一种苯硼酸类次氯酸比色荧光探针的制备与应用的制作方法

本发明涉及苯硼酸类化合物作为次氯酸比色荧光探针，其可在水溶液中对次氯酸进行快速灵敏高选择性检测，或者其可测定实际水样中次氯酸的浓度。

背景技术：

在人体内，次氯酸可以以髓过氧化物酶(mpo)催化反应的过氧化氢和氯离子的调节方式产生，其与先天宿主防御和对杀死各种病原体非常重要。在体外，由于泳池水次氯酸浓度过高导致的游泳池中毒事件现依旧频频发生。生物体内产生或蓄积过量的次氯酸，会引起多种疾病，包括心血管疾病，动脉粥样硬化，骨关节炎，类风湿性关节炎和肺损伤，严重还会导致癌症。因此，检测实际水体和生物体系中次氯酸的浓度已成为一个重要的课题，现亟待发展快速、灵敏、高选择性检测次氯酸的手段。

当前，常见的次氯酸检测手段主要是碘还原滴定法、分光光度法、化学发光分析法、库伦法等。但这些分析手段在实际应用中既昂贵又繁琐，且常常需要特殊的昂贵实验仪器和高技能专业操作人员。因此，高效、廉价、简捷的次氯酸检测手段成为重要的研究课题。

在各种离子/分子的检测方法中，比色荧光探针检测法由于操作简单，可在现场使用，选择性和灵敏度高，检测范围广，响应时间快速，能够进行原位检测和实时监测，检测过程对样品没有破坏而极为引人注目。但是目前报道的荧光探针仍存在一些问题，包括灵敏度低、选择性差以及合成复杂等。总之，发展具有高灵敏度、高选择性、合成步骤简单的次氯酸比色荧光探针是本领域技术人员急需解决的问题。

技术实现要素：

本领域急需一种制备简单的快速高灵敏高选择性识别次氯酸的比色荧光探针，从而能够有效检测体内或体外次氯酸。为此，本发明合成了一类新颖的次氯酸比色荧光探针，其合成简单、超灵敏、稳定性高、和/或选择性高，和/或能够快速特异性识别次氯酸。

具体而言，本发明提供了一种次氯酸比色荧光探针，其为苯硼酸类化合物，其结构如下：

优选的，本发明的荧光探针是：

在本发明的次氯酸比色荧光探针的制备方法中，反应温度为25℃；反应时间是6h；苯并噻唑-2-乙腈和对醛基苯硼酸的摩尔比为约1：1至1：3，优选为1：1.1或1：1.3；二异丙基乙基胺作为有机碱催化剂。

本发明还提供了用于检测样本(例如游泳池水样本)中次氯酸浓度的检测制剂或试剂盒，其包含本发明的探针。优选地，本发明的检测制剂或试剂盒还包含产品的使用说明书。还优选地，本发明的试剂盒还包含用于测定样本中的次氯酸浓度的缓冲剂。

本发明还提供了检测样本(例如游泳池水样本)中次氯酸浓度的方法，其包括将本发明的探针与待测样本接触的步骤。

本发明还提供了本发明的探针在制备用于检测样本(例如游泳池水样本)中次氯酸浓度的制剂中的用途。

本发明的次氯酸荧光探针可与次氯酸进行特异性作用，产生荧光光谱的增强变化，从而实现对次氯酸的定量检测。

具体而言，本发明的次氯酸比色荧光探针分别与过氧化氢、过氧化叔丁醇、羟基自由基以及其他物质进行作用均不能导致荧光光谱的明显改变，从而实现对次氯酸的特异性识别。

可选择地，本发明的次氯酸荧光探针的稳定性好，进而能够长期保存使用。

进一步的，本发明的次氯酸荧光探针是快速高选择性次氯酸比色荧光探针，且合成简单，成本低廉，有利于商业化的推广应用。

附图说明

图1a是探针溶液随次氯酸浓度变化的吸收光谱，插图为反应前后溶液的颜色变化。

图1b是a446/a332对不同次氯酸浓度的拟合曲线。

图2是探针溶液(5μm)随次氯酸浓度变化(0-20μm)的荧光光谱，插图是515nm的荧光强度对次氯酸浓度的拟合曲线。

图3是探针对次氯酸的响应时间测定。

图4是探针(5μm)对不同分析物(0.1mm)的响应情况。其中a：探针溶液，b：钾离子，c：钙离子，d：钠离子，e：镁离子，f：锌离子，g：硝酸根离子，h：亚硝酸根离子，i：一氧化氮，j：半胱氨酸，k：谷胱甘肽，l：过氧化氢，m：过氧化叔丁醇，n：过氧化叔丁醇自由基，o：羟基自由基，p：单线态氧，q：超氧阴离子，r：抗坏血酸，s：高碘酸钠，t：次氯酸(20μm)。

