本发明一种高纯度光甘草定的制备方法，属于植物提取领域。
背景技术：
光甘草定是一种脂溶性化合物，是光果甘草中的主要黄酮类成分之一，具有很强的抗自由基氧化作用，主要应用于化妆品美白方面；另外，由于其能抑制体内新陈代谢过程中所产生的自由基，进而可以防治与自由基氧化有关的某些病理变化，如动脉粥样硬化，细胞衰老等。因此，光甘草定医药、化妆品领域中有较为广泛的应用，尤其是作为美白化妆品的功效成分，在日本、韩国和欧洲得到了广泛的应用。
目前文献和专利报道的光甘草定的制备方法较多，综合起来主要是将光果甘草或光果甘草提取甘草酸的废渣通过水提取、有机溶剂提取或碱水煎煮的方法进行提取在经过柱层析分离纯化得到高纯度的光甘草定，也有通过全合成的方法来制备光甘草定
中国专利201310327397.0一种从光果甘草中提取高纯度光甘草定的方法，该发明通过向光果甘草干燥粉末中加入混合溶液，在10-50℃下超声提取10-30min，抽滤，滤液回收混合溶液，固体冷冻干燥后溶于50％-99.9％的乙醇水溶液中，离心除去沉淀得澄清透明溶液，得溶液加入大孔树脂，洗脱液冷冻干燥得光甘草定。该纯化工艺采用混合溶剂超声提取、冷冻干燥、离心沉淀，这些方法在大批量工业生产较难使用对设备的要求高，且混合溶剂造成生产成本高，因此不适应大量生产。
中国专利201210501850.0采用新技术从甘草废渣中提取高纯度光甘草，该该发明通过向光果甘草渣中加入混合溶液提取，分别加纯水和碱水去除杂质和大孔吸附的工艺流程，最后得光草甘定成品。该纯化工艺采用混合溶剂提取造成生产成本高，经过实验表明低浓度得碱水在常温下即可对光甘草定产生破坏，因此此工艺不适应大量生产。
本发明的优点是利用制备甘草酸单氨盐的母液制备高纯度的光甘草定，使废弃的资源的得到了再利用，使光甘草定的成本得到了大幅降低；通过不断的降低醇溶液的浓度后经过聚酰胺树脂的层析，有效的去除杂质，最后经过c18反向硅胶的纯化，从而得到高含量的光甘草定。且聚酰胺树脂和c18反相硅胶柱可以反复使用，既合理利用了资源又节约了成本。因此本方法易于推广，具有很强的实用性，适用于生产放大。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种利用制备甘草酸单氨盐的母液制备高纯度的光甘草定的制备方法。
本发明的技术方案是这样实现的：
本发明中光甘草定含量的测定高效液相法；
（1）取甘草酸粉，加适量的醇提取，过滤，合并提取液，加入适量的氨水调节ph值，放置结晶、过滤，收集滤液，备用；
（2）取步骤（1）中的滤液，加入适量的水调节至一定浓度，上聚酰胺柱，再用一定浓度的醇洗脱，洗脱至流出液检测不到光甘草定停止洗脱，收集洗脱液，备用；
（3）取步骤（2）中的洗脱液加入适量的水调节至一定浓度，上聚酰胺柱，再用一定浓度的醇洗脱，洗脱至流出液检测不到光甘草定停止洗脱，收集洗脱液，备用；
（4）取步骤（3）中的洗脱液加入适量的水调节至一定浓度，上聚酰胺柱，再用一定浓度的醇洗脱，洗脱至流出液检测不到光甘草定停止洗脱，收集洗脱液，备用；
（5）取步骤（3）中的洗脱液加入适量的水调节至一定浓度上c18反向硅胶柱，先用40%~50%醇洗脱，然后用55%~65%的醇洗脱，收集55%~65%醇洗脱液，浓缩至一定体积，放置结晶，过滤干燥，即得高纯度光甘草定。
本发明步骤（1）中，提取溶剂的用量为甲醇、乙醇，优选为乙醇；提取量为甘草酸粉量的6～10倍（m/v），优选为8倍量；提取次数为1～3次，优选2次；提取时间为0.5～2小时，优选为1小时；ph值为4~5.5，优选为5；提取温度为60~78℃，优选为70℃。
本发明步骤（2）中，所述加入适量的水调节至一定浓度为70%~80%，优选为75%；聚酰胺柱为60~80目、100~200目、200~300目、优选为60~80目。
本发明步骤（2）中，上柱完成后，再用一定浓度的醇洗脱，醇浓度为70%~80%，优选为75%；洗脱溶剂用量为柱体积的2～4倍（m/v），优选为3倍（m/v）。
本发明步骤（3）中，所述加入适量的水调节至一定浓度为60%~70%，优选为65%；聚酰胺柱为60~80目、100~200目、200~300目、优选为100~200目。
