超声批量反应制备不同衍生肽的多肽固相合成机构的制作方法

本实用新型涉及生物化学实验技术领域，尤其涉及一种多肽固相合成装置及合成方法。

背景技术：

多肽固相合成是将保护氨基酸连接到固态树脂上，脱去保护基团，然后将下一个保护氨基酸与第一个氨基酸的残基反应并形成肽键，然后脱去第二个氨基酸的保护基团，再连接下一个氨基酸，这样循环下去使肽链增长。多肽固相合成中，固态树脂是必须使用的反应底物。

多肽固相合成反应中，需要使用抽滤装置，抽滤装置包括有抽滤瓶和与抽滤瓶相连接的真空泵。

多肽固相合成中，溶入活化剂的反应液为偶合溶液，溶入脱保护剂的反应液为脱保护溶液。在进行肽固相合成反应时，常常使用多肽固相合成管，在多肽固相合成管中加入树脂，先将树脂溶胀，然后交替加入脱保护溶液和偶合溶液进行合成反应。加入脱保护溶液时，树脂与脱保护溶液进行脱去保护基团的反应；加入偶合溶液时，树脂与偶合溶液中的带保护基团的氨基酸进行偶合反应。

在多肽固相合成中，常常需要以一个母肽为基础，合成多种突变位点不同的衍生肽，如在研发多肽类药物时，需要以一种母肽为基础，合成多种突变位点不同的衍生肽，然后从各种衍生肽中寻找药效最佳的多肽类药物。

在树脂上每连接一个氨基酸，都需要使用一种特定的与多肽的氨基酸序列相适应的偶合溶液，连接不同的氨基酸需要使用不同的偶合溶液。因此，在多肽固相合成的过程中，就需要多次更换反应液。在基于一种母肽制备多种衍生肽时，各种衍生肽需要的大部分偶合溶液是相同的，但是目前的多肽固相合成装置，在制备各衍生肽需要的偶合溶液相同时，也需要在制备不同的衍生肽时分别进行偶合反应，缺少能够批量进行多肽固相合成反应的装置以及方法。

现有的多肽固相合成方法中，需要使用氮气搅拌来加速固相合成反应的进行，这就需要使用高压氮气瓶，不仅成本较高，而且搬运高压氮气瓶费时费力，十分不便。

技术实现要素：

本实用新型的目的在于提供一种能够在制备不同的衍生肽时批量进行多肽固相合成反应的装置，无须进行氮气搅拌。

为实现上述目的，本实用新型的超声批量反应制备不同衍生肽的多肽固相合成机构包括支撑板和用于盛装反应液的反应缸体，反应缸体底部连接有抽滤接管，抽滤接管上设有抽滤阀门；

抽滤接管连接有抽真空软管，抽真空软管用于连接外置的抽滤装置；

反应缸体顶面连接有若干连接磨口，连接磨口的顶部呈上大下小的空心锥台形；每一连接磨口内分别插设有一多肽合成管，多肽合成管的底端插入反应缸体的下部且多肽合成管的底端设有砂芯滤芯；多肽合成管的中部设有磨砂连接部，磨砂连接部呈与连接磨口相适配的上大下小的空心锥台形；

所述各多肽合成管的底端位于同一水平面；支撑板上设有与反应缸体相适配的支撑凹槽，反应缸体放置在支撑凹槽内；支撑板下表面固定连接有超声波发生器。

超声波发生器嵌设于支撑板下表面；支撑板向下连接有防滑橡胶垫。

本实用新型使用超声波发生器来促进反应缸体内的液体与多肽合成管内树脂之间的接触，从而无须氮气搅拌也可以有效加速固相合成反应，与以往氮气搅拌相比不仅降低了成本，而且大大缩短了反应时间，并且无须搬运沉重的高压氮气瓶，降低了劳动强度。防滑橡胶垫既对上保护了超声波发生器（避免超声波发生器直接与外界硬物接触），又对下起到防滑作用，在将本实用新型的超声批量反应制备不同衍生肽的多肽固相合成机构放置在实验台等装置上时十分稳定。

本实用新型设计了一种多通道多肽固相合成方法及专用的装置，进行多肽固相合成反应非常方便，而且通过将不同的多肽合成管同时插入同一反应缸体来进行批量反应，与以往相比大大提高了多肽固相合成的效率，节约了相应研究的时间。在以一种母肽为基础，合成多种突变位点不同的衍生肽时，与以往的合成装置及合成方法相比，具有突出的高效率优点，能够快速合成多种衍生肽，从而提高寻找效果（如药效）最佳的多肽类物质的效率。

以往的多肽固相反应中，树脂和反应液均加入同一多肽固相反应管，砂芯滤芯则位于多固相反应管的中部。这种结构也限制了批量反应的可能性。

本实用新型在使用时根据进行下一步反应所需要的偶合溶液对各多肽合成管进行分组，将需要的偶合溶液相同的多肽合成管归为同一组，从而为实现批量反应提供基础；本实用新型进一步设置出若干多肽合成管对应同一反应缸体的技术方案。

采用超声波发生器，加上分组的办法，以及多管对应同一缸体的结构，是实用新型人在经过长期低效重复反应实验后，经过创造性思考所提出来的，是实现批量反应、提高反应效率的关键。

