本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种羊胎盘小分子肽的制备方法及其应用。
背景技术：
在自然界中羊胎盘的营养结构最接近于人类胎盘，并含有大量与人胎盘相近、具有多功效的营养成分。羊胎盘的的蛋白质含量在80％以上，氨基酸含量丰富，种类齐全，配比合理。脂肪10％以下，其中含丰富的卵磷脂、脑磷脂、脂多糖，含多种维生素和微量元素，以及多种免疫球蛋白。
鉴于羊胎盘具有重要的营养价值，羊胎盘中的羊胎素对人体来说是异性蛋白，分子量大于10000d具有一定的过敏性，行业内多采用水解液进行水解提取羊胎盘的有效成分进行提取，促进人体对羊胎盘有效成分大分子蛋白有效吸收和利用，该法水解过程的破坏了羊胎盘活性物质。
技术实现要素：
有鉴于此，本申请提供了一种羊胎盘小分子肽的制备方法及其应用，所述制备方法操作简单，制备快速，提高了羊胎盘小分子肽产率，所得羊胎盘小分子肽活性的分子量小，对羊胎盘小分子肽活性的影响小，利于人体吸收利用。
为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是提供一种羊胎盘小分子肽的制备方法，包括以下步骤：
1)以羊胎盘为原料，经过预处理、第一次粉碎、破壁、加水匀浆，得到混合溶液；
2)所述步骤1)得到的所述混合溶液离心，得到澄清液；
3)所述步骤2)得到的澄清液超滤，得到细胞原液；
4)所述步骤3)得到的所述细胞原液经冷冻干燥后，第二次粉碎，得到羊胎盘小分子肽。
优选的，所述预处理过程包括：清洗、除杂、切块。
优选的，所述清洗过程为超声清洗。
优选的，所述原料与所述加水匀浆所加水重量比为1：(1.5～2.0)。
优选的，所述原料与所述加水匀浆所加水重量比为1：1.8。
优选的，所述加水匀浆时间为20～40min。
优选的，所述破壁过程具体为：进行两次超声破壁操作。
优选的，所述离心过程具体为：进行两次离心操作。
优选的，所述离心过程离心条件为：转速为1500～1800rpm。
优选的，所述离心过程离心条件为：转速为1800rpm。
优选的，所述离心过程离心条件为：温度为10～20℃。
优选的，所述超滤过程具体为：使用孔径0.003μm的超滤膜进行超滤处理。
优选的，所述冷冻干燥过程，冷冻干燥温度为-30～-40℃，压力为-10～-25pa。
优选的，所述冷冻干燥过程，冷冻干燥温度为-30℃，压力为-20pa。
优选的，所述压力以大气压力取作参考零点。
优选的，得到的羊胎盘小分子肽分子量小于10000d。
本发明技术方案还提供了一种羊胎盘小分子肽制备方法的应用，由上述的羊胎盘小分子肽制备方法在制备具有抗氧化、增强免疫力、补充维生素保健食品中的应用。
优选的，所述保健食品包括所述羊胎盘小分子肽、青稞提取物、红景天提取物、葡萄仔提取物、虫草提取物、藏当归提取物和波菱瓜提取物。
本申请与现有技术相比，其详细说明如下：
本发明提供的羊胎盘小分子肽制备方法中羊胎盘原料经预处理和粉碎后，两次破壁利用超声波对细胞内所产生的空穴作用，得到粒度极小的微粉，同时，打破细胞壁，提高羊胎盘有活性物质的释放量，利于小分子肽的溶出，提取效率高，从而提高1.2％的羊胎盘小分子肽产率，提取时间短性，从而缩短制备时间。
本发明提供的羊胎盘小分子肽制备方法中对破壁的得到的微粉进行加水匀浆处理，充分溶解羊胎盘中的活性物质，操作简单、快速。
本发明提供的羊胎盘小分子肽制备方法中匀浆后的混合溶液采用两次离心操作充分固液分离处理，得到澄清液，提高了羊胎盘小分子肽产率。澄清液使用孔径0.003μm的超滤膜进行超滤处理得到细胞活液，一方面有效除菌，避免高温灭菌影响羊胎盘物质活性，另一方面选择性分离得到分子量小于10000d的活性物质。
本发明提供的羊胎盘小分子肽制备方法中对细胞进行冷冻干燥，避免影响其活性。冷冻干燥后进一步粉碎保证了得到的羊胎盘小分子肽分子量小于10000d。
本发明提供的制备方法操作简单，快速，提高了羊胎盘小分子肽产率，所得羊胎盘小分子肽活性的分子量小，对羊胎盘小分子肽活性的影响小，制得的羊胎盘小分子肽分子量小，易吸收，活性高，利于人体吸收利用。
