苯并咪唑类衍生物及其制备方法及其在医药上的用途与流程

本发明属于医药领域，具体涉及一种新的苯并咪唑类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物，以及它们作为治疗剂，特别是作为溴结构域蛋白抑制剂的用途。
背景技术：
：近年来，肿瘤成为全球范围内导致人类死亡的主要原因之一。肿瘤普遍具有总体治愈率低且复发率高等特点，因此预防、治疗以及抑制肿瘤复发具有重要的科研价值，实现肿瘤的预防和治愈具有相当的紧迫性和挑战性。表观遗传调控的异常是导致肿瘤发生的重要因素之一。溴结构域(bromodomain)是一种能识别n-乙酰化赖氨酸残基的蛋白结构域。含溴结构域的蛋白质的bet家族包括四个成员(brd2、brd3、brd4和brdt)。bet家族的每个成员都使用两个溴结构域来识别，主要(但并非排外地)在组蛋白蛋白质的氨基末端尾巴(amino-terminaltail)发现n-乙酰化的赖氨酸残基。通过将转录因子募集至染色质内的具体基因组位置来调节基因表达。例如，组蛋白连接的brd4将转录因子p-tefb募集至启动子，导致表达涉及细胞周期进程的基因子集(yangetal.,mol.cell.biol.28:967-976(2008))。brd2和brd3还起生长促进基因的转录调节剂的作用。近来的研究已经证实以bet溴结构域为靶点来治疗多种癌症((zuberetal.,nature478:524-528(2011)；mertzetal.,proc.natl.acad.sci.108:16669-16674(2011)；delmoreetal.,cell146:1-14,(2011)；dawsonetal.,nature478:529-533(2011))、动脉粥样硬化、炎症(huangetal.,mol.cell.biol.29:1375-1387(2009))和hiv感染。最新研究发现，brd4蛋白介导的表观遗传异常与癌基因的过表达密切相关，并与癌细胞的生长增殖关系密切。brd4是含溴结构域和额外终端域家族蛋白(bromoandextrac-terminaldomain,bet)蛋白家族的一员，由于在抗肿瘤方面的潜在价值，引起了各大制药公司和科研机构的极大关注。近期还发现brd4在病毒基因的转录调控中也扮演了重要角色，并且与病毒瘤的发病机制存在一定联系。这些研究结果说明brd4与多种肿瘤存在密切联系，尤其在一些至今难以治愈或者尚无有效治疗手段的肿瘤中具有重要作用，其与肿瘤关系的研究为肿瘤治疗提供了新的策略。通过作用于brd4蛋白溴结构域的小分子化合物，干扰溴结构域与乙酰化赖氨酸的特异性结合，影响肿瘤细胞内的转录调节和其它细胞过程，可以实现对肿瘤的靶向治疗。因此，brd4蛋白是一个非常有前景的表观遗传新靶点，而作用于brd4蛋白溴结构域的小分子抑制剂在肿瘤研究中也有着广阔的应用前景，而且有可能从中开发出新型抗肿瘤药物。目前已经公开了一系列的溴结构域蛋白抑制剂专利，其中包括wo2011054846、wo2008092231、wo2012075383和wo2016139292等，其中wo2016139292公开了实施例1化合物。目前处于临床iii期的药物为apabetalone，处于临床ii期的药物包括gsk-525762a、incb-54329和bms-986158等，同时有多个药物处于临床i期的药物。但这些对于抗肿瘤的研究是远远不够的，仍有必要研究和开发新的溴结构域蛋白抑制剂。技术实现要素：本发明提供一种通式(i)所示的苯并咪唑类衍生物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：其中：x1选自-ch＝或-n＝；x2选自-ch＝或-n＝；且x1和x2不同时为-n＝；r1选自烷基；优选为甲基；r2选自氢原子或烷基；优选为甲基；r3选自烷基，其中所述的烷基进一步被一个或多个烷氧基所取代；r4选自卤素；r5选自氢原子、烷基、氰基、卤素、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-or10、-nr8r9、-c(o)nr8r9、-c(o)r10、-c(o)or10或-nr8c(o)r9，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝o、-nr8r9、-c(o)nr8r9、-c(o)r10、-c(o)or10或-nr8c(o)r9的取代基所取代；r6选自氢原子、烷基、氰基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-or10、-nr8r9、-c(o)nr8r9、-c(o)r10、-c(o)or10或-nr8c(o)r9，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝o、-nr8r9、-c(o)nr8r9、-c(o)r10、-c(o)or10或-nr8c(o)r9的取代基所取代；r7选自氢原子或烷基；优选为氢原子；r8、r9和r10各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝o、-nr11r12、-c(o)nr11r12、-c(o)r13、-c(o)or13或-nr11c(o)r12的取代基所取代；或者，r8和r9与相连接的n原子一起形成一个4～8元杂环基，其中4～8元杂环内含有一个或多个n、o、s(o)p原子，并且4～8元杂环上任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝o、-nr11r12、-c(o)nr11r12、-c(o)r13、-c(o)or13或-nr11c(o)r12的取代基所取代；r11、r12和r13各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代；且p为0、1或2。