本发明涉及一种新型flt3激酶抑制剂化合物、包括该化合物的药物组合物、以及使用这些化合物和组合物来降低或抑制细胞或受试者的flt3激酶和/或突变型flt3激酶活性以及在受试者中预防或治疗细胞增殖性病症和/或flt3相关病症的用途和方法。
背景技术：
蛋白激酶是信号转导途径的酶组分，其催化atp的末端磷酸酯转移到蛋白质的酪氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸残基的羟基。在哺乳动物中正常或突变的蛋白激酶的超量表达或不当表达已经成为广泛研究的主题，并且已经证明在许多疾病的发展中起到重要作用，所述疾病包括糖尿病、血管生成、银屑病、再狭窄、眼病、精神分裂症、类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、心血管疾病和癌症。因此，蛋白激酶的抑制剂在治疗人类和动物疾病中有特殊的应用。
近年来，蛋白激酶抑制剂一直都是抗肿瘤药物研发的热点领域，有许多小分子激酶抑制剂如伊马替尼、索拉非尼和舒尼替尼已经上市，此外还有大量的小分子激酶抑制剂处于临床研究阶段。fms样酪氨酸激酶3(fms-liketyrosinekinase，flt3)，又名胎肝激酶-2(fetalliverkinase-2，flk2)和干细胞激酶-1(stemcellkinase-1，stk1)，是一种第三类受体酪氨酸激酶。flt3基因，位于染色体13q12，是1991年发现的早期造血生长因子受体基因，其编码的flt3受体属于酪氨酸激酶受体家族成员。当flt3受体的细胞膜外结构域与其内源性配体结合后，flt3形成同源或异源二聚体复合物，致使其酪氨酸激酶活性被激活，活化环开启，促使底物蛋白连接到atp结合位点上，进一步催化底物蛋白的磷酸化，从而介导一系列下游信号转导，导致细胞的增殖和分化。flt3受体广泛分布于骨髓造血干/祖细胞、胸腺、淋巴、胎盘、大脑、生殖腺等多种组织中。但flt3基因突变(主要包括近膜结构域的内部串联重复突变和酪氨酸激酶区域的点突变)、过度表达则会导致急性髓细胞性白血病等多种血液系统恶性肿瘤疾病的发生。因此，将flt3作为靶点用于肿瘤治疗已经成为研究的热点。
血液学恶性肿瘤是身体的血液形成和免疫系统、骨髓和淋巴组织的癌症。尽管在正常的骨髓中，flt3表达只限于早期祖细胞，但在血液学恶性肿瘤中，flt3以高水平表达或者flt3突变引起不受控制的flt3受体和下游分子通道诱导可能的ras、jak、pi3k等的活化。血液学恶性肿瘤包括白血病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也称为霍奇金淋巴瘤)和骨髓瘤例如，急性淋巴细胞白血病(all)、急性粒细胞白血病或急性髓性白血病(aml)、急性早幼粒细胞白血病(apl)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性粒细胞白血病(cml)、慢性嗜中性细胞白血病(cnl)、急性未分化细胞白血病(aul)、运行发育性大细胞性淋巴瘤(alcl)、成人t细胞all、伴有兰语系(trilineage)脊髓发育不良的aml(aml/tmds)、混合型语系白血病(mll)、脊髓发育不良综合征(mdss)、骨髓增生异常(mpd)、多发性骨髓瘤(mm)和脊髓肉瘤。
flt3在造血作用和淋巴细胞增殖中发挥关键作用，flt3的异常激活与多种肿瘤特别是急性髓性白血病(acutemyeloidleukemia，aml)的发生发展密切相关。flt3高表达的aml患者，即使骨髓移植后，依然有很高的复发率，使得肿瘤的预后很差。目前对flt3及突变型flt3的靶向抑制成为研究热点，主要为开发小分子酷氨酸激酶抑制剂，通过与flt3酷氨酸激酶竞争atp结合位点丽抑制其活性。目前已经进入临床的抑制flt3的激酶抑制剂有pkc412、ac220等。
迄今为止，flt3小分子抑制剂在治疗aml患者方面进行了很多探索，虽然目前有一些小分子flt3抑制剂处于临床研究阶段，但是治疗效果仍然十分有限。这是因为多种酪氨酸激酶受体结构具有高度的同源性，造成抑制剂选择性不强，从而在药物耐受量的范围内，难以在aml患者中达到抑制flt3的有效剂量。另一方面，抗性突变的发生也是影响flt3抑制剂治疗的重要因素。在对具高度异质性aml的研究中，flt3突变是第1个被发现的突变。flt3与其他激酶同源性高，现存的flt3抑制剂对其他激酶亦有抑制作用，因而活性高、选择性好的flt3抑制剂对于研究flt3与疾病的关系及相关疾病的治疗有着重大意义。
截止目前，仅有诺华公司开发的flt3抑制剂pkc412上市，口服治疗具有特异性遗传突变flt3的、新诊断的急性骨髓性白血病的成年患者。目前，许多flt3抑制剂正处于临床研究阶段，还有更多的flt3抑制剂处于临床前的药物发现阶段。
技术实现要素：
本发明化合物具有优良的flt3选择性和抑制活性。对多种肿瘤细胞株具有强抑制活性，表现出较强的抗肿瘤活性。其包括式(i)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药：
本发明的技术方案如下：
通式(i)的化合物或其药学上可接受的盐：
其中r1表示氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基、杂环烷基、烷氨基、烷氧基烷基、烷氧基甲酰基、烷氨基甲酰基、芳烷基、二芳基烷基、芳杂环烷基、芳基或芳杂环；
r2表示氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基、杂环烷基、烷氨基、烷氧基烷基、烷氧基甲酰基、烷氨基甲酰基、芳烷基、芳氧基、芳氨基、芳硫基、芳烷基氧基、芳烷基氨基、芳烷基硫基、二芳基烷基、芳杂环烷基、芳基或芳杂环；
x、y、z各自独立地表示n原子或ch原子团；其中ch原子团可任选被r3取代，r3可以是氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或芳杂环；
a1各自独立地表示nh、o、s或亚烷基原子团；其中nh原子团或亚烷基原子团各自独立地可任选被r4取代，r4可以是氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或芳杂环；
a2各自独立地表示键、亚烷基、c(o)nh、c(o)、nhc(o)、亚烷基-c(o)、c(o)-亚烷基、亚烷基-c(o)-亚烷基或nhc(o)nh；其中，亚烷基、c(o)nh、nhc(o)、亚烷基-c(o)、c(o)-亚烷基、亚烷基-c(o)-亚烷基或nhc(o)nh各自独立地可任选被r5取代，r5可以是氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或芳杂环；
q1是选自芳基或芳杂环，其中芳基或芳杂环各自独立地可任选被一个或多个r6取代，r6可以是氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或芳杂环；
q2是选自芳基、芳杂环、c3-c8的脂肪族碳环、杂环烷基、-nh2或-oh，其中芳基、芳杂环、c3-c8的脂肪族碳环、杂环烷基各自独立地可任选被一个或多个r7取代，r7可以是氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或芳杂环；-nh2或-oh各自独立地可任选被一个或多个r8取代，r8可以是氢、烷基、卤代烷基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或芳杂环；
烷基为具有1-8个碳原子的直链或支链饱和或部分不饱和烃基；或为具有3-8个碳原子的环状饱和或部分不饱和烃基；或为连接具有1-8个碳原子的直链或支链饱和或部分不饱和烃基的具有3-8个碳原子的环状饱和或部分不饱和烃基；
亚烷基为具有1-8个碳原子的直链或支链饱和烃基；或为具有3-8个碳原子的环状饱和烃基；或为连接具有1-个碳原子的直链或支链饱和烃基的具有3-8个碳原子的环状饱和烃基失去一个氢原子形成的基团；
杂环烷基为饱和或部分不饱和单环或多环环状烷取代基，其包括3至12个环原子，其中一个或多个环原子选自氮、氧或s(o)m(其中m是0至2的整数)的杂原子，其余环原子为碳，各单环或双环任选被1、2或3个取代基取代，各取代基独立选自卤素、卤代烷基、羟基、烷基或烷氧基；卤素为选自氟、氯、溴或碘的取代基；
烷氧基为具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基；或为具有3-6个碳原子的环状饱和烃基；或为连接具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的具有3-6个碳原子的环状饱和烃基；其中各碳原子任选被氧取代；
