一种融合蛋白及其用途的制作方法

文档序号：21186405发布日期：2020-06-20 18:09阅读：856来源：国知局

本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种多特异性融合蛋白，还涉及其在治疗肿瘤和/或自免疫疾病中的用途。

背景技术：

目前，在肿瘤治疗领域，存在施用靶向药物和免疫治疗两大方法。这这两种治疗方法可能有相互作用，导致更强的细胞毒性作用，稳定而持续地缓解肿瘤。然而，靶向药物和免疫治疗之间的相互作用是非常复杂的，种类、剂量、顺序、剂型等各种因素都可能会影响联合治疗的整体抗肿瘤效果和毒性特征。

cd47蛋白是一种跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族成员，除正常组织细胞表达cd47以外，许多肿瘤细胞过度表达cd47。肿瘤细胞表面的cd47与巨噬细胞表面的sirpα相结合会阻止巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬，这被视为肿瘤逃避机体免疫监视的一种机制。阻断cd47蛋白和sirpα的相互作用，可抑制肿瘤增长。

然而，现有的用于阻断cd47蛋白和sirpα相互作用的试剂识别活性有限，其与cd47蛋白的亲和力往往不足，对肿瘤的抑制能力有限。同时，现有靶向cd47的抗体类药物存在引起贫血反应或者血小板减少的副作用。亟待获得同时特异性靶向cd47蛋白和相关肿瘤抗原的有效疗法。

技术实现要素：

本申请提供了一种融合蛋白，其包含特异性结合肿瘤相关抗原的第一结合域和特异性结合cd47蛋白的第二结合域。本申请还提供包含该融合蛋白的免疫缀合物；编码该融合蛋白的核酸分子；能够包含和/或表达该融合蛋白的载体、组合物和细胞；以及制备所述融合蛋白的方法。本申请的融合蛋白、免疫缀合物、核酸分子、载体、组合物和细胞具有以下一种或多种性质：1)能够同时特异性结合cd47蛋白和肿瘤相关抗原；2)能够特异性阻断cd47蛋白与sirpα的相互作用；3)能够有效抑制肿瘤或肿瘤细胞的生长和/或增殖。

一方面，本申请提供了一种融合蛋白，其包含：特异性结合肿瘤相关抗原的第一结合域；以及特异性结合cd47蛋白的第二结合域；其中，所述第二结合域包含人sirpα变体1的突变体，所述突变体与seqidno：50所示的序列相比，在第33位至第149位中的一个或多个位置包含氨基酸残基的取代、缺失或添加。

在某些实施方式中，所述突变体在选自下组的一个或多个氨基酸残基处包含氨基酸取代：r22、i29、i61、v63、e77、q82、k83、e84、v93、d95、d96、k98、n100、r107、g109和v132。

在某些实施方式中，所述突变体在选自下组的氨基酸残基处包含氨基酸取代：(1)i61、v63、e77、e84、v93、l96、k98、n100和v132；(2)i61、e77、q82、k83和e84；(3)i61、v63、k83、e84和v132；(4)i61、e77、e84、r107和v132；(5)i61、v63、e77、k83、e84和n100；(6)i61、e77、q82、k83、e84和r107；(7)i61、e77、q82、e84、v93、l96、n100、r107、g109和v132；(8)i61、e77、q82、k83、e84和v132；(9)i61；(10)i61、d95、l96、g109和v132；(11)i61、d95、l96、k98、g109和v132；(12)i61、e77、e84、v93、r107和v132；(13)e77、l96、n100、g109和v132；(14)i61、v63、q82、e84、d95、l96、n100和v132；(15)i61、e77、q82、k83、e84、v93、d95、l96、k98、n100和v132；(16)i61、e77、q82、k83、e84和v93；(17)i61、v63、e77、k83、e84、d95、l96、k98和n100；(18)i61、v63、e77、k83、d95、l96、k98、n100和g109；(19)i61、e77、q82、e84、v93、d95、l96、k98和n100；和，(20)i61、v63、e77、q82和e84。

在某些实施方式中，所述突变体包含选自下组的一个或多个氨基酸取代：r22c、i29l、i61l/v/f、v63i、e77i/n/q/k/h/m/r/n/v/l、q82s/r/g/n、k83r、e84k/h/d/r/g、v93l/a、d95h/r/e、d96s/t、k98r、n100g/k/d/e、r107n/s、g109r/h和v132l/r/i/s。

在某些实施方式中，所述突变体包含选自下组的氨基酸取代：(1)i61l、v63i、e77i、e84k、v93l、l96s、k98r、n100g和v132l；(2)i61v、e77n、q82s、k83r和e84h；(3)i61f、v63i、k83r、e84k和v132i；(4)i61l、e77q、e84d、r107n和v132i；(5)i61l、v63i、e77k、k83r、e84d和n100g；(6)i61v、e77h、q82r、k83r、e84h和r107s；(7)i61l、e77i、q82g、e84r、v93l、l96t、n100g、r107s、g109r和v132r；(8)i61l、e77m、q82g、k83r、e84d和v132l；(9)i61l；(10)i61f、d95h、l96s、g109h和v132s；(11)i61f、d95h、l96s、k98r、g109h和v132s；(12)i61l、e77q、e84d、v93a、r107n和v132i；(13)e77k、l96s、n100k、g109h和v132l；(14)i61l、v63i、q82g、e84g、d95r、l96s、n100d和v132i；(15)i61l、e77r、q82n、k83r、e84g、v93l、d95e、l96t、k98r、n100d和v132l；(16)i61v、e77n、q82s、k83r、e84h和v93a；(17)i61v、v63i、e77v、k83r、e84d、d95e、l96t、k98r和n100e；(18)i61l、v63i、e77v、k83r、d95e、l96s、k98r、n100d和g109r；(19)i61v、e77l、q82g、e84g、v93l、d95e、l96t、k98r和n100g；和，(20)i61l、v63i、e77n、q82g和e84g。

在某些实施方式中，所述突变体包含如seqidno：51-70中任一项所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，所述第一结合域包含抗体或其抗原结合片段或变体。在某些实施方式中，所述抗体选自下组：单克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。在某些实施方式中，所述抗原结合片段选自下组：fab，fab’，f(ab′)2，f(ab)2，dab，分离的互补决定区cdr，fv和scfv。

在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的所述变体选自下组：

a)在所述抗体或所述其抗原结合片段中经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸的蛋白质或多肽；和

b)与所述抗体或所述其抗原结合片段具有至少90％序列同源性的蛋白质或多肽。

在某些实施方式中，所述肿瘤相关抗原包括与非实体瘤和/或实体瘤相关的肿瘤相关抗原。在某些实施方式中，所述肿瘤相关抗原选自以下组：cd38、axl和trop2。

在某些实施方式中，所述第一结合域包含cd38抗体或其抗原结合片段或变体。在某些实施方式中，所述cd38为人cd38。

在某些实施方式中，所述抗体包含抗体重链或其片段，所述抗体重链或其片段包含hcdr1-3，所述hcdr1-3的氨基酸序列依次为seqidno：4、seqidno：5和seqidno：6。在某些实施方式中，所述抗体重链或其片段包含重链可变区vh，且所述重链可变区vh包含选自下组的氨基酸序列：seqidno：8。在某些实施方式中，所述抗体重链或其片段包含重链恒定区，且所述重链恒定区包含igg。在某些实施方式中，所述igg选自下组：igg1和igg4。在某些实施方式中，所述抗体重链包含选自下组所示的氨基酸序列中的任一项：seqidno：13、seqidno：17、seqidno：19和seqidno：21。

在某些实施方式中，所述抗体包含抗体轻链或其片段，所述抗体轻链或其片段包含lcdr1-3，所述lcdr1-3的氨基酸序列依次为seqidno：1、seqidno：2和seqidno：3。在某些实施方式中，所述抗体轻链或其片段包含轻链可变区vl，且所述轻链可变区vl包含选自下组的氨基酸序列：seqidno：7。在某些实施方式中，所述抗体轻链或其片段包含轻链恒定区，其所述轻链恒定区包含igκ。在某些实施方式中，所述抗体轻链包含选自下组所示的氨基酸序列中的任一项：seqidno：11、seqidno：16、seqidno：18和seqidno：20。

在某些实施方式中，所述第一结合域包含axl抗体或其抗原结合片段或变体。在某些实施方式中，所述axl为人axl。

在某些实施方式中，所述抗体包含抗体重链或其片段，所述抗体重链或其片段包含hcdr1-3，所述hcdr1-3的氨基酸序列依次为seqidno：25、seqidno：26和seqidno：27。在某些实施方式中，所述抗体重链或其片段包含重链可变区vh，且所述重链可变区vh包含选自下组的氨基酸序列：seqidno：29。在某些实施方式中，所述抗体重链或其片段包含重链恒定区，且所述重链恒定区包含igg。在某些实施方式中，所述igg选自下组：igg1和igg4。在某些实施方式中，所述抗体重链包含选自下组的氨基酸序列：seqidno：34。

在某些实施方式中，所述抗体包含抗体轻链或其片段，所述抗体轻链或其片段包含lcdr1-3，所述lcdr1-3的氨基酸序列依次为seqidno：22、seqidno：23和seqidno：24。在某些实施方式中，所述抗体轻链或其片段包含轻链可变区vl，且所述轻链可变区vl包含选自下组的氨基酸序列：seqidno：28。在某些实施方式中，所述抗体轻链或其片段包含轻链恒定区，其所述轻链恒定区包含igκ。在某些实施方式中，所述抗体轻链包含选自下组的氨基酸序列：seqidno：32。

在某些实施方式中，所述第一结合域包含trop2抗体或其抗原结合片段或变体。在某些实施方式中，所述trop2为人trop2。

在某些实施方式中，所述抗体包含抗体重链或其片段，所述抗体重链或其片段包含hcdr1-3，所述hcdr1-3的氨基酸序列依次为seqidno：39、seqidno：40和seqidno：41。在某些实施方式中，所述抗体重链或其片段包含重链可变区vh，且所述重链可变区vh包含选自下组的氨基酸序列：seqidno：43。在某些实施方式中，所述抗体重链或其片段包含重链恒定区，且所述重链恒定区包含igg。在某些实施方式中，所述igg选自下组：igg1和igg4。在某些实施方式中，所述抗体重链包含选自下组的氨基酸序列：seqidno：48。在某些实施方式中，所述抗体包含抗体轻链或其片段，所述抗体轻链或其片段包含lcdr1-3，所述lcdr1-3的氨基酸序列依次为seqidno：36、seqidno：37和seqidno：38。在某些实施方式中，所述抗体轻链或其片段包含轻链可变区vl，且所述轻链可变区vl包含选自下组的氨基酸序列：seqidno：42。在某些实施方式中，所述抗体轻链或其片段包含轻链恒定区，其所述轻链恒定区包含igκ。在某些实施方式中，所述抗体轻链包含选自下组的氨基酸序列：seqidno：46。

在某些实施方式中，所述第一结合域位于所述第二结合域的n端。在某些实施方式中，所述融合蛋白还包含连接子，所述连接子位于所述第一结合域的c端且位于所述第二结合域的n端。在某些实施方式中，所述连接子包含如seqidno：73-74中任一项所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，所述的融合蛋白包含至少2个所述第二结合域。在某些实施方式中，所述每个所述第二结合域分别位于所述第一结合域的c端。

另一方面，本申请提供了一种免疫缀合物，其包含所述的融合蛋白。

另一方面，本申请提供了一个或多个分离的核酸分子，其编码所述的融合蛋白或者所述的免疫缀合物。

另一方面，本申请提供了一个或多个载体，其包含所述的核酸分子。

另一方面，本申请提供了一种组合物，其包含所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，或所述的核酸分子，以及任选地药学上可接受的赋形剂。

另一方面，本申请提供了一种细胞，其包含所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，或所述的载体。

另一方面，本申请提供了制备所述的融合蛋白的方法，其包括在使得所述融合蛋白能够表达的条件下培养所述的细胞。

另一方面，本申请提供了所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，所述的载体，所述的组合物，或所述的细胞在制备药物中的用途，其中所述药物用于治疗肿瘤或自免疫疾病。

在某些实施方式中，所述肿瘤包括非实体瘤和实体瘤。

在某些实施方式中，所述肿瘤包括多发性骨髓瘤、白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、神经胶质瘤、生殖细胞瘤、肉瘤、见皮瘤、胎盘瘤、脑癌、骨癌、皮肤癌、鼻咽癌、肺癌、口腔癌、食道癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、肠癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌和睾丸癌。

在某些实施方式中，所述自免疫疾病包括慢性淋巴性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、胰岛素依赖型糖尿病、重症肌无力、慢性溃疡性结肠炎、恶性贫血伴慢性萎缩性胃炎、肺出血肾炎综合征(goodpasturesyndrome)、寻常天皰疮、类天皰疮、原发性胆汁性肝硬变、多发性脑脊髓硬化症、急性特发性多神经炎、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、硬皮病和结节性多动脉炎。

另一方面，本申请提供了所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，所述的载体，所述的组合物，或所述的细胞，其治疗肿瘤或自免疫疾病。

另一方面，本申请提供了一种阻断cd47蛋白与sirpα相互作用的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，所述的载体，所述的组合物，或所述的细胞。

另一方面，本申请提供了一种抑制肿瘤或肿瘤细胞生长和/或增殖的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，所述的载体，所述的组合物，或所述的细胞。

本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。

附图说明

本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明书如下：

图1显示的是本申请所述融合蛋白的结构示例。

图2和3显示的是本申请所述融合蛋白的生物学活性。

图4a和4b显示的是本申请所述融合蛋白的生物学活性。

图5显示的是检测本申请所述融合蛋白与cd38和cd47之间相互作用的方法原理示意图。

图6显示的是本申请所述融合蛋白的生物学活性。

图7显示的是检测本申请所述融合蛋白与cd38和cd47之间相互作用的方法原理示意图。

图8和9显示的是本申请所述融合蛋白的生物学活性。

图10显示的是本申请所述融合蛋白对cd47蛋白与sirpα相互作用的阻断。

图11a-11b、图12a-12b以及图13a-13b显示的是本申请的融合蛋白与相应抗原的结合活性。

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。

在本申请中，术语“融合蛋白”通常指由两个或更多个蛋白或多肽融合得到的蛋白。融合蛋白可通过重组dna技术人工制备。例如，编码所述两个或更多个蛋白或多肽的基因或核酸分子可彼此连接而形成融合基因或融合的核酸分子，该融合基因或融合的核酸分子可编码所述融合蛋白。所述融合基因的翻译可以产生单一多肽，其可以具有融合前的所述两个或更多个蛋白或多肽中至少一个、甚至每一个的性质。

