h),2.00(m,8h),0.99(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例12制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-ser-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7f)

采用实施例8的方法从2.38g(4.09mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)和0.95g(4.10mmol)hcl·ser-obzl得到742mg(23.9％)标题化合物，为黄色固体。mp185-186℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：759[m+h]⁺；ir(cm^-1):3280,3071,2967,2932,1628,1587,1544,1508,1451,1421,1377,1268,1248,1209,1161,1133,1028,963；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.67(s,1h),8.50(d,j＝7.5hz,1h),8.07(d,j＝8.1hz,1h),7.74(t,j＝5.7hz,1h),7.57(m,2h),7.37(m,7h),7.24(d,j＝7.8hz,1h),7.17(d,j＝8.1hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.89(m,3h),6.10(s,1h),5.15(s,2h),4.60(s,2h),4.49(m,2h),3.87(s,3h),3.84(s,3h),3.69(m,2h),3.40(m,2h),3.04(qd,j1＝7.2hz,j2＝5.7hz,2h),2.10(m,2h),1.94(m,1h),1.77(m,1h),0.99(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例13制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-val-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7g)

采用实施例7的方法从2.67g(4.59mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)和1.34g(5.51mmol)hcl·val-obzl得到902mg(26％)标题化合物，为黄色固体。mp205-206℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：772[m+h]⁺；ir(cm^-1):3290,3068,2965,2935,1736,1626,1583,1507,1450,1375,1336,1253,1212,1128,1030,964,696；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.67(s,1h),8.37(d,j＝7.8hz,1h),8.06(d,j＝8.1hz,1h),7.77(t,j＝6.0hz,1h),7.57(m,2h),7.37(m,7h),7.23(d,j＝8.1hz,1h),7.17(d,j＝8.1hz,1h),6.97(d,j＝8.1hz,1h),6.89(m,3h),6.10(s,1h),5.15(d,j＝2.7hz,2h),4.61(s,2h),4.51(m,1h),4.24(t,j＝6.6hz,1h),3.87(s,3h),3.84(s,3h),3.04(qd,j1＝7.2hz,j2＝6.0hz,2h),2.09(m,2h),1.95(m,1h),1.77(m,1h),0.99(t,j＝7.2hz,3h),0.86(d,j＝6.9hz,6h)。

实施例14制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-tyr-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7h)

采用实施例7的方法从2.5g(5.87mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(6)和3.84g(8.80mmol)hcl·tyr-obzl得到1.78g(20％)标题化合物，为黄色固体。mp148-150℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：836[m+h]⁺；ir(cm^-1):3281,3077,2928,1629,1586,1543,1508,1448,1375,1340,1252,1221,1165,1134,1029,963,810,695；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.70(s,1h),9.24(s,1h),8.53(d,j＝6.9hz,1h),8.02(d,j＝8.1hz,1h),7.74(t,j＝4.8hz,1h),7.57(m,2h),7.22(m,9h),7.04(m,3h),6.84(m,3h),6.65(d,j＝8.4hz,2h),6.09(s,1h),5.07(d,j＝1.5hz,2h),4.59(s,2h),4.44(m,2h),3.87(s,3h),3.85(s,3h),3.04(qd,j1＝7.2hz,j2＝4.8hz,2h),2.90(m,2h),2.09(m,2h),1.95(m,1h),1.77(m,1h),0.99(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例15制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-lys-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(8a)

将500mg(0.67mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-lys-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7a)用丙酮溶解，室温下滴加naoh溶液(2m)至反应液ph值为13并搅拌6h，tlc(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)显示反应完成。反应液用饱和khso4水溶液将ph调到7，减压浓缩，残余物用饱和khso4水溶液调ph为2，用乙酸乙酯萃取3次，合并的乙酸乙酯层用饱和nacl水溶液洗至中性，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用无水乙醚磨洗并用c18柱层析纯化，得到164mg(37％)标题化合物，为黄色固体。mp191.0-192℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：709[m-h]^-；ir(cm^-1):2934,1626,1506,1447,1249,1126,1029,964,844,811,729,602；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.68(s,1h),8.23(d,j＝8.1hz,1h),7.99(t,j＝6.0hz,1h),7.74(d,j＝7.8hz,1h),7.57(m,2h),7.35(m,2h),7.23(d,j＝7.8hz,1h),7.15(d,j＝7.8hz,1h),6.97(d,j＝7.8hz,1h),6.83(m,4h),6.08(s,1h),4.62(s,2h),4.33(m,2h),3.86(s,3h),3.83(s,3h),3.17(m,2h),2.71(m,2h),1.99～1.18(m,10h),0.98(t,j＝6.9hz,3h)。