烷硫基为具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基；或为具有3-6个碳原子的环状饱和烃基；或为连接具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的具有3-6个碳原子的环状饱和烃基；其中各碳原子任选被硫取代；
烷氨基为具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基；或为具有3-6个碳原子的环状饱和烃基；或为连接具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的具有3-6个碳原子的环状饱和烃基；其中各碳原子任选被nh原子团取代；
烷氧基烷基为如上定义的烷氧基与烷基连接；
芳基为选自苯基、萘基、苊基或四氢萘基的碳环，其各自任选被1、2或3个取代基取代，各取代基独立地选自氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或芳杂环；
芳杂环为选自吡咯基、吡唑基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基或哒嗪基的单环杂环；或选自喹啉基、喹喔啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、2，3-二氢苯并[1，4]二氧杂环己烯基或苯并[1，3]二氧杂环戊烯基的双环杂环；
芳烷基、二芳基烷基、芳杂环烷基为如上定义的芳基或芳杂环与烷基连接；
芳氧基、芳氨基、芳硫基、芳烷基氧基、芳烷基氨基、芳烷基硫基为如上定义的芳基分别与o、s、nh、烷氧基、烷氨基、烷硫基链接；
卤代烷基为具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基，或为具有3-6个碳原子的环状饱和烃基，或为连接具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的具有3-6个碳原子的环状饱和烃基；其中一个或多个碳原子被一个或多个卤原子取代。
本发明的优选方案在于：
其中r1表示氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、杂环烷基、烷氧基烷基、烷氧基甲酰基或烷氨基甲酰基；
r2表示氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基、杂环烷基、烷氨基、烷氧基烷基、烷氧基甲酰基、烷氨基甲酰基、芳烷基、芳氧基、芳氨基、芳硫基、芳烷基氧基、芳烷基氨基、芳烷基硫基、二芳基烷基、芳杂环烷基、芳基或芳杂环；
x、y、z各自独立地表示n原子或ch原子团；其中ch原子团可任选被r2取代，r3可以是氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；
a1各自独立地表示nh、o、s或亚烷基原子团；其中nh原子团或亚烷基原子团各自独立地可任选被r4取代，r4可以是氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；
a2各自独立地表示键、亚烷基、c(o)nh、c(o)、nhc(o)、亚烷基-c(o)、c(o)-亚烷基、亚烷基-c(o)-亚烷基或nhc(o)nh；其中，亚烷基、c(o)nh、nhc(o)、亚烷基-c(o)、c(o)-亚烷基、亚烷基-c(o)-亚烷基或nhc(o)nh各自独立地可任选被r5取代，r5可以是氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；
q1是选自芳基或芳杂环，其中芳基或芳杂环各自独立地可任选被一个或多个r6取代，r7可以是氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；
q2是选自芳基、芳杂环、c3-c8的脂肪族碳环、杂环烷基、-nh2或-oh，其中芳基、芳杂环、c3-c8的脂肪族碳环、杂环烷基各自独立地可任选被一个或多个r7取代，r7可以是氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或芳杂环；-nh2或-oh各自独立地可任选被一个或多个r8取代，r8可以是氢、烷基、卤代烷基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或芳杂环。
本发明的另一优选方案在于：
其中r1表示氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基或烷氨基；
r2表示氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基、杂环烷基、烷氨基、烷氧基烷基、烷氧基甲酰基、烷氨基甲酰基、芳烷基、芳氧基、芳氨基、芳硫基、芳烷基氧基、芳烷基氨基、芳烷基硫基、二芳基烷基、芳杂环烷基、芳基或芳杂环；
x、y、z各自独立地表示n原子或ch原子团；
a1各自独立地表示nh、o、s或亚烷基原子团；
a2各自独立地表示键、亚烷基、c(o)nh、c(o)、nhc(o)、亚烷基-c(o)、c(o)-亚烷基、亚烷基-c(o)-亚烷基或nhc(o)nh；
q1是选自芳基或芳杂环，其中芳基或芳杂环各自独立地可任选被一个或多个r6取代，r7可以是氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；
q2是选自芳基、芳杂环、c3-c8的脂肪族碳环、杂环烷基、-nh2或-oh，其中芳基、芳杂环、c3-c8的脂肪族碳环、杂环烷基各自独立地可任选被一个或多个r7取代，r7可以是氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或芳杂环；-nh2或-oh各自独立地可任选被一个或多个r8取代，r8可以是氢、烷基、卤代烷基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或芳杂环。
本发明的另一优选方案在于：
其中r1表示氢、甲基、乙基、异丙基、环丙基、氰基或卤素；
其中r2选自下列的烷基：环丙基、环丁基、环己基、环戊基、环庚基、环辛基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基，或下列的杂环烷基：氧杂环丁基、氧杂环戊基、氧杂环己基、四氢吡咯基、哌啶基、n-甲基哌啶-4-基、吗啉基、n-甲基哌嗪基、3-甲基哌啶-1-基、哌嗪基，或者下列的烷氧基以及烷氨基：环丙基氧基、环丁基氧基、环戊基氧基、环己基氧基、环庚基氧基、环戊基甲氧基、环戊基乙氧基、环丙基氨基、环丁基氨基、环戊基氨基、环己基氨基、环庚基氨基，或者下列的芳基以及芳杂环：苯基、萘基、苊基、四氢萘基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基，或者下列的芳氧基以及芳氨基：苯氧基、萘氧基、苯胺基、萘胺基，或者下列芳烷氧基及芳烷氨基：苄氧基、苄氨基；
x、y、z各自独立地表示n原子或ch原子团，且x、y、z中至少有一个为ch原子团；
a1表示nh；
a2各自独立地表示键、亚烷基或c(o)；
q1是选自下列的芳香环或取代的芳香环：苯基、萘基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基，取代基可以是1～2个卤素、甲基、甲氧基或三氟甲基；
q2是选自下列的脂肪族杂环：四氢吡咯基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、高哌嗪基、硫代吗啉基、吡喃基、四氢呋喃基、吖丙啶基、吖丁啶基，n-甲基哌啶-4-基、n-甲基哌嗪基、3-甲基哌啶-1-基、哌嗪基，或选自下列的取代氨基、取代氧基：n，n-二丙基氨基、n，n-二乙基氨基、n，n-二甲基氨基、正丁基氨基、2-甲氧基乙氧基、2-羟基乙基氨基、n，n-二(2-甲氧基乙基)氨基。
本发明的另一优选方案在于：
其中r1各自独立地表示氢或甲基；
r2各自独立地表示环丙基、环己基、环戊基、环庚基、苯基、呋喃基吡啶基、环戊基氧基、环己基氧基、环庚基氧基、苯氧基、环戊基氨基、环戊基甲氧基或苄氧基；
x、y、z各自独立地表示n原子或ch原子团，且x、y、z中至少有一个为ch原子团；
a1地表示nh；