具体实施方式：

本发明提供了上述快速灵敏高选择性次氯酸比色荧光探针的合成路线、方法及其光谱性能。

本发明的次氯酸比色荧光探针是一种苯硼酸类化合物，其具有以下结构通式：

上式中：r1，r2，r3，r4,r5和r6为氢原子，直链或支链烷基，直链或支链烷氧基，磺酸基，酯基，羧基；r1，r2，r3，r4,r5和r6可以相同或不同。

该类次氯酸比色荧光探针的合成路线和方法如下：

具体地，本发明的比色荧光探针可以通过如下方法制备，将苯并噻唑-2-乙腈(2mmol)、对醛基苯硼酸(2.5mmol)和二异丙基乙基胺(3mmol)溶于20ml乙醇中，25℃下搅拌反应6h，然后用硅胶柱色谱提纯(洗脱剂为二氯甲烷：石油醚＝2：1)得到纯品固体(产率91％)。

因此，本发明还提供了对醛基苯硼酸类化合物在制备用于检测次氯酸的比色荧光探针中的用途。

本发明还提供了苯并噻唑-2-乙腈类化合物在制备用于检测次氯酸的试剂盒中的用途。

本发明的快速高灵敏高选择性识别次氯酸比色荧光探针的显著特征是能够快速高选择性特异性地识别次氯酸，能够准确对次氯酸进行定量分析。

下面将通过借助以下实施例来更详细地说明本发明。以下实施例仅是说明性的，应该明白，本发明并不受下述实施例的限制。

实施例1

(方案1)将苯并噻唑-2-乙腈(348mg，2mmol)和对醛基苯硼酸(300mg，2mmol)溶解于20ml无水乙醇中，然后逐滴加入二异丙基乙基胺(646mg，3mmol)，反应液在室温下反应6小时。反应完成后，旋蒸除去溶剂得到粗产品，然后用硅胶柱(洗脱剂为二氯甲烷：石油醚＝2：1)分离提纯，得到黄色固体508mg，产率为83％。

(方案2)将苯并噻唑-2-乙腈(348mg，2mmol)和对醛基苯硼酸(330mg，2.2mmol)溶解于20ml无水乙醇中，然后逐滴加入二异丙基乙基胺(646mg，3mmol)，反应液在室温下反应6小时。反应完成后，旋蒸除去溶剂得到粗产品，然后用硅胶柱(洗脱剂为二氯甲烷：石油醚＝2：1)分离提纯，得到黄色固体539mg，产率为88％。

(方案3)将苯并噻唑-2-乙腈(348mg，2mmol)和对醛基苯硼酸(375mg，2.5mmol)溶解于20ml无水乙醇中，然后逐滴加入二异丙基乙基胺(646mg，3mmol)，反应液在室温下反应6小时。反应完成后，旋蒸除去溶剂得到粗产品，然后用硅胶柱(洗脱剂为二氯甲烷：石油醚＝2：1)分离提纯，得到黄色固体557mg，产率为91％。

(方案4)将苯并噻唑-2-乙腈(348mg，2mmol)和对醛基苯硼酸(450mg，3.0mmol)溶解于20ml无水乙醇中，然后逐滴加入二异丙基乙基胺(646mg，3mmol)，反应液在室温下反应6小时。反应完成后，旋蒸除去溶剂得到粗产品，然后用硅胶柱(洗脱剂为二氯甲烷：石油醚＝2：1)分离提纯，得到黄色固体569mg，产率为93％。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ(×10^-6):7.52(t,j＝8.0hz,1h),7.59(t,j＝8.0hz,1h),7.97(d,j＝8.0hz,1h),8.05(d,j＝8.0hz,1h),8.11(t,j＝8.0hz,2h),8.19(d,j＝8.0hz,1h),8.35(s,1h),8.42(s,1h).¹³cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(×10^-6):106.27,116.55,122.97,123.68,126.86,127.63,129.49,134.02,134.83,135.10,148.78,153.35,163.61.esi-ms计算值：c16h12bn2o2s[m+h]⁺307.0713,实测值：307.0705。