实施例16制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-leu-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(8b)

采用实施例15的方法，从600mg(0.76mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-leu-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7b)得到385mg(73％)标题化合物，为黄色固体。mp143-145℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：694[m-h]^-；ir(cm^-1):3287,2935,1626,1586,1509,1425,1260,1134,1031,963,843,809,717,603；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝12.60(s,1h),9.68(s,1h),8.31(d,j＝7.5hz,1h),8.05(d,j＝8.1hz,1h),7.76(t,j＝6.3hz,1h),7.57(m,2h),7.37(d,j＝18.9hz,2h),7.23(d,j＝7.5hz,1h),7.17(d,j＝8.1hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.82(m,3h),6.10(s,1h),4.61(s,2h),4.41(m,1h),4.22(m,1h),3.88(s,3h),3.85(s,3h),3.04(qd,j1＝7.2hz,j2＝6.3hz,2h),2.10(m,2h),1.92(m,1h),1.78(m,2h),1.58(m,3h),0.99(t,j＝7.2hz,3h),0.89(d,j＝6.3hz,3h),0.83(d,j＝6.0hz,3h)。

实施例17制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-asn-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(8c)

采用实施例15的方法，从500mg(0.64mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-asn-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7c)得到118mg(27％)标题化合物，为黄色固体。mp146-147℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：695[m-h]^-；ir(cm^-1):2932,1625,1584,1507,1423,1252,1128,1029,964,845,812,666；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝12.70(s,1h),9.69(s,1h),8.40(m,1h),8.08(dd,j＝10.5hz,j＝6.0hz,1h),7.75(t,j＝5.7hz,1h),7.60(s,1h),7.57(d,j＝15.9hz,2h),7.36(d,j＝18.3hz,2h),7.24(d,j＝8.1hz,1h),7.17(d,j＝9.9hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.83(m,3h),6.09(s,1h),4.61(s,2h),4.55(m,1h),4.39(m,1h),3.88(s,3h),3.85(s,3h),3.05(qd,j1＝6.9hz,j2＝5.7hz,2h),2.66(m,2h),2.10(m,2h),1.93(m,1h),1.76(m,1h),0.99(t,j＝6.9hz,3h)。

实施例18制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-pro-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(8d)

采用实施例15的方法，从800mg(0.91mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-pro-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7d)得到435mg(61％)标题化合物，为黄色固体。mp113-114℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：678[m-h]^-；ir(cm^-1):3297,2971,1624,1583,1507,1446,1250,1126,1029,965,846,813,666；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝12.60(s,1h),9.68(s,1h),8.18(d,j＝7.8hz,1h),7.74(t,j＝5.7hz,1h),7.57(m,2h),7.37(m,2h),7.24(d,j＝7.5hz,1h),7.17(d,j＝8.1hz,1h),6.97(d,j＝8.1hz,1h),6.89(m,3h),6.10(s,1h),4.61(m,3h),4.28(m,1h),4.21(m,1h),3.87(s,3h),3.85(s,3h),3.06(qd,j1＝7.2hz,j2＝5.7hz,2h),2.20(m,4h),1.93(m,3h),1.76(m,1h),1.00(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例19制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-gln-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(8e)

采用实施例15的方法，从500mg(0.63mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-gln-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7e)得到31mg(7％)标题化合物，为黄色固体。mp135-137℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：709[m-h]^-；ir(cm^-1):3306,2935,1625,1583,1507,1446,1239,1126,1029,963,849,811,605；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝12.60(s,1h),9.71(s,1h),8.40(d,j＝6.3hz,1h),8.09(d,j＝6.9hz,1h),7.78(t,j＝6.3hz,1h),7.57(m,2h),7.37(m,5h),6.97(d,j＝7.8hz,1h),6.89(m,4h),6.09(s,1h),4.61(s,2h),4.40(m,1h),4.16(m,1h),3.88(s,3h),3.85(s,3h),3.04(qd,j1＝7.2hz,j2＝6.3hz,2h),2.10(m,4h),1.93(m,2h),1.76(m,2h),0.98(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例20制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-ser-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(8f)

采用实施例15的方法，从500mg(0.66mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-ser-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7f)得到70mg(16％)标题化合物，为黄色固体。mp169-170℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：668[m-h]^-；ir(cm^-1):3293,2937,1626,1585,1508,1425,1256,1133,1058,1032,963,843,810,721,597；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝16.5(s,1h),9.68(s,1h),8.29(d,j＝7.5hz,1h),8.06(d,j＝8.1hz,1h),7.76(t,j＝6.3hz,1h),7.57(m,2h),7.37(m,2h),7.24(d,j＝8.1hz,1h),7.17(d,j＝7.5hz,1h),6.98(d,j＝5.4hz,1h),6.89(m,3h),6.10(s,1h),4.61(s,2h),4.49(m,1h),4.23(m,1h),3.88(s,3h),3.85(s,3h),3.65(m,2h),3.33(m,2h),3.04(qd,j1＝7.2hz,j2＝6.3hz,2h),2.10(m,2h),1.93(m,1h),1.76(m,1h),0.99(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例21制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-val-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(8g)