附图说明

图1是本实用新型的超声批量反应制备不同衍生肽的多肽固相合成机构去掉多肽合成管后的结构示意图；

图2是图1的俯视图；

图3是本实用新型的超声批量反应制备不同衍生肽的多肽固相合成机构的结构示意图。

具体实施方式

如图1至图3所示，本实用新型的超声批量反应制备不同衍生肽的多肽固相合成机构包括支撑板1和用于盛装反应液（反应液为脱保护溶液或偶合溶液）的反应缸体2，反应缸体2底部连接有抽滤接管3，抽滤接管3上设有抽滤阀门4；

抽滤接管3连接有抽真空软管5，抽真空软管5用于连接外置的抽滤装置（如真空泵）；

反应缸体2顶面连接有若干连接磨口6，连接磨口6的顶部呈上大下小的空心锥台形；每一连接磨口6内分别插设有一多肽合成管7，多肽合成管7的底端插入反应缸体2的下部且多肽合成管7的底端设有砂芯滤芯8；多肽合成管7的中部设有磨砂连接部，磨砂连接部呈与连接磨口6相适配的上大下小的空心锥台形；磨砂连接部在图3中被连接磨口6所遮挡，因此图中未给出标号。磨砂连接部与连接磨口6形成密封配合。进行反应时，树脂放置在砂芯滤芯8上，液体能够通过砂芯滤芯8，但是固态的树脂不会通过砂芯滤芯8。

所述各多肽合成管7的底端位于同一水平面；支撑板1上设有与反应缸体2相适配的支撑凹槽9，反应缸体2放置在支撑凹槽9内；支撑板1下表面固定嵌设有超声波发生器10。支撑板1向下连接有防滑橡胶垫11。

本实用新型还公开了使用上述超声批量反应制备不同衍生肽的多肽固相合成机构实现的超声辅助多通道多肽合成方法，依次按以下步骤进行：

第一步骤是连接步骤，将抽真空软管5与外置的抽滤装置相连接；将反应缸体2放置在支撑凹槽9内，将超声波发生器10与外置电源相连接；

第二步骤是树脂分装步骤，在多通道多肽固相合成装置的各多肽合成管7中分别装入精确称量后的连接有相同或不同氨基酸残基的树脂；

第三步骤是进行树脂溶胀，具体是：

①将溶胀溶剂加入反应缸体2；

②将装有树脂的每个多肽合成管7分别通过连接磨口6插入同一反应缸体2进行溶胀，多肽合成管7支撑在连接磨口6上；

③打开超声波发生器10，超声波发生器10产生的超声波通过支撑板1传递至反应缸体2，使反应缸体2内的液体与多肽合成管7内部的液体通过砂芯滤芯8进行充分交换，使反应缸体2内的液体与树脂充分接触；溶胀30±10 分钟，待树脂充分溶胀后，关闭超声波发生器10；

④进行抽滤操作，抽滤操作具体是打开抽滤阀门4，启动抽滤装置（如真空泵），对反应缸体2进行抽滤，将反应缸体2内的液体从反应缸体2内抽出；抽滤结束后关闭抽滤阀门4；

第四步骤是进行脱保护反应，具体是：

①将脱保护溶液加入反应缸体2；

②打开超声波发生器10，使反应缸体2内的脱保护溶液与树脂充分接触；本步骤持续进行30-40分钟，关闭超声波发生器10，进行所述抽滤操作；

第五步骤是洗涤树脂步骤，本步骤是将溶剂（如DMF溶剂，甲醇溶剂或二氯化碳溶剂； DMF溶剂即N，N-二甲基甲酰胺溶剂）加入反应缸体2中对树脂进行洗涤，打开超声波发生器10，使反应缸体2内的液体与树脂充分接触；本步骤持续进行1分钟，关闭超声波发生器10，进行所述抽滤操作；

本步骤重复进行六次；

第六步骤是检测脱保护反应是否完成的步骤，具体是：

通过茚三酮显色法检测各多肽合成管7中的树脂的脱保护反应是否完成，对于未完成脱保护反应的树脂，重复第四和第五步骤；

对于已完成脱保护反应的树脂，若固相合成反应未全部结束，则进行下一步骤；若固相合成反应已全部结束，则将树脂从各多肽合成管7中取出，停止反应；

第七步骤是进行偶合反应，具体是：

①对各多肽合成管7进行区分，根据进行下一步反应所需要的偶合溶液对各多肽合成管7进行分组，将需要的偶合溶液相同的多肽合成管7归为同一组；

②对于同一组装有树脂的多肽合成管7，将该组中的每个多肽合成管7分别通过连接磨口6插入同一反应缸体2，将偶合溶液加入反应缸体2；

③打开超声波发生器10，使反应缸体2内的液体与树脂充分接触；本步骤持续进行40-80分钟；关闭超声波发生器10，进行所述抽滤操作；然后进行第五步骤即洗涤树脂步骤，然后进行第八步骤；

第八步骤是检测偶合反应是否完成的步骤，具体是：

通过茚三酮显色法检测各多肽合成管7中的树脂的偶合反应是否完成；对于未完成偶合反应的树脂，重复第七步骤以重新进行偶合反应；对于已完成偶合反应的树脂，则进行第四至第六步骤。其中，所述溶胀溶剂为N，N-二甲基甲酰胺溶剂；所述树脂采用Wang树脂或Rink树脂。

本实用新型尽管参照上述实施例对本实用新型进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本实用新型进行修改或者等同替换，而不脱离本实用新型的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本实用新型的权利要求范围当中。