a2各自独立地表示键或ch2；
q1各自独立地表示苯基；
q2是选自下列的脂肪族杂环：四氢吡咯基、吗啉基、n-甲基哌嗪基、哌嗪基；
根据本发明，药学上可接受的盐包括通式i化合物与下列酸形成的酸加成盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、萘磺酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸或琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸、杏仁酸。此外还包括无机碱的酸式盐，如：含有碱性金属阳离子、碱土金属阳离子、铵阳离子盐。
通式i的化合物优选以下结构化合物：
4-((6-苯基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-1)
4-((6-环戊基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-2)
4-((6-环庚基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-3)
4-((6-环戊基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-4)
4-((6-环丙基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-5)
4-((6-环戊基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-吗啉代苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-6)
4-((6-环戊基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(吗啉代甲基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-7)
4-((6-(呋喃-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-8)
4-((6-(呋喃-2-基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-9)
4-((6-环戊基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(吡咯烷-1-基甲基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-10)
4-((4-环戊基-6-甲基嘧啶-2-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-11)
4-((4-环戊基-6-甲基嘧啶-2-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-12)
4-((4-环戊基嘧啶-2-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺.(i-13)
n-(4-吗啉代)-4-((6-苯基嘧啶-4-基)氨基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-14)
4-((4-环戊基嘧啶-2-基)氨基)-n-(4-吗啉代苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-15)
4-((6-环戊基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-16)
4-((2-甲基-6-苯氧基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-17)
4-((6-(环己基氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-18)
4-((6-(环庚氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-19)
4-((6-(2-溴苯氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-吗啉代苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-20)
4-((6-(环戊基甲氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-21)
4-((6-(环戊基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-22)
4-((6-(环戊基氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-23)
4-((4-苯氧基嘧啶-2-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-24)
4-((6-(2-溴苯氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-25)
4-((4-甲基-6-苯氧基嘧啶-2-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-26)
4-((6-苯氧基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-27)
n-(4-吗啉代)-4-((6-苯氧基嘧啶-4-基)氨基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-28)
4-((6-(环己基氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-吗啉代苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-29)
4-((6-(环戊基氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-吗啉代苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-30)
4-((6-(环戊基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-吗啉代苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-31)
n-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-4-((6-苯氧基嘧啶-4-基)氨基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-32)
n-(4-(吗啉代甲基)苯基)-4-((6-苯氧基嘧啶-4-基)氨基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-33)
4-((6-(苄基氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-34)本发明的部
分化合物制备方法如下：
方法一：
方法二：
方法三：
本发明化合物都可以用上述或类似上述的制备方法制备得到，根据取代基的不同和取代基位置的不同选用相应的原料即可。
药理测试结果表明，通式i的化合物及其药学上可接受的盐对cdk2、cdk4、cdk6、flt3具有优良的抑制活性，因此，通式i化合物及其药学上可接受的盐可以用于治疗与上述激酶有关的临床病症。与上述激酶有关的疾病可以是，但不限于：肺癌、黑色素瘤、肝癌、肾癌、白血病、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、皮肤癌、胰腺癌、卵巢癌、睾丸癌、乳腺癌、膀胱癌、胆囊癌、骨髓增生异常综合症、淋巴瘤、食管癌、甲状腺滤泡癌、胃肠道癌、中枢或外周神经系统的肿瘤(例如星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤或神经鞘瘤)、间皮瘤、ii型或非胰岛素依赖型糖尿病、自身免疫性疾病。(1)目标化合物的激酶抑制活性测定