在本发明中，术语“特异性结合”通常是指两分子间的非随机结合反应，如抗体和产生该抗体的抗原间的反应。一个某抗原特异性抗体是指以亲和力(kd)≤10^-5m(如10^-6m、10^-7m、10^-8m、10^-9m、10^-10m等)结合该抗原，其中kd指解离率与结合率的比值(koff/kon)，其可以采用本领域技术人员熟悉的方法进行测定。

在本申请中，术语“结合域”通常是可以特异性结合和/或识别靶标(例如抗原)上的特定表位的结构域。在本申请中，术语“结构域”通常是指蛋白质亚基结构中明显分开的紧密球状结构区域。例如，多肽链首先可以是在某些区域相邻的氨基酸残基形成有规则的二级结构，然后，又可以由相邻的二级结构片段组装在一起形成超二级结构，在此基础上多肽链可以折叠成近似于球状的三级结构。对于较大的蛋白质分子或亚基，多肽链往往可以由两个或多个在空间上可明显区分的、相对独立的区域性结构缔合而成三级结构，这种相对独立的区域性结构可以称为结构域。

在本申请中，术语“第一结合域”和“第二结合域”中的所述“第一”、“第二”可以只是为了在描述上进行区分。

在本申请中，术语“cd47蛋白”通常是指整联蛋白相关蛋白(iap)，其为一种属于免疫球蛋白超家族的多次跨膜受体。例如，cd47蛋白可与膜整合素(membraneintegrins)结合，并与其配体凝血栓蛋白-1(thrombospondin-1，tsp-1)和信号调节蛋白α(signal-regulatoryproteinalpha，sirpα)结合。cd47蛋白广泛表达于细胞膜表面。在本申请中，所述cd47蛋白可包括人cd47的任何变体、同种型和物种同系物。人cd47蛋白的氨基酸序列在genbank中作为cej95640.1列出。所述cd47蛋白可以由细胞天然表达或在用cd47基因转染的细胞上表达。

在本申请中，术语“sirpα”通常是指来自sirp家族的调节性膜糖蛋白，其可作为cd47蛋白的配体。在本申请中，所述sirpα可包括人sirpα。例如，sirpα变体1和sirpα变体2。所述sirpα变体2与所述sirpα变体1有13个氨基酸不同，并且其氨基酸序列在genbank中作为caa71403.1列出。在本申请中，术语“sirpα变体1”通常是指氨基酸序列作为ncbirefseqnp_542970.1列出(残基31-504构成成熟型)的sirpα蛋白，此时sirpα变体1的氨基酸序列如seqidno：50所示。

在本申请中，术语“变体”通常是指与不具备任何突变/修饰的蛋白质具有序列同源性的蛋白质性分子，其保留至少一部分生物活性蛋白的治疗和/或生物活性。例如，变体蛋白质相较于参照生物活性蛋白可共享至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列同一性。在一些实施方案中，“变体”可以包括经有意地修饰(例如通过定点诱变、编码基因的合成、插入或偶然通过突变)的蛋白质。

术语“抗体”通常是指包含一个或多个基本上由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因片段编码的多肽的蛋白质。例如，免疫球蛋白基因可以包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因，以及无数的免疫球蛋白可变区基因。例如，轻链可被分类为κ或λ，其可以分别定义免疫球蛋白类型：igκ和igλ。重链可被分类为γ、μ、α、δ或ε，其依次分别定义免疫球蛋白类别：igg、igm、iga、igd和ige。例如，抗体可具有包含四聚体的结构单元，每个四聚体可由两对相同的多肽链组成，每对具有一条“轻”链(约25kd)和一条“重链”(约50-70kd)，每个成员的n末端可以界定约100至110个或更多个氨基酸的可变区，其主要负责抗原识别。例如，术语“轻链可变区(vl)”和“重链可变区(vh)”通常分别指轻链和重链的可变区区域。抗体可作为完整免疫球蛋白存在或作为通过用各种肽酶消化或从头表达产生的许多充分表征的片段存在。

在本发明中，术语“抗原结合片段”通常是指全长抗体的一个或多个部分，所述部分基本上保持结合抗体所结合的相同抗原(例如，cd38)的能力，能够与全长抗体竞争对抗原的特异性结合。通常参见，fundamentalimmunology，ch.7(paul，w.，ed.，第2版，ravenpress，n.y.(1989)，并且将其全文通过引用并入本申请。可通过重组dna技术或通过完整抗体的酶促或化学断裂产生抗原结合片段。在一些情况下，抗原结合片段包括fab、fab′、f(ab′)2、(fab)2、fd、fv、dab和互补决定区(cdr)片段、单链抗体(例如，scfv)、嵌合抗体、双抗体(diabody)和这样的多肽，其包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的至少一部分。可使用本领域技术人员已知的常规技术(例如，重组dna技术或酶促或化学断裂法)从给定的抗体获得抗体的抗原结合片段，并且以与对于完整抗体的方式相同的方式就特异性筛选抗体的抗原结合片段。例如，胃蛋白酶可以消化铰链区中二硫键以下的抗体以产生f(ab′)2。

在本申请中，术语“fab”通常指由vl、vh、cl和ch1结构域组成的抗体片段。

在本申请中，术语“fab′”通常是指与fab片段相比在ch1结构域的羧基末端具有几个额外的残基的抗体片段。例如，fab′可包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。

在本申请中，术语“f(ab)2”通常是指由半胱氨酸相连接的成对的fab片段所得到的抗原结合片段。

在本申请中，术语“dab片段”通常是指由vh结构域组成的抗体片段(ward等人，nature341：544-546(1989))。

在本申请中，术语“互补决定区cdr”通常是指轻链可变区(vl)与重链可变区(vh)的3个高变区(hvr)，该部位因在空间结构上可与抗原决定簇形成精密的互补，故高变区又称互补性决定区。

在本申请中，术语“fv片段”通常是指由抗体的单臂的vl和vh结构域组成的抗体片段。

在本申请中，术语“scfv”通常是指是由抗体重链可变区和轻链可变区通过短肽连接子(linker)连接而成的分子，又称为单链抗体。

在本申请中，术语“单克隆抗体”通常是指一群基本同源的抗体，包含于该群的各个抗体除了可能的以微量存在的天然发生的突变之外可以是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，直接针对单个抗原性位点。此外，与包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物相反，每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇修饰语″单克隆″不是被解释为需要通过任何特殊方法产生抗体。例如，所述单克隆抗体可以通过杂交瘤技术制备或者通过使用重组dna方法在细菌、真核动物或植物细胞中产生单克隆抗体，也可以得自噬菌体抗体文库，使用例如clacksonetal.，nature，352：624-628(1991)和marksetal.，mol.biol.，222：581-597(1991)所述的技术进行。

在本申请中，术语“嵌合抗体”通常是指这样的抗体，其中每个重链或轻链氨基酸序列的一部分与来自特定物种的抗体中相应氨基酸序列同源，或者属于特定的类别，而该链的其余区段则与另一物种中的相应序列同源。例如，轻链和重链的可变区均来自一个动物物种(如小鼠、大鼠等)的抗体的可变区，而恒定部分则与来自另一物种(如人)的抗体序列同源。例如，为获得嵌合抗体，可利用非人源的b细胞或杂交瘤细胞产生可变区，而与其组合的恒定区则来自人。所述可变区具有易于制备的优点，并且其特异性不受与其组合的恒定区的来源的影响。同时，由于嵌合抗体的恒定区可来源于人类，因此嵌合抗体在注射时抗体引发免疫应答的可能性会低于使用恒定区为非人来源的抗体。

在本申请中，术语“人源化抗体”通常是指将衍生自非人物种(例如小鼠或大鼠)的抗体、免疫球蛋白结合蛋白和多肽对人体的免疫原性降低，同时仍保留原始抗体的抗原结合特性的改造抗体。例如，可以使用遗传工程技术制备人源化抗体，可以使用cdr移植(jonesetal.，nature321：522(1986))及其变体；包括“重塑”(reshaping)，(verhoeyen，etal.，1988science239：1534-1536；riechmann，etal.，1988nature332：323-337；tempest，etal.，bio/technol19919：266-271)，“高度加成”(hyperchimerization)，(queen，etal.，1989procnatlacadsciusa86：10029-10033；co，etal.，1991procnatlacadsciusa88：2869-2873；co，etal.，1992jimmunol148：1149-1154)和“贴面”(veneering)，(mark，etal.，“derivationoftherapeuticallyactivehumanizedandveneeredanti-cd18antibodies.”in：metcalfbw，daltonbj，eds.cellularadhesion：moleculardefinitiontotherapeuticpotential.newyork：plenumpress，1994：291-312)等技术手段，对非人源的结合域进行人源化。如果其他区域，例如铰链区和恒定区结构域也源自非人来源，则这些区域也可以被人源化。

在本申请中，术语“全人源抗体”通常是指由基因工程改造的抗体基因缺失动物中表达编码人类抗体的基因得到的抗体。例如，可以将人类抗体基因通过转基因或转染色体技术，将编码人类抗体的基因全部转移至基因工程改造的抗体基因缺失动物中，使动物表达的人类抗体

如本申请中所用，术语“序列同源性”通常是指两个或多个多核苷酸序列之间或两个或多个多肽序列之间的序列相似性或可交换性。当使用程序(例如embossneedle或bestfit)来测定两个不同氨基酸序列之间的序列同一性、相似性或同源性时，可以使用默认设置，或者可以选择合适的评分矩阵(诸如blosum45或blosum80)来最优化同一性、相似性或同源性得分。在一些实施方案中，同源的多核苷酸是在严格条件下杂交的那些序列，并且相较于那些序列具有至少60％，至少65％，至少70％，至少80％，至少90％，至少95％，至少97％，至少98％，至少99％，甚至100％的序列同一性。当对准具有相当长度的序列时，同源的多肽具有至少80％，或至少90％，或至少95％，或至少97％，或至少98％的序列同一性，或具有至少99％的序列同一性。

在本申请中，术语“cd38”、“cd38蛋白”和“cd38抗原”在本申请中可互换使用，并且包括人cd38的任何变体、同种型和物种同系物，其可以由细胞天然表达或在用cd38基因转染的细胞上表达。本领域公认的cd38的同义词包括adp核糖基环化酶1、cadpr水解酶1、cd38-rs1、环状adp-核糖水解酶1、i-19和nim-r5抗原。cd38可以在骨髓瘤细胞表面高度表达。

在本申请中，术语“axl”、“axl蛋白”和“axl抗原”在本申请中可以互换使用，通常是指属于酪氨酸激酶家族的一种蛋白，该家族可以由共同的配体gas6。在本申请中，，axl的高表达与肿瘤形成可以由较大的关联，axl可以当作癌细胞恶化的标识物。在本申请中，所述axl可以为人axl，其氨基酸序列在genbank中作为aah32229列出。

在本申请中，术语“trop2”通常是指肿瘤相关钙信号转导2(tumor-associatedcalciumsignaltransducer2)，可以被称为tacstd2、egp-1、ga733-1或gp50等。trop2在细胞中可以定位于细胞膜，其阳性染色着色部位可主要在细胞膜上。在正常组织中，trop2的表达量很低，但在肿瘤细胞中过表达，因此可以作为肿瘤治疗的靶点。在本申请中，所述trop2可以为人trop2，其氨基酸序列在genbank中作为np_002344列出。

通常情况下，在多肽链中，氨基与多肽链中的另一个羧基相连可以使其成为一个链，但是在蛋白质的两个末端，分别剩余没有成肽键的氨基酸残基，分别是携带游离的氨基的多肽链末端和携带羧基的多肽链末端。在本申请中，术语“n端”通常是指氨基酸残基携带游离的氨基的多肽链的末端。在本申请中，术语“c端”通常是指氨基酸残基携带游离的羧基的多肽链的末端。

在本申请中，术语“核酸分子”通常是指从其天然环境中分离的或人工合成的任何长度的分离形式的核苷酸、脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物。

在本申请中，术语“免疫缀合物”通常是指缀合了一个或多个异源分子(包括但不限于细胞毒素)的具有免疫功能的多肽分子。在本申请中，“缀合”和“连接”、“融合”在本申请中可以互换使用，并且通常是指将两个或更多个化学元素、序列或组分连接在一起，例如通过包括化学缀合或重组手段。所述异源分子可以是细胞毒素、化疗药物等。例如，将本申请所述的融合蛋白缀合一个或多个异源分子(例如，细胞毒素)可以得到所述的免疫缀合物。

在本发明中，术语“载体”指的是，可将编码某蛋白的多聚核苷酸插入其中并使蛋白获得表达的一种核酸运载工具。载体可通过转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内表达得以表达。举例来说，载体包括：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体如酵母人工染色体(yac)、细菌人工染色体(bac)或p1来源的人工染色体(pac)；噬菌体如λ噬菌体或m13噬菌体及动物病毒等。用作载体的动物病毒种类有逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如sv40)。一种载体可能含有多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。载体还有可能包括有协助其进入细胞的成分，如病毒颗粒、脂质体或蛋白外壳，但不仅仅只有这些物质。

在本申请中，术语“肿瘤”通常是指哺乳动物中的机体(例如，细胞或其组成部分)在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的赘生物。在本申请中，肿瘤可以包括实体瘤和非实体瘤。实体瘤可以包括神经胶质瘤、生殖细胞瘤、肉瘤、见皮瘤、胎盘瘤、脑癌、骨癌、皮肤癌、鼻咽癌、肺癌、口腔癌、食道癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、肠癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌和睾丸癌。在申请中，非实体瘤可以包括多发性骨髓瘤、白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤。

