本发明专利涉及一株粪肠球菌及其在饲料添加剂中的应用，属于微生物
技术领域：
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背景技术：
：益生菌通常是指改善宿主微生态平衡而发挥有益作用，达到提高宿主健康水平和健康状态的微生物菌剂及其代谢产物。粪肠球菌(enterococcusfaecalis)，乳酸菌的一种，革兰氏阳性菌，是人和动物肠道内主要菌群之一。粪肠球菌的益生作用机制包括：(1)作为乳酸菌的一种，粪肠球菌能够产生细菌素、有机酸或挥发性脂肪酸等来改善肠道内环境，达到竞争有害菌的应用成分或抑制其生长及活动的效果；(2)粪肠球菌能够在动物肠道内形成生物薄膜附着在动物肠道粘膜上，进行正常发育、生长的繁殖，形成乳酸菌屏障，抵御外来毒素和致病菌侵入；(3)粪肠球菌能够能将多种碳水化合物的无氮浸出物转化为乳酸，完全被机体进行吸收利用；还能分解部分蛋白质；(4)粪肠球菌能够显著增强巨噬细胞的活性，促进免疫器官的发育，提高动物的免疫反应能力，促进抗体的产生及细胞因子的分泌，从而增强机体的免疫力(安玉亭，胡浩，王智刚，周新秀，粪肠球菌的生物学特性及其在养殖业中的应用，安徽农业科学，2015，43(27)：115-117)。在《饲料添加剂品种目录(2013)》中，粪肠球菌被归类于微生物饲料添加剂，适用范围为养殖动物。已有不少关于粪肠球菌在畜禽养殖中的应用报道。cn104293697b公开了一种含粪肠球菌的鸡饲料益生菌剂及其制备方法，其有益效果在于：提高动物的饲料利用效率，节约成本，大大改善动物体内消化道内环境的稳态，促进营养的吸收利用，促进动物生长，显著提高动物的生产性能、免疫性能和繁殖性能，降低生产成本，提高经济效益。cn110326706a公开了一种含粪肠球菌的复合型高活性饲用益生菌剂，其有益效果在于：益生菌剂能有效提高饲料利用率和养殖动物机体免疫能力，减少腹泻、下痢机率，改善动物皮毛色泽和肉的品质，降低动物粪便臭味，减少医疗用药次数，降低动物饲养成本。大多数乳酸菌不能耐受动物消化道中胃酸、胆盐等不良环境条件的作用，并且在颗粒饲料加工中无法耐受制粒时的高温、压力和剪切力，以及运输和存储过程中易受温度、挤压、氧气的影响，致使活性大大降低甚至死亡，严重影响了活菌制剂的效价及其应有的益生特性(王建华，杨新建，腾达，王秀敏，毛若雨，郝娅，一种粪肠球菌微胶囊及其制备方法，cn107260704a)。粪肠球菌也存在同样问题。江文涛等考察了国内3家同类产品的室温稳定性，发现60天存活率最高不超过32％(江文涛，马加军，贾朋辉，卢刚，邱勇，微胶囊化粪肠球菌稳定性影响因素研究，饲料研究，2018年01期：74-78)。研究人员进行了大量尝试以增强粪肠球菌的稳定性。张琳等采用乳化凝胶化法制备微囊化粪肠球菌，发现微囊化粪肠球菌5个月的存活率由10.96％提升到30.42％，且对不良环境的抗性有显著提升(张琳，贠婷婷，綦文涛，李杰，王永伟，李爱科，乳化凝胶化法微囊化益生菌抗胁迫作用研究，动物营养学报，2015年11期：3636-3642)。杜志琳等研究了微囊化粪肠球菌的体外特征，发现微囊化粪肠球菌较菌粉样品的抗逆性有明显提高，6个月的存活率由31.5％增加至65.9％(杜志琳，尹望，李雪平，微囊化粪肠球菌的体外特征的研究，中国饲料添加剂，2018年第7期：36-39)。江文涛等选择合适的载体并控制水分，微囊化粪肠球菌的45天存活率达96.6％，较原菌粉的11.3％有显著提高；应用中试中，微囊化粪肠球菌的30天存活率和60天存活率分别可达88.7％和81.3％(江文涛，马加军，贾朋辉，卢刚，邱勇，微胶囊化粪肠球菌稳定性影响因素研究，饲料研究，2018年01期：74-78)。