本发明的优选方案，一种通式(i)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(ii)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：其中：ra和rb各自独立地选自氢原子或烷氧基，且ra和rb不同时为氢原子；所述的烷氧基优选为甲氧基；m为1、2、3或4；优选为1或2；n为1、2、3或4；优选为1或2；且r1、r2、r4～r7的定义如通式(i)中所述。本发明的优选方案，一种通式(ii)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(iii)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：其中：ra选为氢原子；rb选自烷氧基，优选为甲氧基；m为1、2、3或4；优选为1或2；n为1、2、3或4；优选为1或2；且r1、r2、r4～r7的定义如通式(i)中所述。本发明的优选方案，一种通式(ii)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(iv)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：其中：ra为氢原子；rb选自烷氧基，优选为甲氧基；m为1、2、3或4；优选为1或2；n为1、2、3或4；优选为1或2；且r1、r2、r4～r7的定义如通式(i)中所述。本发明的优选方案，一种通式(i)、(ii)、(iii)或(iv)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中r4选自氟、氯或溴；优选为氟。本发明的优选方案，一种通式(i)、(ii)、(iii)或(iv)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中r6选自杂环基，优选为吗啉基。本发明的典型化合物包括，但不限于：或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐。进一步，本发明提供一种通式(i)化合物的制备方法，该方法包括：通式(ia)与r6h反应，得到通式(i)化合物；其中：x选自卤素，优选为氯或溴；r6选自杂环基；且r1～r5、r7、x1和x2的定义如通式(i)中所述。本发明提供一种通式(ia)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：其中：x选自卤素，优选为氯或溴；且r1～r5、r7、x1和x2的定义如通式(i)中所述。通式(ia)的典型化合物包括，但不限于：或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐。进一步，本发明提供一种通式(ia)化合物的制备方法，该方法包括：通式(ib)化合物与通式(ic)化合物反应，得到通式(ia)化合物；其中：x选自卤素，优选为氯或溴；且r1～r5、r7、x1和x2的定义如通式(i)中所述。更近一步，本发明提供一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效剂量的通式(i)、(ii)、(iii)或(iv)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，及可药用的载体、赋形剂或它们的组合。本发明提供一种抑制溴结构域蛋白的方法，其中包括将所述的受体与通式(i)、(ii)、(iii)或(iv)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物相接触，其中所述的溴结构域蛋白优选为brd2、brd3和brd4，更优选为brd4。本发明提供一种通式(i)、(ii)、(iii)或(iv)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备溴结构域蛋白抑制剂的药物中的用途，其中所述的溴结构域蛋白优选为brd2、brd3和brd4，更优选为brd4。本发明提供一种通式(i)、(ii)、(iii)或(iv)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗与溴结构域蛋白相关的疾病的药物中的用途，其中所述的疾病优选为癌症或炎症，其中所述的炎症优选为类风湿性关节炎、克隆恩病、湿疹、巨细胞性动脉炎、肝炎、炎性肠病、骨关节炎、胰腺炎、肺炎、银屑病、银屑病性关节炎、系统性红斑狼疮、肾小球性肾炎、狼疮性肾炎、膜性肾小球肾炎或心肌炎；所述的炎症更优选为类风湿性关节炎；其中所述的癌症优选为小细胞肺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、黑色素瘤、胰腺癌、神经胶质瘤、脑瘤、宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌、胃癌、膀胱癌、肝癌、睾丸核蛋白中线癌、多发性骨髓瘤、急性髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病或慢性骨髓性白血病。本发明提供一种通式(i)、(ii)、(iii)或(iv)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗糖尿病性肾病、高血压性肾病、hiv-相关的肾病、多囊性肾病、肥胖、血脂异常、高胆固醇血症、阿尔茨海默病、代谢综合征、脂肪肝、ii型糖尿病、胰岛素抵抗、糖尿病性视网膜病或糖尿病性神经病的药物中的用途。发明的详细说明除非有相反陈述，否则本发明在说明书和权利要求书中所使用的部分术语定义如下：“烷基”当作一基团或一基团的一部分时是指包括c1-c20直链或者带有支链的脂肪烃基团。优选为c1-c10烷基，更优选为c1-c6烷基。烷基基团的实施例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代或未取代的。“环烷基”是指饱和或部分饱和的单环、稠环、桥环和螺环的碳环。优选为c3-c12环烷基，更优选为c3-c8环烷基，最优选为c3-c6环烷基。