一种高纯种超微藻的分离和鉴定方法与流程

文档序号:20004373发布日期:2020-02-22 03:28阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种高纯种超微藻的分离和鉴定方法,其特征在于包括以下步骤:

(1)首先,在目标水体多次采集水样并进行混合,并用300目的筛绢进行预过滤;

(2)然后,选择激发波长分别为488nm和640nm的荧光作为叶绿素荧光,并在200-300个细胞/秒的进样流速下,通过流式细胞仪对水样的目标藻细胞数进行分选,分选过程中设置侧向散射光,以3.1μm的nile小球圈定3μm以内区域,收集超微藻细胞的藻样;

(3)接着,采用过滤后的湖水对分选得到的目标超微藻细胞的藻样进行稀释;

(4)经过稀释后的藻细胞稀释溶液与20%的gb11培养液混合分装于孔板中,置于培养箱进行培养;

(5)将步骤(4)中发生变色的藻细胞液取出,转移至含有bg11培养液的无菌瓶中进行扩大培养数日;扩大培养成功的藻液通过离心弃上清液后收集至收集管内;

(6)对步骤(5)收集的藻样提取dna,并通过分子生物学技术进行藻种鉴定。

2.根据权利要求1所述高纯种超微藻的分离和鉴定方法,其特征在于:步骤(1)中水样是通过采集目标水体水面以下0.5m内的表层水、中层水和离湖底0.5m以内的湖底水的三层水混合而得。

3.根据权利要求1所述高纯种超微藻的分离和鉴定方法,其特征在于:步骤(3)中用于稀释的湖水通过0.2μm聚碳酸脂滤膜进行过滤。

4.根据权利要求1所述高纯种超微藻的分离和鉴定方法,其特征在于:步骤(4)的培养条件:每日光照周期为16小时光照与8小时黑暗,培养温度为25±1℃,且每3日补充一次过滤后的湖水至原体积。

5.根据权利要求1所述高纯种超微藻的分离和鉴定方法,其特征在于:步骤(6)中的藻样通过dneasyblood&tissuekit试剂盒提取dna;

采用18srrna通用引物ns1(5’-gtagtcatatgcttgtctc-3’)和18l(5’-cacctacggaaaccttgttacgactt-3’)扩增目标藻样18s序列,再利用sanger法进行双向测序,对双向测序成功的样品进行正反列拼接,正向或反向测序成功的样品提取正向序列,进行分子鉴定;最后通过silva(silva_132_ssuref_tax_silva.fasta)数据库的本地blast比对,基于分子生物学手段判断目标藻样品的种水平分类学信息。

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