所合成的化合物用荧光共振能量转移(fret)法分别测定对flt3、cdk2、4、6的抑制活性，并与阳性对照药比较，筛选出活性较好的化合物。上述激酶通过纯化或直接购买试剂盒获得。以flt3的抑制活性测试为例，具体方法如下：
flt3用激酶稀释液稀释至合适浓度后使用。激酶反应混合物中含flt3、peptidesubstrate、hepes(ph7.5)、brij-35、mgcl2和edta。cdk2phospho-peptidesubstrate用作100％磷酸化对照，不加atp用作0％磷酸化对照。室温下反应1h后，向反应体系中加入适度稀释的developmentreagenta。室温下继续反应1h，加入stopreagent中止反应。激发波长400nm，同时检测波长为445nm(coumarin)和520nm(fluorescein)的荧光强度。按公式计算受试化合物抑制率。
(2)化合物对部分激酶的抑制活性(抑制率％，1×10-6mol/l)
(3)目标化合物的体外抗肿瘤活性测定
用mtt法测定对胃癌细胞株mgc803、白血病细胞株k562、乳腺癌细胞株mcf7、白血病细胞株mv4-11、肺癌细胞株a549、结肠癌细胞株hct116等肿瘤细胞株的抑制作用。
mtt法利用活细胞线粒体中存在与nadp相关的脱氢酶能使外源性的mtt还原成难溶性的蓝紫色结晶物(formazan)，并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。再用二甲基亚砜(dmso)或三联液(10％sds-5％异丁醇-0.01mol/lhcl)溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其od值，间接反应其活细胞量。
具体方法：将处于细胞对数生长期的要进行实验的肿瘤细胞按一定的细胞量接种于96孔培养板内，培养24h后加入所筛的样品(悬浮细胞接板后可直接加)，细胞在37℃、5％co2条件下继续培养48小时后，加入mtt继续培养4小时，用dmso溶解结晶，在酶标仪下进行检测。
目标化合物10μm浓度下对上述肿瘤细胞株的体外抗肿瘤活性结果如下(抑制率％)：
药理测试结果表明，本发明化合物对flt3具有较强的抑制活性，对其他激酶表现出一定的选择性，可用于预防或治疗与flt3、cdk2、cdk4或cdk6有关的临床疾病，这些疾病可以是：白血病、淋巴(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也称为霍奇金淋巴瘤)和骨髓瘤例如，急性淋巴细胞白血病(all)、急性粒细胞白血病或急性髓性白血病(aml)、急性早幼粒细胞白血病(apl)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性粒细胞白血病(cml)、慢性嗜中性细胞白血病(cnl)、急性未分化细胞白血病(aul)、运行发育性大细胞性淋巴瘤(alcl)、成人t细胞all、伴有兰语系(trilineage)脊髓发育不良的aml(aml/tmds)、混合型语系白血病(mll)、脊髓发育不良综合征(mdss)、骨髓增生异常(mpd)、多发性骨髓瘤(mm)和脊髓肉瘤、肺癌、黑色素瘤、肝癌、肾癌、白血病、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、皮肤癌、胰腺癌、卵巢癌、睾丸癌、乳腺癌、膀胱癌、胆囊癌、骨髓增生异常综合症、淋巴瘤、食管癌、甲状腺滤泡癌、胃肠道癌、中枢或外周神经系统的肿瘤(例如星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤或神经鞘瘤)、间皮瘤、ii型或非胰岛素依赖型糖尿病、自身免疫性疾病。
具体实施方式
熔点用b形熔点管测定，介质为甲基硅油，温度计未校正；1hnmr用jeolfx90q型傅立叶变换核磁共振仪、brukeracf-300型核磁共振仪(tms内标)；ms用nicolet2000型傅立叶变换质谱仪和mat-212型质谱仪测定；微波反应用cemdiscover单模微波仪。
实施例1
1-甲基-4-(4-硝基苄基)哌嗪(i-a)
在500ml单颈瓶中加入对硝基溴苄10g(46.3mmol)和二氯甲烷100ml，在冰水浴下(0-5℃)缓慢滴加n-甲基哌嗪4.7g(47.0mmol)和三乙胺7.1g(70.3mmol)的二氯甲烷20ml混合液，加毕加热回流1h，tlc检测原料消失(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)。将氯仿150ml和饱和碳酸氢钠溶液100ml加入反应液中，于室温剧烈搅拌30min。反应液用氯仿萃取(100ml×3)，合并有机层，分别用水和饱和氯化钠各洗一次(100ml×1)。无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂得淡黄色固体8.5g，收率78.1％，产品无需进一步纯化，直接投入下一步反应。1hnmr(300mhz，dmso)δ8.1(d，j＝8.6hz，2h，arh)，7.5(d，j＝8.6hz，2h，arh)，3.5(s，2h，-ch2-)，2.3-2.5(br，8h，-ch2-×4)，2.15(s，3h，-ch3).
实施例2
4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯胺(i-b)
在500ml单颈瓶中加入i-a粗品8.5g(36.2mmol)、feo(oh)/c催化剂2.0g和95％乙醇100ml，加热回流，缓慢滴加水合肼25ml和95％乙醇20ml的混合液，tlc检测原料消失(甲醇∶氯仿＝1∶15)。趁热抽滤，滤饼用热的乙醇洗两次(30ml×2)，减压蒸除溶剂得白色固体，真空干燥得(i-b)6.7g，收率90.3％。产品无需进一步纯化，直接投入下一步反应。1hnmr(300mhz，dmso)δ8.1(d，j＝8.5hz，2h，arh)，7.5(d，j＝8.5hz，2h，arh)，4.0(s，2h，-nh2)，3.5(s，2h，-ch2-)，2.3-2.5(br，8h，-ch2-×4)，2.1(s，3h，-ch3)
实施例3
n-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基-4-硝基-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-c)
在250ml圆底烧瓶中加入i-a’粗品7.5g(36.6mmol)、4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸6.3g(40.1mmol)、edc·hcl8.4g(44.0mmol)、hobt6.0g(44.4mmol)和无水dmf100ml，室温搅拌24h。tlc检测原料消失(甲醇∶氯仿＝1∶10)。将反应液到入冰水200ml中，析出大量淡黄色固体，静置，抽虑得黄色固体，所得粗品用乙酸乙酯和甲醇混合溶剂重结晶得(i-e)11.1g，收率88.2％。ms[m+h]+345.3。1hnmr(300mhz，dmso)δ14.2(s，1h，-nh-，pyrazole)，10.6(s，1h，-nhco-)，8.8(s，1h，arh)，7.6(d，j＝8.7hz，2h，arh)，7.3(d，j＝8.7hz，2h，arh)，3.4(s，2h，-ch2-)，2.3-2.4(br，8h，-ch2-×4)，2.2(s，3h，-ch3).
实施例4
n-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基-4-氨基-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-d)
在250ml单颈瓶中加入i-m6.0g(17.4mmol)、feo(oh)/c催化剂2g和95％乙醇100ml，加热回流，缓慢滴加水合肼25ml和95％乙醇20ml的混合液，tlc检测原料消失(甲醇∶氯仿＝1∶10)。趁热抽滤，滤饼用热的乙醇洗两次(30ml×2)，减压蒸除溶剂得类白色固体，所得粗品用乙酸乙酯和甲醇混合溶剂重结晶得(i-m’)3.5g，产率64％，ms[m+h]+315.8。1hnmr(300mhz，dmso)δ12.7(s，1h，pyrazole)，9.7(s，1h，-nhco-)，7.7(d，j＝8.6hz，2h，arh)，7.1-7.2(m，3h，arh)，4.7(s，2h，-nh2)，3.3(s，2h，-ch2-)，2.3-2.5(m，8h，-ch2-×4)，2.1(s，3h，-ch3).
