本发明涉及一种抗菌肽的提取方法，具体涉及一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法。
背景技术：
：：昆虫是生物界种类最多、分布最广、数量最大的一类节肢动物，约占整个动物数量的90％。由于其体型小，不具有大型动物体那样的完整复杂的免疫系统与机制，但也进化出了属于昆虫自己的特殊的免疫系统与机制。昆虫体的免疫主要通过应激性的分泌出各种凝集素、抗菌肽、溶菌酶等小分子抗菌物质。抗菌肽是一种从生物体内各组织细胞中提取出的具有一定免疫作用的小分子类物质，具有广谱抗微生物的活性，且不易产生耐药性，稳定性好，是一种优秀的抗菌物质。由于昆虫抗菌肽还具有分子量小，无免疫原型，且对宿主细胞无不良影响等有点，可用于替代耐药性日益严重的抗生素。具体的说，抗菌肽无论对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌还是真菌均有高效的抗菌作用，可以在5min内清除大部分细菌，且对正常细胞不会损伤，也不会产生毒素的累积，具有辅助生物提高其免疫机能的作用。而针对蝼蛄抗菌肽，尚未发现有报道与其提取技术有关。技术实现要素：：本发明的目的在于，提供一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法，以解决上述技术问题。本发明提取的蝼蛄抗菌肽，通过在提取过程中防止相关成分变质，从而使成品具有较高的品质，能产生理想的抗菌作用。为实现上述目的，本发明提供如下方案：本发明提供一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)挑选新鲜的蝼蛄，洗净，晾干备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:3～5体积比的菌液混合，离心收集菌体；(3)取步骤(2)收集的菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入蝼蛄腹部，继续饲养1～3d；(4)取步骤(3)诱导后的蝼蛄置于酒精中浸泡10s，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(5)往步骤(4)的匀浆中加入10～20倍体积的乙酸提取液，进行超声提取，过滤，收集滤液；(6)将步骤(5)收集的滤液于0～4℃下静置过夜后，冷冻离心，取滤液在4℃下保存，得抗菌肽。进一步的，所述步骤(4)的酒精浓度为70～75％。进一步的，所述步骤(5)的乙酸提取液含有1～3％的0.01g/l苯甲基硫酰氟。进一步的，所述步骤(5)的超声提取条件：提取时间为40～60min，超声功率为100～250w，超声频率为30～50khz。进一步的，所述步骤(6)的离心条件：转速为4000～5000r/min，时间为20～30min。进一步的，所述蝼蛄抗菌肽可应用于饲料中。进一步的，所述饲料为鸡饲料。进一步的，本发明还提供了一种鸡饲料，包含以下重量份的成分：蝼蛄抗菌肽1～3份、米糠12～20份、豆饼15～25份、酵母粉1～3份、山梨酸钾0.1～0.5份、水30～40份。研究表明，昆虫体在被注射细菌、真菌等各类微生物或者在体壁受伤等的情况下，会应激性的高效合成大量抗菌肽，用以迅速杀死或者防止自身受到进一步侵害。而抗菌肽本身由于是一种热稳定性良好，同时拥有较好水溶性的多肽物质，因此可以通过注射大肠杆菌和枯草芽孢杆菌，随后进一步对蝼蛄虫体进行匀浆制得大量蝼蛄抗菌肽。与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：(1)本发明的蝼蛄抗菌肽提取方法中，往提取液添加了用于减缓酶促反应的苯甲基硫酰氟，进而减少蛋白质的降解，同时使用了超声提取进行辅助，能减短提取时间的同时减少各成分的损失；(2)本发明的提取过程中，利用了大肠杆菌结合枯草芽孢杆菌诱导产生的抗菌肽，且具有活性高的优点；(3)本发明还提供了一种将抗菌肽应用在鸡饲料中的配方，使用后能提高鸡的抗病力。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明。实施例1一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)挑选新鲜的蝼蛄，洗净，晾干备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:4体积比的菌液混合，离心收集菌体；(3)取步骤(2)收集的菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入蝼蛄腹部，继续饲养2d；(4)取步骤(3)诱导后的蝼蛄置于75％酒精中浸泡10s，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(5)往步骤(4)的匀浆中加入15倍体积含有2％的0.01g/l苯甲基硫酰氟的乙酸提取液，进行超声提取，提取时间为50min，超声功率为200w，超声频率为40khz，过滤，收集滤液；(6)将步骤(5)收集的滤液于2.5℃下静置过夜后，冷冻离心25min，转速为4500r/min，取滤液在4℃下保存，得抗菌肽。实施例2一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)挑选新鲜的蝼蛄，洗净，晾干备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:3体积比的菌液混合，离心收集菌体；(3)取步骤(2)收集的菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入蝼蛄腹部，继续饲养1d；(4)取步骤(3)诱导后的蝼蛄置于70％酒精中浸泡10s，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(5)往步骤(4)的匀浆中加入10倍体积含有1％的0.01g/l苯甲基硫酰氟的乙酸提取液，进行超声提取，提取时间为40min，超声功率为100w，超声频率为30khz，过滤，收集滤液；(6)将步骤(5)收集的滤液于0℃下静置过夜后，冷冻离心20min，转速为4000r/min，取滤液在4℃下保存，得抗菌肽。