一种提取竹柏果仁油的方法与流程

本发明涉及植物油提取技术领域，尤其是涉及一种提取竹柏果仁油的方法。本发明还涉及由所述方法提取得到的竹柏果仁油及其用途。

背景技术：

竹柏(Podocarpus nagi)为罗汉松科(Podocarpacese)罗汉松属植物，是古老的裸子植物。竹柏作为常绿乔木，在我国主要分布于华南地区、台湾、和云南南部，越南、柬埔寨也有分布。竹柏盛果期单株产果可达100-200kg，种子含油率30％，可用作工业用油，经处理可成为优质食用油。然而到目前为止，仍然缺乏对竹柏果仁油的获取工艺、理化特性、脂肪酸组成以及抗氧化活性的详细研究。

因此，仍然需要开发新的提取竹柏果仁油的方法，以期促进竹柏资源的进一步利用，提高其经济价值。

技术实现要素：

为了解决上述现有技术中的问题，本发明提供了以下技术方案。

在一个方面，本发明提供一种提取竹柏果仁油的方法，包括以下步骤：

S100，将竹柏果仁破碎颗粒干燥；

S200，将干燥后的竹柏果仁破碎颗粒与提取溶剂在超声波条件下接触，以便将竹柏果仁破碎颗粒中的竹柏果仁油提取到所述提取溶剂中，得到含有竹柏果仁油的提取溶剂；

S300，将S200中含有竹柏果仁油的提取溶剂分离，去除其中的提取溶剂，得到所述竹柏果仁油。

根据本发明的所述提取竹柏果仁油的方法，在一些实施方式中，在步骤S100中，所述竹柏果仁破碎颗粒在30～60℃烘箱中干燥2-10小时。

根据本发明的所述提取竹柏果仁油的方法，在一些实施方式中，在步骤S200中，所述提取溶剂选自烷烃类溶剂、醚类溶剂、酯类溶剂及其混合物，优选地选自正己烷、石油醚、乙酸乙酯及其混合物。

根据本发明的所述提取竹柏果仁油的方法，在一些实施方式中，在步骤S200中，所述竹柏果仁破碎颗粒与提取溶剂接触并且用超声波超声处理5-60分钟，优选10-20分钟，更优选约15分钟。

根据本发明的所述提取竹柏果仁油的方法，在一些实施方式中，在步骤S200中，所述竹柏果仁破碎颗粒与提取溶剂接触并且在60～100℃保持4-12小时，优选在80～90℃保持6-10小时，更优选在所述提取溶剂的回流温度下保持6-8小时。

根据本发明的所述提取竹柏果仁油的方法，在一些实施方式中，在步骤S200中，所述竹柏果仁破碎颗粒与所述提取溶剂的重量比为1:20至1:100，优选1:40至1:90，更优选1:60至1:80。

在另一个方面，本发明提供一种根据本发明的所述方法制备的竹柏果仁油。

根据本发明的所述竹柏果仁油，以重量百分比计，包含以下成分：

在再另一个方面，本发明提供一种所述竹柏果仁油作为抗氧化剂的用途。

在本发明中，术语“基本”或“基本上”并不排除“完全”的意思。如一个成分“基本上不含”Y，也可以是完全不含有Y。在限定具体数值的情况下，是指该具体数值具有以该具体数值为基础的上下浮动的范围，浮动范围可以是该具体数值的+/-5％，+/-4％，+/-3％，+/-2％，+/-1％，+/-0.5％，+/-0.2％，+/-0.1％，+/-0.05％，+/-0.01％等。如果需要，“基本”或“基本上”可以以上浮动范围代替或从本发明定义中删除。

“含有”既包括提到的因素，也允许包括附加的、不确定的因素。

“大约”、“约”、“左右”在限定具体数值的情况下，是指该具体数值具有以该具体数值为基础的上下浮动的范围，浮动范围可以是该具体数值的+/-5％，+/-4％，+/-3％，+/-2％，+/-1％，+/-0.5％，+/-0.2％，+/-0.1％，+/-0.05％，+/-0.01％等。

“和/或”表示由其连接的多个术语可以各自单独地使用，也可以相互任意地组合。

本发明中，为简明起见而使用的数值范围不仅包括其端点值，也包括其所有的子范围和此范围内所有的单独的数值。例如，数值范围1-6不仅包括子范围，例如1-3、1-4、1-5、2-4、2-6、3-6等，也包括此范围内单独的数值，例如1、2、3、4、5、6。