基于成本因素和加工便利，饲用益生菌不仅要求益生功能显著，还必须有良好的加工性能和储存性能。技术实现要素：针对现有技术存在的上述问题，本发明申请人提供了一株粪肠球菌及其在饲料加工中的应用。本发明粪肠球菌菌株抗逆性强、稳定性能好，可用作动物益生菌。本发明技术方案如下：一株粪肠球菌(enterococcusfaecalis)及其应用。所述粪肠球菌(enterococcusfaecalis)，于2019年12月31日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctccm20191139。所述粪肠球菌的应用，是指粪肠球菌cctccno：m20191139用于饲喂动物，规格为100亿cfu/g的单菌粉用量为0.5‰-1.0‰。本发明的有益效果在于：本发明的粪肠球菌cctccno：m20191139稳定性好，可明显提升动物健康状态。具体实施方式下面结合实施例，对本发明进行具体描述。本发明粪肠球菌(enterococcusfaecalis)于2019年12月31日保藏于位于中国武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctccno：m20191139。实施例1取粪肠球菌cctccno：m20191139发酵液进行耐酸性能评估。粪肠球菌发酵液活菌数为50亿cfu/ml。取1ml粪肠球菌发酵液加入模拟胃液中，置于37℃培养。定时取样并测定粪肠球菌活菌数，与初始活菌数进行比较，计算存活率。模拟胃液配制方法：配制ph1.5-3.0的稀盐酸溶液各100ml，分别加入1g胃蛋白酶，使其充分溶解，模拟胃液。采用倾注平板法测定粪肠球菌活菌数。先以无菌生理盐水进行十倍逐级稀释，取1ml稀释液在培养皿上，将灭菌后冷却至45℃的mrs培养基倾注在培养皿上，迅速摇匀，置于37℃条件下培养24hr，计算粪肠球菌数量。mrs培养基配制方法：蛋白胨10.0g，牛肉粉5.0g，酵母粉4.0g，葡萄糖20.0g，吐温-801.0ml，七水磷酸氢二钾2.0g，三水醋酸钠5.0g，柠檬酸三铵2.0g，七水硫酸镁0.2g，四水硫酸锰0.05g，琼脂粉15.0g，将上述成分加入到1000ml蒸馏水中，加热溶解，调节ph6.2±0.2，121℃灭菌15～20min。表1粪肠球菌cctccno：m20191139在不同模拟胃酸条件下存活率变化情况人和的动物的胃液呈强酸性，采用模拟胃液评估了粪肠球菌cctccno：m20191139的耐酸性能。ph1.5-3.0范围内，随时间延长，粪肠球菌cctccno：m20191139的存活率逐步下降；ph越低，下降趋势越明显。即使这样，ph1.5、作用180min后，粪肠球菌cctccno：m20191139的存活率依然达到58％，这说明粪肠球菌cctccno：m20191139有良好的耐酸能力。实施例2取粪肠球菌cctccno：m20191139发酵液进行耐胆盐性能评估。粪肠球菌发酵液活菌数为50亿cfu/ml。取1ml粪肠球菌发酵液加入模拟胆盐中，置于37℃培养。定时取样并测定粪肠球菌活菌数，与初始活菌数进行比较，计算存活率。模拟胆盐配制方法：氯化钠8g，氯化钾0.2g，十二水磷酸氢二钠3.63g，磷酸二氢钾0.24g，纯净水1000ml，猪胆盐0.1％～0.3％。粪肠球菌活菌数测定方法和存活率计算方法同实施例1。表2粪肠球菌cctccno：m20191139在不同模拟胆盐条件下存活率变化情况胆盐对微生物有一定破坏性。要发挥益生作用，微生物必须能耐受胆盐。人体胆盐浓度一般0.3％，动物有所不同。在模拟胆盐试验条件下，随时间延长，粪肠球菌cctccno：m20191139的存活率逐步下降；胆盐浓度越高，下降趋势越明显。