本发明步骤（3）中，上柱完成后，再用一定浓度的醇洗脱，醇浓度为60%~70%%，优选为65%；洗脱溶剂用量为柱体积的2～4倍（m/v），优选为3倍（m/v）。
本发明步骤（4）中，所述洗脱液加入适量的水调节至一定浓度为50%~60%，优选为55%；聚酰胺柱为60~80目、100~200目、200~300目、优选为100~200目；上柱完成后，再用一定浓度的醇洗脱，醇浓度为50%~60%%，优选为55%；洗脱溶剂用量为柱体积的2～4倍（m/v），优选为3倍（m/v）。
本发明步骤（5）中，40%~50%醇洗脱液，优选为45%；洗脱溶剂用量为柱体积的2～4倍（m/v），优选为3倍（m/v）；55%~65%的醇洗脱，优选为60%，洗脱溶剂用量为柱体积的2～4倍（m/v），优选为3倍（m/v）；65%~75%的醇洗脱液在60~78℃下减压浓缩，优选70℃；浓缩体积为药材量的0.01~0.03倍（m/v），优选为0.02倍（m/v）；静置时间12~24h,优选为12h;减压干燥温度为60~78℃，优选70℃。
具体实施方式
以下实施例中所用甘草酸粉购于新疆，含量测定用对照品提供，所用乙醇为分析纯，水为纯化水，其他溶剂为分析纯，所用辅料为药用级。
实施例1
取甘草酸粉50公斤，分别加入400l95%乙醇在70℃下提取二次，过滤，合并提取液，加入适量的氨水调节ph值为5，放置结晶24h、过滤，收集滤液；滤液加水调节浓度至75%上60~80目聚酰胺柱，上柱完成后，改用75%乙醇7.5l洗脱，洗脱至流出液检测不到光甘草定停止洗脱，收集洗脱液，备用；
取上述洗脱液加水调节浓度至65%上100~200目聚酰胺柱，上柱完成后，改用65%乙醇7.5l洗脱，洗脱至流出液检测不到光甘草定停止洗脱，收集洗脱液；加水调节浓度至55%上100~200目聚酰胺柱，上柱完成后，改用55%乙醇7.5l洗脱，洗脱至流出液检测不到光甘草定停止洗脱，收集洗脱液，备用；
取上述洗脱液加水调节浓度至45%上c18反向硅胶柱，上柱完成后，先用6l45%乙醇醇洗脱，洗脱后再用60%乙醇6l洗脱，收集60%乙醇洗脱液，在70℃下浓缩1l，放置结晶12h，过滤，在70℃下减压干燥，即得含量为98.6%光甘草定72.8g。
实施例2
取甘草酸粉50公斤，分别加入300l95%乙醇在70℃下提取二次，过滤，合并提取液，加入适量的氨水调节ph值为4，放置结晶36h、过滤，收集滤液；滤液加水调节浓度至70%上100~200目聚酰胺柱，上柱完成后，改用70%乙醇7.5l洗脱，洗脱至流出液检测不到光甘草定停止洗脱，收集洗脱液，备用；
取上述洗脱液加水调节浓度至60%上100~200目聚酰胺柱，上柱完成后，改用60%乙醇7.5l洗脱，洗脱至流出液检测不到光甘草定停止洗脱，收集洗脱液；加水调节浓度至50%上100~200目聚酰胺柱，上柱完成后，改用55%乙醇7.5l洗脱，洗脱至流出液检测不到光甘草定停止洗脱，收集洗脱液，备用；
取上述洗脱液加水调节浓度至40%上c18反向硅胶柱，上柱完成后，先用4l40%乙醇醇洗脱，洗脱后再用55%乙醇6l洗脱，收集55%乙醇洗脱液，在70℃下浓缩1l，放置结晶24h，过滤，在60℃下减压干燥，即得含量为92.1%光甘草定54.1g。
实施例3：
取甘草酸粉50公斤，分别加入400l甲醇在60℃下提取2次，过滤，合并提取液，加入适量的氨水调节ph值为5，放置结晶36h、过滤，收集滤液；滤液加水调节浓度至75%上100~200目聚酰胺柱，上柱完成后，改用75%甲醇6l洗脱，洗脱至流出液检测不到光甘草定停止洗脱，收集洗脱液，备用；
取上述洗脱液加水调节浓度至65%上100~200目聚酰胺柱，上柱完成后，改用65%甲醇7.5l洗脱，洗脱至流出液检测不到光甘草定停止洗脱，收集洗脱液；加水调节浓度至55%上100~200目聚酰胺柱，上柱完成后，改用55%甲醇7.5l洗脱，洗脱至流出液检测不到光甘草定停止洗脱，收集洗脱液，备用；
取上述洗脱液加水调节浓度至40%上c18反向硅胶柱，上柱完成后，先用4l40%甲醇洗脱，洗脱后再用55%甲醇6l洗脱，收集55%甲醇洗脱液，在70℃下浓缩1l，放置结晶24h，过滤，在60℃下减压干燥，即得含量为94.1%光甘草定63.7g。