本发明有益的技术发明效果在于：

1、用超声波辅助浸取的方法成功提取到了竹柏果仁油，并通过响应面试验优化了提取工艺，得到了竹柏果仁油的最优提取工艺条件：提取温度85℃、提取时间7h、料液比1∶40(g/ml)，得率最大值为30.67％。本发明超声波辅助浸取的方法耗时相比较短、提取剂浓度小、用量少、操作简单、提取效率高。

2、本发明的竹柏果仁油含有9种脂肪酸，以亚油酸、二十碳三烯酸、十八碳一烯酸为主，不饱和脂肪酸含量达到95.81％，对人体具有益智、软化血管、降低低密度脂蛋白胆固醇、增强视力等作用，对人类健康大有裨益。

3、本发明的竹柏果仁油能够清除羟基自由基的EC50值和清除DPPH自由基的EC50值分别为0.29mg/mL和84.18mg/mL，可作为抗氧化剂使用。

附图说明

图1是不同提取溶剂对竹柏果仁油得率的影响；

图2是不同提取温度对竹柏果仁油得率的影响；

图3是不同回流时间对竹柏果仁油得率的影响；

图4是不同料液比对竹柏果仁油得率的影响；

图5是竹柏果仁油中9种脂肪酸甲酯GC-MS总离子流图；

图6是竹柏果仁油对·OH的清除作用；

图7是竹柏果仁油对DPPH自由基的清除作用。

具体实施方式

在下面描述和图解本发明的示例性实施方案。为了清楚和准确，下面讨论的所述示例性实施方案可以包括优选的步骤、方法和特征，本领域普通技术人员将可以认识到，这些优选的步骤、方法和特征不是落在本发明范围内的必要条件。

在下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。在下述实施例中所用的材料、试剂等如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1～3

在实施例1中，将竹柏果仁从竹柏果实中取出，用研钵磨碎，置于45℃烘箱中干燥6h，称取4.0g，用滤纸包裹好置于250mL锥形瓶中，按料液比1:40(g/mL)加入正己烷提取溶剂，用超声波清洗机(超声波清洗机，JP-040S，深圳市洁盟清洁设备有限公司)超声15min后，将样品滤纸包放入索氏提取器中，将提取溶剂倒入，80℃水浴加热，回流6h。提取结束后将提取液过滤，滤液经减压蒸馏、干燥、恒重，按下式(1)计算竹柏果仁油得率。

在实施例2和3中，分别将实施例1中的正己烷替换为石油醚和乙酸乙酯。

由图1可知实施例1～3中，乙酸乙酯的竹柏果仁油得率最高，而正己烷的竹柏果仁油得率相对较低。

实施例4～7

在实施例4～7中，采用与实施例1基本相同的条件，除了水浴加热温度分别为70℃、75℃、85℃和90℃，竹柏果仁油得率如图2所示。由图2可知，当提取温度在70～85℃内，竹柏果仁油得率随着提取温度升高而增加；在85℃，竹柏果仁油得率最高；但超过85℃以后，竹柏果仁油得率得率呈现下降趋势。

实施例8～11

在实施例8～11中，采用与实施例1基本相同的条件，除了回流时间分别为4小时、8小时、10小时和12小时，竹柏果仁油得率如图3所示。由图3可知，当提取时间在4～6h以内，竹柏果仁油得率上升较快；在提取时间为6h以后，竹柏果仁油得率增加趋势变缓。不受任何理论约束，发明人认为这可能是因为在提取初期，溶剂中油脂的浓度低，扩散驱动力大，竹柏果仁油得率增加明显；随着提取时间延长，油脂在提取液和物料中的浓度达到动态平衡，竹柏果仁油得率基本保持恒定。

实施例12～17

在实施例12～17中，采用与实施例1基本相同的条件，除了料液比分别为1:30、1:50、1:60、1:70、1:80和1:90g/mL，竹柏果仁油得率如图4所示。由图4可知，在液料比1∶40～1∶70范围内，随着液料比增加，竹柏果仁油得率逐渐上升；在液料比超过1∶70后，竹柏果仁油得率增幅趋于平缓，且略有下降趋势。不受任何理论约束，发明人认为这可能是因为当物料的质量一定时，提取溶剂用量越大，反应体系渗透压越大，可提高竹柏果仁油在溶剂中的扩散速度，使得油率增加。但如果液料比过大，会增加超声波破碎细胞的阻力，使物料细胞破碎程度下降，从而降低得率。此外，在一定的回流时间和提取温度内，若物料中的油脂已被大量提出，即使再增加提取溶剂用量，得率也不会明显增加。

