1.一种快速区分非洲猪瘟病毒野毒株与cd2v和/或360-505r基因缺失株的三重pcr检测引物组,所述检测引物的核苷酸序列如下所示:
asfv-p72-f:5’aaccagtggccctctcctat3’(seqidno:1);
asfv-p72-r:5’aatcgcattgcctccgtagt3’(seqidno:2);
asfv-cd2v-f:5’tcctaagccttacagtcgttatcagt3’(seqidno:3);
asfv-cd2v-r:5’agataatggcgggatattgggtagt3’(seqidno:4);
asfv-360-505r-f:5’tcttgtccttttcatacgcctcat3’(seqidno:5);
asfv-360-505r-r:5’gagcacacctgggacctct3’(seqidno:6)。
2.一种用于快速区分非洲猪瘟病毒野毒株与基因缺失株的检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含权利要求1所述的检测引物组。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中还包括dna提取试剂和pcr扩增试剂。
4.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中还包括阳性对照品和阴性对照品。
5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述阳性对照品为包含非洲猪瘟病毒p72基因的质粒dna。
6.一种非疾病诊断目的的非洲猪瘟病毒野毒株与cd2v和/或360-505r基因缺失株的快速区分方法,其特征在于,包活以下步骤:
s1.从样品中提取病毒核酸;
s2.以核酸为模板,用权利要求1所述的检测引物组对样品进行pcr扩增反应获得扩增产物;
s3.将pcr扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析,在凝胶成像系统下观察结果,确定病毒类型。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,步骤s3所述确定病毒类型的方法为:
当无扩增产物时,则样品中没有病毒;
当扩增产物为三条片段,分别为1005,414和225bp,则样本中的病毒为野毒株;
当扩增产物为一条片段1005bp,则样本中的病毒缺失cd2v和360-505r基因;
当扩增产物为两条片段1005和414bp,则样本中的病毒缺失cd2v基因;
当扩增产物为两条片段1005和225bp,则样本中的病毒缺失360-505r基因。
8.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,步骤s2所述pcr扩增反应的反应体系包括:2×premixrtaq10μl,三对引物asfv-p72-f/r(20μm)、asfv-cd2v-f/r(10μm)、asfv-360-505r-f/r(10μm)各1μl,模板dna1μl,补加去离子水至20μl。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述2×premixrtaq包含takarataq酶1.25u/25μl,dntpmixture各0.4mm,taqbuffer3mmmg2+,色素marker。
10.根据权利要求6~9任一项所述的方法,其特征在于,步骤s2所述pcr扩增反应的反应条件为:95℃预变性5min;95℃变性30s,53℃退火30s,72℃延伸70s,共30~35个循环;最后72℃延伸10min。