单环环烷基的实施例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等，优选环丙基、环己烯基。“螺环烷基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，环内含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺、双螺或多螺环烷基，优选为单螺和双螺环烷基，优选为4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元。“螺环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：螺[4.5]癸基、螺[4.4]壬基、螺[3.5]壬基、螺[2.4]庚基。“稠环烷基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构彼此公用一对碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、吡啶酮或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。“稠环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：二环[3.1.0]己基、二环[3.2.0]庚-1-烯基、二环[3.2.0]庚基、十氢化萘基或十四氢菲基。“桥环烷基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、吡啶酮或多环桥环烷基，优选为双环、三环或吡啶酮，更有选为双环或三环。“桥环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：(1s,4s)-二环[2.2.1]庚基、二环[3.2.1]辛基、(1s,5s)-二环o[3.3.1]壬基、二环[2.2.2]辛基、(1r,5r)-二环[3.3.2]癸基。所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实施例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或未取代的。“杂环基”、“杂环”或“杂环的”在本申请中可交换使用，都是指非芳香性杂环基，其中一个或多个成环的原子是杂原子，如氧、氮、硫原子等，包括单环、稠环、桥环和螺环。优选具有5至7元单环或7至10元双-或三环，其可以包含1，2或3个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂环基”的实例包括但不限于吗啉基，氧杂环丁烷基，硫代吗啉基，四氢吡喃基，1，1-二氧代-硫代吗啉基，哌啶基，2-氧代-哌啶基，吡咯烷基，2-氧代-吡咯烷基，哌嗪-2-酮，8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛基和哌嗪基。杂环基可以是取代或未取代的。“螺杂环基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个原子的多环基团，环内含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或s(o)p(其中p选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。“螺杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：1,7-二氧杂螺[4.5]癸基、2-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬基、7-氧杂螺[3.5]壬基和5-氧杂螺[2.4]庚基。“稠杂环基”指含有两个或两个以上环状结构彼此共用一对原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或s(o)p(其中p选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、吡啶酮或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。“稠杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：八氢吡咯并[3,4-c]吡咯基、八氢-1h-异吲哚基，3-氮杂二环[3.1.0]己基，八氢苯并[b][1,4]二噁英(dioxine)。“桥杂环基”指5至14元，5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接的原子的多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或s(o)p(其中p选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、吡啶酮或多环桥杂环基，优选为双环、三环或吡啶酮，更有选为双环或三环。“稠杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：2-氮杂二环[2.2.1]庚基，2-氮杂二环[2.2.2]辛基和2-氮杂二环[3.3.2]癸基。所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基。杂环基可以是任选取代的或未取代的。“芳基”是指含有一个或者两个环的碳环芳香系统，其中所述环可以以稠合的方式连接在一起。术语“芳基”包括比如苯基、萘基、四氢萘基的芳香基团。优选芳基为c6-c10芳基，更优选芳基为苯基和萘基，最优选为苯基。芳基可以是取代或未取代的。