一种经过修饰的基因芯片探针、其制备方法及使用该基因芯片探针的微阵列芯片与流程

文档序号:20365059发布日期:2020-04-10 23:58阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种经过修饰的基因芯片探针,其特征在于,按照5’-3’的方向包括以下结构:5’修饰基团-cn-(dt)m-寡核苷酸链3’,其中:所述寡核苷酸链表示基因芯片探针的核苷酸序列本体,(dt)m表示m个dt,cn表示具有n个碳原子的直链烷基,所述5’修饰基团能与芯片固相载体本体表面修饰的基团发生化学反应形成共价键连接,8≤m≤15,5≤n≤15;可选地,m=10,n=12。

2.根据权利要求1所述的基因芯片探针,其特征在于,所述基因芯片探针适用于短链pcr产物和长链pcr产物,优选为500-2000bp的长链pcr产物。

3.根据权利要求1所述的基因芯片探针,其特征在于,芯片固相载体本体表面的修饰为醛基化修饰,基因芯片探针上的修饰基团为氨基。

4.一种微阵列芯片,其特征在于,包括:

经过修饰的芯片固相载体;

和,权利要求1所述的基因芯片探针,所述基因芯片探针以阵列的方式分布并通过共价键连接于经过修饰的芯片固相载体的修饰基团上。

5.一种权利要求4所述的的微阵列芯片的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)修饰芯片固相载体本体使其能与权利要求1所述的基因芯片探针的修饰基团发生化学反应形成共价键连接;

2)合成权利要求1所述的经过修饰的基因芯片探针;

3)配制检测探针点样液并将检测探针点样液涡旋震荡混匀后,于芯片点样仪上以阵列的方式向经过修饰的芯片固相载体进行点样;可选的,所述检测探针点样液含0.1-1%(g/v)聚乙烯醇(pva)、0.1-10mm上述经过修饰的基因芯片探针、其余为pbs缓冲液。

6.根据权利要求4所述的微阵列芯片或权利要求5所述的制备方法,其特征在于,芯片固相载体本体为二氧化硅载玻片。

7.根据权利要求4所述的微阵列芯片或根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,芯片固相载体本体的修饰为醛基化修饰,基因芯片探针上的修饰基团为氨基。

8.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,在修饰芯片固相载体本体前,包括对芯片固相载体本体进行清洗和/或酸碱处理的步骤,在进行清洗和/或酸碱处理时使用了载玻片夹具,所述载玻片夹具包括:

第一载玻片固定托座,其上下表面之间开设有螺纹通孔,并且其上下表面之间开设有载玻片固定通口;

第二载玻片固定托座,其上表面开设有与载玻片固定通口位置相对应的载玻片固定槽;

和,连接杆,所述连接杆的一端固定连接于第二载玻片固定托座的上表面使连接杆与第二载玻片固定托座相垂直,所述连接杆外表面设置有与螺纹通孔的螺纹相匹配的螺纹,连接杆的另一端穿过螺纹通孔将第一、第二载玻片固定托座固定连接;

所述载玻片夹具的材质为耐酸、耐碱的材质。

9.一种使用微阵列芯片的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)带有生物素标记的pcr引物制备;

2)带有生物素标记的pcr产物制备;

3)带有生物素标记的pcr产物与权利要求4所述的微阵列芯片或权利要求5所述的制备方法制备的微阵列芯片进行杂交;

4)对微阵列芯片上的杂交产物进行显色;

5)对显色结果进行检测;

所述生物素标记的pcr引物与基因芯片探针中的寡核酸链的碱基互补。

10.根据权利要求9的检测方法,其特征在于,pcr引物包括:适用于粪肠球菌的pcr引物或适用于白色念珠菌的pcr引物。


技术总结
本发明实施例涉及一种经过修饰的基因芯片探针、其制备方法及使用该基因芯片探针的微阵列芯片。该经过修饰的基因芯片探针,按照5’‑3’的方向包括以下结构:5’修饰基团‑Cn‑(dT)m‑寡核苷酸链3’,其中:所述寡核苷酸链表示基因芯片探针的核苷酸序列本体,(dT)m表示m个dT,Cn表示具有n个碳原子的直链烷基,所述5’修饰基团能与芯片固相载体本体表面修饰的基团发生化学反应形成共价键连接,8≤m≤15,5≤n≤15。本发明经过修饰的基因芯片探针通过Cn和polydT共同修饰的方式,有效减少了探针与PCR产物在特异性结合时的空间位阻效应。并且本发明还对各种原材料以及众多工艺过程进行了优化。

技术研发人员:王玲;闫宝山;于大为;邵育晓;徐悦;刘瑞鑫;樊高君
受保护的技术使用者:北京贝尔生物工程股份有限公司
技术研发日:2019.11.12
技术公布日:2020.04.10
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