在本申请中，术语“淋巴瘤”通常是指一种淋巴系统的恶性肿瘤。淋巴瘤的发生可以是由于淋巴结细胞或淋巴细胞开始无法控制地繁殖，并产生具有异常能力，可以侵入整个身体其他组织的癌细胞。患者体征和症状可以包括淋巴结肿大、发热、盗汗、消瘦或瘙痒，并持续感到疲倦。淋巴瘤有多种亚型，其中两种主要的类型可以为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。在本申请中，术语“霍奇金淋巴瘤”(hodgkin′slymphoma，hl)通常是指一种由淋巴细胞类白细胞产生的一种淋巴瘤。约有一半的霍奇金淋巴瘤病例是由epstein-barr病毒引起的。在本申请中，术语“非霍奇金淋巴瘤”(non-hodgkinlymphoma，nhl)通常是指除了霍奇金淋巴瘤外其他类型的淋巴瘤。

在本申请中，术语“白血病”通常是指一种造血系统恶性增殖性疾病，通常指因白血病细胞大量增殖、累积所引起的一类疾病。克隆性白血病细胞因为增殖失控、分化障碍、凋亡受阻等机制在骨髓和其他造血组织中大量增殖累积，并浸润其他非造血组织和器官，同时抑制正常造血功能。临床可见不同程度的贫血、出血、感染发热以及肝、脾、淋巴结肿大和骨骼疼痛。

在本申请中，术语“多发性骨髓瘤”通常是指一种浆细胞不正常增生致使侵犯骨髓的一种恶性肿瘤。多发性骨髓瘤导致癌细胞可以在骨髓中聚集，使得健康的血细胞被排除。癌细胞产生可导致并发症的异常蛋白质而不是正常的抗体。多发性骨髓瘤的发病率可以在老年人群中增加。其化学治疗方案细胞增殖速率低和药物抗药性强，限制了其化疗效果。超过90％的多发性骨髓瘤患者有化疗抗药性。

在本申请中，术语“raji细胞”通常是指能产生epstein-barr病毒株的连续的人类细胞系。病毒将转化脐带淋巴细胞并且在raji细胞中诱导早期抗原。raji细胞可以被广泛用作转染宿主，也可以被用于了解造血细胞和其他细胞恶性肿瘤。此外，raji细胞具有和表达某些补体成分的几种受体以及免疫球蛋白g的fc受体，因而还可以被用于检测免疫复合物。

在本申请中，术语“自免疫疾病”通常是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。自免疫疾病可以分为两大类，即器官特异性自身免疫病和系统性自身免疫病。器官特异性自身免疫病可以是指组织器官的病理损害和功能障碍仅限于抗体或致敏淋巴细胞所针对的某一器官，可包括慢性淋巴性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、胰岛素依赖型糖尿病、重症肌无力、慢性溃疡性结肠炎、恶性贫血伴慢性萎缩性胃炎、肺出血肾炎综合征(goodpasturesyndrome)、寻常天皰疮、类天皰疮、原发性胆汁性肝硬变、多发性脑脊髓硬化症和急性特发性多神经炎。系统性自身免疫病可以是由于抗原抗体复合物广泛沉积于血管壁等原因导致全身的多器官损害，可以是由于免疫损伤导致血管壁及间质的纤维素样坏死性炎及随后产生多器官的胶原纤维增生所致，系统性自身免疫病可以包括系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、硬皮病和结节性多动脉炎。

在本申请中，术语“adcc”是抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity，adcc)，通常是指是指具有杀伤活性的细胞通过其表面表达的fc受体(fcr)识别包被于靶抗原上的fc段，由此免疫系统的效应细胞主动溶解其膜表面抗原已被特异性抗体结合的靶细胞。

在本申请中，术语“包含”通常是指包括明确指定的特征，但不排除其他要素。

在本申请中，术语“约”通常是指在指定数值以上或以下0.5％-10％的范围内变动，例如在指定数值以上或以下0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、或10％的范围内变动。

融合蛋白

一方面，本申请提供一种融合蛋白，所述融合蛋白可包含第一结合域以及第二结合域。所述第一结合域可以特异性结合肿瘤相关抗原；所述第二结合域可以特异性结合cd47蛋白，所述第二结合域可以包含人sirpα变体1的突变体，所述突变体与seqidno：50所示的序列相比，在第33位至第149位中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)位置包含氨基酸残基的取代、缺失或添加。本申请所述的融合蛋白能够同时特异性结合肿瘤相关抗原和cd47蛋白，从而起到治疗肿瘤和/或自免疫疾病的作用。

在本申请中，术语“第一结合域”通常是指可以特异性结合肿瘤相关抗原的结构域。术语“第二结合域”通常是指可以特异性结合cd47蛋白的结构域。

在本申请中，所述肿瘤相关抗原可以包括与非实体瘤和/或实体瘤相关的肿瘤相关抗原。例如，所述肿瘤相关抗原可以选自以下组：cd38、axl和trop2。

特异性结合cd47的第二结合域

在本申请中，所述突变体(例如特异性结合cd47蛋白的人sirpa变体1的突变体)在选自下组的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸残基处包含氨基酸取代：r22、i29、i61、v63、e77、q82、k83、e84、v93、d95、d96、k98、n100、r107、g109和v132。

在本申请中，所述氨基酸取代中氨基酸残基的位置是以seqidno：50所示氨基酸序列为基准确定的残基编号。

在本申请中，“氨基酸取代xn”是指在相应于seqidno：50所示氨基酸序列中第n位的残基x处发生氨基酸取代，其中n为正整数，x为任意氨基酸残基的缩写。例如，“氨基酸取代i61”表示在相应于seqidno：50所示氨基酸序列中第61位的残基i处发生氨基酸取代。

本申请中，所述的氨基酸取代可以为非保守取代。所述非保守取代可包括以非保守的形式改变目标蛋白或多肽中的氨基酸残基，例如将具有某种侧链大小或某种特性(例如，亲水性)的氨基酸残基变为具有不同侧链大小或不同特性(例如，疏水性)的氨基酸残基。

本申请中，所述的氨基酸取代也可以为保守取代。所述保守取代可包括以保守的形式改变目标蛋白或多肽中的氨基酸残基，例如将具有某种侧链大小或某种特性(例如，亲水性)的氨基酸残基变为具有相同或相似侧链大小或者相同或相似特性(例如，仍为亲水性)的氨基酸残基。这样的保守取代通常不会对所产生的蛋白质的结构或功能带来很大影响。在本申请中，作为所述融合蛋白或其片段的氨基酸序列变体可包括不显著改变蛋白质结构或其功能(例如，阻断cd47与特异性结合cd47蛋白的人sirpα变体1的突变体)的保守氨基酸取代。

作为示例，下述各组中每组内各氨基酸间的相互取代在本申请中可被认为是保守取代：具有非极性侧链的氨基酸组：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和甲硫氨酸。不带电荷、具有极性侧链的氨基酸组：甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸，半胱氨酸，酪氨酸，天冬酰胺和谷氨酰胺。带负电荷、具有极性侧链的氨基酸组：天冬氨酸和谷氨酸。带正电荷的碱性氨基酸：赖氨酸、精氨酸和组氨酸。带苯基的氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。

在本申请中，所述突变体可以在选自下组的氨基酸残基处包含氨基酸取代：(1)i61、v63、e77、e84、v93、l96、k98、n100和v132；(2)i61、e77、q82、k83和e84；(3)i61、v63、k83、e84和v132；(4)i61、e77、e84、r107和v132；(5)i61、v63、e77、k83、e84和n100；(6)i61、e77、q82、k83、e84和r107；(7)i61、e77、q82、e84、v93、l96、n100、r107、g109和v132；(8)i61、e77、q82、k83、e84和v132；(9)i61；(10)i61、d95、l96、g109和v132；(11)i61、d95、l96、k98、g109和v132；(12)i61、e77、e84、v93、r107和v132；(13)e77、l96、n100、g109和v132；(14)i61、v63、q82、e84、d95、l96、n100和v132；(15)i61、e77、q82、k83、e84、v93、d95、l96、k98、n100和v132；(16)i61、e77、q82、k83、e84和v93；(17)i61、v63、e77、k83、e84、d95、l96、k98和n100；(18)i61、v63、e77、k83、d95、l96、k98、n100和g109；(19)i61、e77、q82、e84、v93、d95、l96、k98和n100；和，(20)i61、v63、e77、q82和e84。

在本申请中，所述突变体可以包含选自下组的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸取代：r22c、i29l、i61l/v/f、v63i、e77i/n/q/k/h/m/r/n/v/l、q82s/r/g/n、k83r、e84k/h/d/r/g、v93l/a、d95h/r/e、d96s/t、k98r、n100g/k/d/e、r107n/s、g109r/h和v132l/r/i/s。

在本申请中，氨基酸取代“xny/z”是指相应于seqidno：50所示氨基酸序列中第n位的残基x被取代为氨基酸残基y或者氨基酸残基z，其中n为正整数，x、y和z分别独立地为任意氨基酸残基的缩写，且x不同于y或z。例如，氨基酸取代“i61l/v/f”是指相应于seqidno：50所示氨基酸序列中第61位的残基i被取代为氨基酸残基l、v或f。

在本申请中，所述突变体可以包含选自下组的氨基酸取代：(1)i61l、v63i、e77i、e84k、v93l、l96s、k98r、n100g和v132l；(2)i61v、e77n、q82s、k83r和e84h；(3)i61f、v63i、k83r、e84k和v132i；(4)i61l、e77q、e84d、r107n和v132i；(5)i61l、v63i、e77k、k83r、e84d和n100g；(6)i61v、e77h、q82r、k83r、e84h和r107s；(7)i61l、e77i、q82g、e84r、v93l、l96t、n100g、r107s、g109r和v132r；(8)i61l、e77m、q82g、k83r、e84d和v132l；(9)i61l；(10)i61f、d95h、l96s、g109h和v132s；(11)i61f、d95h、l96s、k98r、g109h和v132s；(12)i61l、e77q、e84d、v93a、r107n和v132i；(13)e77k、l96s、n100k、g109h和v132l；(14)i61l、v63i、q82g、e84g、d95r、l96s、n100d和v132i；(15)i61l、e77r、q82n、k83r、e84g、v93l、d95e、l96t、k98r、n100d和v132l；(16)i61v、e77n、q82s、k83r、e84h和v93a；(17)i61v、v63i、e77v、k83r、e84d、d95e、l96t、k98r和n100e；(18)i61l、v63i、e77v、k83r、d95e、l96s、k98r、n100d和g109r；(19)i61v、e77l、q82g、e84g、v93l、d95e、l96t、k98r和n100g；和，(20)i61l、v63i、e77n、q82g和e84g。

在本申请中，在人sirpα变体1(如seqidno：50所示的氨基酸序列，即人sirpα的氨基酸序列中的第33-149位残基)的基础上，分别包含以上(1)-(20)的氨基酸取代组的sirpα变体1的突变体可依次被命名为m1、m5、m12、m35、m37、m41、m57、m67、m81、m82、m84、m91、m99、m102、m111、m122、m126、m130、m135和m145。所述sirpα变体1的突变体可依次包含如seqidno：51-seqidno：70所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，所述sirpα变体1的突变体是m91，所述sirpα变体1的突变体包含如seqidno：62所示的氨基酸序列。

特异性结合肿瘤相关抗原的第一结合域

在本申请中，所述第一结合域可以包含抗体或其抗原结合片段或变体。例如，所述抗体可以选自下组：单克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。例如，所述抗原结合片段选自下组：fab，fab′，(fab′)2，f(ab)2，dab，分离的互补决定区cdr，fv和scfv。

在本申请中，所述抗体或其抗原结合片段的所述变体可以在所述抗体或所述其抗原结合片段中经过取代、缺失或添加一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸的蛋白质或多肽。或者所述抗体或其抗原结合片段的所述变体可以与所述抗体或所述其抗原结合片段具有至少90％(例如，例如，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或至少100％)序列同源性的蛋白质或多肽。

特异性结合cd38的第一结合域

本申请所述的抗体或其抗原结合片段或变体，可通过与cd38蛋白特异性结合而杀伤肿瘤细胞和/或抑制肿瘤生长。例如，所述肿瘤可以包括cd38阳性的肿瘤。如，所述cd38阳性的肿瘤可以选自以下组：骨髓瘤、淋巴瘤和白血病。又例如，所述肿瘤选自以下组：非霍奇金淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤。所述肿瘤的细胞可以选自下组：raji细胞、daudi细胞、ramos细胞和rpmi8226细胞。在本申请中，所述抗体、其抗原结合片段或变体可以杀伤多发性骨髓瘤、淋巴瘤、白血病、非霍奇金淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤细胞或抑制多发性骨髓瘤、淋巴瘤、白血病、非霍奇金淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤生长。

本申请所述的cd38蛋白可为人cd38蛋白或其功能片段。例如，所述的cd38蛋白可以不为小鼠cd38蛋白，或者可以不为大鼠cd38蛋白。在某些实施方式中，本申请所述的抗体、其抗原结合片段或变体基本上不结合小鼠cd38蛋白或大鼠cd38蛋白。

本申请所述的抗体、其抗原结合片段或变体，可以与参比抗体竞争结合所述cd38蛋白。所述参比抗体可以包含轻链可变区和重链可变区。例如，所述参比抗体的轻链可变区可包含lcdr1-3，所述lcdr1-3的氨基酸序列依次为seqidno：1、seqidno：2和seqidno：3。所述参比抗体的重链可变区可包含hcdr1-3，所述hcdr1-3的氨基酸序列依次为seqidno：4、seqidno：5和seqidno：6。

例如，所述参比抗体的轻链可变区的氨基酸序列可以为：seqidno：7，且所述参比抗体的重链可变区的氨基酸序列可以为：seqidno：8。又例如，所述参比抗体的轻链可包含选自下组所示的氨基酸序列中的任一项：seqidno：11、seqidno：16、seqidno：18和seqidno：20；且所述参比抗体的重链可包含选自下组所示的氨基酸序列中的任一项：seqidno：13、seqidno：17、seqidno：19和seqidno：21。例如，所述参比抗体的轻链可包含如seqidno：11所示的氨基酸序列，且所述参比抗体的重链可包含如seqidno：13所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的轻链可包含如seqidno：16所示的氨基酸序列，且所述参比抗体的重链可包含如seqidno：17所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的轻链可包含如seqidno：18所示的氨基酸序列，且所述参比抗体的重链可包含如seqidno：19所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体的轻链可包含如seqidno：20所示的氨基酸序列，且所述参比抗体的重链可包含如seqidno：21所示的氨基酸序列。

