1.用于检测样本中abcg2基因相对表达量的引物和探针,其特征在于,所述引物和探针包括:
(1)针对abcg2基因的上游引物abcg2-f、下游引物abcg2-r和探针
abcg2-probe,其碱基序列如下所示:
abcg2-f:5’-atgaaacctggtctcaacgc-3’
abcg2-r:5’-ccacttggatctttccttgc-3’
abcg2-probe:5’-fam-cacaggtggaggcaaatcttcgt-tamra-3’;
(2)针对内参基因actin的上游引物actin-f、下游引物actin-r和探针actin-probe,其碱基序列如下所示:
actin-f:5’-tgagcgaggctacagctt-3’
actin-r:5’-tccttgatgtcgcgcacgattt-3’
actin-probe:5’-fam-accaccacggccgagcgg-tamra-3’。
2.一种检测样本中abcg2基因相对表达量的方法,所述方法包括以下步骤:
(1)提取样本中的rna;
(2)将步骤(1)中的rna逆转录cdna;
(3)加入cdna到反应管中,利用针对abcg2的上、下游引物和探针检测样本中的abcg2基因的荧光信号;利用针对actin内参基因的上、下游引物和探针检测样本中的actin内参基因的荧光信号。其碱基序列如下所示:
abcg2-f:5’-atgaaacctggtctcaacgc-3’
abcg2-r:5’-ccacttggatctttccttgc-3’
abcg2-probe:5’-fam-cacaggtggaggcaaatcttcgt-tamra-3’
actin-f:5’-tgagcgaggctacagctt-3’
actin-r:5’-tccttgatgtcgcgcacgattt-3’
actin-probe:5’-fam-accaccacggccgagcgg-tamra-3’;
(4)根据abcg2基因的荧光信号和actin内参基因的荧光信号,确定样本中的abcg2基因的相对表达量。
3.一种检测样本中abcg2基因相对表达量的试剂盒,所述试剂盒包括检测体系pcr反应液,其特征在于,所述检测体系pcr反应液包括:
(1)针对abcg2基因的上游引物abcg2-f、下游引物abcg2-r和探针abcg2-probe,其碱基序列如下所示:
abcg2-f:5’-atgaaacctggtctcaacgc-3’
abcg2-r:5’-ccacttggatctttccttgc-3’
abcg2-probe:5’-fam-cacaggtggaggcaaatcttcgt-tamra-3’;
(2)针对内参基因actin的上游引物actin-f、下游引物actin-r和探针actin-probe,其碱基序列如下所示:
actin-f:5’-tgagcgaggctacagctt-3’
actin-r:5’-tccttgatgtcgcgcacgattt-3’
actin-probe:5’-fam-accaccacggccgagcgg-tamra-3’。
4.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括阳性对照品、阴性对照品和空白对照品,所述阳性对照品为含有abcg2cdna序列的阳性质粒溶液,所述阴性对照品为不含有abcg2cdna序列的质粒溶液,所述空白对照品为生理盐水或不加任何物质。
5.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括样本rna提取试剂,所述样本rna提取试剂包括trizol、氯仿、异丙醇、75%乙醇和rnase-free水。
6.如权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述样本rna提取试剂还包括红细胞裂解液,所述红细胞裂解液包括16μmol/l氯化铵、1mmol/l碳酸氢钾和12.5μmol/ledta。