一种重组几丁质脱乙酰酶及其制备方法和应用与流程

文档序号:20030853发布日期:2020-02-28 10:22阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种分离的多肽,其特征在于,该多肽选自下组:

(a)具有seqidno:2所示氨基酸序列多肽;

(b)由(a)所述的多肽经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的,且具有多肽(a)功能的多肽;或

(c)与(a)所述的多肽的氨基酸序列有80%以上同源性,且具有多肽(a)功能的多肽;

(d)在(a)或(b)或(c)所述多肽的n或c末端添加标签序列,或在其n末端添加信号肽序列后形成的多肽。

2.一种分离的多核苷酸,其特征在于,它包含一核苷酸序列,该核苷酸序列选自下组:

(1)编码如权利要求1所述多肽的多核苷酸;

(2)与多核苷酸(1)互补的多核苷酸;

较佳地,该多核苷酸编码如seqidno:2所示氨基酸序列的多肽;较佳地,该多核苷酸的核苷酸序列如seqidno:1所示。

3.一种载体,其特征在于,它含有权利要求2所述的多核苷酸。

4.一种遗传工程化的宿主细胞,其特征在于,它含有权利要求4所述的载体,或其基因组中整合有权利要求2所述的多核苷酸。

5.一种制备权利要求1所述的多肽的方法,包括:(i)培养权利要求4所述的宿主细胞;(ii)收集含有权利要求1所述的多肽的培养物;(iii)从培养物中分离出权利要求1所述的多肽;

较佳地,在以下条件下进行培养:

诱导剂iptg浓度0.05~0.3mm、较佳地0.08~0.15mm;

诱导温度16~35℃、更佳地18~30℃;更佳地18~20℃;

诱导时间15~20小时;较佳地16~18小时。

6.权利要求1所述的多肽的用途,用于:

催化几丁质的脱乙酰化,或用于制备催化几丁质的脱乙酰化的组合物;较佳地,脱乙酰化后生成壳聚糖;或

抑制微生物,或用于制备具有抑制微生物功能的组合物;较佳地,所述的微生物是细胞壁包含几丁质的微生物。

7.一种组合物,其包含选自下组的成分:权利要求1所述的多肽;或权利要求5所述的宿主细胞;以及

工业学或微生物学上可接受的载体。

8.一种催化几丁质的脱乙酰化的方法,包括:应用权利要求1所述的多肽、权利要求5所述的宿主细胞或权利要求8所述的组合物对几丁质或含有几丁质的物质进行处理;较佳地,脱乙酰化后生成壳聚糖;较佳地,在以下条件下进行处理:

温度0~35℃、较佳地5~25℃、更佳地10~20℃;

ph5~10、较佳地ph5.5~9、更佳地ph6.5~8.5;

nacl0.01~0.5m、较佳地0.03~0.3m、更佳地0.05~0.2m;

含有na+、k+、mg2+、zn2+和/或ni2+

含有edta;和/或

含有dtt。

9.一种抑制微生物的方法,包括:应用权利要求1所述的多肽、权利要求5所述的宿主细胞或权利要求8所述的组合物对需要抑制微生物的对象进行处理;较佳地,所述的微生物是细胞壁包含几丁质的微生物;较佳地,在以下条件下进行处理:

温度0~35℃、较佳地5~25℃、更佳地10~20℃;

ph5~10、较佳地ph5.5~9、更佳地ph6.5~8.5;

nacl0.01~0.5m、较佳地0.03~0.3m、更佳地0.05~0.2m;

含有na+、k+、mg2+、zn2+和/或ni2+

含有edta;和/或

含有dtt。

10.如权利要求6、7或9所述,其特征在于,所述的微生物包括:真菌;较佳地所述真菌包括:轮枝菌属(verticillium)真菌,镰刀菌属(fusarium)真菌,曲霉属(aspergillus)真菌,青霉属(penicillium)真菌;

更佳地,所述轮枝菌属真菌包括:大丽花轮枝孢(verticilliumdahlia);所述镰刀菌属真菌包括:尖孢镰孢黄瓜专化型(fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum);所述曲霉属真菌包括:黑曲霉(aspergillusniger);所述青霉属真菌包括:大核青霉(penicilliummacrosclerotiorum)。

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