采用实施例15的方法从500mg(0.67mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-val-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7g)得到327mg(75％)标题化合物，为黄色固体。mp140-141℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：680[m-h]^-；ir(cm^-1):3289,2931,1625,1507,1423,1264,1132,1029,964,845,811,666；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝12.65(s,1h),9.69(s,1h),8.18(d,j＝8.4hz,1h),8.07(d,j＝7.5hz,1h),7.77(t,j＝6.3hz,1h),7.57(m,2h),7.37(m,2h),7.23(d,j＝7.8hz,1h),7.17(d,j＝8.1hz,1h),6.97(d,j＝8.4hz,1h),6.89(m,3h),6.10(s,1h),4.61(s,2h),4.50(m,1h),4.15(m,1h),3.87(s,3h),3.85(s,3h),3.04(qd,j1＝7.2hz,j2＝6.3hz,2h),2.10(m,3h),1.93(m,1h),1.76(m,1h),0.99(t,j＝7.2hz,3h),0.88(d,j＝6.6hz,6h)。

实施例22制备1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-tyr-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(8h)

采用实施例15的方法从600mg(0.72mmol)1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-7-(4-氧乙酰茶氨酰-tyr-obzl-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(7h)得到354mg(66％)标题化合物，为黄色固体。mp146-147℃；(c＝0.1，甲醇)；esi-ms(m/e)：744[m-h]^-；ir(cm^-1):3280,1646,1626,1585,1540,1509,1424,1251,1130,1030,963,813,667；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝12.68(s,1h),9.70(s,1h),9.21(s,1h),8.29(d,j＝7.2hz,1h),8.00(d,j＝8.4hz,1h),7.75(t,j＝6.0hz,1h),7.57(m,2h),7.37(m,2h),7.23(d,j＝8.1hz,1h),7.17(d,j＝7.8hz,1h),7.00(m,3h),6.89(m,3h),6.65(d,j＝8.4hz,2h),6.10(s,1h),4.59(s,2h),4.37(m,2h),3.87(s,3h),3.85(s,3h),3.04(qd,j1＝6.9hz,j2＝6.0hz,2h),2.10(m,2h),1.93(m,1h),1.76(m,1h),0.99(t,j＝6.9hz,3h)。

实施例23测定化合物8a-h的抗肿瘤生长活性

测定前将阿霉素,化合物6和化合物8a-h用生理盐水溶解,用于s180小鼠给药。在无菌环境中取接种于雄性icr小鼠10天生长旺盛的s180腹水瘤液，用生理盐水稀释成(1:2)的液体充分混合，将肿瘤细胞悬液用新鲜配制的0.2％台盼蓝染色，混匀后按白细胞计数方法计数，染蓝色者为死细胞，不染色者为活细胞。按细胞浓度＝4大方格内活细胞数/4×10⁴×稀释倍数＝细胞数/ml计算细胞密度，按细胞存活率＝活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100％计算细胞存活率。将存活率大于90％的瘤液用匀浆法制成密度为2.0×10⁷个/ml的细胞悬液。该细胞悬液接种于小鼠右腋皮下(0.2ml/只)，制造s180荷瘤小鼠。接种24h后s180荷瘤小鼠每日腹腔注射阿霉素的生理盐水溶液(剂量为2μmol/kg/天g)或腹腔注射化合物6的生理盐水溶液(剂量为1μmol/kg/天)或腹腔注射化合物8a-h的生理盐水溶液(剂量为0.1μmol/kg/天)，每组10只。每天给药一次，连续给药12天。最后一次给药的次日乙醚麻醉脱颈椎处死，然后用镊子固定小鼠右腋肿瘤生长部位，剪开皮肤钝性剥离肿瘤并称重。用瘤重(均值±sdg)表示疗效，数据用t检验和方差分析。结果见表1。在0.1μmol/kg剂量下化合物8a-h不仅有效地抑制肿瘤生长，而且活性与剂量比它们大10倍的化合物6没有显著性差异。这些数据表明，本发明有显著的技术效果。

表1化合物8a-h对s180小鼠肿瘤生长的影响

a)与生理盐水比p<0.05,与化合物6比p>0.05；n＝10。