膜蛋白AmpG的表达载体及其表达纯化方法

文档序号:25873765发布日期:2021-07-16 17:11阅读:来源:国知局

技术特征:
1.膜蛋白ampg的表达载体,其特征在于,为表达质粒ply077-ampg,核苷酸序列如seq id no.2所示,包含:噬菌体t7启动子;大肠杆菌核糖体结合位点,其中包含ncoi序列ccatgg、seq id no.1所示的大肠杆菌膜蛋白ampg序列以及bamhi位点ggatcc;烟草蚀纹病毒半胱氨酸蛋白酶切割位点gagaacctgtacttccaatcc;ndei酶切位点catatg;超折叠维纳斯荧光蛋白编码序列;xhoi酶切位点ctcgag;6个组氨酸位点以及终止密码子tag。2.根据权利要求1所述的膜蛋白ampg的表达载体的表达纯化方法,其特征在于,具体步骤如下:步骤1,大肠杆菌膜蛋白ampg表达载体突变株的制备:将膜蛋白ampg的表达载体即表达质粒ply077-ampg转化到宿主大肠杆菌中,并涂布于含抗生素以及0.1mm iptg琼脂平板,挑选黄绿色的阳性单克隆菌进行扩大培养和诱导表达;步骤2,将挑选的突变菌株转化株接种至培养基中进行扩大培养,并用1mm iptg大规模诱导表达膜蛋白ampg。3.根据权利要求2所述的表达纯化方法,其特征在于,步骤1中,所述的大肠杆菌为大肠杆菌dh5α或大肠杆菌bl21(de3)。4.根据权利要求2所述的表达纯化方法,其特征在于,步骤2中,所述的培养基为lb培养基或tb培养基。
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