本申请所述的抗体、其抗原结合片段或变体可包含抗体轻链或其片段。例如，所述抗体轻链或其片段可包括igκ恒定区，例如可包含人igκ恒定区。

例如，所述抗体轻链或其片段可包含lcdr1，且所述lcdr1可包含如下的氨基酸序列：seqidno：1。所述抗体轻链或其片段可包含lcdr2，且所述lcdr2可包含如下的氨基酸序列：seqidno：2。所述抗体轻链或其片段可包含lcdr3，且所述lcdr3可包含如下的氨基酸序列：seqidno：3。

本申请所述抗体的轻链或其片段可包含轻链可变区vl，且所述轻链可变区vl的氨基酸序列可以为：seqidno：7。在某些实施方式中，所述抗体轻链或其片段可包含选自下组所示的氨基酸序列中的任一项：seqidno：11、seqidno：16、seqidno：18和seqidno：20。

本申请所述的抗体或其抗原结合片段可包含抗体重链或其片段。例如，所述抗体重链或其片段还包含人恒定区。其中，所述人恒定区可包括人igg恒定区。其中，所述igg恒定区可包含人igg1恒定区或igg4。

例如，所述抗体重链或其片段可包含hcdr1，且所述hcdr1可包含如下的氨基酸序列：seqidno：4。所述抗体重链或其片段可包含hcdr2，且所述hcdr2可包含如下的氨基酸序列：seqidno：5。又例如，所述抗体重链或其片段可包含hcdr3，且所述hcdr3可包含如下的氨基酸序列：seqidno：6。

所述抗体重链或其片段可包含重链可变区vh，且所述重链可变区vh可包含如下的氨基酸序列：seqidno：8。在某些实施方式中，所述抗体重链可包含选自下组所示的氨基酸序列中的任一项：seqidno：13、seqidno：17、seqidno：19和seqidno：21。

在某些实施方式中，本申请所述的抗体或其抗原结合片段中lcdr1的氨基酸序列可包括seqidno：1；lcdr2的氨基酸序列可包括seqidno：2；lcdr3的氨基酸序列可包括seqidno：3；且hcdr1的氨基酸序列可包括seqidno：4或；hcdr2的氨基酸序列可包括seqidno：5；hcdr3的氨基酸序列可包括seqidno：6。例如，该抗体或其抗原结合片段可包括抗体sg003或与其具有相同的lcdr1-3及hcdr1-3的抗体。在某些实施方式中，本申请所述的抗体或其抗原结合片段的轻链可包含轻链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列可包括seqidno：7；且其中重链可包含重链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列可包括seqidno：8。例如，该抗体或其抗原结合片段可包括抗体sg003或与其具有相同的轻链可变区及重链可变区的抗体。在某些实施方式中，本申请所述的抗体或其抗原结合片段可包含轻链和重链，所述轻链的轻链氨基酸序列如seqidno：11所示且所述重链氨基酸序列如seqidno：13所示。例如，该抗体或其抗原结合片段可包括抗体sg003或与其具有相同的轻链及重链氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请所述的抗体可以为sg003。抗体sg003的lcdr1-3的氨基酸序列分别如seqidno：1、seqidno：2和seqidno：3所示；vl的氨基酸序列如seqidno：7所示；hcdr1-3的氨基酸序列分别如seqidno：4、seqidno：5和seqidno：6所示；vh的氨基酸序列如seqidno：8所示；轻链的氨基酸序列如seqidno：11所示；重链的氨基酸序列如seqidno：13所示。

本申请所述的抗体或其抗原结合片段或变体，还可以在sg003的轻链和/或重链的氨基酸序列中包含一个或多个随机突变(例如，一个或多个、如一个或数个氨基酸取代)。例如，所述抗体、其抗原结合片段或变体可在sg003的轻链可变区的框架区l-fr1-4的一个或多个位点包含一个或多个随机突变(例如，一个或多个，如一个或数个氨基酸取代)，和/或在sg003的重链可变区的框架区h-fr1-4的一个或多个位点包含一个或多个随机突变(例如，一个或多个，如一个或数个氨基酸取代)。例如，发生随机突变后，所述的抗体或其抗原结合片段或变体的轻链可包含包含选自下组所示的氨基酸序列中的任一项：seqidno：16、seqidno：18和seqidno：20；和/或所述的抗体或其抗原结合片段或变体的重链可包含选自下组所示的氨基酸序列中的任一项：seqidno：17、seqidno：19和seqidno：21。发生随机突变后的cd38抗体或其抗原结合片段或变体，仍具有特异性结合人cd38蛋白的能力。

在某些实施方式中，本申请所述的抗体或其抗原结合片段的轻链的氨基酸序列包括seqidno：11；并且其重链的氨基酸序列包括seqidno：13；或者本申请所述的抗体或其抗原结合片段的轻链的氨基酸序列包括seqidno：16；并且其重链的氨基酸序列包括seqidno：17；或者，本申请所述的抗体或其抗原结合片段的轻链的氨基酸序列包括seqidno：18；并且其重链的氨基酸序列包括seqidno：19；或者，本申请所述的抗体或其抗原结合片段的轻链的氨基酸序列包括seqidno：20；并且其重链的氨基酸序列包括seqidno：21。

特异性结合axl的第一结合域

本申请所述的抗体或其抗原结合片段或变体，可通过与axl特异性结合而杀伤肿瘤细胞和/或抑制肿瘤生长。例如，所述axl可以为人axl。

本申请所述的抗体、其抗原结合片段或变体，可以与参比抗体竞争结合所述axl蛋白。所述参比抗体可以包含轻链可变区和重链可变区。例如，所述参比抗体的轻链可变区可包含lcdr1-3，所述lcdr1-3的氨基酸序列依次为seqidno：22、seqidno：23和seqidno：24。所述参比抗体的重链可变区可包含hcdr1-3，所述hcdr1-3的氨基酸序列依次为seqidno：25、seqidno：26和seqidno：27。

例如，所述参比抗体的轻链可变区的氨基酸序列可以为：seqidno：28，且所述参比抗体的重链可变区的氨基酸序列可以为：seqidno：29。又例如，所述参比抗体的轻链的氨基酸序列可以为：seqidno：32；且所述参比抗体的重链的氨基酸序列可以为：seqidno：34。

本申请所述的抗体、其抗原结合片段或变体可包含抗体轻链或其片段。例如，所述抗体轻链或其片段可包括igκ恒定区，例如可包含人igκ恒定区。

例如，所述抗体轻链或其片段可包含lcdr1，且所述lcdr1可包含如下的氨基酸序列：seqidno：22。所述抗体轻链或其片段可包含lcdr2，且所述lcdr2可包含如下的氨基酸序列：seqidno：23。所述抗体轻链或其片段可包含lcdr3，且所述lcdr3可包含如下的氨基酸序列：seqidno：24。

本申请所述抗体的轻链或其片段可包含轻链可变区vl，且所述轻链可变区vl的氨基酸序列可以为：seqidno：28。在某些实施方式中，所述抗体轻链或其片段的氨基酸序列可以为：seqidno：32。

例如，所述抗体重链或其片段可包含hcdr1，且所述hcdr1可包含如下的氨基酸序列：seqidno：25。所述抗体重链或其片段可包含hcdr2，且所述hcdr2可包含如下的氨基酸序列：seqidno：26。又例如，所述抗体重链或其片段可包含hcdr3，且所述hcdr3可包含如下的氨基酸序列：seqidno：27。

所述抗体重链或其片段可包含重链可变区vh，且所述重链可变区vh的氨基酸序列可以为：seqidno：29。在某些实施方式中，所述抗体重链或其片段的氨基酸序列可以为：seqidno：34。

在某些实施方式中，本申请所述的抗体或其抗原结合片段中lcdr1的氨基酸序列可包括seqidno：22或其变体；lcdr2的氨基酸序列可包括seqidno：23或其变体；lcdr3的氨基酸序列可包括seqidno：24或其变体；且hcdr1的氨基酸序列可包括seqidno：25或其变体；hcdr2的氨基酸序列可包括seqidno：26或其变体；hcdr3的氨基酸序列可包括seqidno：27或其变体。例如，该抗体或其抗原结合片段可包括抗体c6g12或与其具有相同的lcdr1-3及hcdr1-3的抗体。在某些实施方式中，本申请所述的抗体或其抗原结合片段的轻链可包含轻链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列可包括seqidno：28或其变体；且其中重链可包含重链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列可包括seqidno：29或其变体。例如，该抗体或其抗原结合片段可包括抗体c6g12或与其具有相同的轻链可变区及重链可变区的抗体。在某些实施方式中，本申请所述的抗体或其抗原结合片段可包含轻链和重链，所述轻链的轻链氨基酸序列如seqidno：32所示且所述重链氨基酸序列如seqidno：34所示。例加，该抗体或其抗原结合片段可包括抗体c6g12或与其具有相同的轻链及重链氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请所述的抗体可以为c6g12。抗体c6g12的lcdr1-3的氨基酸序列分别如seqidno：22、seqidno：23和seqidno：24所示；vl的氨基酸序列如seqidno：28所示；hcdr1-3的氨基酸序列分别如seqidno：25、seqidno：26和seqidno：27所示；vh的氨基酸序列如seqidno：29所示；轻链的氨基酸序列如seqidno：32所示；重链的氨基酸序列如seqidno：34所示。

特异性结合trop2的第一结合域

本申请所述的抗体或其抗原结合片段或变体，可通过与trop2特异性结合而杀伤肿瘤细胞和/或抑制肿瘤生长。例如，所述trop2可以为人trop2。

本申请所述的抗体、其抗原结合片段或变体，可以与参比抗体竞争结合所述trop2蛋白。所述参比抗体可以包含轻链可变区和重链可变区。例如，所述参比抗体的轻链可变区可包含lcdr1-3，所述lcdr1-3的氨基酸序列依次为seqidno：36、seqidno：37和seqidno：38。所述参比抗体的重链可变区可包含hcdr1-3，所述hcdr1-3的氨基酸序列依次为seqidno：39、seqidno：40和seqidno：41。

例如，所述参比抗体的轻链可变区的氨基酸序列可以为：seqidno：42，且所述参比抗体的重链可变区的氨基酸序列可以为：seqidno：43。又例如，所述参比抗体的轻链可包的氨基酸序列可以为：seqidno：46；且所述参比抗体的重链的氨基酸序列可以为：seqidno：48。例如，所述参比抗体的轻链可包含如seqidno：46所示的氨基酸序列，且所述参比抗体的重链可包含如seqidno：48所示的氨基酸序列。

本申请所述的抗体、其抗原结合片段或变体可包含抗体轻链或其片段。例如，所述抗体轻链或其片段可包括igκ恒定区，例如可包含人igκ恒定区。

例如，所述抗体轻链或其片段可包含lcdr1，且所述lcdr1可包含如下的氨基酸序列：seqidno：36。所述抗体轻链或其片段可包含lcdr2，且所述lcdr2可包含如下的氨基酸序列：seqidno：37。所述抗体轻链或其片段可包含lcdr3，且所述lcdr3可包含如下的氨基酸序列：seqidno：38。

本申请所述抗体的轻链或其片段可包含轻链可变区vl，且所述轻链可变区vl可包含如下的氨基酸序列：seqidno：42。在某些实施方式中，所述抗体轻链或其片段的氨基酸序列可以为：seqidno：46。

例如，所述抗体重链或其片段可包含hcdr1，且所述hcdr1可包含如下的氨基酸序列：seqidno：39。所述抗体重链或其片段可包含hcdr2，且所述hcdr2可包含如下的氨基酸序列：seqidno：40。又例如，所述抗体重链或其片段可包含hcdr3，且所述hcdr3可包含如下的氨基酸序列：seqidno：41。

所述抗体重链或其片段可包含重链可变区vh，且所述重链可变区vh可包含如下的氨基酸序列：seqidno：43。在某些实施方式中，所述抗体重链或其片段的氨基酸序列可以为：seqidno：48。

在某些实施方式中，本申请所述的抗体或其抗原结合片段中lcdr1的氨基酸序列可包括seqidno：36或其变体；lcdr2的氨基酸序列可包括seqidno：37或其变体；lcdr3的氨基酸序列可包括seqidno：38或其变体；且hcdr1的氨基酸序列可包括seqidno：39或其变体；hcdr2的氨基酸序列可包括seqidno：40或其变体；hcdr3的氨基酸序列可包括seqidno：41或其变体。例如，该抗体或其抗原结合片段可包括抗体sg701或与其具有相同的lcdr1-3及hcdr1-3的抗体。在某些实施方式中，本申请所述的抗体或其抗原结合片段的轻链可包含轻链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列可包括seqidno：42或其变体；且其中重链可包含重链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列可包括seqidno：43或其变体。例如，该抗体或其抗原结合片段可包括抗体sg701或与其具有相同的轻链可变区及重链可变区的抗体。在某些实施方式中，本申请所述的抗体或其抗原结合片段可包含轻链和重链，所述轻链的轻链氨基酸序列如seqidno：46所示且所述重链氨基酸序列如seqidno：48所示。例如，该抗体或其抗原结合片段可包括抗体sg701或与其具有相同的轻链及重链氨基酸序列。

在某些实施方式中，本申请所述的抗体可以为sg701。抗体sg701的lcdr1-3的氨基酸序列分别如seqidno：36、seqidno：37和seqidno：38所示；vl的氨基酸序列如seqidno：42所示；hcdr1-3的氨基酸序列分别如seqidno：39、seqidno：40和seqidno：41所示；vh的氨基酸序列如seqidno：43所示；轻链的氨基酸序列如seqidno：46所示；重链的氨基酸序列如seqidno：48所示。

第一结合域和第二结合域的连接

在本申请中，所述第一结合域可以位于所述第二结合域的n端。例如，所述第一结合域的c端可以通过连接子间接连接于所述第二结合域的n端。在某些情形中，所述第一结合域的c端也可以直接(例如，在框内)连接于第二结合域的n端。

