本发明涉及一种丝素蛋白、制备方法及其在化妆品护肤、织物柔软整理中的应用。
背景技术：
：丝素蛋白，是从蚕丝中提取的天然高分子纤维蛋白，含量约占蚕丝的70％～80％，含有18种氨基酸，其中甘氨酸(gly)、丙氨酸(ala)和丝氨酸(ser)约占总组成的80％以上。丝素本身具有良好的机械性能和理化性质，如良好的柔韧性和抗拉伸强度、透气透湿性、缓释性等，而且经过不同处理可以得到不同的形态，如纤维、溶液、粉、膜以及凝胶等。丝素作为一种天然纤维蛋白，自古以来一直受到人们的青睐，其手感柔软，不仅制成服装穿着舒适，而且用作护肤美肤亦大有裨益。将丝素蛋白水解成分子量较小的能透过半透明的中间产物称为肽，彻底水解便成为丝氨基酸、丝肽。二者皆为良好的化妆品添加剂。技术实现要素：为实现上述目的，本发明提供了一种丝素蛋白、制备方法及其在化妆品护肤、织物柔软整理中的应用。1、一种丝素蛋白的制备方法，包括如下步骤：s1脱胶：将蚕丝按浴比1:(30～50)g/ml投入质量分数为0.5～1.5％碳酸钠水溶液中煮沸脱胶30～50min，捞出蚕丝用水冲洗，烘干，得到丝素；s2溶解除杂：将烘干后的丝素按浴比1:(8～15)g/ml加入到40～50％的氯化钙水溶液中，煮沸至丝素完全溶解，冷却至室温，真空抽滤，得到的滤液装入透析袋用蒸馏水透析2～3天，得到丝素蛋白溶液，旋转蒸发浓缩至原滤液体积，得到丝素蛋白溶液；s3按100：(1～3)ml/g将蛋白酶加入到丝素蛋白溶液中酶解，加热灭酶，冷却至室温，调ph至7.0，离心取上清液，即得所述丝素蛋白。所述蛋白酶为胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶中的至少一种。优选的，所述蛋白酶为胃蛋白酶时，步骤s3为：按100：(1～3)ml/g将胃蛋白酶加入到丝素蛋白溶液中在温度为30～60℃、ph为1.5～5.0条件下酶解3～5h，接着加热至80～100℃灭酶10～20min，然后用冰水冷却至25℃，调ph至7.0，离心取上清液，即得胃蛋白酶丝素蛋白；所述蛋白酶为木瓜蛋白酶时，步骤s3为：按100：(1～3)ml/g将木瓜蛋白酶加入到丝素蛋白溶液中在温度为55～65℃、ph为6～7条件下酶解3～5h，接着加热至80～100℃灭酶10～20min，然后用冰水冷却至25℃，调ph至7.0，离心取上清液，即得木瓜蛋白酶丝素蛋白；所述蛋白酶为碱性蛋白酶时，步骤s3为：按100：(1～3)ml/g将碱性蛋白酶加入到丝素蛋白溶液中在温度为10～50℃、ph为9～11条件下酶解3～5h，接着加热至80～100℃灭酶10～20min，然后用冰水冷却至25℃，调ph至7.0，离心取上清液，即得碱性蛋白酶丝素蛋白。本发明还提供了一种丝素蛋白，采用上述方法制备而成。本发明还提供了一种丝素蛋白为胃蛋白酶丝素蛋白、木瓜蛋白酶丝素蛋白、碱性蛋白酶丝素蛋白中的至少一种。优选的，一种丝素蛋白，为胃蛋白酶丝素蛋白、木瓜蛋白酶丝素蛋白、碱性蛋白酶丝素蛋白按质量比(1-5):(1-5):(1-5)混合而成。