实施例2

本发明的发明人进行了如下测试：(a)在pbsph＝7.4条件下不同浓度次氯酸对探针溶液吸收光谱的影响；(b)吸收光谱法定量分析次氯酸的线性关系图；上述测定是在10mmpbs的水溶液中进行的，所使用的探针是实施例1中所制备的探针，且所有光谱测试都是在25℃下次氯酸加入作用1min后测得的。结果参见图1。

从图1可以看出，在加入次氯酸之前，探针的吸收峰在320nm；加入次氯酸之后，随着次氯酸浓度的增高，320nm处的吸收峰逐渐消失，并在446nm处产生一个新的吸收峰。吸收峰红移了126nm，并在357nm处有一个完美的等吸收点，反应液由无色逐渐变为了黄色。这说明探针与次氯酸发生了反应，并且生成了一种新的物种，导致了吸收峰的红移。此外，两个吸收峰处吸光度的比值(a446/a332)与次氯酸的浓度之间保持好的线性关系。经计算，探针对次氯酸吸收光谱法的检出限为181nm。

实施例3

在pbsph＝7.4条件下，不同浓度次氯酸对探针溶液荧光光谱的影响，插图是荧光光谱法定量分析次氯酸的线性关系图；上述测定是在10mmpbs的水溶液中进行的，所使用的探针是实施例1中所制备的探针，且所有光谱测试都是在25℃下次氯酸加入作用1min后测得的。结果参见图2。

图2是探针的荧光光谱随不同浓度次氯酸的变化情况图。由图可以看出，在加入次氯酸之前，探针几乎没有荧光；当加入次氯酸之后，随着次氯酸浓度的增加，515nm处的荧光强度逐渐增强。而且515nm处的发射峰荧光强度与次氯酸的浓度之间保持好的线性关系，说明探针可以用荧光光谱法定量检测次氯酸。经计算，探针对次氯酸的检出限为9.5nm。

实施例4

探针(5μm)对次氯酸(5μm)响应时间的测试结果。上述测定是在10mmpbs,ph7.4的水溶液中进行的，所使用的探针是实施例1中所制备的探针，且所有光谱测试都是在25℃下测得的。结果参见图3。

从图3可以看出，加入等浓度次氯酸后，荧光强度骤然上升，并且在1min内能够响应完成。

实施例5

(a)不同分析物对探针(5μm)荧光光谱的影响。分析物包括：a：探针溶液，b：钾离子，c：钙离子，d：钠离子，e：镁离子，f：锌离子，g：硝酸根离子，h：亚硝酸根离子，i：一氧化氮，j：半胱氨酸，k：谷胱甘肽，l：过氧化氢，m：过氧化叔丁醇，n：过氧化叔丁醇自由基，o：羟基自由基，p：单线态氧，q：超氧阴离子，r：抗坏血酸，s：高碘酸钠，t：次氯酸(20μm)。它们的浓度(除特殊标注)均为100μm。所有测试条件是10mmpbs,ph＝7.4的水溶液中进行的，所使用的探针是实施例1中所制备的探针，且所有光谱测试都是在25℃下作用1min后测得的。结果参见图4。具体地，移取50μl的探针储备液(1mm)放进10ml比色管中，然后依次加入2ml乙醇和5ml超纯水，再移取相应体积的上述分析物储备液加入比色管内，然后移取1ml的pbs溶液(ph7.4,100mm)，加入比色管内，最后用超纯水定容至10ml。摇匀，静置1min，即可测定。结果如图4所示。

从图4可以看出，探针对次氯酸具有很高的选择性，能够专一性地和次氯酸进行反应，反应前后，荧光光谱有明显变化，而其他分析物与探针作用后荧光强度并不发生明显变化。而且其他物质不会明显干扰探针对次氯酸的定性与定量检测。

虽然用上述实施方式描述了本发明，应当理解的是，在不背离本发明的精神的前提下，本发明可进行进一步的修饰和变动，且这些修饰和变动均属于本发明的保护范围之内。