实施例5
4-(4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(i-e)
在500ml单颈瓶中加入对氟硝基苯10g(70.9mmol)和碳酸钾14.6g(106.4mmol)，用100mldmso溶解，在冰水浴下(0-5℃)缓慢滴加n-boc-哌嗪10.6g(106.4mmol)的dmso溶液，加毕加热回流6h，tlc检测原料消失(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)。加入1000ml水，析出黄色固体，过滤，减压干燥得淡黄色固体15.2g，收率70.1％，产品无需进一步纯化，直接投入下一步反应。1hnmr(300mhz，dmso)δ8.14(d，j＝8.7hz，2h，arh)，7.85(d，j＝8.7hz，2h，arh)，3.45(s，4h，-ch2-×2)，3.39(s，4h，-ch2-×2)，1.35(s，9h，-ch3×3)。
实施例6
4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(i-f)
在500ml单颈瓶中加入i-e粗品10g(32.6mmol)、feo(oh)/c催化剂1.0g和95％乙醇100ml，加热回流，缓慢滴加水合肼10ml和95％乙醇20ml的混合液，tlc检测原料消失(甲醇∶氯仿＝1∶15)。趁热抽滤，滤饼用热的乙醇洗两次(30ml×2)，减压蒸除溶剂得白色固体，真空干燥得(i-f)7.86g，收率87.1％。产品无需进一步纯化，直接投入下一步反应。1hnmr(300mhz，dmso)δ6.94(d，j＝8.7hz，2h，arh)，6.22(s，2h，-nh2)，6.15(d，2h，j＝8.7hz，arh)，3.45(t，4h，-ch2-×2)，3.39(t，4h，-ch2-×2)，1.35(s，9h，-ch3×3)，
实施例7
4-(4-(4-硝基-1h-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(i-g)
在250ml圆底烧瓶中加入i-f粗品5g(18.1mmol)、4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸3.1g(19.9mmol)、edc·hcl4.1g(21.7mmol)、hobt2.9g(21.7mmol)和无水dmf50ml，室温搅拌24h。tlc检测原料消失(甲醇∶氯仿＝1∶10)。将反应液到入冰水200ml中，析出大量淡黄色固体，静置，抽虑得黄色固体，所得粗品用乙酸乙酯和甲醇混合溶剂重结晶得(i-g)4.7g，收率62.4％。ms[m+h]+417.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ11.46(s，1h，-nh-，pyrazole)，9.53(s，1h，-nhco-)，7.88(s，1h，arh)，7.84(d，j＝8.7hz，2h，arh)，7.45(d，j＝8.7hz，2h，arh)，3.45(t，4h，-ch2-×2)，3.39(t，4h，-ch2-×2)，1.45(s，9h，-ch3×3)。
实施例8
4-(4-(4-氨基-1h-吡唑-3-甲酰胺基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(i-h)
在250ml单颈瓶中加入i-g5.0g(12.0mmol)、feo(oh)/c催化剂0.5g和95％乙醇60ml，加热回流，缓慢滴加水合肼5ml，tlc检测原料消失(甲醇∶氯仿＝1∶10)。趁热抽滤，滤饼用热的乙醇洗两次(30ml×2)，减压蒸除溶剂得类白色固体，所得粗品用乙酸乙酯和甲醇混合溶剂重结晶得(i-h)3.9g，产率85.3％，ms[m+h]+386.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ11.56(s，1h，-nh-，pyrazole)，9.53(s，1h，-nhco-)，7.88(s，1h，arh)，7.84(d，2h，j＝8.7hz，arh)，7.44(s，2h，-nh2)，6.45(d，j＝8.7hz，2h，arh)，3.55(t，4h，-ch2-×2)，3.49(t，4h，-ch2-×2)，1.45(s，9h，-ch3×3)。
实施例9
4-((6-苯基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-1)
在50ml单颈瓶中加入i-h150mg(0.39mmol)、4-氯-6-苯基嘧啶88.9mg(0.47mmol)和50％乙酸水溶液5ml，加热回流，tlc检测原料消失(甲醇∶氯仿＝1∶10)，反应液冷却至室温，用饱和碳酸氢钠水溶液调节ph到8-9，析出固体，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取3次(50ml×3)，合并萃取液，无水硫酸镁干燥，抽滤后减压蒸除溶剂，与滤饼合并，粗品经柱层析(甲醇∶氯仿＝1∶15)，得(i-1)107mg，收率63％，[m+h]+441.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.44(s，1h，pyrazole)，10.08(s，1h，-nh-)，9.51(s，1h，-nhco-)，8.78(s，1h，arh)，8.53(s，1h，arh)，8.16(d，j＝3.7hz，2h，arh)，7.71(m，3h，arh)，7.52(d，j＝3.5hz，3h，arh)，6.91(d，j＝8.7hz，2h，arh)，3.45(s，1h，-nh-)，3.01(s，4h，-ch2-×2)，2.83(s，4h，-ch2-×2).
实施例10
4-((6-环戊基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-2)
在50ml单颈瓶中加入i-d150mg(0.48mmol)、4-氯-6-环戊基嘧啶104mg(0.58mmol)和50％乙酸水溶液5ml，加热回流，tlc检测原料消失(甲醇∶氯仿＝1∶10)，反应液冷却至室温，用饱和碳酸氢钠水溶液调节ph到8-9，析出固体，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取3次(50ml×3)，合并萃取液，无水硫酸镁干燥，抽滤后减压蒸除溶剂，与滤饼合并，粗品经柱层析(甲醇∶氯仿＝1∶15)，得(i-2)157mg，淡黄色固体，收率71％，ms[m+h]+460.3.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.40(s，1h，pyrazole)，10.19(s，1h，-nh-)，9.20(s，1h，-nhco-)，8.60(s，1h，arh)，8.45(s，1h，arh)，7.79(d，j＝8.4hz，2h，arh)，7.25(d，j＝8.4hz，2h，arh)，6.96(s，1h，arh)，3.45(s，2h，-ch2-)，3.00(m，1h，-ch-)，2.48(dd，j＝13.1，11.4hz，8h，-ch2-×4)，2.28(s，3h，-ch3)，1.95(dd，j＝16.6，8.4hz，2h，-ch2-)，1.69(m，6h，-ch2-×3).
实施例11
4-((6-环庚基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-3)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-3)，收率43％，ms[m+h]+461.3.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.46(s，1h，pyrazole)，10.09(s，1h，-nh-)，9.25(s，1h，-nhco-)，8.59(s，1h，arh)，8.43(s，1h，arh)，7.73(d，j＝8.8hz，2h，arh)，6.96(m，3h，arh)，3.35(s，4h，-ch2-×2)，3.20(s，4h，-ch2-×2)，3.15(s，1h，-nh-)，2.67(s，1h，-ch-)，1.68(m，14h，-ch2-×7).
实施例12
4-((6-环戊基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-4)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-4)，收率44％，ms[m+h]+432.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.42(s，1h，pyrazole)，10.09(s，1h，-nh-)，9.27(s，1h，-nhco-)，9.07(s，1h，arh)，8.61(s，1h，arh)，8.44(s，1h，arh)，7.73(d，j＝8.8hz，2h，arh)，6.97(m，3h，arh)，3.33(s，4h，-ch2-×2)，3.23(s，4h，-ch2-×2)，3.02(m，-nh-)，2.9-3.0(m，1h，-ch-)，1.90(m，2h，-ch2-)，1.73(s，6h，-ch2-×3).
实施例13
4-((6-环丙基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-5)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-5)，收率38％，ms[m+h]+405.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.4(s，1h，pyrazole)，9.96(s，1h，-nh-)，9.21(s，1h，-nhco-)，8.45(d，j＝26.5hz，2h，arh)，7.66(d，j＝8.9hz，2h，arh)，6.91(m，3h，arh)，3.17(s，1h，-nh-)，3.02(m，4h，-ch2-×2)，2.85(d，j＝4.8hz，4h，-ch2-×2)，1.92(m，1h，-ch-)，0.95(d，j＝7.4hz，4h，-ch2-×2).