所述“芳基”可与杂芳基、杂环基或环烷基稠合，其中与母体结构连接在一起的为芳基环，非限制性实施例包括但不限于：“杂芳基”是指芳香族5至6元单环或9至10元双环，其可以包含1至4个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂芳基”的实施例包括但不限于呋喃基，吡啶基，2-氧代-1，2-二氢吡啶基，哒嗪基，嘧啶基，吡嗪基，噻吩基，异噁唑基，噁唑基，噁二唑基，咪唑基，吡咯基，吡唑基，三唑基，四氮唑基，噻唑基，异噻唑基，1，2，3-噻二唑基，苯并间二氧杂环戊烯基，苯并咪唑基，吲哚基，异吲哚基，1，3-二氧代-异吲哚基，喹啉基，吲唑基，苯并异噻唑基，苯并噁唑基和苯并异噁唑基。杂芳基可以是取代或未取代的。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包括但不限于：“烷氧基”是指(烷基-o-)的基团。其中，烷基见本文有关定义。c1-c6的烷氧基为优先选择。其实例包括，但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。“羟基”指-oh基团。“卤素”是指氟、氯、溴和碘。“氨基”指-nh2。“氰基”指-cn。“硝基”指-no2。“苄基”指-ch2-苯基。“羧基”指-c(o)oh。“羧酸酯基”指-c(o)o(烷基)或(环烷基)，其中烷基、环烷基的定义如上所述。“bn”指苄基。“dmso”指二甲基亚砜。“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。本说明书所述的“取代”或“取代的”，如无特别指出，均是指基团可被一个或多个选自以下的基团取代：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、疏基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基、羧酸酯基、＝o、-or10、-sr10、-c(o)nr8r9、-c(o)r10、-c(o)or10或-nr8c(o)r9；r8、r9和r10各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝o、-nr11r12、-c(o)nr11r12、-c(o)r13、-c(o)or13或-nr11c(o)r12的取代基所取代；或者，r8和r9与相连接的n原子一起形成一个4～8元杂环基，其中4～8元杂环内含有一个或多个n、o、s(o)p原子，并且4～8元杂环上进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝o、-nr11r12、-c(o)nr11r12、-c(o)r13、-c(o)or13或-nr11c(o)r12的取代基所取代；r11、r12和r13各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；且p为0、1或2。“可药用的盐”是指上述化合物能保持原有生物活性并且适合于医药用途的某些盐类。式(i)所表示的化合物的可药用的盐可以为金属盐、与合适的酸形成的胺盐，金属盐优选碱金属、碱土金属盐，合适的酸包括无机酸和有机酸。“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。本发明化合物的合成方法为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：本发明通式(i)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：通式(ia)化合物与r3nh2反应，得到通式(ib)化合物；通式(ib)化合物与通式(ic)化合物反应，得到通式(ia)化合物；通式(ia)化合物与r6h反应，得到通式(i)化合物；其中：x选自卤素，优选为氯或溴；r6选自杂环基；且r1～r5、r7、x1和x2的定义如通式(i)中所述；附图说明图1为测试例2中wo2016139292的实施例1化合物、本发明实施例1和实施例4化合物对mv4-11荷瘤balb/c裸鼠移植瘤平均肿瘤体积变化图。图2为测试例2中wo2016139292的实施例1化合物、本发明实施例1和实施例4化合物对mv4-11荷瘤balb/c裸鼠移植瘤平均相对肿瘤体积变化图。具体实施方式以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。实施例实施例给出了式(i)所表示的代表性化合物的制备及相关结构鉴定数据。必须说明，下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。1hnmr图谱是用bruker仪器(400mhz)测定而得，化学位移用ppm表示。使用四甲基硅烷内标准(0.00ppm)。1hnmr的表示方法：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，m＝多重峰，br＝变宽的，dd＝双重峰的双重峰，dt＝三重峰的双重峰。若提供偶合常数时，其单位为hz。质谱是用lc/ms仪测定得到，离子化方式可为esi或apci。薄层层析硅胶板使用烟台黄海hsgf254或青岛gf254硅胶板，薄层色谱法(tlc)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。在下列实施例中，除非另有指明，所有温度为摄氏温度，除非另有指明，各种起始原料和试剂来自市售或者是根据已知的方法合成，市售原料和试剂均不经进一步纯化直接使用，除非另有指明，市售厂家包括但不限于aldrichchemicalcompany，abcrgmbh&co.kg，acrosorganics，广赞化工科技有限公司和景颜化工科技有限公司等处购买。cd3od：氘代甲醇。cdcl3：氘代氯仿。dmso-d6：氘代二甲基亚砜。氩气氛是指反应瓶连接一个约1l容积的氩气气球。实施例中无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液。对化合物进行纯化，采用硅胶柱层析洗脱剂体系和薄层色谱法，其中洗脱剂体系选自：a：石油醚和乙酸乙酯体系；b：二氯甲烷和甲醇体系；c：二氯甲烷：乙酸乙酯；其中溶剂的体积比根据化合物的极性不同而不同，也可以加入少量的酸性或碱性试剂进行调节，如醋酸或三乙胺等。