优选的，所述胃蛋白酶丝素蛋白，采用下述方法制备而成：s1脱胶：将蚕丝按浴比1:(30～50)g/ml投入质量分数为0.5～1.5％碳酸钠水溶液中煮沸脱胶30～50min，捞出蚕丝用水冲洗，烘干，得到丝素；s2溶解除杂：将烘干后的丝素按浴比1:(8～15)g/ml加入到40～50％的氯化钙水溶液中，煮沸至丝素完全溶解，冷却至室温，真空抽滤，得到的滤液装入透析袋用蒸馏水透析2～3天，得到丝素蛋白溶液，减压旋转蒸发浓缩至原滤液体积，得到丝素蛋白溶液；s3按100：(1～3)ml/g将胃蛋白酶加入到丝素蛋白溶液中在温度为30～60℃、ph为1.5～5.0条件下酶解3～5h，接着加热至80～100℃灭酶10～20min，然后用冰水冷却至25℃，调ph至7.0，离心取上清液，即得所述胃蛋白酶丝素蛋白；所述木瓜蛋白酶丝素蛋白，采用下述方法制备而成：s1脱胶：将蚕丝按浴比1:(30～50)g/ml投入质量分数为0.5～1.5％碳酸钠水溶液中煮沸脱胶30～50min，捞出蚕丝用水冲洗，烘干，得到丝素；s2溶解除杂：将烘干后的丝素按浴比1:(8～15)g/ml加入到40～50％的氯化钙水溶液中，煮沸至丝素完全溶解，冷却至室温，真空抽滤，得到的滤液装入透析袋用蒸馏水透析2～3天，得到丝素蛋白溶液，减压旋转蒸发浓缩至原滤液体积，得到丝素蛋白溶液；s3按100：(1～3)ml/g将木瓜蛋白酶加入到丝素蛋白溶液中在温度为55～65℃、ph为6～7条件下酶解3～5h，接着加热至80～100℃灭酶10～20min，然后用冰水冷却至25℃，调ph至7.0，离心取上清液，即得所述木瓜蛋白酶丝素蛋白；所述碱性蛋白酶丝素蛋白，采用下述方法制备而成：s1脱胶：将蚕丝按浴比1:(30～50)g/ml投入质量分数为0.5～1.5％碳酸钠水溶液中煮沸脱胶30～50min，捞出蚕丝用水冲洗，烘干，得到丝素；s2溶解除杂：将烘干后的丝素按浴比1:(8～15)g/ml加入到40～50％的氯化钙水溶液中，煮沸至丝素完全溶解，冷却至室温，真空抽滤，得到的滤液装入透析袋用蒸馏水透析2～3天，得到丝素蛋白溶液，减压旋转蒸发浓缩至原滤液体积，得到丝素蛋白溶液；s3按100：(1～3)ml/g将碱性蛋白酶加入到丝素蛋白溶液中在温度为10～50℃、ph为9～11条件下酶解3～5h，接着加热至80～100℃灭酶10～20min，然后用冰水冷却至25℃，调ph至7.0，离心取上清液，即得所述碱性蛋白酶丝素蛋白。本发明还提供了一种丝素蛋白在化妆品护肤中的应用。将本发明的丝素蛋白加入化妆品配方中，加入量为0.1-10wt％。化妆品添加本发明丝素蛋白之后，具有保湿，营养、活化细胞，抑制黑色素形成，促进皮肤组织再生，防止皮肤皲裂，抗菌及防晒等作用。本发明还提供了一种丝素蛋白在织物柔软整理中的应用。例如用浓度为0.2-0.8wt％的丝素蛋白水溶液对有棉白布以1：(10-40)浴比在20-40℃进行整理30-90min，水洗，自然风干。面料后整理之后，触感有滑爽感、身骨感和厚实感。本发明的有益效果：本发明的丝素蛋白，具有保湿，营养、活化细胞，抑制黑色素形成，促进皮肤组织再生，防止皮肤皲裂，抗菌及防晒等作用，可以适用于化妆品中用作护肤美肤亦大有裨益。丝素蛋白在毛织物中的应用，所有处理后的织物样品同未被处理的织物样品相比，都有柔软感和毛茸感。具体实施方式实施例中各原料来源：银耳提取物：粒度80目，含银耳多糖30％，提取方法为水提法，提取规格为10:1，即每10kg银耳得到1kg银耳提取物，陕西森弗天然制品有限公司。