1.一种抗非洲猪瘟病毒的scfv抗体,其特征在于,所述scfv抗体的重链可变区的氨基酸序列如seqidno:1所示,scfv抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seqidno:2所示。
2.一种编码如权利要求1所述scfv抗体的dna片段。
3.根据权利要求2所述的dna片段,其特征在于,编码scfv抗体的重链可变区的dna片段如seqidno:3所示,编码scfv抗体的轻链可变区的dna片段如seqidno:4所示。
4.一种重组表达载体,其特征在于,所述的重组表达载体包含有如权利要求2所述的dna片段。
5.一种宿主细胞,其特征在于,所述的宿主细胞包含有权利要求4所述的重组表达载体。
6.一种抗非洲猪瘟病毒的scfv抗体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)淋巴细胞分离:
从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞,保存备用;
(2)淋巴细胞总mrna的提取:
提取步骤(1)分离得到的淋巴细胞的总mrna;
(3)全基因cdna合成:
以步骤(2)提取的淋巴细胞的总mrna为模板,合成全基因cdna;
(4)第一轮扩增:
以步骤(3)合成的全基因cdna为模板,进行第一轮扩增获得vh、vlλ和vlκ;
(5)第二轮扩增:
以第一轮扩增产物为模板,进行第二轮扩增获得vlλ-linker、vh-linker和vlκ-linker;
(6)第三轮扩增:
以第二轮扩增产物为模板,进行第三轮扩增获得vh-vlκ13;
(7)t-a克隆鉴定;
(8)scfv抗体的构建与制备:
将测序正确的扩增产物构建的vh-vlκ13插入到pet-30a质粒中,构建重组质粒vh-vlκ13-pet-30a,然后将重组质粒转化入感受态细胞中,培养转化菌液并诱导表达抗体蛋白,对表达的抗体蛋白进行收集、洗涤、纯化,既得抗非洲猪瘟scfv抗体。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,以p1、r1;f1、b11、b12、b13为引物进行第一轮扩增,引物具体为:
p1:5’-acgacgacttcaacgcctgg-3’,
r1:5’-gaggwgaagctggtggagtcygg-3’,
f1:5’-tttgakytccagcttggtccc-3’,
b11:5’-gccatygtgctgacccagastcc-3’,
b12:5’-gagctcgtsatgacccagtctcc-3’,
b13:5’-gagctgcgtgatacacagtctcc-3’。
8.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,以p1、r2;f2、b11、b12、b13为引物进行第二轮扩增,引物具体为:
p1:5’-acgacgacttcaacgcctgg-3’;
r2:5’-gccgcctgaccctccgccaccgaggwgaagctggtggagtcygg-3’;
f2:5’-ggtggcggagggtcaggcggctttgakytccagcttggtccc-3’;
b11:5’-gccatygtgctgacccagastcc-3’;
b12:5’-gagctcgtsatgacccagtctcc-3’;
b13:5’-gagctgcgtgatacacagtctcc-3’。
9.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,以p1、b11、b12、b13为引物进行第三轮扩增,引物具体为:
p1:5’-acgacgacttcaacgcctgg-3’;
b11:5’-gccatygtgctgacccagastcc-3’;
b12:5’-gagctcgtsatgacccagtctcc-3’;
b13:5’-gagctgcgtgatacacagtctcc-3’。
10.权利要求1所述的scfv抗体在制备禽非洲猪瘟病毒诊断试剂或非洲猪瘟病毒治疗试剂中的应用。