在本申请中，所述融合蛋白还可以包含连接子，所述连接子可以位于所述第一结合域的c端且位于所述第二结合域的n端。例如，在所述融合蛋白中，第一结合域的c端可以连接连接子的n端，连接子的c端可以连接第二结合域的n端。例如，在所述融合蛋白中，从n端到c端，可以依次包含第一结合域、连接子和第二结合域。

在本申请中，所述连接子可以包含如seqidno：73-74中任一项所示的氨基酸序列。

在某些情形中，所述融合蛋白可以包含至少2个(例如，至少2个，至少3个，至少4个，至少5个，至少6个，至少7个，至少8个，至少9个，至少10个，或更多)所述第二结合域。在本申请中，所述每个所述第二结合域可以分别位于所述第一结合域的c端。在本申请中，所述2个以上的第二结合域可以分别直接或间接连接于所述第一结合域的c端。

在本申请中，所述融合蛋白可以包含特异性结合cd38抗原的第一结合域，以及特异性结合cd47蛋白的第二结合域，其中所述第一结合域可以包含特异性结合cd38抗原的抗体或其抗原结合片段或变体，第二结合域可以包含人sirpα变体1的突变体，特异性结合cd38抗原的抗体或其抗原结合片段或变体的c端可以直接或者间接连接人sirpα变体1的突变体的n端。例如，所述第二结合域可以包含至少2个人sirpα变体1的突变体，且2个人sirpα变体1的突变体的n端分别连接特异性结合cd38抗原的抗体或其抗原结合片段或变体的c端。

例如，如图1所示，所述融合蛋白(sg3847l1)的第一结合域可以包含sg003，第二结合域可以包含2个sirpα变体1的突变体m91，采用的连接子1的序列如seqidno：73所示，2个m91的n端分别通过连接子1连接于sg003的2条重链的c端，在所述融合蛋白中，m91连接sg003重链的c端可以得到第二多肽链，sg003的轻链可以命名为第一多肽链。sg3847l1的所述第二多肽链和所述第一多肽链的氨基酸序列分别如seqidno：75和seqidno：11所示。

例如，如图1所示，所述融合蛋白(sg3847l2)的第一结合域可以包含sg003，第二结合域可以包含2个sirpα变体1的突变体m91，采用的连接子2的序列如seqidno：74所示，2个m91的n端分别通过连接子2连接于sg003的2条重链的c端，在所述融合蛋白中，m91连接sg003重链的c端可以得到第二多肽链，sg003的轻链可以命名为第一多肽链。sg3847l2的所述第二多肽链和所述第一多肽链的氨基酸序列分别如seqidno：76和seqidno：11所示。

在本申请中，所述融合蛋白可以包含特异性结合trop2抗原的第一结合域，以及特异性结合cd47蛋白的第二结合域，其中所述第一结合域可以包含特异性结合trop2抗原的抗体或其抗原结合片段或变体，第二结合域可以包含人sirpα变体1的突变体，特异性结合trop2抗原的抗体或其抗原结合片段或变体的c端可以直接或者间接连接人sirpα变体1的突变体的n端。在本申请中，所述第二结合域可以包含至少2个人sirpα变体1的突变体，且2个人sirpα变体1的突变体的n端分别连接特异性结合axl抗原的抗体或其抗原结合片段或变体的c端。

例如，如图1所示，所述融合蛋白(sgtrop247)的第一结合域可以包含抗体sg701，第二结合域可以包含2个sirpα变体1的突变体m91，采用的连接子的序列如seqidno：74所示，2个m91的n端分别通过连接子连接于sg701的2条重链的c端，在所述融合蛋白中，m91连接sg701重链的c端可以得到第二多肽链，sg701的轻链可以命名为第一多肽链。sgtrop247的所述第二多肽链和所述第一多肽链的氨基酸序列分别如seqidno：78和seqidno：46所示。

在本申请中，所述融合蛋白可以包含特异性结合axl抗原的第一结合域，以及特异性结合cd47蛋白的第二结合域，其中所述第一结合域可以包含特异性结合axl抗原的抗体或其抗原结合片段或变体，第二结合域可以包含人sirpα变体1的突变体，特异性结合axl抗原的抗体或其抗原结合片段或变体的c端可以直接或者间接连接人sirpα变体1的突变体的n端。在本申请中，所述第二结合域可以包含至少2个人sirpα变体1的突变体，且2个人sirpα变体1的突变体的n端分别连接特异性结合axl抗原的抗体或其抗原结合片段或变体的c端。

例如，如图1所示，所述融合蛋白(sgaxl47)的第一结合域可以包含抗体c6g12，第二结合域可以包含2个sirpα变体1的突变体m91，采用的连接子的序列如seqidno：74所示，2个m91的n端分别通过连接子连接于c6g12的2条重链的c端，在所述融合蛋白中，m91连接c6g12重链的c端可以得到第二多肽链，c6g12的轻链可以命名为第一多肽链。sgaxl47的所述第二多肽链和所述第一多肽链的氨基酸序列分别如seqidno：77和seqidno：32所示。

核酸分子、载体和细胞及制备方法

另一方面，本申请提供一个或多个分离的核酸分子，其编码所述的融合蛋白或者所述的免疫缀合物。例如，所述一种或多种核酸分子中的每一个核酸分子可以编码完整的所述抗体或其抗原结合片段，也可以编码其中的一部分(例如，hcdr1-3、lcdr1-3、vl、vh、轻链或重链中的一种或多种)。

本申请所述的核酸分子可以为分离的。例如，其可以是通过以下方法产生或合成的：(i)在体外扩增的，例如通过聚合酶链式反应(pcr)扩增产生的，(ii)通过克隆重组产生的，(iii)纯化的，例如通过酶切和凝胶电泳分级分离，或者(iv)合成的，例如通过化学合成。在某些实施方式中，所述分离的核酸是通过重组dna技术制备的核酸分子。

重组dna和分子克隆技术包括由sambrook，j.，fritsch，e.f.和maniatis，t.molecularcloning：alaboratorymanual；coldspringharborlaboratorypress：coldspringharbor，(1989)(maniatis)和由t.j.silhavy，m.l.bennan和l.w.enquist，experimentswithgenefusions，coldspringharborlaboratory，coldspringharbor，n.y.(1984)以及由ausubel，f.m.等，currentprotocolsinmolecularbiology，pub.bygreenepublishingassoc.andwiley-interscience(1987)描述的那些技术。简而言之，可从基因组dna片段、cdna和rna制备所述核酸，所有这些核酸可直接从细胞中提取或通过各种扩增方法(包括但不限于pcr和rt-pcr)重组产生。

核酸的直接化学合成通常涉及将3′-封闭的和5′-封闭的核苷酸单体依次添加至生长中的核苷酸聚合物链的末端5′-羟基，其中每次添加通过亲核攻击所添加的单体的3′-位上的生长链的末端5′-羟基来实现，所述单体通常是磷衍生物，诸如磷酸三酯、亚磷酰胺等。参见，例如，matteuci等，tet.lett.521：719(1980)；属于caruthers等的美国专利第4,500,707号；和属于southern等的美国专利第5,436,327号和第5,700,637号；在另一方面，本申请提供了包含本申请的分离的多核苷酸的载体。所述载体可以是任何线性核酸、质粒、噬菌粒、粘粒、rna载体、病毒载体等。病毒载体的非限制性实例可包括逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒。在一些实施方案中，所述载体是表达载体，例如，噬菌体展示载体。

另一方面，本申请提供一个或多个载体，其包含所述的核酸分子。例如，所述载体可以包含本申请所述的一种或多种核酸分子。每种载体中可包含一种或多种所述核酸分子。此外，所述载体中还可包含其他基因，例如允许在适当的宿主细胞中和在适当的条件下选择该载体的标记基因。此外，所述载体还可包含允许编码区在适当宿主中正确表达的表达控制元件。这样的控制元件为本领域技术人员所熟知的，例如，可包括启动子、核糖体结合位点、增强子和调节基因转录或mrna翻译的其他控制元件等。在某些实施方式中，所述表达控制序列为可调的元件。所述表达控制序列的具体结构可根据物种或细胞类型的功能而变化，但通常包含分别参与转录和翻译起始的5’非转录序列和5’及3’非翻译序列，例如tata盒、加帽序列、caat序列等。例如，5’非转录表达控制序列可包含启动子区，启动子区可包含用于转录控制功能性连接核酸的启动子序列。所述表达控制序列还可包括增强子序列或上游活化子序列。在本申请中，适当的启动子可包括，例如用于sp6、t3和t7聚合酶的启动子、人u6rna启动子、cmv启动子及其人工杂合启动子(如cmv)，其中启动子的某部分可与其他细胞蛋白(如人gapdh，甘油醛-3-磷酸脱氢酶)基因启动子的某部分融合，其可包含或不包含另外的内含子。本申请所述的一种或多种核酸分子可以与所述表达控制元件可操作地连接。

所述载体可以包括，例如质粒、粘粒、病毒、噬菌体或者在例如遗传工程中通常使用的其他载体。在某些实施方式中，所述载体可以为表达载体。

所述载体还可含有一个或多个选择标记基因，其在表达后赋予可用于选择或以其它方式鉴定携带载体的宿主细胞的一个或多个表型性状。用于真核细胞的合适的选择标记的非限制性实例包括二氢叶酸还原酶和新霉素抗性。

另一方面，本申请提供一种细胞，所述细胞包含所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，或所述的载体。所述细胞可以是宿主细胞。例如，所述细胞可以包括如下许多细胞类型，如大肠杆菌或枯草菌等原核细胞，如酵母细胞或曲霉菌等真菌细胞，如s2果蝇细胞或sf9等昆虫细胞，或者如纤维原细胞，cho细胞，cos细胞，nso细胞，hela细胞，bhk细胞，hek293细胞或人细胞的动物细胞。

例如，可通过多种已建立的技术将所述载体稳定地或瞬时引入宿主细胞。例如，一种方法涉及氯化钙处理，其中通过钙沉淀引入载体。也可以按照类似方法使用其它盐，例如磷酸钙。另外，可以用电穿孔(即，施加电流以增加细胞对核酸的渗透性)。转化方法的其它实例包括显微注射、deae葡聚糖介导的转化和在乙酸锂存在下的热休克。脂质复合物、脂质体和树状聚合物也可用于转染宿主细胞。

在将异源序列引入宿主细胞中时，可实施多种方法来鉴定已向其中引入了载体的宿主细胞。一种示例性选择方法包括将单个细胞继代培养以形成单个菌落，然后测试所需蛋白质产物的表达。另一种方法需要基于通过载体内包含的选择标记基因的表达赋予的表型性状选择含有异源序列的宿主细胞。

例如，将本申请的各种异源序列引入宿主细胞可通过方法诸如pcr、southern印迹或northern印迹杂交来确认。例如，可从所得宿主细胞制备核酸，并且可使用对目标序列是特异的引物，通过pcr扩增特定目标序列。将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳或毛细管电泳，然后用溴化乙锭、sybrgreen溶液等染色，或用uv检测来检测dna。或者，可在杂交反应中使用对目标序列是特异的核酸探针。特定基因序列的表达可以通过与pcr，northern印迹杂交或通过使用与编码的基因产物反应的抗体的免疫测定的反转录检测相应的mrna来确定。示例性免疫测定包括但不限于elisa、放射免疫测定和夹心免疫测定。

此外，将本申请的各种异源序列引入宿主细胞可以通过异源序列编码的酶(例如，酶促标志物)的酶促活性来确认实。可通过本领域已知的多种方法测定酶。通常，酶促活性可通过产物的形成或正在研究的酶促反应的底物的转化来确定。所述反应可在体外或体内进行。

另一方面，本申请提供一种制备所述的融合蛋白的方法，其可以包括在使得所述融合蛋白能够表达的条件下培养所述的细胞。例如，可通过使用适当的培养基、适当的温度和培养时间等，这些方法是本领域普通技术人员所了解的。

在某些情形中，所述方法还可包括分离和/或纯化所述融合蛋白的步骤。例如，可以采用蛋白g-琼脂糖或蛋白a-琼脂糖进行亲和层析，还可通过凝胶电泳和/或高效液相色谱等来纯化和分离本申请所述的融合蛋白。

免疫缀合物、组合物和应用

另一方面，本申请提供一种免疫缀合物，其包含所述的融合蛋白。例如，所述免疫缀合物可以为融合蛋白-药物缀合物(adc)，其中本申请所述的融合蛋白与一种或多种治疗剂缀合，所述治疗剂包括但不限于细胞毒性剂、放射性毒性剂(例如，放射性同位素)和/或免疫抑制剂(例如，通过抑制免疫应答等途径杀伤细胞的任何药剂)等。在某些实施方式中，所述治疗剂可以为能够治疗肿瘤相关的疾病或病症的治疗剂。

所述缀合可通过肽连接子(例如，可切割连接子)或其它方式进行，例如，所述连接子可以为酸不稳定连接子、肽酶敏感连接子、光不稳定连接子等。

另一方面，本申请提供一种组合物，所述组合物包含所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，或所述的核酸分子，以及任选地药学上可接受的赋形剂。

例如，所述药学上可接受的赋形剂可以包括缓冲剂、抗氧化剂、防腐剂、低分子量多肽、蛋白质、亲水聚合物、氨基酸、糖、螯合剂、反离子、金属复合物和/或非离子表面活性剂等。

在本申请中，可按照本领域的常规技术手段将所述组合物与药学上可接受的载体或稀释剂以及任何其他已知的辅剂和赋形剂配制在一起，例如按照remington：thescienceandpracticeofpharmacy，第十九版，gennaro编辑，mackpublishingco.，easton，pa，1995中公开的技术进行操作。

在本申请中，所述组合物可被配制用于口服给药，静脉内给药，肌肉内给药，在肿瘤部位的原位给药，吸入，直肠给药，阴道给药，经皮给药或通过皮下储存库给药。

例如，所述组合物可以用于抑制肿瘤生长。例如，本申请的组合物可以抑制或延缓疾病的发展或进展，可以减小肿瘤大小(甚至基本消除肿瘤)，和/或可以减轻和/或稳定疾病状态。