实施例15-(1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-7-氟-5-吗啉基-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮第一步2-(二苄基氨基)丙烷-1,3-二醇将2-氨基丙烷-1,3-二醇1a(10.0g,109.7mmol)和碳酸钾(47.7g,345.6mmol)溶于300ml乙醇中，室温下搅拌，在反应液中滴加溴化苄(56g,329mmol)，回流反应12小时。过滤，将滤液减压浓缩，将得到的残留物溶于200ml二氯甲烷中，以水(100ml)洗涤，分去水层，有机相以无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：a体系)纯化，得到2-(二苄基氨基)丙烷-1,3-二醇1b(20g，白色固体)，产率：67％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.40-7.25(m,10h),3.74(s,4h),3.69(m,2h),3.59(m,2h),2.99(m,3h).第二步n,n-二苄基-1,3-二甲氧基丙-2-胺氩气保护下，将2-(二苄基氨基)丙烷-1,3-二醇1b(5g,18.4mmol)和氢氧化钾(8.3g,147.6mmol)溶于80ml二甲亚砜中，室温下搅拌10分钟。在反应液中滴加碘甲烷(10.4g,73.6mmol)，室温下反应1小时。在反应液中加入100ml水，淬灭反应。以乙酸乙酯(100ml×3)萃取，合并有机相，以饱和氯化钠水溶液(100ml×1)洗涤，以无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：a体系)纯化，得到n,n-二苄基-1,3-二甲氧基丙-2-胺1c(5g，白色固体)，产率：90.9％。msm/z(esi)：300.0[m+1]第三步1,3-二甲氧基丙-2-胺氢气保护下，将n,n-二苄基-1,3-二甲氧基丙-2-胺1c(5g，16.7mmol)溶于50ml甲醇中，加入10％钯碳催化剂(500mg,10％)，置换氢气3次，室温下反应12小时。过滤，将滤液减压浓缩，得到粗品1,3-二甲氧基丙-2-胺1d(1.99g，无色油状物)，产率：100％。msm/z(esi)：120.1[m+1]1hnmr(400mhz,cdcl3):δ5.72(s,2h),3.44(m,4h),3.32(m,1h)3.28(s,6h).第四步4-溴-n-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-2-氟-6-硝基苯胺将5-溴-1,2-二氟-3-硝基苯1e(500mg,2.11mmol)和1,3-二甲氧基丙-2-胺1d(276mg,2.32mmol)溶于20ml乙腈中，加入碳酸钾(437mg,3.16mmol)，80℃下反应6小时。减压浓缩，除去溶剂，加入200ml水，以乙酸乙酯(300ml×3)萃取，合并有机相，以饱和氯化钠水溶液(100ml×1)洗涤，以无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：a体系)纯化，得到4-溴-n-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-2-氟-6-硝基苯胺1f(560mg，黄色固体)，产率：78.7％。msm/z(esi)：337.9[m+1]第五步5-(5-溴-1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-7-氟-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮将4-溴-n-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-2-氟-6-硝基苯胺1f(186mg,0.55mmol)和1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲醛1g(100mg,0.66mmol,根据专利申请wo2016146738(a1)公开的中间体2的制备方法制得)溶于5ml乙醇中，依次加入2ml水和连二亚硫酸钠(287mg,1.66mmol)，90℃下反应3小时。加入10ml水和10ml乙酸乙酯稀释反应液，以乙酸乙酯(10ml×3)萃取，合并有机相，以无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：b体系)纯化，得到5-(5-溴-1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-7-氟-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮1h(150mg，黄色固体)，产率：64.9％。msm/z(esi)：438.9[m+1]第六步5-(1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-7-氟-5-吗啉基-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮氩气保护下，将5-(5-溴-1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-7-氟-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮1h(50mg,0.12mmol)、吗啉(21mg,0.24mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(11mg,0.012mmol)、2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(11mg,0.024mmol)和叔丁醇钾(34mg,0.36mmol)溶于5ml1,4-二氧六环中，100℃下微波反应1小时。