实施例18

采用与实施例1基本相同的条件，除了水浴温度为85℃、回流时间为7小时、料液比为1:40g/mL，竹柏果仁油得率为30.67％。所得竹柏果仁油的理化性质见表1。

表1：竹柏果仁油的理化性质

由表1可知，经检测，竹柏果仁油所测的各项理化指标符合GB2716—2005《食用植物油卫生标准》,可应用于食品、医药保健品。

实施例19：竹柏果仁油的脂肪酸组成分析

1、碱催化甲酯化

取实施例18得到的竹柏果仁油约20mg，加入2mL正己烷充分振荡溶解后，再加入2％氢氧化钠-甲醇溶液5ml混匀，置于60℃水浴锅加热30min，冷却后加入饱和氯化钠溶液至10mL。振荡离心取上清,上清液过0.2μm微孔滤膜后入样品瓶，作为GC-MS分析试样。

2、GC-MS分析

色谱质谱条件：HP-530m×0.25mm×0.25μm弹性石英毛细管柱；载气为高纯氦气；柱初温：50℃，恒温0.5min后，以55℃/min升温速率升至155℃，以8℃/min升温速率升至175℃，以1.2℃/min升温速率升至187℃，最后以9℃/min升温速率升至280℃。分流比为100∶1扫描方式：SCAN，SIM；进样口温度：250℃，进样量为1uL；He流速：45cm/s。

3、定量分析

用正己烷将100mg的混合标准样品定容至2mL稀释成50mg/mL，再用正己烷逐级稀释成40、25、10、5、2和0.6mg/mL系列的标准溶液进行GC-MS/SIM分析，以峰面积和质量浓度作定量工作曲线。使用相同的GC-MS条件和操作过程对竹柏果仁油试样进行分析，根据定量离子的响应值和建立的标准曲线进行绝对定量，结果见图4和表2。

表2：竹柏果仁油GC－MS成分分析结果

由表2可知，竹柏果仁油主要化学成分为脂肪酸类，鉴别出9种脂肪酸，以亚油酸、二十碳三烯酸、十八碳一烯酸为主，不饱和脂肪酸含量达到95.81％。

实施例20：竹柏果仁油抗氧化活性的测定

1、清除羟基自由基的能力测定

采用水杨酸法测定其清除羟自由基的能力，利用H2O2与Fe²⁺混合反应产生羟自由基即：H2O2+Fe²⁺→·OH+H2O+Fe³⁺。再向体系中加入水杨酸捕捉羟自由基而产生有色物质，该物质在510nm处有最大吸收值。用该吸光度值来表示羟自由基的含量。

用无水乙醇配制浓度分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mg/mL的实施例18的竹柏果仁油溶液，取10ml离心管，依次加入2ml不同浓度的样品溶液，8.0mmol/L的FeSO4溶液0.6mL，20mmol/L的H2O2溶液0.5mL，3.0mmol/L的水杨酸溶液2.0mL；将离心管于37℃反应30min，流水冷却，在3000r/min条件下离心15min。取上清液于510nm处，以乙醇调零比色得A1值，以乙醇代20mmol/L H2O2测定A2值，以乙醇代替样品溶液测定A0值。根据公式(2)计算出羟基自由基的清除率。

清除率(％)＝[A0－(A1－A2)]/A0×100 ⑵

式中：A0为空白对照的吸光值；A1为加样品的吸光值；A2为不加显色剂H2O2的吸光值。结果见图6。

由图6可以看出，竹柏果仁油对·OH清除率随着浓度的增加而升高，当质量浓度为0.5mg/mL时，清除率达到74.38％。依据清除率曲线计算出竹柏果仁油清除·OH的EC50为0.29mg/ml。

2、DPPH·的清除作用的测定

将实施例18所得精油配制成10、20、30、40mg/mL的的竹柏果仁油乙醇溶液。用分析天平准确称取DPPH标准品10mg，以95％乙醇溶液溶解并定容至100ml，得到10％的DPPH溶液。用移液管准确移取该溶液3mL于10mL比色管中,分别加入不同浓度的样液各1mL,充分摇匀,置于室温阴暗处静置30min,在波长517nm处测定吸光(Di)。同时测定1mL溶剂3mL DPPH溶液混合后的吸光度(Dc),以及1mL样液与3mL 95％乙醇溶液混合后的吸光度(Dj)。根据公式(3)计算出清除率。

清除率(％)＝[1－(Di－Dj)/Dc]×100％⑶

由图7可以看出，竹柏果仁油对DPPH自由基清除率随样品浓度的增加而升高；根据清除率曲线计算出竹柏果仁油清除DPPH自由基的EC50为84.18mg/mL。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。