实施例3一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)挑选新鲜的蝼蛄，洗净，晾干备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:5体积比的菌液混合，离心收集菌体；(3)取步骤(2)收集的菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入蝼蛄腹部，继续饲养3d；(4)取步骤(3)诱导后的蝼蛄置于75％酒精中浸泡10s，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(5)往步骤(4)的匀浆中加入20倍体积含有3％的0.01g/l苯甲基硫酰氟的乙酸提取液，进行超声提取，提取时间为60min，超声功率为250w，超声频率为50khz，过滤，收集滤液；(6)将步骤(5)收集的滤液于4℃下静置过夜后，冷冻离心30min，转速为5000r/min，取滤液在4℃下保存，得抗菌肽。实施例4一种鸡饲料，具体如表1表1：鸡饲料重量份蝼蛄抗菌肽2.0米糠16豆饼20酵母粉2.0山梨酸钾0.25水35实施例5一种鸡饲料，具体如表2表2：鸡饲料重量份蝼蛄抗菌肽2.5米糠15豆饼22酵母粉2.5山梨酸钾0.3水38对比例1一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)挑选新鲜的蝼蛄，洗净，晾干备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:4体积比的菌液混合，离心收集菌体；(3)取步骤(2)收集的菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入蝼蛄腹部，继续饲养2d；(4)取步骤(3)诱导后的蝼蛄置于75％酒精中浸泡10s，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(5)往步骤(4)的匀浆中加入15倍体积的乙酸提取液，进行超声提取，提取时间为50min，超声功率为200w，超声频率为40khz，过滤，收集滤液；(6)将步骤(5)收集的滤液于2.5℃下静置过夜后，冷冻离心25min，转速为4500r/min，取滤液在4℃下保存，得抗菌肽。对比例2一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)挑选新鲜的蝼蛄，洗净，晾干备用；(2)取步骤(1)的蝼蛄置于75％酒精中浸泡10s，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(3)往步骤(2)的匀浆中加入15倍体积含有2％的0.01g/l苯甲基硫酰氟的乙酸提取液，进行超声提取，提取时间为50min，超声功率为200w，超声频率为40khz，过滤，收集滤液；(4)将步骤(3)收集的滤液于2.5℃下静置过夜后，冷冻离心25min，转速为4500r/min，取滤液在4℃下保存，得抗菌肽。对比例3一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)挑选新鲜的蝼蛄，洗净，晾干备用；(2)取步骤(1)的蝼蛄置于75％酒精中浸泡10s，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(3)往步骤(2)的匀浆中加入15倍体积的乙酸提取液，进行超声提取，提取时间为50min，超声功率为200w，超声频率为40khz，过滤，收集滤液；(4)将步骤(3)收集的滤液于2.5℃下静置过夜后，冷冻离心25min，转速为4500r/min，取滤液在4℃下保存，得抗菌肽。蝼蛄抗菌肽提取率评价为更好地证明本发明所提供的一种蝼蛄抗菌肽提取方法具有优异的效果，选取实施例1、2、3与对比例1、2、3的提取方法分别提取蝼蛄抗菌肽，对蝼蛄抗菌肽提取率进行下表所述测定。表3：实施例1-3和对比例1-3的性能测试结果：结果表明：从表3中可以看出，由本发明的蝼蛄抗菌肽提取方法所提取出来的蝼蛄抗菌肽提取率均较高，且优于对比例。未加入苯甲基硫酰氟的对比例1与实施例1相比，蝼蛄抗菌肽提取率明显较低，表明苯甲基硫酰氟的加入可以帮助蝼蛄抗菌肽的提取；未加入苯甲基硫酰氟也未使用杆菌诱导产生抗菌肽的对比例3与实施例1相比，蝼蛄抗菌肽得率明显较低，表明苯甲基硫酰氟的加入，能够减少蛋白质的降解，减少各成分的损失，从而达到更好的提取效率；大肠杆菌结合枯草芽孢杆菌诱导产生的抗菌肽，能够帮助抗菌肽的提取，从而达到更好的提取效率。抗病能力评价实施例1-2和对比例1制备方法提取的蝼蛄抗菌肽，根据实施例4提供的鸡饲料配方进行试用检测效果；实施例3和对比例2-3制备方法提取的蝼蛄抗菌肽，根据实施例5提供的鸡饲料配方进行试用检测效果；同时以一款市售鸡饲料为对照组。表4：实施例1-3和对比例1-3、对照组的性能测试结果：从表4可看出，由本发明的蝼蛄抗菌肽提取方法所提取出来的蝼蛄抗菌肽抗病能力均较高，且优于对比例。表明将抗菌肽应用在鸡饲料中的配方，使用后能提高鸡的抗病力。上面以举例方式对本发明进行了说明，但本发明不限于上述具体实施例，凡基于本发明所做的任何改动或变型均属于本发明要求保护的范围。当前第1页12