加入10ml水和10ml乙酸乙酯稀释反应液，以乙酸乙酯(10ml×3)萃取，合并有机相，以无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物用薄层色谱法(展开剂：b体系)纯化，得到5-(1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-7-氟-5-吗啉基-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮1(10mg，白色固体)，产率：18.5％。msm/z(esi)：444.5[m+1]1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.98(s,1h),7.78(s,1h),7.07(s,1h),6.75-6.71(m,1h),4.88-4.83(m,1h),3.90-3.83(m,4h),3.80-3.75(m,4h),3.62(s,3h),3.26(s,6h),3.18-3.16(t,j＝4.0hz,4h),2.22(s,3h).实施例25-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-吗啉基-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮第一步4-溴-2-氟-n-(1-甲氧基丁-2-基)-6-硝基苯胺将5-溴-1,2-二氟-3-硝基苯1e(600mg,2.52mmol)和1-甲氧基丁-2-胺2a(260mg,2.52mmol)溶于20ml乙腈中，加入碳酸钾(521mg,3.78mmol)，80℃下反应6小时。减压浓缩，除去溶剂，加入50ml水，以乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有机相，以饱和氯化钠水溶液(100ml×1)洗涤，以无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：a体系)纯化，得到4-溴-2-氟-n-(1-甲氧基丁-2-基)-6-硝基苯胺2b(600mg，黄色固体)，产率：74.2％。msm/z(esi)：322.8[m+1]第二步5-(5-溴-7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮将4-溴-2-氟-n-(1-甲氧基丁-2-基)-6-硝基苯胺2b(600mg,1.87mmol)和1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲醛1g(282mg,1.87mmol)溶于10ml乙醇中，依次加入2ml水和连二亚硫酸钠(813mg,4.67mmol)，100℃下反应3小时。减压浓缩，在残留物中加入50ml乙酸乙酯，搅拌，过滤，除去固体不溶物，将滤液减压浓缩，残留物溶解于甲苯(10ml×3)中进一步减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：a体系)纯化，得到5-(5-溴-7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮2c(650mg，黄色固体)，产率：82.2％。msm/z(esi)：421.8[m+1]第三步5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-吗啉基-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮氩气保护下，将5-(5-溴-7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮2c(220mg,0.52mmol)、吗啉(90.6mg,1.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(47.6mg,0.052mmol)、2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(47.6mg,0.1mmol)和叔丁醇钾(149.9mg,1.56mmol)溶于5ml1,4-二氧六环中，100℃下微波反应2小时。加入50ml水和30ml乙酸乙酯稀释反应液，以乙酸乙酯(30ml×2)萃取，合并有机相，以无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：b体系)纯化，得到5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-吗啉基-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮2(221mg，白色固体)，产率：99.1％。msm/z(esi)：429.0[m+1]1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.31(s,1h),7.80(s,1h),7.19(s,1h),6.81(d,j＝15.1hz,1h),4.58(s,1h),4.05(t,j＝10.3hz,1h),3.92-3.85(m,4h),3.81(d,j＝9.1hz,1h),3.68(s,3h),3.36(s,3h),3.26-3.19(m,4h),2.23(s,3h),2.03-1.92(m,1h),1.90-1.79(m,1h),0.61(t,j＝7.3hz,3h).实施例3和实施例4(s)-5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-吗啉基-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮(r)-5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-吗啉基-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮第一步(s)-5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-吗啉基-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮(r)-5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-吗啉基-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮将5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-吗啉基-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮2(210mg,0.49mmol)进一步通过采用超临界流体色谱(sfc)法，用高效液相制备色谱和手性柱对手性异构体进行拆分(手性柱chiralpakad,300×50mmi.d.,10μm；80ml/min；流动相aforco2andbforetoh(0.1％nh3.h2o))，得到(s)-5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-吗啉基-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮3(57.09mg,白色固体)，产率：27.2％，100％ee，保留时间4.590min；(r)-5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-吗啉基-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1h)-酮4(60.38mg,白色固体)，产率：28.8％，100％ee，保留时间2.863min。3msm/z(esi)：429.0[m+1]1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.31(s,1h),7.80(s,1h),7.19(s,1h),6.81(d,j＝15.1hz,1h),4.58(s,1h),4.05(t,j＝10.3hz,1h),3.92-3.85(m,4h),3.81(d,j＝9.1hz,1h),3.68(s,3h),3.36(s,3h),3.26-3.19(m,4h),2.23(s,3h),2.03-1.92(m,1h),1.90-1.79(m,1h),0.61(t,j＝7.3hz,3h).4msm/z(esi)：429.0[m+1]1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.31(s,1h),7.80(s,1h),7.19(s,1h),6.81(d,j＝15.1hz,1h),4.58(s,1h),4.05(t,j＝10.3hz,1h),3.92-3.85(m,4h),3.81(d,j＝9.1hz,1h),3.68(s,3h),3.36(s,3h),3.26-3.19(m,4h),2.23(s,3h),2.03-1.92(m,1h),1.90-1.79(m,1h),0.61(t,j＝7.3hz,3h).生物学评价测试例1本发明化合物对brd4蛋白活性测定本发明优选化合物通过以下方法测试其针对brd4蛋白的生物活性。本测试方法采用cisbioassays公司的epigeneoustmbromodomainassay在体外条件下，测试化合物对重组人源brd4蛋白与乙酰化组蛋白多肽底物之间基于fret(荧光能量共振转移)的相互作用的影响来表述化合物针对brd4的生物活性。其中gst标记的重组人源brd4(1/2)蛋白来源于bpsbioscience，乙酰化组蛋白多肽底物[lys(5,8,12,16)ac]h4(1-21)-biotinpeptide购于anaspec。具体实验方法和流程可参考epigeneoustmbromodomainassay试剂盒说明书，实验流程简述如下：本发明中的化合物先溶解于dmso中，随后以试剂盒中提供的缓冲液将其稀释至测试所需浓度(终浓度范围10μm-0.1nm)。将2μl化合物加入到384孔微孔板中，随后分别加入4ul以缓冲液稀释的gst标记的重组人源brd4(1/2)蛋白和4μl乙酰化组蛋白多肽底物，最后向孔中加入偶联有铕系元素化合物的抗gst抗体和偶联有链酶亲和素的fret受体d2各5ul，振荡混匀后以封板膜密封，并在室温下振荡孵育3～5小时。化合物每个浓度设复孔对照，对照孔和空白孔中加入2μldmso。随后在兼容tf-fret模式的酶标仪上测定读取各孔在对应铕系元素激发波长下，发射波长为620nm和665nm下的荧光强度。通过与对照组的荧光强度数值进行比较计算化合物在各浓度点下的抑制率，进而通过graphpadprism5软件中以化合物浓度对数-抑制率进行非线性回归分析并得到化合物抑制brd4蛋白与乙酰化组蛋白多肽底物相互作用的ic50值。表1本发明优选化合物对brd4蛋白活性抑制的ic50数据化合物编号ic50(nm)/brd4(1/2)wo2016139292的实施例1化合物2718.5413结论：本发明的优选化合物对于brd4蛋白具有较好的抑制作用。备注：wo2016139292的实施例1化合物的结构式如下式所示：其制备方法参见wo2016139292的实施例1。测试例2本发明化合物对前列腺癌细胞(lncap)增殖抑制测定本发明优选化合物的细胞水平活性通过cck-8(dojindo，东仁化学科技)以吸光度方法来检测化合物对细胞增殖的抑制作用。将处于对数生长期的前列腺癌细胞lncap(购于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)以4000个每孔的密度接种至96孔培养板中，培养过夜后，加入不同浓度的测试化合物(终浓度浓度范围30μm～0.1nm)。