例如，本申请所述的组合物可以为适于口服给药的形式，如片剂，胶囊剂，丸剂，粉剂，缓释制剂，溶液剂，混悬剂，或者用于肠胃外注射，如无菌溶液剂，混悬剂或乳剂，或者用于软膏或乳膏局部给药或作为栓剂直肠给药。所述组合物可以是适合精确剂量单次给药的单位剂量形式。所述组合物可以进一步包含常规的药物载体或赋形剂。此外，所述组合物可以包括其他药物或药剂，载体，佐剂等。

本申请所述的组合物可以包含治疗有效量的所述融合蛋白。所述治疗有效量是能够预防和/或治疗(至少部分治疗)患有或具有发展风险的受试者中的病症或病症(例如肿瘤)和/或其任何并发症而所需的剂量。所述剂量的具体量/浓度可以根据施用方法和患者需要而变化，并且可以基于例如患者体积，粘度和/或体重等来确定。例如，合适的剂量可以是约0.1mg或1mg/kg/天至约50mg/kg/天；有时，剂量可能会更高。应当理解的是，基于特定患者，制剂和/或疾病的状况，本领域技术人员(例如，医生或药剂师)可以方便地调整这些特定剂量。

在本申请中，术语“治疗”或“医治”或“缓解”或“改善”在本申请中可互换使用，并且是指获得有益或所需的结果(包括但不限于治疗益处和/或预防益处)的方法。在本申请中，治疗益处通常是指根除或减轻所治疗的潜在病症的严重性。此外，通过根除、减轻严重性或减少与潜在病症相关的一种或多种生理症状的发生率，以使得在受试者中观察到改善(尽管受试者仍然可能受到潜在病症折磨)来实现治疗益处。对于预防益处，可向处于发展特定疾病的风险中的受试者，或报告疾病的一种或多种生理症状的受试者施用组合物，即使可能尚未进行该疾病的诊断。

另一方面，本申请提供了所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，所述的载体，所述的组合物，或所述的细胞在制备药物中的用途，其中所述药物可以用于治疗肿瘤或自免疫疾病。

另一方面，本申请所述的融合蛋白、免疫缀合物、核酸分子、载体、组合物或细胞可以用于治疗所述肿瘤或自免疫疾病。

另一方面，本申请提供了治疗肿瘤或自免疫疾病的方法，所述方法包括向受试者施用本申请所述的融合蛋白、免疫缀合物、核酸分子、载体、组合物或细胞。

另一方面，本申请提供了一种阻断cd47蛋白与sirpα相互作用的方法，所述方法可包括施用(例如，向有需要的受试者或细胞或生物学样品施用)本申请所述的融合蛋白或组合物。

另一方面，本申请提供了一种抑制肿瘤或肿瘤细胞生长和/或增殖的方法，所述方法可包括使本申请所述的融合蛋白或组合物与所述肿瘤或肿瘤细胞接触。例如，所述接触可在体外发生。

在某些实施方式中，所述肿瘤可以包括非实体瘤和实体瘤。

在某些实施方式中，所述肿瘤可以包括多发性骨髓瘤、白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、神经胶质瘤、生殖细胞瘤、肉瘤、见皮瘤、胎盘瘤、脑癌、骨癌、皮肤癌、鼻咽癌、肺癌、口腔癌、食道癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、肠癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌和睾丸癌。

在某些实施方式中，所述自免疫疾病可以包括慢性淋巴性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、胰岛素依赖型糖尿病、重症肌无力、慢性溃疡性结肠炎、恶性贫血伴慢性萎缩性胃炎、肺出血肾炎综合征(goodpasturesyndrome)、寻常天皰疮、类天皰疮、原发性胆汁性肝硬变、多发性脑脊髓硬化症、急性特发性多神经炎、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、硬皮病和结节性多动脉炎。

另一方面，本申请提供了所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，所述的载体，所述的组合物，或所述的细胞，其可以治疗肿瘤或自免疫疾病。

另一方面，本申请提供了一种可以阻断cd47蛋白与sirpα相互作用的方法，其可以包括向有需要的受试者施用有效量的所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，所述的载体，所述的组合物，或所述的细胞。

在本申请中，术语“受试者”通常是指人或非人动物，包括但不限于猫、狗、马、猪、牛、绵羊、山羊、兔、小鼠、大鼠或猴。

另一方面，本申请提供了一种可以抑制肿瘤或肿瘤细胞生长和/或增殖的方法，其可以包括向有需要的受试者施用有效量的所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，所述的载体，所述的组合物，或所述的细胞。

不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的融合蛋白、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。

实施例

实施例1.不同连接子选择对活性的影响

1.1采用不同连接子制备融合蛋白

参照如图1所示的融合蛋白结构，以抗cd38人源化抗体sg003、sirpα变体1的突变体m91(seqid：no62)为例，从n端到c端，选用不同的连接子，依次连接sg003、连接子和2个m91，其中2个m91的n端分别和sg003的重链的c端连接，研究不同的连接子对融合蛋白生物学活性的影响。

抗体sg003的lcdr1-3的氨基酸序列分别如seqidno：1、seqidno：2和seqidno：3所示；vl的氨基酸序列如seqidno：7所示；编码vl的核苷酸序列如seqidno：9所示；抗体sg003的hcdr1-3的氨基酸序列分别如seqidno：4、seqidno：5和seqidno：6所示；vh的氨基酸序列如seqidno：8所示；编码vh的核苷酸序列如seqidno：10所示。抗体sg003的轻链的氨基酸序列如seqidno：11所示；编码其的核苷酸序列如seqidno：12所示。抗体sg003的重链的氨基酸序列如seqidno：13所示；编码其的核苷酸序列如seqidno：14所示。

选择连接子1(seqid：no73)，构建的融合蛋白命名为sg3847l1，所述sg3847l1由第一多肽链和第二多肽链构成，第一多肽链即sg003的轻链，其氨基酸序列如seqidno：11所示，第二多肽链即sg003的重链和m91通过连接子1连接得到的多肽链，其氨基酸序列如seqidno：75所示。

选择连接子2(seqid：no74)，构建的融合蛋白命名为sg3847l2，所述sg3847l2由第一多肽链和第二多肽链构成，第一多肽链即sg003的轻链，其氨基酸序列如seqidno：11所示，第二多肽链即sg003的重链和m91通过连接子2连接得到的多肽链，其氨基酸序列如seqidno：76所示。

1.2分别与双抗原的结合活性分析

(1)以sg003为对照，elisa评价融合蛋白和cd38结合活性。

将靶抗原cd38-his(1μg/ml)包被elisa板条，4℃过夜；pbst洗涤后，加入10％的胎牛血清，37℃封闭1小时；加入不同浓度的sg003抗体、sg3847l1或sg3847l2融合蛋白，37℃反应1小时；pbst洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人igg二抗(goatantihumanigghrp，thermofisherscientific)，37℃反应30分钟；pbst洗涤5次；每孔加入100μltmb(ebioscience)，室温(20±5℃)避光放置1～2min；随后每孔加入100μl2nh2so4终止液终止底物反应，酶标仪450nm处读取od值，分析融合蛋白与靶抗原cd38结合能力。

如图2所示，sg3847l1、sg3847l2和sg003抗体相比，与靶抗原cd38的结合力相似，sg3847l1、sg3847l2和sg003的ec50值分别为0.175nm、0.149nm和0.133nm。

(2)以ss002m91为对照，elisa评价融合蛋白和cd47结合活性。

将m91和igg1-fc(序列如seqidno：71所示)融合得到ss002m91，ss002m91氨基酸序列如seqidno：72所示。

将靶抗原cd47-his(1μg/ml)包被elisa板条，4℃过夜；pbst洗涤后，加入10％的胎牛血清，37℃封闭1小时；加入不同浓度的ss002m91、sg3847l1或sg3847l2，37℃反应1小时；pbst洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人igg二抗(goatantihumanigghrp，thermofisherscientific)，37℃反应30分钟；pbst洗涤5次；每孔加入100ultmb(ebioscience)，室温(20±5℃)避光放置1～2min；随后每孔加入100μl2nh2so4终止液终止底物反应，酶标仪450nm处读取od值，分析融合蛋白与靶抗原cd47结合能力。

如图3所示，sg3847l1、sg3847l2和ss002m91相比，与靶抗原cd47的结合力相似，sg3847l1、sg3847l2和ss002m91的ec50值分别为0.114nm，0.091nm和0.072nm。

(3)分别以sg003和ss002m91为对照，评价融合蛋白分别与cd38和cd47抗原的结合活性。

使用经工程改造以表达人cd38或人cd47的cho-s细胞系评价融合蛋白结合细胞表面抗原的能力。收集对数生长期细胞，调整细胞密度到5×10⁶个细胞/ml，冰上预冷。含2％fbs预冷的生理盐水将sg003、ss002m91、阴性对照抗体(igg1)、sg3847l1或sg3847l2稀释成不同浓度。

取100μl细胞，加入等体积前述稀释抗体或融合蛋白，4℃避光反应30min。结束后，洗涤细胞两次。用稀释的pe标记山羊抗人igg-fc二抗(pe-goatanti-humaniggfcsecondaryantibody，ebioscience)100μl重悬细胞，4℃避光反应30min。反应结束后，洗涤细胞两次。用400μl1％多聚甲醛重悬细胞。流式细胞仪(bdcalibur)分析融合蛋白与细胞表面cd38或cd47的结合能力。

如图4a和4b所示，“1”、“2、“3”、“4”、“5”、“6”、“7”、“8”和“9”分别是指20μgml^-¹igg1、20μgml^-1sg003、20μgml^-1ss002m91、20μgml^-1sg3847l1、10μgml^-1sg3847l1、5μgml^-¹sg3847l1、20μgml^-1sg3847l2、10μgml^-1sg3847l2和5μgml^-1sg3847l2。结果显示，融合蛋白sg3847l1和sg3847l2能特异性识别细胞表面表达的cd38或cd47抗原。

1.3与两个抗原同时结合的活性分析

(1)参考图5的原理，以抗cd38人源化抗体sg003为对照，elisa分析融合蛋白sg3847l1和sg3847l2同时结合两抗原cd38和cd47的生物学活性。

将靶抗原cd38-his(1μg/ml)包被elisa板条，4℃过夜；pbst洗涤后，加入10％的胎牛血清，37℃封闭1小时；加入不同浓度的sg003抗体、sg3847l1或sg3847l2融合蛋白，37℃反应1小时；pbst洗涤后，加入生物素标记cd47(biotin-fc-cd47)，37℃反应30分钟；pbst洗涤5次；加入辣根过氧化物酶标记的亲和素(streptavidin-hrp，嘉暄生物)，37℃反应30分钟；pbst洗涤5次；每孔加入100μltmb(ebioscience)，室温(20±5℃)避光放置1～2min；随后每孔加入100μl2nh2so4终止液终止底物反应，酶标仪450nm处读取od值，分析融合蛋白与靶抗原cd38、cd47同时结合的能力。

如图6所示，融合蛋白sg3847l1、sg3847l2和sg003抗体相比，可与靶抗原cd38和cd47同时结合，sg3847l1和sg3847l2的ec50值分别为0.020nm和0.024nm。

(2)参考图7的原理，以sg003和ss002m91为对照，评价融合蛋白sg3847l1、sg3847l2同时结合细胞表面两抗原cd38和cd47的生物学活性。

使用经工程改造以表达人cd38的cho-s细胞系评价融合蛋白同时结合细胞表面双抗原的能力。收集对数生长期细胞，调整细胞密度到5×10⁶个细胞/ml，冰上预冷。含2％fbs预冷的生理盐水将sg003抗体、ss002m91融合蛋白、阴性对照抗体(igg1)、sg3847l1或sg3847l2稀释。取100μl细胞，加入等体积前述稀释抗体或融合蛋白及cd47-fitc(嘉暄生物)，4℃避光反应30min。结束后，洗涤细胞两次。用稀释的pe标记山羊抗人igg-fc二抗(pe-goatanti-humaniggfcsecondaryantibody，ebioscience)即fc-pe100μl重悬细胞，4℃避光反应30min。反应结束后，洗涤细胞两次。用400μl1％多聚甲醛重悬细胞。流式细胞仪(bdcalibur)分析融合蛋白与细胞表面cd38和cd47同时结合的能力。

如图8所示，融合蛋白sg3847l1、sg3847l2能同时识别细胞表面的cd38和cd47抗原，并且sg3847l2同时识别双抗原的能力更高。

1.4杀伤cd38阳性细胞的adcc活性分析

首先将实验所需靶细胞(raji细胞)调整密度至2×10⁵个细胞/ml重悬在adcc缓冲液(无酚红mem培养液+1％fbs)中，并加入96孔板(50μl/孔)。随后向每孔中加入100μl不同浓度的sg003、sg3847l1和sg3847l2，混匀后在37℃，5％co2培养箱中孵育30min。再将实验所需效应细胞nk92mi-cd16a(华博生物)调整密度至1.2×10⁶个细胞/ml，加入有靶细胞的孔中，使得靶细胞∶效应细胞＝1∶6。混匀后在37℃，5％co2培养箱中孵育6h后，去掉96孔板内原液100μl/孔，加入ldh检测试剂盒(cytotoxicitydetectionkit，roche)中ldh反应混合物100μl/孔，37℃反应10min。再加入终止液50μl/孔，轻微混匀。酶标仪测定od492nm，同时测定od650nm作为背景值。实验中同时设置如下对照组，其中对照1为adcc缓冲液，对照2为靶细胞+adcc缓冲液，对照3为靶细胞+裂解液+adcc缓冲液，对照4为靶细胞+效应细胞+adcc缓冲液。特异性杀伤率％＝((实验组-对照4)/(对照3-对照2))×100％。量效曲线采用graphpadprismversion5进行数据分析。

如图9所示，使用raji靶细胞和nk92mi-cd16a效应细胞检测时，融合蛋白sg3847l1、sg3847l2显示出了更好的adcc作用。sg003、sg3847l1和sg3847l2的ec50值分别为0.067nm、0.014nm和0.013nm。