海藻提取物：粒度80目，溶解度≥98％，提取方法为水提法，提取规格为10:1，即每10kg海藻得到1kg海藻提取物，陕西森弗天然制品有限公司。云芝提取物：粒度80目，溶解度≥98％，提取方法为水提法，提取规格为10:1，即每10kg云芝得到1kg云芝提取物，陕西森弗天然制品有限公司。纳豆提取物：粒度100目，溶解度≥98％，陕西森弗天然制品有限公司。薰衣草提取物：粒度100目，溶解度≥98％，提取方法为水提法，提取规格为10:1，即每10kg薰衣草得到1kg薰衣草提取物，陕西森弗天然制品有限公司。麝香草提取物：粒度80目，溶解度≥98％，提取方法为水提法，提取规格为10:1，即每10kg麝香草得到1kg麝香草提取物，西安青芷生物技术有限公司。蜡菊提取物：粒度80目，溶解度≥98％，提取方法为水提法，提取规格为10:1，即每10kg蜡菊得到1kg蜡菊提取物，陕西森弗天然制品有限公司。芡欧鼠尾草籽提取物：将芡欧鼠尾草籽用粉碎机粉碎至100目，称取10g芡欧鼠尾草籽粉末加入到100ml质量分数为60％的乙醇水溶液，在25℃下超声40min，超声频率20khz，超声功率150w；超声完毕后将混合在2500转/分的条件下离心10min，收集上清液，即得到芡欧鼠尾草籽提取物。木瓜蛋白酶：酶活力300万u/g，西安百川生物科技有限公司。胃蛋白酶：酶活力10万u/g，陕西森弗天然制品有限公司。碱性蛋白酶：酶活力10万u/g，陕西森弗天然制品有限公司壳聚糖：脱乙酰度85％，陕西森弗天然制品有限公司。透析袋：截留分子量8000。木瓜蛋白酶丝素蛋白的制备方法如下：s1脱胶：将蚕丝按浴比1:40g/ml投入质量分数为1.0％碳酸钠水溶液中煮沸脱胶50min，捞出蚕丝用水冲洗，烘干，得到丝素；s2溶解除杂：将烘干后的丝素按浴比1:10g/ml加入到40％的氯化钙水溶液中，煮沸至丝素完全溶解，冷却至室温，真空抽滤，得到的滤液装入透析袋用蒸馏水透析3天，得到丝素蛋白溶液，旋转蒸发浓缩至原滤液体积，得到丝素蛋白溶液；s3按100:2ml/g将木瓜蛋白酶加入到丝素蛋白溶液中在温度为55℃、ph为7条件下酶解5h，接着加热至100℃灭酶20min，然后用冰水冷却至室温，在5000转/分的条件下离心20min，取上清液，即得木瓜蛋白酶丝素蛋白。胃蛋白酶丝素蛋白的制备方法同木瓜蛋白酶丝素蛋白的基本一致，其区别仅在于：步骤s3为按100:2ml/g将胃蛋白酶加入到丝素蛋白溶液中在温度为37℃、ph为2条件下酶解5h，接着加热至100℃灭酶20min，然后用冰水冷却至室温，用0.1mol/l氢氧化钠水溶液调节ph至7，在5000转/分的条件下离心20min，取上清液，即得胃蛋白酶丝素蛋白。碱性蛋白酶丝素蛋白的制备方法同木瓜蛋白酶丝素蛋白的基本一致，其区别仅在于：步骤s3为按100:2ml/g将碱性蛋白酶加入到丝素蛋白溶液中在温度为40℃、ph为10条件下酶解5h，接着加热至100℃灭酶20min，然后用冰水冷却至室温，用0.1mol/l盐酸调节ph至7，5000转/分的条件下离心20min，取上清液，即得碱性蛋白酶丝素蛋白。实施例1一种抗皱保湿锁水精华液，由以下按质量百分比计的原料制备而成：6％银耳提取物、6％木瓜蛋白酶丝素蛋白、5％海藻提取物、1％透明质酸钠、2％云芝提取物、2％纳豆提取物、1％薰衣草提取物、1％麝香草提取物、1％蜡菊提取物、余量为水。一种抗皱保湿锁水精华液的制备方法：按配方称取原料，在25℃、300转/分下将各原料搅拌30min即得。实施例2一种抗皱保湿锁水精华液，由以下按质量百分比计的原料制备而成：6％银耳提取物、6％木瓜蛋白酶丝素蛋白、5％海藻提取物、1％透明质酸钠、2％云芝提取物、2％纳豆提取物、1％薰衣草提取物、1％麝香草提取物、1％蜡菊提取物、0.5％壳聚糖-纳米银胶溶液、余量为水。所述壳聚糖-纳米银胶溶液的制备方法如下：将按质量比2:100将壳聚糖加入到水中煮沸20min，过滤，得到滤液；将摩尔浓度为1mmol/l的硝酸银水溶液煮沸，以0.05g/s的速度滴加上述滤液，滴加完毕后，移除热源，冷却至室温得到壳聚糖-纳米银胶溶液；所述的滤液与硝酸银水溶液的体积比为9:50。一种抗皱保湿锁水精华液的制备方法：按配方称取原料，在25℃、300转/分下将各原料搅拌30min即得。实施例3一种抗皱保湿锁水精华液，由以下按质量百分比计的原料制备而成：6％银耳提取物、6％木瓜蛋白酶丝素蛋白、5％海藻提取物、1％透明质酸钠、2％云芝提取物、2％纳豆提取物、1％薰衣草提取物、1％麝香草提取物、1％蜡菊提取物、0.5％壳聚糖-纳米银胶溶液、0.2％稳定剂、余量为水。所述稳定剂为聚二烯丙基二甲基氯化铵。所述壳聚糖-纳米银胶溶液的制备方法如下：将按质量比2:100将壳聚糖加入到水中煮沸20min，过滤，得到滤液；将摩尔浓度为1mmol/l的硝酸银水溶液煮沸，以0.05g/s的速度滴加上述滤液，滴加完毕后，移除热源，冷却至室温得到壳聚糖-纳米银胶溶液；所述的滤液与硝酸银的体积比为9:50。一种抗皱保湿锁水精华液的制备方法：按配方称取原料，在25℃、300转/分下将各原料搅拌30min即得。实施例4一种抗皱保湿锁水精华液，由以下按质量百分比计的原料制备而成：6％银耳提取物、6％木瓜蛋白酶丝素蛋白、5％海藻提取物、1％透明质酸钠、2％云芝提取物、2％纳豆提取物、1％薰衣草提取物、1％麝香草提取物、1％蜡菊提取物、0.5％壳聚糖-纳米银胶溶液、0.2％稳定剂、余量为水。所述稳定剂为芡欧鼠尾草籽提取物。所述壳聚糖-纳米银胶溶液的制备方法如下：将按质量比2:100将壳聚糖加入到水中煮沸20min，过滤，得到滤液；将摩尔浓度为1mmol/l的硝酸银水溶液煮沸，以0.05g/s的速度滴加上述滤液，滴加完毕后，移除热源，冷却至室温得到壳聚糖-纳米银胶溶液；所述的滤液与硝酸银的体积比为9:50。一种抗皱保湿锁水精华液的制备方法：按配方称取原料，在25℃、300转/分下将各原料搅拌30min即得。实施例5一种抗皱保湿锁水精华液，由以下按质量百分比计的原料制备而成：6％银耳提取物、6％木瓜蛋白酶丝素蛋白、5％海藻提取物、1％透明质酸钠、2％云芝提取物、2％纳豆提取物、1％薰衣草提取物、1％麝香草提取物、1％蜡菊提取物、0.5％壳聚糖-纳米银胶溶液、0.2％稳定剂、余量为水。所述稳定剂为芡欧鼠尾草籽提取物、聚二烯丙基二甲基氯化铵按质量比1:5混合而成。所述壳聚糖-纳米银胶溶液的制备方法如下：将按质量比2:100将壳聚糖加入到水中煮沸20min，过滤，得到滤液；将摩尔浓度为1mmol/l的硝酸银水溶液煮沸，以0.05g/s的速度滴加上述滤液，滴加完毕后，移除热源，冷却至室温得到壳聚糖-纳米银胶溶液；所述的滤液与硝酸银的体积比为9:50。一种抗皱保湿锁水精华液的制备方法：按配方称取原料，在25℃、300转/分下将各原料搅拌30min即得。实施例6一种抗皱保湿锁水精华液，由以下按质量百分比计的原料制备而成：6％银耳提取物、6％丝素蛋白、5％海藻提取物、1％透明质酸钠、2％云芝提取物、2％纳豆提取物、1％薰衣草提取物、1％麝香草提取物、1％蜡菊提取物、0.5％壳聚糖-纳米银胶溶液、0.2％稳定剂、余量为水。所述稳定剂为芡欧鼠尾草籽提取物、聚二烯丙基二甲基氯化铵按质量比1:5混合而成。所述丝素蛋白为木瓜蛋白酶丝素蛋白与胃蛋白酶按质量比1:1混合而成。所述壳聚糖-纳米银胶溶液的制备方法如下：将按质量比2:100将壳聚糖加入到水中煮沸20min，过滤，得到滤液；将摩尔浓度为1mmol/l的硝酸银水溶液煮沸，以0.05g/s的速度滴加上述滤液，滴加完毕后，移除热源，冷却至室温得到壳聚糖-纳米银胶溶液；所述的滤液与硝酸银的体积比为9:50。一种抗皱保湿锁水精华液的制备方法：按配方称取原料，在25℃、300转/分下将各原料搅拌30min即得。实施例7一种抗皱保湿锁水精华液，由以下按质量百分比计的原料制备而成：6％银耳提取物、6％丝素蛋白、5％海藻提取物、1％透明质酸钠、2％云芝提取物、2％纳豆提取物、1％薰衣草提取物、1％麝香草提取物、1％蜡菊提取物、0.5％壳聚糖-纳米银胶溶液、0.2％稳定剂、余量为水。所述稳定剂为芡欧鼠尾草籽提取物、聚二烯丙基二甲基氯化铵按质量比1:5混合而成。所述丝素蛋白为胃蛋白酶丝素丝素蛋白与碱性蛋白酶丝素蛋白按质量比1:1混合而成。所述壳聚糖-纳米银胶溶液的制备方法如下：将按质量比2:100将壳聚糖加入到水中煮沸20min，过滤，得到滤液；将摩尔浓度为1mmol/l的硝酸银水溶液煮沸，以0.05g/s的速度滴加上述滤液，滴加完毕后，移除热源，冷却至室温得到壳聚糖-纳米银胶溶液；所述的滤液与硝酸银的体积比为9:50。一种抗皱保湿锁水精华液的制备方法：按配方称取原料，在25℃、300转/分下将各原料搅拌30min即得。实施例8一种抗皱保湿锁水精华液，由以下按质量百分比计的原料制备而成：6％银耳提取物、6％丝素蛋白、5％海藻提取物、1％透明质酸钠、2％云芝提取物、2％纳豆提取物、1％薰衣草提取物、1％麝香草提取物、1％蜡菊提取物、0.5％壳聚糖-纳米银胶溶液、0.2％稳定剂、余量为水。所述稳定剂为芡欧鼠尾草籽提取物、聚二烯丙基二甲基氯化铵按质量比1:5混合而成。所述丝素蛋白为木瓜蛋白酶丝素蛋白、碱性蛋白酶丝素蛋白按质量比1:1混合而成。实施例9一种抗皱保湿锁水精华液，由以下按质量百分比计的原料制备而成：6％银耳提取物、6％丝素蛋白、5％海藻提取物、1％透明质酸钠、2％云芝提取物、2％纳豆提取物、1％薰衣草提取物、1％麝香草提取物、1％蜡菊提取物、0.5％壳聚糖-纳米银胶溶液、0.2％稳定剂、余量为水。所述稳定剂为芡欧鼠尾草籽提取物、聚二烯丙基二甲基氯化铵按质量比1:5混合而成。聚二烯丙基二甲基氯化铵：简称pdda，cas号：26062-79-3，为强阳离子聚电解质，常作调节剂、抗静电剂、增湿剂、洗发剂和护肤用的润肤剂等。所述丝素蛋白为胃蛋白酶丝素蛋白、木瓜蛋白酶丝素蛋白、碱性蛋白酶丝素蛋白按质量比1:1:1混合而成。所述壳聚糖-纳米银胶溶液的制备方法如下：将按质量比2:100将壳聚糖加入到水中煮沸20min，过滤，得到滤液；将摩尔浓度为1mmol/l的硝酸银水溶液煮沸，以0.05g/s的速度滴加上述滤液，滴加完毕后，移除热源，冷却至室温得到壳聚糖-纳米银胶溶液；所述的滤液与硝酸银的体积比为9:50。一种抗皱保湿锁水精华液的制备方法：按配方称取原料，在25℃、300转/分下将各原料搅拌30min即得。测试例1选择160名志愿者随机分为8个组，每个组20个人，主要表现为面部皮肤衰老，出现皱纹。分别用去离子水与对实施例1～9制备得到的精华水进行抗衰老测试。受试部位前3天不能使用任何化妆品或者外用药物。实验前，志愿者需要清洁面部。实验中，每组志愿者，每天早晚涂抹对应样品2次，每次分别按1.0mg/cm2的用量均匀涂抹，在连续使用8周后，将受试者的涂抹部位洗净，使用美国visia面部图像分析仪，对皮肤纹理变化规律进行分析。比较各组测试结果，通过统计学分析方法得p＜0.05，表明样本均数差别具有统计学意义。表1皮肤纹理变化表实施例皮肤纹理变化率去离子水1.89％实施例1-8.52％实施例2-19.34％实施例3-28.43％实施例4-29.65％实施例5-32.54％实施例6-34.36％实施例7-36.78％实施例8-35.27.实施例9-45.32％测试例2保湿效果测试：挑选18-40岁，共240人，男女各半，身体健康，无皮肤病，随机分为7组，每组20人，分别在使用本发明实施例1～9的抗皱保湿锁水精华液。使用方法：受试对象每天清洁脸部皮肤后，擦干，用手将3g抗皱保湿锁水精华液均匀涂抹在脸部皮肤上。皮肤水分含量测试方法：在测试环境温度为25℃，相对湿度为50％的环境中测定左脸的水分含量，同时让被检者保持平静。在左脸上划出2个2cm×2cm的正方形实验区域，作为抗皱保湿锁水精华液的测试区，使用皮肤水分测定仪(德国ck公司提供，型号为tm300)分别测定使用抗皱保湿锁水精华液前和使用8h后的脸部皮肤含水率，测试环境温度为25℃，相对湿度为50％，记录结果，并取其平均值。比较各组测试结果，通过统计学分析方法得p＜0.05，表明样本均数差别具有统计学意义。具体结果见表2。表2：保湿效果测试结果表测试例3将实施例1～9制得的抗皱保湿锁水精华液分别用棕褐色玻璃瓶进行灌装，密封，置于环境温度为25℃、相对湿度为55％的环境下保藏180天，然后参考gb15979-2002一次性卫生用品卫生标准-c4溶出性抗(抑)菌产品抑菌性能试验方法中规定的方法进行测试。测试结果见表3。表3：抗皱保湿锁水精华液抑菌率表测试例4将实施例6-9所制备的丝素蛋白，溶液倒入聚丙烯的容器内，在50℃条件下烘干5小时，形成丝素蛋白膜。测试数据，见表4。表4：丝素蛋白膜性能表断裂强度，mpa金黄色葡萄球菌atcc6538抑制率，％实施例620.569实施例720.871实施例820.672实施例921.478以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本
技术领域：
中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。当前第1页12