实施例14
4-((6-环戊基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-吗啉代苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-6)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-6)，收率54％，ms[m+h]+434.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.33(s，1h，pyrazole)，10.01(s，1h，-nh-)，9.26(s，1h，-nhco-)，8.60(s，1h，arh)，8.44(s，1h，arh)，7.69(d，j＝8.9hz，2h，arh)，6.93(m，3h，arh)，3.74(m，4h，-ch2-×2)，3.07(m，4h，-ch2-×2)，2.9-3.00(m，1h，-ch-)，1.93(s，2h，-ch2-)，1.69(m，6h，-ch2-×3).
实施例15
4-((6-环戊基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(吗啉代甲基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-7)
以类似于制备i-2的方法，得淡黄色固体(i-7)，收率56％，ms[m+h]+448.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.38(s，1h，pyrazole)，10.19(s，1h，-nh-)，9.21(s，1h，-nhco-)，8.60(s，1h，arh)，8.46(s，1h，arh)，7.79(d，j＝8.4hz，2h，arh)，7.26(d，j＝8.4hz，2h，arh)，6.97(s，1h，arh)，3.57(m，4h，-ch2-×2)，3.42(s，2h，-ch2-)，2.96(dd，j＝22.1，14.2hz，1h，-ch-)，2.34(s，4h，-ch2-×2)，1.95(dd，j＝16.6，8.5hz，2h，-ch2-)，1.70(dt，j＝20.4，7.8hz，6h，-ch2-×3).
实施例16
4-((6-(呋喃-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-8)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-8)，收率52％，ms[m+h]+431.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ10.05(s，1h)，9.45(s，1h)，8.67(s，1h)，8.48(s，1h)，8.39(s，1h)，7.81(s，1h)，7.68(d，j＝9.0hz，2h)，7.40(s，1h)，7.08(s，1h)，6.91(d，j＝9.1hz，2h)，3.15(m，1h，-nh-)，3.02(d，j＝5.1hz，4h)，2.86(s，4h).
实施例17
4-((6-(呋喃-2-基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-9)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-9)，收率46％，ms[m+h]+431.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.4(s，1h，pyrazole)，10.09(s，1h)，9.38(s，1h)，8.66(s，1h)，8.48(s，1h)，8.13(s，1h)，7.94(s，1h)，7.69(d，j＝9.0hz，2h)，7.37(s，1h)，7.05(s，1h)，6.88(d，j＝9.1hz，2h)，3.07(m，1h，-nh-)，3.00(d，j＝5.1hz，4h)，2.76(s，4h).
实施例18
4-((6-环戊基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(吡咯烷-1-基甲基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-10)
以类似于制备i-2的方法，得淡黄色固体(i-10)，收率61％，ms[m+h]+432.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.45(s，1h，pyrazole)，10.14(s，1h，-nh-)，9.07(s，1h，-nhco-)，8.67(s，1h，arh)，8.55(s，1h，arh)，7.69(d，j＝8.4hz，2h，arh)，7.15(d，j＝8.4hz，2h，arh)，6.91(s，1h，arh)，3.42(s，2h，-ch2-)，3.15(m，1h，-ch-)，2.85(s，4h，-ch2-×2)，2.15(s，4h，-ch2-×2)，1.82-1.86(m，2h，-ch2-)，1.69(m，6h，-ch2-×3).
实施例19
4-((4-环戊基-6-甲基嘧啶-2-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-11)
以类似于制备i-2的方法，得淡黄色固体(i-11)，收率67％，ms[m+h]+447.3.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.44(s，1h，pyrazole)，10.14(s，1h，-nh-)，9.31(s，1h，-nhco-)，9.12(s，1h，arh)，8.14(s，1h，arh)，7.69(d，j＝8.8hz，2h，arh)，6.95-7.04(m，3h，arh)，3.31(s，4h，-ch2-×2)，3.21(s，4h，-ch2-×2)，3.02(m，-nh-)，2.9-3.0(m，1h，-ch-)，2.65(s，3h，-ch3)，1.94(m，2h，-ch2-)，1.81(s，6h，-ch2-×3).
实施例20
4-((4-环戊基-6-甲基嘧啶-2-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-12)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-12)，收率45％，ms[m+h]+419.5.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.19(s，1h，pyrazole)，10.21(s，1h，-nh-)，9.45(s，1h，-nhco-)，8.37(d，j＝8.9hz，2h，arh)，7.62(d，j＝8.9hz，2h，arh)，6.92(m，3h，arh)，3.17(s，1h，-nh-)，3.12(m，4h，-ch2-×2)，2.94(m，4h，-ch2-×2)，2.82(m，1h，-ch-)，2.73(s，3h，-ch3)，0.88(d，j＝7.4hz，4h，-ch2-×2).
实施例21
4-((4-环戊基嘧啶-2-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺.(i-13)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-13)，收率42％，ms[m+h]+433.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.33(s，1h，pyrazole)，10.12(s，1h，-nh-)，9.35(s，1h，-nhco-)，8.66(s，1h，arh)，8.24(s，1h，arh)，7.68(d，j＝8.8hz，2h，arh)，6.95(m，3h，arh)，3.23(s，4h，-ch2-×2)，3.09(s，4h，-ch2-×2)，3.04(m，-nh-)，2.7-2.9(m，1h，-ch-)，1.88(m，2h，-ch2-)，1.67(s，6h，-ch2-×3).
实施例22
n-(4-吗啉代)-4-((6-苯基嘧啶-4-基)氨基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-14)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-14)，收率47％，ms[m+h]+442.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.42(s，1h，pyrazole)，10.05(s，1h，-nh-)，9.44(s，1h，-nhco-)，8.76(s，1h，arh)，8.47(s，1h，arh)，8.15(d，j＝3.7hz，2h，arh)，7.65(m，3h，arh)，7.49(d，j＝3.5hz，3h，arh)，6.92(d，j＝8.7hz，2h，arh)，3.65(s，4h，-ch2-×2)，2.98(s，4h，-ch2-×2).
实施例23
4-((4-环戊基嘧啶-2-基)氨基)-n-(4-吗啉代苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-15)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-15)，收率55％，ms[m+h]+434.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.45(s，1h，pyrazole)，10.03(s，1h，-nh-)，9.22(s，1h，-nhco-)，8.44(s，1h，arh)，8.36(s，1h，arh)，7.69(d，j＝8.8hz，2h，arh)，6.92(m，3h，arh)，3.69(s，4h，-ch2-×2)，3.10(s，4h，-ch2-×2)，2.81-2.96(m，1h，-ch-)，1.92(m，2h，-ch2-)，1.72-1.76(m，6h，-ch2-×3).