1.5阻断cd47蛋白与sirpa相互作用活性分析

以ss002m91为对照，评价融合蛋白sg3847l1、sg3847l2阻断cd47蛋白与sirpa相互作用的生物学活性。

将sirpα-his包被酶联板，1μg/ml，4℃过夜；pbst洗涤后，加入10％的胎牛血清，37℃封闭1小时；使用10％的胎牛血分别梯度稀释ss002m91、sg3847l1或sg3847l2，并在样品中加入biotin-fc-cd47至终浓度2μg/ml，37℃预孵育30min，作为一抗；pbst洗涤酶联板后，加入一抗，37℃孵育1小时；pbst洗5遍，加入辣根过氧化物酶标记的亲和素(streptavidin-hrp，嘉暄生物)，37℃孵育30分钟；pbst洗5遍，每孔加入100μltmb(ebioscience)，室温(20±5℃)避光放置1-5min；每孔加入100μl2nh2so4终止液终止底物反应，酶标仪450nm处读取od值，分析ss002m91、sg3847l1、sg3847l2对cd47/sirpα的阻断作用。

从图10中可以看出，sg3847l1、sg3847l2与ss002m91一样，可以竞争性阻断cd47与其配体sirpα的结合。sg3847l1的ic50值为46.8nm，sg3847l2的ic50值为78.8nm，ss002m91的ic50值为45.7nm。

实施例2采用不同靶点抗体与人sirpα变体1的突变体组合

参照如图1的融合蛋白结构以及实施例1的结果，选用抗axl抗体(c6g12)和抗trop2(sg701)抗体为例，研究不同靶点抗体融合蛋白生物学活性的影响，采用的连接子为连接子2。

抗体c6g12的lcdr1-3的氨基酸序列分别如seqidno：22、seqidno：23和seqidno：24所示；vl的氨基酸序列如seqidno：28所示；hcdr1-3的氨基酸序列分别如seqidno：25、seqidno：26和seqidno：27所示；vh的氨基酸序列如seqidno：29所示；轻链的氨基酸序列如seqidno：32所示；重链的氨基酸序列如seqidno：34所示。

抗体sg701的lcdr1-3的氨基酸序列分别如seqidno：37、seqidno：38和seqidno：39所示；vl的氨基酸序列如seqidno：42所示；hcdr1-3的氨基酸序列分别如seqidno：39、seqidno：40和seqidno：41所示；vh的氨基酸序列如seqidno：43所示；轻链的氨基酸序列如seqidno：46所示；重链的氨基酸序列如seqidno：48所示。

以抗axl抗体(c6g12)、sirpα变体1的突变体m91和连接子2(seqid：no74)制备融合蛋白，从n端到c端，依次连接c6g12、连接子和2个m91，其中2个m91的n端分别和c6g12的重链的c端连接，得到的融合蛋白命名为sgaxl47。sgaxl47的所述第二多肽链和所述第一多肽链的氨基酸序列分别如seqidno：77和seqidno：32所示。

以抗trop抗体(sg701)、sirpα变体1的突变体m91和连接子2(seqid：no74)制备融合蛋白，从n端到c端，依次连接sg701、连接子和2个m91，其中2个m91的n端分别和sg701的重链的c端连接，得到的融合蛋白命名为sgtrop247。sgtrop247的所述第二多肽链和所述第一多肽链的氨基酸序列分别如seqidno：78和seqidno：46所示。

采用常规分子生物学技术，将sgaxl47和sgtrop247融合蛋白的表达基因构建真核表达载体，转染cho-s细胞后，收获上清，经过proteina亲和纯化，获得目的蛋白，合理评价其生物学活性。

2.1与双抗原结合的活性分析

(1)以抗不同抗原的人源化抗体为对照，elisa评价相应融合蛋白和相关抗原的结合活性。

将靶抗原包被elisa板条，4℃过夜；pbst洗涤后，加入10％的胎牛血清，37℃封闭1小时；加入不同浓度的抗体或融合蛋白，37℃反应1小时；pbst洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人igg二抗(goatantihumanigghrp，thermofisherscientific)，37℃反应30分钟；pbst洗涤5次；每孔加入100μltmb(ebioscience)，室温(20±5℃)避光放置1～2min；随后每孔加入100μl2nh2so4终止液终止底物反应，酶标仪450nm处读取od值，分析融合蛋白与相关靶抗原结合能力。

如图11a所示，sgaxl47和c6g12相比，对axl抗原的结合能力接近。如图11b所示，sgtrop247和sg701相比，对trop2抗原的结合能力接近。说明在融合蛋白中采用不同靶点的抗体，并不影响该抗体与trop2抗原的结合力。

(2)以ss002m91为对照，elisa评价融合蛋白和cd47的结合活性。

将靶抗原cd47包被elisa板条，4℃过夜；pbst洗涤后，加入10％的胎牛血清，37℃封闭1小时；加入不同浓度的融合蛋白ss002m91或融合蛋白，37℃反应1小时；pbst洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人igg二抗(goatantihumanigghrp，thermofisherscientific)，37℃反应30分钟；pbst洗涤5次；每孔加入100μltmb(ebioscience)，室温(20±5℃)避光放置1～2min；随后每孔加入100μl2nh2so4终止液终止底物反应，酶标仪450nm处读取od值，分析融合蛋白与cd47结合能力。

如图12a所示，sgaxl47和ss002m91相比，对cd47抗原的结合能力接近。如图12b所示，sgtrop247和ss002m91相比，对cd47抗原的结合能力接近。说明在融合蛋白中采用不同靶点的抗体，并不影响该抗体与其cd47抗原的结合力。

2.2.同时结合两个抗原的活性分析

以抗不同抗原的人源化抗体为对照，elisa分析融合蛋白同时结合双抗原的生物学活性。

将靶抗原包被elisa板条，4℃过夜；pbst洗涤后，加入10％的胎牛血清，37℃封闭1小时；加入不同浓度的抗体或融合蛋白，37℃反应1小时；pbst洗涤后，加入生物素标记cd47(biotin-fc-cd47)，37℃反应30分钟；pbst洗涤5次；加入辣根过氧化物酶标记的亲和素(streptavidin-hrp，嘉暄生物)，37℃反应30分钟；pbst洗涤5次；每孔加入100μltmb(ebioscience)，室温(20±5℃)避光放置1～2min；随后每孔加入100μl2nh2so4终止液终止底物反应，酶标仪450nm处读取od值，分析融合蛋白与相关抗原和cd47同时结合的能力。

图13a显示，sgaxl47和c6g12分别对axl和cd47双抗原的结合情况，图13b显示，sgtrop247和ss002m91分别对trop2和cd47双抗原的结合情况。图13结果显示融合蛋白替换不同抗体，并不影响其与双抗原同时结合。

前述详细说明是以解释和举例的方式提供的，并非要限制所附权利要求的范围。目前本申请所列举的实施方式的多种变化对本领域普通技术人员来说是显而易见的，且保留在所附的权利要求和其等同方案的范围内。

sequencelisting

<110>杭州尚健生物技术有限公司;尚健单抗（北京）生物技术有限公司

<120>一种融合蛋白及其用途

<130>0070-pa-004

<160>78

<170>patentinversion3.5

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<210>9

<211>333

<212>dna

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>编码sg003的vl核苷酸

<400>9

gagatcgtgatgacccagagccctgccagcctgagcgccagcctgggccagagggccacc60

atcagctgcagggccagcagcagcgtgagcagcagcgccttcagctacgtgcactggtac120

cagcagaagagcggccagcctcctaagctgctgatctacctggccagcaacctggagagc180

ggcgtgcctgccaggttcagcggcagcggcagcggcaccgacttcaccctgaccatccac240

cctgtggagagcgaggacgtggccacctactactgccaccacagcagggagctgcctttc300

accttcggcagcggcaccaagctggagatcaag333

<210>10

<211>357

<212>dna

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>编码sg003的vh核苷酸

<400>10

caggtgcagctgctggagagcggcggcggcctggtgcagcctggcggcagcctgaagctg60

agctgcgtggccagcggcttcgacttcagcctgtactggatgaactgggtgaggcaggcc120

cctggcaagggcctggagtggatcggcaagatcaaccctgacagcagcaccatcaactac180

acccctagcctgaaggacaagttcttcatcagcagggacaacgccaagaacaccctgtac240

ctgcagatgaccaaggtgaggagcgaggacaccgccctgtactactgcgccaggctgtgg300

atcgccaccggcggcttcgactactggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagc357

<210>11

<211>218

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>sg003轻链

<400>11

gluilevalmetthrglnserproalaserleuseralaserleugly

151015

glnargalathrilesercysargalaserserservalserserser

202530

alaphesertyrvalhistrptyrglnglnlysserglyglnpropro

354045

lysleuleuiletyrleualaserasnleugluserglyvalproala

505560

argpheserglyserglyserglythraspphethrleuthrilehis

65707580

provalglusergluaspvalalathrtyrtyrcyshishisserarg

859095

gluleuprophethrpheglyserglythrlysleugluilelysarg

100105110

thrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspglugln

115120125

leulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphetyr

130135140

proargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnser

145150155160

glyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspserthr

165170175

tyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglulys

180185190

hislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserserpro

195200205

valthrlysserpheasnargglyglucys

210215

<210>12

<211>657

<212>dna

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>sg003轻链核苷酸

<400>12

gagatcgtgatgacccagagccctgccagcctgagcgccagcctgggccagagggccacc60

atcagctgcagggccagcagcagcgtgagcagcagcgccttcagctacgtgcactggtac120

cagcagaagagcggccagcctcctaagctgctgatctacctggccagcaacctggagagc180

ggcgtgcctgccaggttcagcggcagcggcagcggcaccgacttcaccctgaccatccac240

cctgtggagagcgaggacgtggccacctactactgccaccacagcagggagctgcctttc300

accttcggcagcggcaccaagctggagatcaagcgtacggtggctgcaccatctgtcttc360

atcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctg420

aataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcg480

ggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagc540

agcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtc600

acccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttag657

<210>13

<211>449

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>sg003重链

<400>13

glnvalglnleuleugluserglyglyglyleuvalglnproglygly

151015

serleulysleusercysvalalaserglypheasppheserleutyr

202530

trpmetasntrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpile

354045

glylysileasnproaspserserthrileasntyrthrproserleu

505560

lysasplysphepheileserargaspasnalalysasnthrleutyr

65707580

leuglnmetthrlysvalargsergluaspthralaleutyrtyrcys

859095

alaargleutrpilealathrglyglypheasptyrtrpglyglngly

100105110

thrthrleuthrvalserseralaserthrlysglyproservalphe

115120125

proleualaproserserlysserthrserglyglythralaalaleu

130135140

glycysleuvallysasptyrpheprogluprovalthrvalsertrp

145150155160

asnserglyalaleuthrserglyvalhisthrpheproalavalleu

165170175

glnserserglyleutyrserleuserservalvalthrvalproser

180185190

serserleuglythrglnthrtyrilecysasnvalasnhislyspro

195200205

serasnthrlysvalasplyslysvalgluprolyssercysasplys

210215220

thrhisthrcysproprocysproalaprogluleuleuglyglypro

225230235240

servalpheleupheproprolysprolysaspthrleumetileser

245250255

argthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhisgluasp

260265270

progluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalgluvalhisasn

275280285

alalysthrlysproargglugluglntyrasnserthrtyrargval

290295300

valservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasnglylysglu

305310315320

tyrlyscyslysvalserasnlysalaleuproalaproileglulys

325330335

thrileserlysalalysglyglnproarggluproglnvaltyrthr

340345350

leuproproserargaspgluleuthrlysasnglnvalserleuthr

355360365

cysleuvallysglyphetyrproseraspilealavalglutrpglu

370375380

serasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrproprovalleu

385390395400

aspseraspglyserphepheleutyrserlysleuthrvalasplys

405410415

serargtrpglnglnglyasnvalphesercysservalmethisglu

420425430

alaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleuserprogly

435440445

lys

<210>14

<211>1350

<212>dna

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>sg003重链核苷酸

<400>14

caggtgcagctgctggagagcggcggcggcctggtgcagcctggcggcagcctgaagctg60

agctgcgtggccagcggcttcgacttcagcctgtactggatgaactgggtgaggcaggcc120

cctggcaagggcctggagtggatcggcaagatcaaccctgacagcagcaccatcaactac180

acccctagcctgaaggacaagttcttcatcagcagggacaacgccaagaacaccctgtac240

ctgcagatgaccaaggtgaggagcgaggacaccgccctgtactactgcgccaggctgtgg300

atcgccaccggcggcttcgactactggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcgct360

agcaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggc420

acagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtgg480

aactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcagga540

ctctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctac600

atctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaa660

tcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccg720

tcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgag780

gtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtcaagttcaactggtac840

gtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagc900

acgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggag960

tacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaa1020

gccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctg1080

accaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgcc1140

gtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctg1200

gactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcag1260

caggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcag1320

aagagcctctccctgtctccgggtaaatga1350

<210>15

<211>22

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>cd38蛋白结合表位

<400>15

serthrpheglyservalgluvalhisasnleuglnproglulysval

151015

glnthrleuglualatrp

<210>16

<211>218

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>sg003的突变后的轻链1

<400>16

gluilevalmetthrglnserproalaserleuseralaserleugly

151015

glnargalaserilesercysargalaserasnservalserserser

202530

alatyrsertyrvalhistrptyrglnglnlysserglyglnpropro

354045

lysleuleuiletyrleualaserasnileglnserglyvalproala

505560

argpheserglyserglyserglythraspphethrleuthrilehis

65707580

provalglusergluaspvalalathrtyrtyrcyshishisserarg

859095

glnleuproserthrpheglyserglythrlysleugluilelysarg

100105110

thrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspglugln

115120125

leulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphetyr

130135140

proargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnser

145150155160

glyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspserthr

165170175

tyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglulys

180185190

hislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserserpro

195200205

valthrlysserpheasnargglyglucys

210215

<210>17

<211>449

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>sg003的突变后的重链1

<400>17

glnvalglnleuleugluserglyglyglyleuvalglnproglygly

151015

serleulysleusercysvalalaserglytyrasnpheserleutyr

202530

tyrmetasntrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpile

354045

glylysileglnprogluserserthrileglntyrthrproserleu

505560

lysasplysphepheileserargaspasnalalysasnthrleutyr

65707580

leuglnmetthrlysvalargsergluaspthralaleutyrtyrcys

859095

alaargleutrpileglyserglyglypheasptyrtrpglyglngly

100105110

thrthrleuthrvalserseralaserthrlysglyproservalphe

115120125

proleualaproserserlysserthrserglyglythralaalaleu

130135140

glycysleuvallysasptyrpheprogluprovalthrvalsertrp

145150155160

asnserglyalaleuthrserglyvalhisthrpheproalavalleu

165170175

glnserserglyleutyrserleuserservalvalthrvalproser

180185190

serserleuglythrglnthrtyrilecysasnvalasnhislyspro

195200205

serasnthrlysvalasplyslysvalgluprolyssercysasplys

210215220

thrhisthrcysproprocysproalaprogluleuleuglyglypro

225230235240

servalpheleupheproprolysprolysaspthrleumetileser

245250255

argthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhisgluasp

260265270

progluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalgluvalhisasn

275280285

alalysthrlysproargglugluglntyrasnserthrtyrargval

290295300

valservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasnglylysglu

305310315320

tyrlyscyslysvalserasnlysalaleuproalaproileglulys

325330335

thrileserlysalalysglyglnproarggluproglnvaltyrthr

340345350

leuproproserargaspgluleuthrlysasnglnvalserleuthr

355360365

cysleuvallysglyphetyrproseraspilealavalglutrpglu

370375380

serasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrproprovalleu

385390395400

aspseraspglyserphepheleutyrserlysleuthrvalasplys

405410415

serargtrpglnglnglyasnvalphesercysservalmethisglu

420425430

alaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleuserprogly

435440445

lys

<210>18

<211>218

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>sg003的突变后的轻链2

<400>18

gluilevalmetthrglnserproalaserleuseralaserleugly

151015

glnargalathrilesercysargalaserserservalserserser

202530

alatyrsertyrvalhistrptyrglnglnlysserglyglnpropro

354045

lysleuleuiletyrleualaseraspleuglnserglyvalproala

505560

argpheserglyserglyserglythraspphethrleuthrilehis

65707580

provalglusergluaspvalalathrtyrtyrcyshishisserarg

859095

gluleuprotyrserpheglyserglythrlysleugluilelysarg

100105110

thrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspglugln

115120125

leulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphetyr

130135140

proargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnser

145150155160

glyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspserthr

165170175

tyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglulys

180185190

hislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserserpro

195200205

valthrlysserpheasnargglyglucys

210215

<210>19

<211>449

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>sg003的突变后的重链2

<400>19

glnvalglnleuleugluserglyglyglyleuvalglnproglygly

151015

serleulysleusercysvalalaserglypheasppheserleutyr

202530

trpmetasntrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpile

354045

glylysileserproasnserserthrileasntyrserproserleu

505560

lysasplysphepheileserargaspasnalalysasnthrleutyr

65707580

leuglnmetthrlysvalargsergluaspthralaleutyrtyrcys

859095

alaargleutyrilealaserglyglypheasptyrtrpglyglngly

100105110

thrthrleuthrvalserseralaserthrlysglyproservalphe

115120125

proleualaproserserlysserthrserglyglythralaalaleu

130135140

glycysleuvallysasptyrpheprogluprovalthrvalsertrp

145150155160

asnserglyalaleuthrserglyvalhisthrpheproalavalleu

165170175

glnserserglyleutyrserleuserservalvalthrvalproser

180185190

serserleuglythrglnthrtyrilecysasnvalasnhislyspro

195200205

serasnthrlysvalasplyslysvalgluprolyssercysasplys

210215220

thrhisthrcysproprocysproalaprogluleuleuglyglypro

225230235240

servalpheleupheproprolysprolysaspthrleumetileser

245250255

argthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhisgluasp

260265270

progluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalgluvalhisasn

275280285

alalysthrlysproargglugluglntyrasnserthrtyrargval

290295300

valservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasnglylysglu

305310315320

tyrlyscyslysvalserasnlysalaleuproalaproileglulys

325330335

thrileserlysalalysglyglnproarggluproglnvaltyrthr

340345350

leuproproserargaspgluleuthrlysasnglnvalserleuthr

355360365

cysleuvallysglyphetyrproseraspilealavalglutrpglu

370375380

serasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrproprovalleu

385390395400

aspseraspglyserphepheleutyrserlysleuthrvalasplys

405410415

serargtrpglnglnglyasnvalphesercysservalmethisglu

420425430

alaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleuserprogly

435440445

lys

<210>20

<211>218

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>sg003的突变后的轻链3

<400>20

gluilevalmetthrglnserproalaserleuseralaserleugly

151015

glnargalathrilesercysargalaserasnservalserthrser

202530

alaphesertyrvalhistrptyrglnglnlysserglyglnpropro

354045

lysleuleuiletyrleualaserasnleugluserglyvalproala

505560

argpheserglyserglyserglythraspphethrleuthrilehis

65707580

provalglusergluaspvalalathrtyrtyrcyshishisserarg

859095

gluvalprophethrpheglyserglythrlysleugluilelysarg

100105110

thrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspglugln

115120125

leulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphetyr

130135140

proargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnser

145150155160

glyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspserthr

165170175

tyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglulys

180185190

hislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserserpro

195200205

valthrlysserpheasnargglyglucys

210215

<210>21

<211>449

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>sg003的突变后的重链3

<400>21

glnvalglnleuleugluserglyglyglyleuvalglnproglygly

151015

serleulysleusercysvalalaserglypheasppheserleutyr

202530

trpmetasntrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpile

354045

glylysileserproaspserserserleuasntyrthrproserval

505560

lysasplysphepheileserargaspasnalalysasnthrleutyr

65707580

leuglnmetthrlysvalargsergluaspthralaleutyrtyrcys

859095

alaargleutrpilealathrglyglytyrasntyrtrpglyglngly

100105110

thrthrleuthrvalserseralaserthrlysglyproservalphe

115120125

proleualaproserserlysserthrserglyglythralaalaleu

130135140

glycysleuvallysasptyrpheprogluprovalthrvalsertrp

145150155160

asnserglyalaleuthrserglyvalhisthrpheproalavalleu

165170175

glnserserglyleutyrserleuserservalvalthrvalproser

180185190

serserleuglythrglnthrtyrilecysasnvalasnhislyspro

195200205

serasnthrlysvalasplyslysvalgluprolyssercysasplys

210215220

thrhisthrcysproprocysproalaprogluleuleuglyglypro

225230235240

servalpheleupheproprolysprolysaspthrleumetileser

245250255

argthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhisgluasp

260265270

progluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalgluvalhisasn

275280285

alalysthrlysproargglugluglntyrasnserthrtyrargval

290295300

valservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasnglylysglu

305310315320

tyrlyscyslysvalserasnlysalaleuproalaproileglulys

325330335

thrileserlysalalysglyglnproarggluproglnvaltyrthr

340345350

leuproproserargaspgluleuthrlysasnglnvalserleuthr

355360365

cysleuvallysglyphetyrproseraspilealavalglutrpglu

370375380

serasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrproprovalleu

385390395400

aspseraspglyserphepheleutyrserlysleuthrvalasplys

405410415

serargtrpglnglnglyasnvalphesercysservalmethisglu

420425430

alaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleuserprogly

435440445

lys

<210>22

<211>16

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>c6g12的lcdr1

<400>22

argserserargserleuleuhisserasnglyphethrtyrleutyr

151015

<210>23

<211>7

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>c6g12的lcdr2

<400>23

glnmetserasnleualaser

<210>24

<211>9

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>c6g12的lcdr3

<400>24

glyglnasnleugluleuproleuthr

<210>25

<211>6

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>c6g12的hcdr1

<400>25

serglytyrtyrtrpasn

<210>26

<211>16

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>c6g12的hcdr2

<400>26

tyrargsertyraspglyserasnasntyrasnproserleulysasn

151015

<210>27

<211>10

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>c6g12的hcdr3

<400>27

glytrpleuleuhistyrthrmetasptyr

1510

<210>28

<211>112

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>c6g12的vl

<400>28

gluleuvalmetthrglnserpropheserasnalavalthrleugly

151015

thrseralaserilesercysargserserargserleuleuhisser

202530

asnglyphethrtyrleutyrtrptyrleuglnlysproglyglnser

354045

proglnleuleuiletyrglnmetserasnleualaserglyvalpro

505560

aspargpheserserserglyserglythraspphethrleuargile

65707580

serargvalglualagluaspvalglyvaltyrtyrcysglyglnasn

859095

leugluleuproleuthrpheglyalaglythrlysleugluleulys

100105110

<210>29

<211>119

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>c6g12的vh

<400>29

glnvalglnleulysglnserglyproglyleuvallysprosergln

151015

serleuserleuthrcysservalthrglypheserilesersergly

202530

tyrtyrtrpasntrpileargglnpheproglyasnlysleuglutrp

354045

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505560

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65707580

leulysleuasnservalthrthrgluaspthralathrtyrtyrcys

859095

alaargglytrpleuleuhistyrthrmetasptyrtrpglyglngly

100105110

thrservalthrvalserser

115

<210>30

<211>336

<212>dna

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>编码c6g12的vl核苷酸

<400>30

gagctcgtgatgacacagtctccattctccaatgcagtcactcttggaacatcagcttcc60

atctcctgcaggtctagtaggagtctcctacatagtaatggcttcacttatttgtattgg120

tatctgcagaagccaggccagtctcctcagctcctgatttatcagatgtccaaccttgcc180

tcaggagtcccagacaggttcagtagcagtgggtcaggaactgatttcacactgagaatc240

agcagagtggaggctgaggatgtgggtgtttattactgtggtcaaaatctagagcttccg300

ctcacgttcggtgctgggaccaagctggagctgaaa336

<210>31

<211>357

<212>dna

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>编码c6g12的vh核苷酸

<400>31

caggtgcagctgaagcagtcaggacctggcctcgtgaaaccttctcagtctctgtctctc60

acctgttctgtcactggcttctccatcagcagtggttattactggaactggatccggcag120

tttccaggaaacaaactggaatggatgggctacagaagctacgacggttccaataactac180

aacccatctctcaaaaatcgaatctccatcactcgtgacacatctaagaaccagtttttc240

ctgaagttgaattctgtgacaactgaggacacagctacatattactgtgcaagaggatgg300

ttactgcattatactatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctca357

<210>32

<211>219

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>c6g12轻链

<400>32

gluleuvalmetthrglnserpropheserasnalavalthrleugly

151015

thrseralaserilesercysargserserargserleuleuhisser

202530

asnglyphethrtyrleutyrtrptyrleuglnlysproglyglnser

354045

proglnleuleuiletyrglnmetserasnleualaserglyvalpro

505560

aspargpheserserserglyserglythraspphethrleuargile

65707580

serargvalglualagluaspvalglyvaltyrtyrcysglyglnasn

859095

leugluleuproleuthrpheglyalaglythrlysleugluleulys

100105110

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115120125

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130135140

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145150155160

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165170175

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180185190

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195200205

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210215

<210>33

<211>660

<212>dna

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>c6g12轻链核苷酸

<400>33

gagctcgtgatgacacagtctccattctccaatgcagtcactcttggaacatcagcttcc60

atctcctgcaggtctagtaggagtctcctacatagtaatggcttcacttatttgtattgg120

tatctgcagaagccaggccagtctcctcagctcctgatttatcagatgtccaaccttgcc180

tcaggagtcccagacaggttcagtagcagtgggtcaggaactgatttcacactgagaatc240

agcagagtggaggctgaggatgtgggtgtttattactgtggtcaaaatctagagcttccg300

ctcacgttcggtgctgggaccaagctggagctgaaacgtacggtggctgcaccatctgtc360

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ctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaa480

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agcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaa600

gtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttag660

<210>34

<211>449

<212>prt

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>c6g12重链

<400>34

glnvalglnleulysglnserglyproglyleuvallysprosergln

151015

serleuserleuthrcysservalthrglypheserilesersergly

202530

tyrtyrtrpasntrpileargglnpheproglyasnlysleuglutrp

354045

metglytyrargsertyraspglyserasnasntyrasnproserleu

505560

lysasnargileserilethrargaspthrserlysasnglnphephe

65707580

leulysleuasnservalthrthrgluaspthralathrtyrtyrcys

859095

alaargglytrpleuleuhistyrthrmetasptyrtrpglyglngly

100105110

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115120125

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130135140

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145150155160

asnserglyalaleuthrserglyvalhisthrpheproalavalleu

165170175

glnserserglyleutyrserleuserservalvalthrvalproser

180185190

serserleuglythrglnthrtyrilecysasnvalasnhislyspro

195200205

serasnthrlysvalasplyslysvalgluprolyssercysasplys

210215220

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225230235240

servalpheleupheproprolysprolysaspthrleumetileser

245250255

argthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhisgluasp

260265270

progluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalgluvalhisasn

275280285

alalysthrlysproargglugluglntyrasnserthrtyrargval

290295300

valservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasnglylysglu

305310315320

tyrlyscyslysvalserasnlysalaleuproalaproileglulys

325330335

thrileserlysalalysglyglnproarggluproglnvaltyrthr

340345350

leuproproserargaspgluleuthrlysasnglnvalserleuthr

355360365

cysleuvallysglyphetyrproseraspilealavalglutrpglu

370375380

serasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrproprovalleu

385390395400

aspseraspglyserphepheleutyrserlysleuthrvalasplys

405410415

serargtrpglnglnglyasnvalphesercysservalmethisglu

420425430

alaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleuserprogly

435440445

lys

<210>35

<211>1350

<212>dna

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>c6g12重链核苷酸

<400>35

caggtgcagctgaagcagtcaggacctggcctcgtgaaaccttctcagtctctgtctctc60

acctgttctgtcactggcttctccatcagcagtggttattactggaactggatccggcag120

tttccaggaaacaaactggaatggatgggctacagaagctacgacggttccaataactac180

aacccatctctcaaaaatcgaatctccatcactcgtgacacatctaagaaccagtttttc240

ctgaagttgaattctgtgacaactgaggacacagctacatattactgtgcaagaggatgg300

ttactgcattatactatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcagct360