1.一种索玛鲁肽中间体多肽的重组蛋白,其特征在于:所述索玛鲁肽中间体多肽的重组蛋白为前导肽-ddddk-glp-1(9-37),所述索玛鲁肽中间体多肽的重组蛋白的氨基酸序列为seqidno.1所示;
在索玛鲁肽中间体多肽制备中,可采用如下前导肽:
(1)mflkgdgyvqgiinfeglhhlvalglv;(2)ksi;(3)trxa;(4)dsba、(5)dsbc;(6)
sumo;(7)gst;(8)intein;(9)kpstyi。
2.一种基因重组表达质粒,其特征在于:含有编码权利要求1所述重组蛋白的编码基因。
3.一种包含权利要求2所述的基因重组表达质粒的重组工程菌,其特征在于:采用所述的基因重组表达质粒转入到大肠杆菌bl21(de3),hms174(de3)、jm109(de3)、t7express、bl21(de3plyss)和rosetta2(de3)中任意一种得到。
4.一种权利要求4所述的重组工程菌在重组索玛鲁肽中间体glp-1(9-37)表达方面的应用。
5.一种索玛鲁肽主肽链的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)合成编码基因,所述编码基因编码权利要求1所述的重组蛋白;
(2)将编码基因连接到表达载体中,得到重组表达载体;
(3)将带有编码基因的重组表达载体转化到大肠杆菌宿主中,构建重组工程菌;
(4)利用抗性平板筛选含有目的基因重组表达质粒的重组工程菌;
(5)重组工程菌发酵,诱导胞内不溶性包涵体形式的重组蛋白的表达,所述重组蛋白包含seqidno.1所示的氨基酸序列;
(6)将菌体进行高压均质,收集包涵体,然后将包涵体经过洗涤和变复性;
(7)酶切转化和分离纯化得到中间体多肽glp-1(9-37);
(8)将中间体多肽与二肽(fmoc-his-aib-su)于碱性水溶液中,合成索玛鲁肽主肽链。
6.根据权利要求5所述的索玛鲁肽主肽链的制备方法,其特征在于:在步骤(2)中,所述的基因重组表达质粒:通过将所述的编码基因克隆进入质粒载体pet-24a(+)、pet-28a(+)、pet-29a(+)、pet-31b(+)或者pet-39b(+)中获得重组表达载体pet-24a(+)-前导肽-ddddk-glp-1(9-37),pet-28a(+)-前导肽-ddddk-glp-1(9-37),pet-29a(+)-前导肽-ddddk-glp-1(9-37)、pet-31b(+)-前导肽-ddddk-glp-1(9-37)或pet-39b(+)-前导肽-ddddk-glp-1(9-37)。
7.根据权利要求6所述的索玛鲁肽主肽链的制备方法,其特征在于:在步骤(2)中,
编码基因与表达载体的连接方式为通过alwni/xhoi、hindiii/xhoi、hindiii/ncoi、xhoi/eagi或者saci/sali酶切位点插入到质粒载体pet-24a(+)、pet-28a(+)、pet-29a(+)、pet-31b(+)或者pet-39b(+)中的任意一种相应酶切位点中;所述步骤(5)中,重组工程菌进行发酵培养,诱导表达所用的诱导剂为异丙基硫代半乳糖苷。
8.根据权利要求6或者7所述的索玛鲁肽主肽链的制备方法,其特征在于:在步骤(6)中,将洗涤后的包涵体在ph为7.5-14的碱性条件下,按照蛋白浓度为5-40g/l加入包涵体溶解缓冲液,进行包涵体溶解变性。
9.根据权利要求6或者7所述的索玛鲁肽主肽链的制备方法,其特征在于:在步骤(7)中,所述的酶切转化、分离纯化的具体方式为:步骤(6)变复性后的重组蛋白经肠激酶所述的溶液的ph范围为10.0-11.,步骤(6)变复性后的重组蛋白经肠激酶酶解8-12h后即可得到中间体多肽、标签和连接肽的混合液,混合液使用离子交换分离即可获得纯度符合要求的中间体多肽样品。
10.根据权利要求9所述的索玛鲁肽主肽链的制备方法,其特征在于:在步骤(8)中,所述的索玛鲁肽主肽链合成反应溶液为纯化水,或者为纯化水与甲醇的混合溶液;溶液的ph范围为9.5-11.5。