实施例24
4-((6-环戊基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-16)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-18)，收率29％，1hnmr(300mhz，dmso)δ13.42(s，1h，pyrazole)，10.09(s，1h，-nh-)，9.27(s，1h，-nhco-)，8.61(s，1h，arh)，8.40(s，1h，arh)，7.71(d，j＝8.4hz，2h，arh)，7.28(d，j＝8.4hz，2h，arh)，7.05(s，1h，arh)，3.87(s，4h，-ch2-×2)，3.01(s，4h，-ch2-×2)，2.56(s，3h，-ch3)，1.95(dd，j＝16.6，8.4hz，2h，-ch2-)，1.69(m，6h，-ch2-×3).
实施例25
4-((2-甲基-6-苯氧基嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-17)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-17)，收率25％，ms[m+h]+471.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.47(s，1h，pyrazole)，10.15(s，1h，-nh-)，9.33(s，1h，-nhco-)，8.51(s，1h，arh)，7.79(d，j＝8.9hz，2h，arh)，7.52(t，j＝7.8hz，2h，arh)，7.33(t，j＝7.4hz，1h，arh)，7.23(d，j＝7.6hz，2h，arh)，7.04(d，j＝9.0hz，2h，arh)，6.35(s，1h，arh)，3.39(s，4h，-ch2-×2)，3.12(s，4h，-ch2-×2)，3.14(m，1h，-nh-)，2.45(s，3h，-ch3).
实施例26
4-((6-(环己基氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-18)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-18)，收率19％，ms[m+h]+463.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.32(br，1h，pyrazole)，9.96(s，1h，-nh-)，9.14(s，1h，arh)，8.37(s，2h，arh)，7.65(d，j＝8.9hz，2h，arh)，6.90(d，j＝8.9hz，2h，arh)，6.31(s，1h，arh)，4.95(m，1h，-ch-)，3.04(m，4h，-ch2-×2)，2.88(s，4h，-ch2-×2)，1.91(s，1h，-nh-)，1.72(m，2h，-ch2-)，1.34-1.41(m，4h，-ch2-×2)，1.20(s，4h，-ch2-×2).
实施例27
4-((6-(环庚氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-19)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-19)，收率17％，ms[m+h]+477.3.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.31(s，1h，pyrazole)，9.97(s，1h，-nh-)，9.13(s，1h，-nhco-)，8.37(s，2h，arh)，7.66(d，j＝9.1hz，2h，arh)，6.91(d，j＝9.0hz，2h，arh)，6.29(s，1h，arh)，5.14(m，1h，-ch-)，3.08(s，4h，-ch2-×2)，2.94(s，4h，-ch2-×2)，1.98(m，1h，-nh-)，1.66(br，4h，ch2-×2)，1.55(br，4h，-ch2-×2)，1.44(br，2h，-ch2-)，1.23(m，2h，-ch2-).
实施例28
4-((6-(2-溴苯氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-吗啉代苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-20)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-20)，收率30％，ms[m+h]+536.1.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.36(s，1h，pyrazole)，10.03(s，1h，-nh-)，9.40(s，1h，-nhco-)，8.43(s，1h，arh)，8.35(s，1h，arh)，7.72(dd，j＝13.9，7.7hz，3h，arh)，7.46(d，j＝7.3hz，1h，arh)，7.33(d，j＝6.8hz，1h，arh)，7.29-7.21(m，1h，arh)，6.92(d，j＝8.9hz，2h，arh)，6.64(s，1h，arh)，3.79-3.69(m，4h，-ch2-×2)，3.07(s，4h，-ch2-×2).
实施例29
4-((6-(环戊基甲氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-21)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-21)，收率19％，ms[m+h]+463.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.36(s，1h，pyrazole)，10.06(s，1h，-nh-)，9.16(s，1h，-nhco-)，8.87-8.78(m，1h，arh)，8.37(s，1h，arh)，7.72(d，j＝6.5hz，2h，arh)，6.98(d，j＝7.4hz，2h，arh)，6.36(m，1h，arh)，3.23(br，4h，-ch2-×2)，3.17(s，1h，-ch-)，3.08(d，4h，-ch2-×2)，2.28(m，2h，-och2-)，1.92(s，1h，-nh-)，1.57-1.73(m，8h，-ch2-×4).
实施例30
4-((6-(环戊基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-22)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-22)，收率21％，ms[m+h]+448.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.27(s，1h，pyrazole)，9.98(s，1h，-nh-)，9.60(s，1h，-nhco-)，8.78(s，1h，arh)，8.22(s，1h，arh)，8.12(s，1h，arh)，7.66(d，j＝8.9hz，2h，arh)，6.92(d，j＝8.9hz，2h，arh)，6.83(d，j＝7.3hz，1h，arh)，5.85(m，1h，-nch-)，3.09(s，4h，-ch2-×2)，2.94(s，4h，-ch2-×2)，2.62(m，1h，-nh-)，2.11(s，1h，-nh-)，1.91(br，2h，-ch2-)，1.67(br，2h，-ch2-)，1.44-1.54(m，4h，-ch2-×2).
实施例31
4-((6-(环戊基氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-23)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-23)，收率15％，ms[m+h]+449.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.38(s，1h，pyrazole)，10.07(s，1h，-nh-)，9.14(s，1h，-nhco-)，8.85(s，1h，arh)，8.38(s，1h，arh)，7.70(s，2h，arh)，6.96(s，2h，arh)，6.32(s，1h，arh)，5.29(s，1h，-ch-)，3.17(s，4h，-ch2-×2)，2.46(s，4h，-ch2-×2)，1.90(s，1h，-nh-)，1.67(br，6h，-ch2-×3)，1.18(s，2h，-ch2-).
实施例32
4-((4-苯氧基嘧啶-2-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-24)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-24)，收率24％，ms[m+h]+471.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.25-12.90(s，1h，pyrazole)，9.93(s，1h，-nh-)，9.10(s，1h，-nhco-)，8.23(d，j＝11.0hz，1h，arh)，7.62(d，j＝9.1hz，2h，arh)，7.54(t，j＝7.7hz，2h，arh)，7.39(d，j＝7.2hz，1h，arh)，7.27(d，j＝7.6hz，2h，arh)，6.88(d，j＝9.0hz，3h，arh)，3.04(d，j＝5.2hz，4h，-ch2-×2)，2.91(d，j＝5.2hz，4h，-ch2-×2)，2.11(s，1h，-nh-).
实施例33
4-((6-(2-溴苯氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-25)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-25)，收率19％，ms[m+h]+535.1.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.36(s，1h，pyrazole)，10.03(s，1h，-nh-)，9.40(s，1h，-nhco-)，8.43(s，1h，arh)，8.35(s，1h，arh)，7.72(dd，j＝13.9，7.7hz，3h，arh)，7.46(d，j＝7.3hz，1h，arh)，7.23(d，j＝6.8hz，1h，arh)，7.29-7.21(m，1h，arh)，6.92(d，j＝8.9hz，2h，arh)，6.64(s，1h，arh)，3.08(s，4h，-ch2-×2)，2.94(s，4h，-ch2-×2)，2.23(s，1h，-nh-).
实施例34
4-((4-甲基-6-苯氧基嘧啶-2-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-26)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-26)，收率17％，ms[m+h]+471.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.25-12.90(s，1h，pyrazole)，9.93(s，1h，-nh-)，9.10(s，1h，-nhco-)，8.23(d，j＝11.0hz，1h，arh)，7.62(d，j＝9.1hz，2h，arh)，7.54(t，j＝7.7hz，2h，arh)，7.39(d，j＝7.2hz，1h，arh)，7.27(d，j＝7.6hz，2h，arh)，6.88(d，j＝9.0hz，2h，arh)，6.38(s，1h，arh)，3.04(d，j＝5.2hz，4h，-ch2-×2)，2.91(d，j＝5.2hz，4h，-ch2-×2)，2.34(s，3h，-ch3)，2.20(s，1h，-nh-).
实施例35
4-((6-苯氧基嘧啶4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-27)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-27)，收率19％，ms[m+h]+457.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.32(s，1h，pyrazole)，10.33(s，1h，-nh-)，9.12(s，1h，-nhco-)，8.45(s，1h，arh)，8.31(d，j＝10.0hz，1h，arh)，7.71(d，j＝9.3hz，2h，arh)，7.64(t，j＝7.7hz，2h，arh)，7.41(d，j＝7.2hz，1h，arh)，7.37(d，j＝7.6hz，2h，arh)，6.81(d，j＝9.0hz，2h，arh)，6.37(s，1h，arh)，3.14(br，4h，-ch2-×2)，2.93(br，4h，-ch2-×2)，2.17(s，1h，-nh-).
实施例36
n-(4-吗啉代)-4-((6-苯氧基嘧啶-4-基)氨基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-28)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-28)，收率19％，ms[m+h]+458.1.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.34(s，1h，pyrazole)，10.02(s，1h，-nh-)，9.35(s，1h，-nhco-)，8.44(s，1h，arh)，8.37(s，1h，arh)，8.21(s，1h，arh)，7.69(m，3h，arh)，7.41(d，j＝7.3hz，1h，arh)，7.32(s，1h，arh)，7.26-7.29(m，1h，arh)，6.94(d，j＝8.9hz，2h，arh)，6.65(s，1h，arh)，3.77-3.68(m，4h，-ch2-×2)，3.08(br，4h，-ch2-×2).
实施例37
4-((6-(环己基氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-吗啉代苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-29)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-29)，收率19％，ms[m+h]+464.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.31(br，1h，pyrazole)，10.03(s，1h，-nh-)，9.24(s，1h，-nhco-)，8.33(s，2h，arh)，7.67(d，j＝8.9hz，2h，arh)，6.91(d，j＝8.9hz，2h，arh)，6.32(s，1h，arh)，4.95(m，1h，-ch-)，3.14(m，4h，-ch2-×2)，2.87(s，4h，-ch2-×2)，1.72(m，2h，-ch2-)，1.34-1.41(m，4h，-ch2-×2)，1.20(s，4h，-ch2-×2).
实施例38
4-((6-(环戊基氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-吗啉代苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-30)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-30)，收率19％，ms[m+h]+450.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.35(s，1h，pyrazole)，10.04(s，1h，-nh-)，9.11(s，1h，-nhco-)，8.34(s，1h，arh)，8.27(s，1h，arh)，7.73(s，2h，arh)，6.98(s，2h，arh)，6.34(s，1h，arh)，4.06(s，1h，-ch-)，3.78(s，4h，-ch2-×2)，3.12(s，4h，-ch2-×2)，1.91(s，2h，-ch2-)，1.68(br，6h，-ch2-×3).
实施例39
4-((6-(环戊基氨基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-吗啉代苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-31)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-31)，收率24％，ms[m+h]+449.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.31(s，1h，pyrazole)，9.96(s，1h，-nh-)，9.62(s，1h，-nhco-)，8.20(s，1h，arh)，8.11(s，1h，arh)，7.69(d，j＝8.9hz，2h，arh)，6.91(d，j＝8.9hz，2h，arh)，6.82(d，j＝7.3hz，1h，arh)，4.56(s，1h，-nh-)，4.15(s，1h，-ch-)，3.78(br，4h，-ch2-×2)，2.94(s，4h，-ch2-×2)，1.92(br，2h，-ch2-)，1.66(br，2h，-ch2-)，1.41-1.54(m，4h，-ch2-×2).
实施例40
n-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-4-((6-苯氧基嘧啶-4-基)氨基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-32)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-32)，收率19％，ms[m+h]+485.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.36(s，1h，pyrazole)，10.31(s，1h，-nh-)，9.11(s，1h，-nhco-)，8.42(s，1h，arh)，8.33(d，j＝10.0hz，1h，arh)，7.69(d，j＝9.3hz，2h，arh)，7.65(t，j＝7.7hz，2h，arh)，7.43(d，j＝7.2hz，1h，arh)，7.36(d，j＝7.6hz，2h，arh)，6.82(d，j＝9.0hz，2h，arh)，6.36(s，1h，arh)，3.44(s，2h，-ch2-)，2.47(br，8h，-ch2-×4)，2.17(s，2h，-ch3).
实施例41
n-(4-(吗啉代甲基)苯基)-4-((6-苯氧基嘧啶-4-基)氨基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-33)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-33)，收率21％，ms[m+h]+472.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.32(s，1h，pyrazole)，10.23(s，1h，-nh-)，9.17(s，1h，-nhco-)，8.44(s，1h，arh)，8.31(d，j＝10.0hz，1h，arh)，7.70(d，j＝9.3hz，2h，arh)，7.64(t，j＝7.7hz，2h，arh)，7.41(d，j＝7.2hz，1h，arh)，7.37(d，j＝7.6hz，2h，arh)，6.81(d，j＝9.0hz，2h，arh)，6.34(s，1h，arh)，3.44(s，2h，-ch2-)，3.14(br，4h，-ch2-×2)，2.46(br，4h，-ch2-×2)，.
实施例42
4-((6-(苄基氧基)嘧啶-4-基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(i-34)
以类似于制备i-1的方法，得淡黄色固体(i-34)，收率22％，ms[m+h]+471.2.1hnmr(300mhz，dmso)δ13.31(s，1h，pyrazole)，10.03(s，1h，-nh-)，9.36(s，1h，-nhco-)，8.43(s，1h，arh)，8.35(s，1h，arh)，8.20(s，1h，arh)，7.64(m，3h，arh)，7.53(d，j＝7.3hz，1h，arh)，7.39(s，1h，arh)，7.23(m，1h，arh)，6.95(s，2h，arh)，6.63(s，1h，arh)，4.51(s，2h，-ch2-)，3.66(m，4h，-ch2-×2)，3.01(br，4h，-ch2-×2)，2.14(s，1h，-nh-).