本发明制备方法操作简单快速，制得的羊胎盘小分子分子量小，活性高，改方法可广泛应用于制备具有抗氧化、增强免疫力、补充维生素保健食品。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
本发明提供的技术方案是提供一种羊胎盘小分子肽的制备方法，包括以下步骤：
1)以羊胎盘为原料，经过预处理、第一次粉碎、破壁、加水匀浆，得到混合溶液；
2)所述步骤1)得到的所述混合溶液离心，得到澄清液；
3)所述步骤2)得到的澄清液超滤，得到细胞原液；
4)所述步骤3)得到的所述细胞原液经冷冻干燥后，第二次粉碎，得到羊胎盘小分子肽。
按照本发明，所述预处理过程包括：清洗、除杂、切块。优选的，所述清洗过程为超声清洗。
按照本发明，所述原料与所述加水匀浆所加水重量比为1：(1.5～2.0)。所述原料与所述加水匀浆所加水重量比为1：1.8。所述加水匀浆时间为20～40min。充分溶解羊胎盘中的活性物质，操作简单、快速
按照本发明，所述破壁过程具体为：进行两次超声破壁操作。提高羊胎盘有活性物质的释放量，利于小分子肽的溶出，提取效率高，提高羊胎盘小分子肽产率，提取时间短性，从而缩短制备时间。
按照本发明，所述离心过程具体为：进行两次离心操作。所述离心过程离心条件为：转速为1500～1800rpm，温度为10～20℃。优选的，所述离心过程离心条件为：转速为1800rpm。
按照本发明，所述超滤过程具体为：使用孔径0.003μm的超滤膜进行超滤处理。一方面有效除菌，避免高温灭菌影响羊胎盘物质活性，另一方面选择性分离得到分子量小于5000d的活性物质。
按照本发明，所述冷冻干燥过程，冷冻干燥温度为-30～-40℃，压力为-10～-25pa。优选的，所述冷冻干燥过程，冷冻干燥温度为-30℃，压力为-20pa。按照本发明，得到的羊胎盘小分子肽分子量小于10000d。
本发明技术方案还提供了一种羊胎盘小分子肽制备方法的应用，由上述的羊胎盘小分子肽制备方法在制备具有抗氧化、增强免疫力、补充维生素保健食品中的应用。优选的，所述保健食品包括所述羊胎盘小分子肽、青稞提取物、红景天提取物、葡萄仔提取物、虫草提取物、藏当归提取物和波菱瓜提取物。
实施例1～3
一种羊胎盘小分子肽的制备方法，包括以下步骤：
以羊胎盘为原料，经过清洗、除杂、切块、第一次粉碎、两次超声破壁，得到微粉；
微粉加水匀浆，得到混合溶液；所述原料与所述加水匀浆所加水重量比为1：1.8；
所述混合溶液台式离心机离心得到固相和液相，液相用管式离心机离心，得到澄清液；
所述澄清液使用孔径0.003μm的超滤膜进行超滤处理，得到细胞原液；
所述细胞原液经冷冻干燥后，第二次粉碎，得到羊胎盘小分子肽。
制备条件：均浆时间、所述离心条件、所述冷冻干燥过程温度、所述冷冻干燥过程压强见表1。
试验结果：所述步骤3)得到的得到羊胎盘小分子肽产率、所述步骤3)得到的得到羊胎盘小分子肽分子量见表1。
表1
实施例4
本实施例除下述特征外，其他均与实施例1相同：所述原料与所述加水匀浆所加水重量比为1：1.5。试验结果：所述步骤3)得到的得到羊胎盘小分子肽产率为0.53％、所述步骤3)得到的得到羊胎盘小分子分子量小于10000d。
实施例5
本实施例除下述特征外，其他均与实施例1相同：所述原料与所述加水匀浆所加水重量比为1：2.0。试验结果：所述步骤3)得到的得到羊胎盘小分子肽产率为0.53％、所述步骤3)得到的得到羊胎盘小分子分子量小于10000d。
实施例6
本实施例除下述特征外，其他均与实施例1相同：不进行破壁处理过程。试验结果：所述步骤3)得到的得到羊胎盘小分子肽产率为0.51％、所述步骤3)得到的得到羊胎盘小分子分子量小于10000d。
实施例7
一种羊胎盘小分子肽的制备方法的应用，所述应用具体为：制备具有抗氧化、增强免疫力、补充维生素保健食品的方法，包括：
采用实施例1制备方法制备得到羊胎盘小分子肽，所述羊胎盘小分子肽具有调节机体的免疫功能，能清除体内过多的自由基。维持体内自由基和抗氧化酶之间的平衡的作用；
所述羊胎盘小分子肽与青稞提取物、红景天提取物、葡萄仔提取物、虫草提取物、藏当归提取物、波菱瓜提取物复配得到所述保健食品。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。