在37℃，5％co2条件下培养细胞72小时。培养结束后，向每孔加入适宜体积的cck-8试剂(购于东仁化学科技(上海)有限公司，货号ck04)并在37℃下继续培养1～5小时，随后在酶标仪上读取各孔的在450nm下的吸光度数值。通过与对照组的吸光度数值进行比较计算化合物在各浓度点下的抑制率，进而通过graphpadprism5软件中以化合物浓度对数-抑制率进行非线性回归分析并得到化合物抑制细胞增殖的ic50值。表2本发明优选化合物对lncap增殖抑制的ic50数据化合物编号ic50(nm)/lncapwo2016139292的实施例1化合物76116443结论：本发明的优选化合物对于前列腺癌细胞lncap增殖具有较好的抑制作用。测试例3本发明化合物对人类急性单核细胞白血病细胞mv4-11裸鼠移植瘤的生长抑制作用的测试1.实验目的本测试用来评价连续22天，每天两次，口服给予实施例1、实施例4化合物以及wo2016139292的实施例1化合物对人类急性单核细胞白血病细胞mv4-11裸鼠移植瘤的生长抑制作用。2.受试物配制2.1空白给药制剂配制配制适量体积的含有90％peg300和10％乙醇(10％tpgs，w/v)作为空白组给药试液。2.2wo2016139292的实施例1化合物给药制剂配制称取适量wo2016139292的实施例1化合物，加入适量体积含有90％peg300和10％乙醇(10％tpgs，w/v)的溶媒，涡旋振荡均匀，配制成浓度为0.5mg/ml的给药制剂。2.3实施例1化合物口服给药制剂配制称取适量实施例1化合物，加入适量体积含有90％peg300和10％乙醇(10％tpgs，w/v)的溶媒，涡旋振荡均匀，配制成浓度为0.5mg/ml的给药制剂。2.4实施例4化合物口服给药制剂配制称取适量实施例4化合物，加入适量体积含有90％peg300和10％乙醇(10％tpgs，w/v)的溶媒，涡旋振荡均匀，配制成浓度为0.5mg/ml的给药制剂。3.实验动物品种和品系：balb/c裸鼠，spf，雌性，6～7周龄(16～22克)，健康状况良好，32只，适应环境时间5～7天。合格证号：1140070017310，购买于北京维通利华实验动物技术有限公司。4.mv-4-11细胞培养在5％co2、37℃培养条件下，mv4-11细胞(购买于美国模式培养物保藏所(atcc))在含10％胎牛血清的imdm培养基中进行常规细胞培养。以0.25％胰酶消化传代，根据细胞生长情况进行传代，传代比例为1:3或1:4。5.动物接种及分组实验第0天，收取对数生长期mv4-11细胞，细胞计数后重悬于含50％的pbs(磷酸缓冲盐溶液)(ph7.4，0.01m)和50％的基质胶(matrigel)中，调整细胞浓度至7.0×107细胞/ml；将细胞置于冰盒中，用1-ml注射器吸取细胞悬液，注射到裸鼠前右侧腋窝皮下，每只动物接种200μl(14×106细胞/只)，建立mv4-11移植瘤模型。接种后第12天，肿瘤长至体积100～300mm3左右时，选出肿瘤体积相近、形状较好的小鼠(形状尽量为单一圆球形，无不规则的形状或多个肿瘤聚在一起)每组8只，分为4组。6.动物给药和观察各组动物每天固定时间根据动物体重给予受试物1天1次(qd)，口服给药(po)，于分组当天(接种后第12天)，开始第一次给药，连续22天，并记录每天动物体重。第1组灌胃给予空白溶剂，给药体积为10ml/kg，qd，po；第2组灌胃给予wo的实施例1化合物，给药剂量5mg/kg，qd，po；第3组给予实施例1化合物，给药剂量：第12～19天为5mg/kg，qd，po；第20～33天为2mg/kg，qd，po；第4组给予实施例4化合物，给药剂量：第12～19天为5mg/kg，qd，po；第20～33天为2mg/kg，qd，po。观察各组动物接种部位肿瘤的形成状况，实验开始后每周测量2次瘤径，计算肿瘤体积，同时称量动物体重并记录。肿瘤体积(tv)计算公式如下：tv(mm3)＝l×w2/2其中，l表示肿瘤长径(mm)；w表示肿瘤短径(mm)。抗肿瘤活性的评价指标：肿瘤生长抑制率tgi(％)，相对肿瘤增殖率t/c(％)。相对肿瘤体积(rtv)的计算公式为：rtv＝100×tvt/tvinitial其中，tvinitial为分组给药时测量到的肿瘤体积；tvt为给药期间每一次测量时的肿瘤体积。相对肿瘤增殖率t/c(％)的计算公式为：t/c＝100％×(rtvt/rtvc)其中，rtvt表示治疗组rtv；rtvc表示溶剂对照组rtv。肿瘤生长抑制率tgi(％)的计算公式为：tgi＝100％×[1－(tvt(t)－tvinitial(t))/(tvt(c)－tvinitial(c))]其中，tvt(t)表示治疗组每次测量的肿瘤体积；tvinitial(t)表示分组给药时治疗组的肿瘤体积；tvt(c)表示溶剂对照组每次测量的肿瘤体积；tvinitial(c)表示分组给药时溶剂对照组的肿瘤体积。瘤重抑瘤率ir(％)的计算公式为：ir＝100％×(wc－wt)/wc其中，wc表示对照组瘤重；wt表示治疗组瘤重。7.结果wo2016139292的实施例1化合物、本发明实施例1和实施例4化合物对mv4-11荷瘤balb/c裸鼠移植瘤平均肿瘤体积变化图见图1；wo2016139292的实施例1化合物、本发明实施例1和实施例4化合物对mv4-11荷瘤balb/c裸鼠移植瘤平均相对肿瘤体积变化图见图2。表3本发明化合物对mv4-11荷瘤balb/c裸鼠移植瘤的生长抑制率(tgi％)表4本发明化合物对mv4-11荷瘤balb/c裸鼠移植瘤的相对肿瘤增殖率t/c(％)表5.实验结束时各组动物瘤重及瘤重抑瘤率由表3～5、图1～2可知，在5mg/kg；2mg/kg(po，qd)剂量下，本发明实施例1和4化合物在给药22天内对mv-411细胞建立小鼠体内肿瘤模型具有明显的生长抑制作用，且两者的活性均优于wo2016139292的实施例1的化合物。在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。当前第1页12