0.5％胆盐、作用6hr后，粪肠球菌cctccno：m20191139的存活率依然达到79％，这说明粪肠球菌cctccno：m20191139有良好的耐胆盐能力。实施例3对粪肠球菌cctccno：m20191139单菌粉进行储存稳定性评估。将粪肠球菌原菌粉与无水葡萄糖按比例混合，制备粪肠球菌单菌粉(规格：500亿cfu/g-2000亿cfu/g)；将单菌粉密封，分别储存于-18℃、4℃和室温，定期测定活菌数，计算存活率。表3粪肠球菌cctccno：m20191139单菌粉不同储存温度下的存活率情况不同规格的粪肠球菌单菌粉在不同储存温度下的存活率有细微差异，但结论一致：低温低于保存。从试验情况看，粪肠球菌cctccno：m20191139单菌粉室温下储存2个月，存活率保持在80％以上；储存3个月，存活率保持在70％左右；储存6个月，存活率不低于60％。由此可见，粪肠球菌cctccno：m20191139单菌粉成品货架期相对较长，便于客户应用。实施例4将粪肠球菌cctccno：m20191139单菌粉(规格：100亿cfu/g)用于仔猪饲喂。选用28日龄平均体重为(7.82±0.75)kg“杜×长×大”断奶仔猪108头，随机分为3组，每组6个重复(公母各占一半)，每个重复6头，每个重复为1栏。i组为空白组，基础饲粮中不添加任何益生菌和抗生素；ii组为益生菌组，将粪肠球菌cctccno：m20191139单菌粉拌入基础饲粮，用量是投料量的1‰；iii组为抗生素组，在基础饲粮中加入500mg/kg硫酸粘杆菌素。仔猪在封闭式猪舍中饲养，水泥地面，自由采食和饮水，驱虫、消毒及免疫均按养猪场常规饲养管理程序进行，试验期30天。仔猪腹泻率的计算方法按文献执行(史自涛，姚焰础，江山，肖融，刘作华，杨飞云，董国忠，郭致君，粪肠球菌替代抗生素对断奶仔猪生长性能、腹泻率、血液生化指标和免疫器官的影响，动物营养学报，2015，27(6)：1832-1840)，结果如下：表4粪肠球菌cctccno：m20191139对仔猪腹泻率的影响i组ii组iii组腹泻率7.3％1.5％5.2％粪肠球菌cctccno：m20191139可显著降低仔猪腹泻率，对于促进仔猪健康生长具有积极作用。实施例5将粪肠球菌cctccno：m20191139单菌粉(规格：100亿cfu/g)用于宠物狗饲喂。参考张明秀的方法(张明秀，高多不饱和脂肪酸含量犬粮的制备及应用研究[d]，无锡：江南大学，2013年)，选取45只符合实验动物健康要求的成年比格犬，10kg左右/只，随机分成3组，每组15只。饲养温度23±2℃，相对湿度55±5％，光照时间为7：00～19：00，一笼一只饲养。采用商品犬粮(宝路成犬中小型犬全价犬粮)按建议喂食量进行比格犬喂养，三周后随机分成3组(对照组、实验组一、实验组二)分别喂食。喂食时间为9周。对照组，正常饲喂商品犬粮；实验组一，按照1‰用量进行拌料饲喂；实验组二，按照0.5‰用量进行拌料饲喂。犬毛发收集：第-21、-14、0、7、14、28和第63天。按张明秀的方法采用感官评定进行打分：1-钝的、粗糙的、干燥的；2-不弯曲的、不柔软的；3-中等完全、中等柔软的；4-高度弯曲的、非常柔软的；5-油腻的。表5粪肠球菌cctccno：m20191139对犬毛发的影响在未添加粪肠球菌cctccno：m20191139前，对照组、实验组一、实验组二的打分非常接近，基本没有区分，说明犬只毛发没有差异。使用粪肠球菌cctccno：m20191139仅7天后，实验组一、实验组二的打分较对照组有所提升；使用粪肠球菌cctccno：m2019113914天后，实验组一、实验组二的打分明显高于对照组。这说明粪肠球菌cctccno：m20191139对改善犬毛发有明显促进作用。当前第1页12